CC BY
15
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитов Immunology of HIV and viral hepatitis
синдрома. Эти факторы метаболического риска могут влиять на его течение и ответ на противовирусную терапию (ПВТ).
Цель и задачи. Целью данного исследования явилось изучение влияния факторов метаболического риска на состояние иммунитета больных ХГС при проведении ПВТ и достижения устойчивого вирусологического ответа (УВО).
Материалы и методы. Проведено первичное иммунологическое обследование периферической крови (ПК) 73 больных ХГС, как с метаболическими факторами риска, так и без них. В динамике через 24 недели после противовирусной терапии (ПВТ) пегилированным интерфероном-а и рибавирином иммунологическое обследование было проведено повторно у 25 больных с ХГС, из них у 7 больных не был достигнут УВО. Иммунологическое обследование включало определение содержания субпопуляций Т- и В-лимфоцитов, иммуноглобулинов IgA, IgM, IgG и циркулирующих иммунных комплексов высокомолекулярных (ЦИК выс.), среднемолекулярных (ЦИК сред.) и низкомолекулярных (ЦИК низ.). Иммунофенотипирование лимфоцитов ПК осуществляли на проточном цитометре Cytomics FC500 (фирма Beckman Coulter, США) с использованием 4-х цветных комбинаций прямых моноклональных антител той же фирмы: CD19/CD5/CD27/CD45, CD4/CD8/CD3/ CD45, CD16/CD56/CD3/CD45, CD3/CD25/HLA-DR/ CD45, CD4/CD127/CD25/CD45, CD8/CD38/CD3/CD45. Определение концентраций IgA, IgM, IgG в сыворотке крови проводили турбидимитрическим методом на полуавтоматическом анализаторе BTS-350 фирмы BioSystems с помощью наборов той же фирмы, уровней ЦИК — методом, предложенным Ю.А. Гриневичем и А.Н. Алферовым (1981). Средние значения исследуемых показателей представлены медианой (Ме).
Результаты. Иммунологическое обследование показало, что относительное содержание TNK-клеток (CD3+CD16+CD56+) (до ПВТ 5,85%; УВО 4,45%), NK-клеток (CD3CD56+) (до ПВТ 7,30%; УВО 5,30%), NK-клеток цитолитических (CD3-CD16+/highCD56dim) (до ПВТ 8,00%; УВО 5,95%), достоверно снижалось (р < 0,05) у больных ХГС с метаболическими факторами риска, достигших УВО, в отличие от его отсутствия. Снижение активированных NK-лимфоцитов (CD3CD8dimCD38+) было зафиксировано у больных после ПВТ, как достигших (до ПВТ 24,80%; УВО 14,00%), так и не достигших УВО (до ПВТ 24,80%; без УВО 15,05%). В то же время у этой категории больных в ПК статистически значимо повышалось (р < 0,05) содержание активированных Т-лимфоцитов (CD3+CD25+), как при достижении УВО (до ПВТ 0,08%; УВО 0,25%), так и при его отсутствии (до ПВТ 0,08%; без УВО 0,21%). Уровни этих показателей у больных ХГС без метаболических факторов риска, как достигших, так и не достигших УВО, не имели значимых различий, что может свидетельствовать о влиянии метаболических факторов риска на функциональность TNK- и NK-клеток при ХГС. Количество В-клеток CD19+ у больных с метаболическими факторами риска повышалось у больных не достигших УВО (до ПВТ 12,4%; без УВО 20,9%), тогда как при достижении УВО их количество практически не изменялось (до ПВТ 12,4%; без УВО 13,65%). В то же время выявлено статистически значимое снижение сред. ЦИК у больных ХГС без метаболических факторов риска достигших УВО (до ПВТ 187%; УВО 114%) по сравнению с теми, у кого произошел рецидив заболевания (до ПВТ 187%; УВО
194%). Уровень ЦИК низ. достоверно снижался у больных с УВО в обеих группах (с и без метаболических факторов риска) (до ПВТ 699%; УВО 367%) и (до ПВТ 799%; УВО 398%) соответственно. У больных, не достигших УВО ЦИК низ., также имели тенденцию к снижению, но статистически значимых отличий не было получено. Исследование содержания IgA, IgM, IgG не показало какой-либо взаимосвязи с метаболическими факторами риска и вирусологическим ответом.
Заключение. Исследования показали, что метаболические факторы риска влияют на состояние иммунитета больных при ХГС. У пациентов с ХГС и метаболическими факторами риска при достижении УВО после ПВТ снижается количество Т- и NK-киллерных клеток, тогда как при отсутствии УВО увеличивается содержание В-клеток. Таким образом, у больных ХГС с метаболическими факторами риска снижение содержания популяций истинных киллеров и Т-киллеров во время терапии можно считать благоприятным признаком, а повышение числа В-клеток неблагоприятным.
РЕЗУЛЬТАТЫ ПИЛОТНОГО КЛИНИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ДЕНДРИТНО-КЛЕТОЧНЫХ ВАКЦИН В ЛЕЧЕНИИ ХРОНИЧЕСКОЙ HCV-ИНФЕКЦИИ
Олейник Е.А., Леплина О.Ю., Курочкина Ю.Д., Останин А.А., Старостина Н.М.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск, Россия
Введение. Многочисленными исследованиями показано, что ключевую роль в патогенезе и исходе инфекции, обусловленной вирусом гепатита С (HCV), играют антиген-специфические CD4+ и CD8+T-клетки. Развитие сильного устойчивого и мультиэпитопного Т-клеточного ответа приводит к элиминации вируса, тогда как несостоятельность адаптивного Т-клеточного ответа ассоциируется с персистенцией вируса. Дендритные клетки являются профессиональными антиген-презентирующими клетками, которые играют доминирующую роль в прими-ровании Т-клеток и поддержании сильного Т-клеточного ответа.
Цель и задачи. Изучение безопасности ДК, нагруженных рекомбинантными белками Core (1-120) и NS3 (11921457) HCV генотипа 1b, и способности ДК-вакцин индуцировать антиген-специфический Т-клеточный ответ.
Материалы и методы. В исследование были включены 10 пациентов с хроническим гепатитом С 1-го генотипа с вирусной нагрузкой — РНК >104 МЕ/мл, без трансформации в цирроз. Иммунотерапия проводилась в виде инициирующего (4 вакцинации с кратностью 1 раз в неделю) и поддерживающего (4-6 вакцинаций с кратностью 1 раз в месяц) курсов. Обследование пациентов проводилось до начала терапии, после 1-го, 2-го курса и последующего 6-месячного наблюдения. IFN-ДК получали путем культивирования прилипающей фракции моно-нуклкеарных клеток (МНК) больных ХГС в присутствии ГМ-КСФ и IFNa с последующей часовой нагрузкой вирусными антигенами. Специфический пролифератив-ный Т-клеточный ответ на вирусные антигены оценивали радиометрически по включению Н3 тимидина. Th1 и Th2 Т-клеточный ответ оценивали по продукции цитоки-нов IFNy и IL-4 в антиген-стимулированных культурах Т-клеток.
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
Результаты. Установлено, что иммунотерапия ауто-логичными ДК, нагруженными рекомбинантными вирусными антигенами, характеризуется хорошей переносимостью, не вызывает тяжелых поствакцинальных реакций. Вакцинотерапия сопровождается возрастанием пролиферативного ответа мононуклеарных клеток на вирусные антигены, в большей степени на Core, индукцией антиген-специфических TM-клеток (с пиком ответа после 2-го курса вакцинаций), и не приводит к генерации регуляторных СD4+СD25+СD127- Т-клеток. Несмотря на отсутствие устойчивого вирусологического ответа, было показано, что пролиферативный ответ МНК на вирусные антигены после 1-го курса вакцинотерапии обратно коррелирует с вирусной нагрузкой. Полученные данные свидетельствуют о том, что ДК, нагруженные НСV Core (1-120) и NS3 (1192-1457) рекомбинантными белками, способны стимулировать антигенспецифический Т-клеточный ответ и могут рассматриваться в качестве адьювантной иммунотерапии в комбинированном лечении больных хроническим гепатитом С.
Заключение. Полученные данные свидетельствуют о безопасности иммунотерапии IFN-ДК, нагруженными рекомбинантными вирусными антигенами, и позволяют рассматривать данный подход в качестве дополнения к терапии пегилированными интерферонами и рибави-рином для улучшения результатов лечения.
ГЕНОТИПИРОВАНИЕ ОККУЛЬТНОГО ГЕПАТИТА В У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАНЫХ ПАЦИЕНТОВ
Останкова Ю.В.1, Семенов А.В.1, 2, Тотолян Арег А.1, 2
1ФБУН«Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера», Санкт-Петербург, Россия
2 ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Введение. По данным ООН количество инфицированных вирусом иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ) в мире составляет свыше 35 миллионов человек, количество инфицированных вирусом гепатита С (ВГС) составляет почти 3% от населения земного шара, у 70-80% которых развивается хронический вирусный гепатит С, вирусом гепатита В (ВГВ) заражены почти 2 млрд человек, из которых у 240 млн развивается хроническая форма. Общность механизмов заражения ВГВ, ВГС и ВИЧ-инфекцией способствует повышению вероятности сочетания этих инфекций у пациентов, а чем больше группа людей подвержена действию основных факторов риска в отношении ВГВ и других парентеральных инфекций, тем более высокий уровень носительства HBsAg она будет демонстрировать. Исходя из вышесказанного, логично было бы предполагать высокую частоту встречаемости ВГВ у ВИЧ-инфицированных пациентов. Однако ХВГВ выявляют примерно у 10%, а ХВГС у 25% ВИЧ-инфицированных. Такое противоречие ожидаемого и диагностируемого уровней распространенности ВГВ у ВИЧ-инфицированных пациентов может объясняться использованием для диагностики ВГВ преимущественно серологических методов (главным образом HBsAg), в то время как известно, что ВИЧ способен подавлять репликацию ВГВ, что приводит к распространенности оккульт-
ной формы ХВГВ (окГВ), а иммуносупрессия, вызванная ВИЧ-инфекцией, может приводить к низкой реакции антител на HBsAg, а также реактивации ВГВ.
Цель. Проанализировать распространенность генотипов оккультного гепатита В у HBsAg-негативных ВИЧ-инфицированных лиц с вирусологически неэффективной антиретровирусной терапией (АРВТ).
Материалы и методы. В работе использованы образцы плазмы крови 264 HBsAg-негативных ВИЧ-инфицированных пациентов из СЗФО с вирусологической неэффективностью АРВТ (вирусная нагрузка > 50 МЕ/мл после 6 месяцев АРВТ или повышение вирусной нагрузки после первичного подавления репликации вируса). Выявление ДНК ВГВ проводили с помощью разработанного метода «гнездовой» ПЦР с использованием праймеров, фланкирующих рекомендованный для гено- и субтипирования ВГВ регион Pre-S1/Pre-S2/S протяженностью 1169 п.о., и в дальнейшем проводили прямое секвенирование фрагмента. Первичный анализ полученных в ходе секвенирования фрагментов проводили с помощью программы NCBI Blast в сравнении с ну-клеотидными последовательностями, представленными в международной базе данных GenBank. Выравнивание нуклеотидных последовательностей проводили в программе MEGA версия 5, используя алгоритм ClustalW.
Результаты. При использовании предложенного нами метода выявления ДНК ВГВ при низкой вирусной нагрузке ВГВ был обнаружен у 33,7% пациентов. На основании филогенетического анализа 89 изолятов показано, что в обследованной группе представлен преимущественно ВГВ генотипа D и только один пациент с ВГВ генотипа C, преобладает ВГВ субгенотипа D1 (39,3%) по сравнению с субгенотипами D2 (29,2%), D3 (30,4%) и С1 (1,1%). Вну-тригрупповой процент нуклеотидной идентичности среди пациентов с ВГВ субгенотипов D1, D2 и D3 составил 98,6%±0,6%, 98,9%±0,4% и 98,1%±0,4% соответственно. На филогенетическом древе выделяются несколько тесных кластеров, изоляты которых получены преимущественно (83,3%) от мужчин, более чем для половины из которых в анамнестических данных указана принадлежность к активным или бывшим ПИН. Так, среди пациентов с ВГВ D1 выявлен кластер, внутри которого средняя эволюционная р-дистанция составила 0,0025±0,001, среди пациентов с ВГВ D2 кластер со средней р-дистанцией 0,0013±0,0009, среди пациентов с ВГВ D3 кластер со средней р-дистанцией 0,004±0,001, что указывает на единый источник происхождения вирусов в каждом из этих случаев. Таким образом, становится очевидным, что главную роль в кластеризации играет не столько географическая общность, сколько пути передачи инфекции. Дополнительным подтверждением этого предположения является высокая встречаемость в группе ВГВ D3, ассоциированного с парентеральным инфицированием среди ПИН, при этом четко разделяющегося на специфический кластер близкородственных изолятов и последовательности ВГВ, находящиеся на различных филогенетических отростках, не имеющих близкого генетического родства.
Заключение. По всей видимости, среди ВИЧ-инфицированных лиц ВГВ распространяется не за счет значимых эпидемиологических сетей с конкретными единичными прародителями, а преимущественно независимыми путями посредством гетеросексуальных контактов, исключая отдельные случаи, явно связанные с парентеральным инфицированием у ПИН.
