CC BY
20
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитов Immunology of HIV and viral hepatitis
ИЗМЕНЕНИЯ СУБПОПУЛЯЦИОННОГО СОСТАВА ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ Т-КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ КОИНФЕКЦИИ ВИЧ И MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
Кудрявцев И.В.1, 2, Васильева Е.В.4 5, Максимов Г.В.3, Вербов В.Н.4, Серебрякова М.К.2, Тотолян Арег АЛ 4
1ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Минздрава РФ, Санкт-Петербург, Россия
2 ФГБНУ«Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия
3 СПбГУЗ «Городской противотуберкулезный диспансер», Санкт-Петербург, Россия
4 ФБУН«Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера», Санкт-Петербург, Россия
5 Bostongene, Москва
ВИЧ-инфекция традиционно ассоциируется с уменьшением как относительного, так и абсолютного содержания общего пула CD4+ лимфоцитов в периферической крови. Однако изменения в составе Т-хелперов, обладающих широким спектром регуляторных функций, оказывают влияние на эффективность реакций врожденного и приобретенного иммунитета в целом, в том числе и цито-токсических Т-клеток, играющих ведущую роль в защите от внутриклеточных патогенов. Целью данной работы был анализ субпопуляционного состава и оценка уровня диф-ференцировки CD3+CD8+ клеток, а также поиск новых перспективных маркеров, позволяющих отличить больных с ВИЧ от больных с коинфекцией ВИЧ-ТБ в условиях клинико-диагностической лаборатории. Объектом исследования служила венозная кровь, полученная от условно здоровых добровольцев (n = 37) и больных трех указанных групп. Для исследования особенностей дифференциров-ки цитотоксических Т-клеток у больных ВИЧ (n = 23), ТБ (n = 28) и при коинфекции ВИЧ-ТБ (n = 30) была использована тактика поэтапного «гейтирования», основанная на первоначальной оценке экспрессии CD45RA и CD62L с последующим анализом ко-экспрессии CD27 и CD28 клетками с фенотипами CD45RACD62L- (клетки эф-фекторной памяти, ЕМ) и CD45RA+CD62L- («терминально-дифференцированных» клетки эффекторной памяти, экспрессирующие CD45RA, TEMRA). Было определено относительное и абсолютное содержания CD3+CD8+ лимфоцитов с фенотипами CD45RA+CD62L+ («наивные» клетки), CD45RA+CD62L-,клеток эффекторной памяти и их основных субпопуляций (ЕМ1, ЕМ2, ЕМ3 и ЕМ4), а также клеток TEMRA, котрые подразделялись на «пре-эффекторы» 1 типа (рЕ1), «пре-эффекторы» 2 типа (рЕ2) и эффекторные (Е) клетки. На всех упомянутых выше типах цитотоксических Т-клеток определяли уровень молекулы CD57, уровень экспрессии которой тесно связан с накоплением перфорина и гранзима В в составе цито-литических гранул. Относительное и абсолютное содержание CD3+CD8+ у здоровых доноров и больных ТБ не отличались, тогда как наличие ВИЧ приводило к увеличению данных показателей в два и полтора раза соответственно (в обоих случаях р < 0,001). В случае коинфекции относительное содержания CD3+CD8+ превосходило все указанные группы и достигало 60,94% (45,88; 72,03), а абсолютное содержание — 890 (538; 1159) кл/1 мкл. Столь же существенные изменения касались и субпопуляционного
состава CD3+CD8+ клеток. Так, наличие ВИЧ приводило к резкому снижению числа «наивных» клеток и увеличению в циркуляции субпопуляций более «зрелых» фенотипов — ЕМ и TEMRA. При сопоставлении групп больных только ВИЧ-инфекцией и на фоне туберкулеза, наиболее информативным являлся анализ субпопуляционного состава клеток ЕМ. Так, относительное содержание клеток EM3 (CD45RA-CD62L-CD27-CD28-) при ВИЧ-инфекции составляло 5,66% (3,63; 7,84) или 82 (46; 102) клеток в 1 мкл крови, а при коинфекции ВИЧ-ТБ эти значения составили 12,05% (8,48; 23,17) и 180 (90,65; 294) кл/мкл соответственно (р < 0,001 в обоих случаях). При анализе групп сравнения - условно здоровые добровольцы и больные ТБ - эти значения были значимо ниже (2,11% (0,75; 3,95) и 42 (14; 76) кл/мкл, а также 3,06% (1,68; 5,69) и 47 (24; 100) кл/мкл соответственно). Более того, отмечено снижение относительного числа ЕМ3 клеток, экспрессирующих CD57, в исследованных группах. Так, у здоровых добровольцев и больных ТБ CD57 обнаруживался на поверхности 79,83% (71,05; 88,20) и 76,75% (66,55; 83,64) клеток, соответственно, тогда как при ВИЧ-инфекции - лишь на 62,26% (51,30; 72,71) клеток, а при ВИЧ-ТБ - на 52,43% (34,73; 63,02) клеток. Полученные результаты позволяют предположить, что на основании анализа уровня диффе-ренцировки CD3+CD8+ клеток при помощи многоцветной проточной цитометрии возможно разработать новые перспективные способы мониторинга течения ВИЧ и ТБ.
ИЗУЧЕНИЕ ЧАСТОТЫ АЛЛЕЛЕЙ ГЕНА CCR5 У ПОПУЛЯЦИИ САНКТ-ПЕТЕРБУРГА
Любимова Н.Е.1, Семёнов А.В.1, 2
1 ФБУН «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» имени Пастера, Санкт-Петербург, Россия
2 ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Ген хемокинового рецептора CCR5 локализован на коротком плече 3 хромосомы. Лиганды CCR5, такие как хемокины CCL3, CCL4, CCL5 и CCL8, играют главную роль в хемотаксисе и активации лимфоцитов во вторичных лимфоидных органах. Аллель delta32 гена CCR5 представляет собой делецию 32 пар оснований этого гена. Эта мутация приводит к нарушению адгезивных свойств кодируемого ею белка CCR5 Т-лифоцитов.
Гомозиготы по делеции CCR5del32 резистентны к некоторым заболеваниям, например к ВИЧ. Аллель CCR5del32 преимущественно распространён в европейских популяциях, тогда как частота аллеля в большинстве азиатских популяциях ниже 3-5%. Этот аллель практически полностью отсутствует в аборигенных популяциях Америки и Океании. Его частота самая высокая в Северной Европе, в областях, прилегающих к Балтийскому и Белому морям (15-18%).
Определение пациентов с аллелью CCR5del32 важно для прогноза течения ВИЧ-инфекции у инфицированных пациентов, а также для оценки риска передачи ВИЧ в дискор-дантных парах, где только один из партнеров инфицирован.
Цель. Изучение частоты встречаемости аллелей CCR5del32 в Санкт-Петербурге.
Методы. Обследовали группу, состоящую из 423 условно здоровых доноров возрастом от 0 до 95 лет, про-
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
живающих в Санкт-Петербурге. Из образцов крови или буккального эпителия с помощью коммерческих наборов (Интерлабсервис, РФ) выделяли геномную ДНК. Генотип CCR5 определяли методом пиросеквенирования на пиросеквенаторе PyroMark Q24 (Qiagen), используя коммерческие наборы (Интерлабсервис, РФ), по рекомендации фирмы-производителя.
Результаты. Не было выявлено достоверного влияния пола и возраста на частоту распределения изучаемых аллелей. Распределение частот генотипов в исследуемой популяции не отличается от распределения Харди-Вайн-берга. У 346 человек выявили генотип дикого типа. 72 человека были гетерозиготами по делеции изучаемого гена. В обследуемой популяции выявлено пять человек, являющимися гомозиготами по делеции. Таким образом, частота генотипа CCR5 дикого типа составляла 81,8% (346/423), гетерозигот по делеции — 17,0% (72/423), гомозигот CCR5del32/CCR5del32 — 1,2% (5/423). Частота аллеля дикого типа была 0,9, делеции — 0,1.
Заключение. Полученные результаты по частоте аллелей CCR5del32 совпадают с частотой аллелей в северной Европе и Северо-Запада РФ, где частота этих аллелей одна из самых высоких в мире. Высокая частота встречаемости аллели CCR5del32 делает обоснованным скрининг ВИЧ-инфицированных и группу риска по ВИЧ-инфекции.
ОЦЕНКА ГЕМОПОЭЗА У ПАЦИЕНТОВ С ЦИРРОЗОМ ПЕЧЕНИ РАЗЛИЧНОЙ ЭТИОЛОГИИ
Меледина И.В., Старостина Н.М., Шипунов М.В., Меняева Е.В., Филимонов П.Н., Черных Е.Р., Шевела Е.Я.
Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии, Новосибирск, Россия
Введение. При исследовании периферической крови у 80-88% больных циррозом печени (ЦП) регистрируется цитопенический синдром, степень выраженность которого не всегда коррелирует со спленомегалией, тяжестью заболевания, проведением противовирусной терапии (ПВТ). Цитопения имеет клиническое значение при развитии осложнений ЦП, а также ограничивает возможность проведения ПВТ. Кроме того, учитывая возможность использования аутологичных мононуклеарных и мезенхимальных стромальных клеток костного мозга в терапии больных ЦП, представляется актуальной оценка костномозгового кроветворения у этой группы пациентов.
Цель и задачи. Оценка особенностей гемопоэтиче-ского плацдарма и развития линий клеточных элементов крови у больных ЦП различной этиологии.
Материалы и методы. Исследование клеточного состава костного мозга и периферической крови проведено у 19 пациентов (средний возраст 45,8±10,6 лет) с подтвержденным ранее диагнозом ЦП различного генеза: как исход вирусного гепатита (n = 11), токсического гепатита (n = 6), первичного билиарного цирроза (ПБЦ) и аутоиммунного гепатита (АИГ) (n = 2). Пациентам выполнялась трепано-биопсия подвздошной кости с последующим патогисто-логическим и цитологическим исследованием биоптата. Статистическую обработку проводили при помощи пакета прикладных программ Statistica 6.0 для Windows.
Результаты. Цитопенический синдром был диагностирован у 97.4% пациентов исследуемой группы. При пато-гистологической оценке трепанобиоптата подвздошной
кости нарушение соотношения гемопоэтической и жировой ткани было зарегистрировано у 66,7% пациентов.
Наиболее выраженные изменения гемопоэза выявлены у пациентов с ЦП вирусной этиологии. Так, при оценке гранулоцитарного ряда, у 90,9% пациентов этой группы снижено количество промиелоцитов, у 63% — сегментоядерных нейтрофилов. У 36,4% регистрируется увеличение количества плазматических клеток. Количество мегакариоцитов снижено у 54,5% пациентов, преобладают мелкие формы. В группе больных ЦП вирусной этиологии эритроидный ряд гиперплазирован у 63,6% пациентов, снижение количества эритробластов и про-нормоцитов регистрируется у 100 и 45,5% соответственно, более зрелые формы — нормоциты — представлены в нормальном количестве. У 64% пациентов снижен индекс созревания эритробластов.
В группе пациентов с ЦП токсической этиологии наблюдается преимущественно супрессия кроветворения — в 100% случаев был выявлен миелофиброз 1 ст, у 66,7% (п = 4) — гипоплазия эритроидного ростка за счет снижения количества эритробластов, при оценке грану-лоцитарного ряда регистрируется снижение количества промиелоцитов (100%) и миелоцитов (66,7%), количество мегакариоцитов снижено у 83,3% пациентов.
У пациентов с аутоиммунным генезом ЦП (ПБЦ и АИГ) имеется реактивная гиперплазия эритроидного ростка, особенностью мегакариоцитарного ростка является преобладание мелких гипосегментированных форм, у 1 пациента зарегистрирован миелофиброз 1 степени, также у 1 пациента — гиперплазия плазматического ряда, ассоциированная с увеличением количества В-лимфоцитов периферической крови и гиперпродукцией IgG.
Заключение. Таким образом, у больных циррозом печени с высокой частотой регистрируются изменения костномозгового кроветворения, имеющие особенности в зависимости от этиологии заболевания печени, в связи с чем для рациональной коррекции гемопоэза могут требоваться различные подходы. В развитии нарушений костномозгового кроветворения обсуждается роль активной вирусной инфекции, резервуаром которой являются в т.ч. монону-клеарные и полиморфноядерные клетки периферической крови и костного мозга, опосредованной Т-лимфоцитами миелосупрессии, аутоиммунных реакций, влияния ци-токинов (1КЫу, ТОТа, хемокинов М1Р 1 а/в, СЖХ-10, СХСЬ-3, ВСА-1). Представляется целесообразным дальнейшее уточнение генеза нарушений гемопоэза и оценка их влияния на структурные и функциональные характеристики гемопоэтических стволовых клеток.
ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО РИСКА НА СОСТОЯНИЕ ИММУНИТЕТА БОЛЬНЫХ ХГС ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ПРОТИВОВИРУСНОЙ ТЕРАПИИ
Никитин В.Ю., Сухина И.А., Яременко М.В., Жданов К.В., Иванов А.М., Никитин Ю.В., Ширина И.В., Козлов К.В., Жанарстанова Г.А.
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург, Россия
Введение. В настоящее время активно изучается взаимосвязь хронического гепатита С (ХГС) и метаболического синдрома. Коморбидные заболевания, такие как ожирение, сахарный диабет, гипертоническая болезнь, ишемическая болезнь сердца (ИБС), часто сопровождающие ХГС являются предикторами метаболического
