Влияние экстракта из виноградных листьев на антиоксидантно-прооксидантный индекс АПИ в тканях полости рта крыс с экспериментальным стоматитом на фоне гипосаливации Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

2

BicHUK стоматологИ", № 1, 2013

ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧНИЙ РОЗД1Л

УДК 616.36-102.2-07:616-078.33

А. П. Левицкий, д. биол. н., С. В. Гончарук, к. мед. н., О. И. Аншукова, к. мед. н., Е. П. Пустовойт, к. мед. н.

ГУ "Институт стоматологии НАМН Украины"

ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА ИЗ ВИНОГРАДНЫХ ЛИСТЬЕВ НА АНТИОКСИДАНТНО-ПРООКСИДАНТНЫЙ ИНДЕКС АПИ В ТКАНЯХ ПОЛОСТИ РТА КРЫС С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ СТОМАТИТОМ НА ФОНЕ ГИПОСАЛИВАЦИИ

Изучено содержание МДА, активность каталазы и индекс АПИ в слизистой щеки, языка и в десне крыс с сочетанной патологией (гипосаливация + токсический стоматит). Показано увеличение содержания МДА, снижение активности каталазы и уровня АПИ, которые нормализуются после орошений полости рта экстрактом из виноградных листьев. Ключевые слова: слизистая полости рта, гипосаливация, стоматит, десна, МДА, каталаза, экстракт из виноградных листьев.

А. П. Левицький, С. В. Гончарук, О. I. Аншукова, О. П. Пустовойт

ДУ "1нститут стоматологи НАМН"

ВПЛИВ ЕКСТРАКТУ З ВИНОГРАДНОГО ЛИСТЯ НА АНТИОКСИДАНТНО-ПРООКСИДАНТНИЙ 1НДЕКС АП1 В ТКАНИНАХ ПОРОЖНИНИ РОТА ЩУР1В З ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНИМ СТОМАТИТОМ НА ФОН1 Г1ПО САЛ1ВАЦП

Вивчено вмiст МДА, активтсть каталази та шдекс АП1 в слизовш щоки, язика та в яснах щурiв iз сполученою пато-логieю (гiпосалiвацiя + токсичний стоматит). Показано збшьшення вм^ту МДА, зниження активностi каталази та рiвня АП1, ят нормалiзуються тсля зрошень порожнини рота екстрактом з виноградного листя. Ключов1 слова: слизова порожнини рота, гiпосалiвацiя, стоматит, ясна, МДА, каталаза, екстракт з виноградного листя.

A.P. Levitskij, S. V. Goncharuk, O.I. Anshukova, E.P. Pustovojt

State Establishment "The Institute of Stomatology of the NAMS"

THE INFLUENCE OF THE EXTRACT FROM VINE LEAVES UPON THE ANTIOOXIDANT -PROOXIDANT INDEX API IN ORAL TISSUES OF RATS WITH EXPERIMENTAL STOMATITIS AND HYPOSALIVATION

The antioxidant and anti-inflammatory effect of the extract from vine leaves, conditioned by the presence of bioflavonoids, was revealed in the previous studies. On the grounds of the role of free-radical oxidation in the processes of inflammation, the aim of this work is to evaluate the state of antioxidant system in pe-riodontium tissues at inflammation and the influence of the extract from vine leaves. The water-alcohol extract from vine

leaves of Isabella breed was used in the work. Hyposalivation was simulated in she-rats with the help of atropine and stomatitis with the applications of apitoxin on gums. The contents of malonic dialdehyde (MDA), activity of catalase and antioxidant-prooxidant index (API) were determined in homogenates of gum, mucous membranes of cheek and tongue. The simulation of the combined pathology has resulted in the growth of the level of MDA, simultaneous to the reduction of catalase activity that results in the considerable decrease in API index in the studied subjects and speaks of the weakening of the preventive potential of oral tissues. The irrigations of oral cavity with the extract from vine leaves improve considerably the impaired indices. The findings became the substantiation for the further study of the extract from vine leaves in clinics not only at stomatological diseases but also at other ones, in pathogenesis of which the free-radical oxidation play the decisive role. Key words: oral mucous membrane, hyposalivation, stomatitis, gum, MDA, catalase, extract from vine leaves.

Ранее нами было показано антиоксидантное и противовоспалительное действие экстракта из листьев винограда [1, 2]. Установлено, что листья винограда содержат большие количества полифенольных веществ, среди которых преобладают биофлавоноиды, обладающие Р-витаминной активностью [3]. В механизме биологического действия биофлавоноидов, как правило, на первое место ставят их сильные антиок-сидантные свойства, превосходящие во много раз подобные свойства у классических антиоксидантов - аскорбиновой кислоты и токоферолов [4, 5].

Учитывая существенную роль, которую играет свободнорадикальное окисление в процессах воспаления и дистрофии [6, 7], нам представлялось целесообразным оценить состояние антиоксидантной системы в тканях полости рта при моделировании воспалительно-дистрофического процесса и воздействии по-лифенольных веществ из листьев винограда.

Материалы и методы исследования. Экстракт из листьев винограда получали путем настаивания 50%-ного спиртового раствора с тонкоизмельченны-ми сухими листьями винограда сорта Изабелла в соотношении 20:1 в течение 5 дней при комнатной температуре. После фильтрования отгоняли на водяной бане спирт и получали водный раствор биологически активных веществ с концентрацией сухих веществ 4,5 % и содержанием в них полифенольных веществ около 70 %.

Эксперименты проводили на 24 белых крысах линии Вистар (самки, 5 месяцев, живая масса 200250 г), разделенных на 3 равные группы: 1-ая - норма (интактные), 2-ая - сочетанная патология: атропино-вая гипосаливация [8] + стоматит после воздействия аппликации на слизистую геля с пчелиным ядом [9], 3-я - сочетанная патология + орошение полости рта разведенным в 5 раз водой экстрактом из листьев винограда (по 2,5 мл на крысу 2 раза в день за полчаса до еды и спустя 1 час после аппликации геля с пчелиным ядом). Продолжительность эксперимента составила 6 дней (4 дня гипосаливация + 2 дня аппликаций пчелиного яда + орошение полости рта экстрактом).

Вiсник стоматологИ", № 1, 2013

3

Эвтаназию животных осуществляли под тиопен-таловым наркозом (20 мг/кг); иссекали десну, слизистую щеки и языка, которые хранили до исследования при -30°С.

В гомогенате тканей определяли содержание малонового диальдегида (МДА), который является конечным продуктом перекисного окисления полиено-

вых жирных кислот [10], активность антиоксидантно-го фермента каталазы, разрушающего перекись водорода [10] и по соотношению активности каталазы и концентрации МДА рассчитывали антиоксидантно-прооксидантный индекс АПИ [10], который характеризует баланс антиоксидантной и прооксидантной систем организма.

Таблица

Влияние экстракта из виноградных листьев на антиоксидантно-прооксидантный индекс АПИ в тканях полости рта крыс с экспериментальным стоматитом на фоне гипосаливации

№ п/п Ткани и группы МДА, ммоль/кг Каталаза, мкат/кг АПИ, ед.

Слизистая щеки

1 Норма 15,2±1,1 7,6±0,3 5,0±0,2

2 Стоматит + гипосаливация 19,7±0,8 р<0,01 7,0±0,3 р>0,05 3,5±0,2 р<0,01

3 Стоматит + гипосаливация +экстракт 16,0±1,0 р>0,3 р1<0,05 7,5±0,3 р>0,5 р1>0,1 4,7±0,2 р>0,3 р1<0,01

Слизистая языка

1 Норма 28,0±2,5 4,4±0,1 1,6±0,1

2 Стоматит + гипосаливация 36,8±2,2 р<0,05 3,3±0,2 р<0,01 0,9±0,1 р<0,001

3 Стоматит + гипосаливация +экстракт 29,6±2,8 р>0,3 р1>0,05 3,9±0,1 р<0,05 р1<0,05 1,3±0,1 р<0,05 р1<0,05

Десна

1 Норма 19,8±2,0 9,7±0,8 4,9±0,3

2 Стоматит + гипосаливация 29,2±2,9 р<0,05 7,2±0,4 р<0,05 2,5±0,2 р<0,01

3 Стоматит + гипосаливация +экстракт 21,3±2,8 р>0,3 р1>0,05 8,9±0,6 р>0,3 р1<0,05 4,2±0,3 р>0,05 р1<0,01

Примечание : р - показатель достоверности различий с группой 1; р1 - показатель достоверности различий с группой 2.

Результаты исследований и их обсуждение. В

таблице представлены результаты исследования вышеуказанных показателей антиоксидантной и проок-сидантной систем в трех тканях полости рта: слизистой щеки, языка и в десне. Из этих данных видно, что самый высокий уровень прооксидантной системы (о чем свидетельствует высокое содержание МДА) отмечается в слизистой языка, возможно, из-за его большей микробной обсемененности [8], либо из-за самого низкого уровня антиоксидантного фактора ка-талазы. Индекс АПИ для слизистой языка в 3 раза ниже, чем аналогичный показатель для слизистой щеки и десны.

При сочетанной патологии (гипосаливация + токсический стоматит) наблюдается повышение содержания МДА, что указывает на активизацию перекис-ного окисления липидов, которое происходит на фоне снижения активности каталазы, отражающего состояние антиоксидантной системы. Эти разнонаправленные изменения уровней МДА и каталазы приводят к значительному (р<0,01) падению индекса АПИ, что может свидетельствовать об ослаблении защитного потенциала тканей полости рта при моделируемой патологии.

Орошения полости рта экстрактом из виноград-

ных листьев практически нормализуют содержание МДА, активность каталазы и индекс АПИ в слизистой щеки и в десне, однако не восстанавливают до нормы активность каталазы и индекс АПИ в слизистой языка.

Полученные нами данные могут свидетельствовать о том, что наблюдавшееся нами ранее [1, 2] противовоспалительное и антидисбиотическое действие экстракта из виноградных листьев можно объяснить способностью биофлавоноидов виноградного экстракта тормозить процессы свободнорадикального окисления, играющего пусковую роль в развитии воспаления, повышении проницаемости гисто-гематических барьеров, снижении иммунитета, а также способных индуцировать активацию антиокси-дантной системы, обладающей цитопротективным и антивоспалительным действием.

Эти результаты дают основание для дальнейшего изучения экстракта из виноградных листьев - богатейшего источника Р-витаминных веществ [3], в клинике не только при стоматологических, но и при других заболеваниях, в патогенезе которых свободно-радикальное окисление играет решающую роль.

Из наших результатов следует, что слизистая полости рта не однородна и имеет существенные отличия в плане состояния их защитных систем, что тре-

4

BicHUK стоматологИ'", № 1, 2013

бует дифференцированного подхода к профилактике и лечению заболеваний слизистой оболочки полости рта различной локализации.

Выводы. 1. Из трех изученных тканей полости рта (слизистая щеки и языка, десна) самым высоким содержанием МДА и самой низкой активностью каталазы, а, следовательно, и самым низким уровнем индекса АПИ характеризуется слизистая языка.

2. При сочетанной патологии (гипосаливация + стоматит) наблюдается существенное увеличение в исследуемых тканях содержания МДА, снижение активности каталазы и, особенно, индекса АПИ.

3. Экстракт из виноградных листьев, содержащий Р-витаминные вещества, снижает содержание МДА и повышает активность каталазы и уровень индекса АПИ.

4. Экстракт из виноградных листьев заслуживает внимания для дальнейшего изучения в клинических условиях.

Список литературы

1. Лепский В. В. Влияние зубного эликсира "Виноградный" на уровень маркеров воспаления и дисбиоза в десне крыс с экспериментальным гингивитом / В. В. Лепский, В. В. Лепский, Л. Н. Хромагина, О. Э. Кнава // Вюник стоматологи. - 2011. - № 3 (76). - С. 22-24.

2. Левицкий А. П. Лечебно-профилактическое действие оральных гелей с полифенолами при экспериментальном сахарном диабете / А. П. Левицкий, Ю. В. Цисельский, О. Ю. Билык, И. А. Селиванская // Вюник морсько! медицини. - 2012. - № 2 (56). -С.88-92.

3. Мука из виноградных листьев - источник витамина Р в комбикормах / А. П. Левицкий, В. Т. Гулавский, И. В. Ходаков [и др.] // Зерновi продукти i комбжорми. - 2011. - № 1. - С. 30-33.

4. Andersen O. M., Markham K. R. Flavonoids: chemistry, biochemistry and applications. New York, CRC Press, 2005:1256.

5. Макаренко О. А. Антиоксидантные свойства некоторых природных биофлаваноидов / О. А. Макаренко, А. П. Левицкий, В. И. Литвиненко, И. В. Ходаков // Вюник Одеського нащонального ушверситету. - 2010. - Т. 15, вип. 6, бюлопя. - С. 15-21.

6. Величковский Б. Т. Свободнорадикальное окисление как звено срочной и долговременной адаптации организма к факторам окружающей среды / Б. Т. Величковский // Вестник РАМН. -2001. - № 6. - С. 45-52.

7. Сазонтова Т. Г. Значение баланса прооксидантов и ан-тиоксидантов - равнозначных участников метаболизма / Т. Г. Са-зонтова, Ю. В. Архипенко // Пат. физиол. и экспер. терапия. - 2007. - № 3. - С. 2-18.

8. Куштр E. М. Вплив гiпосалiвацii на розвиток експери-ментального стоматиту у щурiв / E. М. Кушшр, А. П. Левицький, Н. I. Ткачук // Одеський медичний журнал. - 2012. - № 1 (129). -С. 18-19.

9. Ткачук Н. И. Биохимические изменения в тканях полости рта крыс при воспроизведении стоматита с помощью пчелиного яда /_Н. И. Ткачук, В. Я. Скиба, А. П. Левицкий // Вюник стоматологи. 2007.№ 6 (60). С. 16-20.

10. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости: метод. рекомендации / А. П. Левицкий, О. В. Деньга, О. А. Макаренко [и др.] Одесса, 2010. 16 с.

REFERENCES

1. Lepskiy V. V., Lepskiy V. V., Khromagina L. N., Kna-

va O. E. The influence of dentifrice water "Vinogradnyj" upon the level of markers of inflammation and disbiosis in gums of rats with experimental gingivitis. Visnyk stomatologiy; 2011; 3 (76): 22-24.

2. Levitskiy A. P., Tsiselskiy Yu. V., Bilyk O. Yu., Selivan-skaya I. A. The therapeutic and prophylactic action of oral gels with polyphenols on experimental diabetes mellitus. Visnyk morskoi medit-syny. 2012; 2(56): 88-92.

3. Levitskiy A. P., Gulavskiy V. T., Khodakov I. V., Ta-rasenko Yu. V., Ryaguzova I. S., Tsyundyk A. G. Meal from grape

leaves - the source of vitamin P. Zernovi ргс^Йу i tomM^i'my. 2011; 1: 30-33.

4. Andersen O. M., Markham K. R. Flavonoids: chemistry, biochemistry and applications. New York, CRC Press, 2005:1256.

5. Makarenko O. A., Levitskiy A. P., Litvinenko V. I., Kho-dakov I. V. The Antioxidant characteristics of some natural bioflavonoids. Visnyk Odeskogo natsionalnogo universytetu. 2010; 15 (6); biologiya: 15-21.

6. Velichkovskiy B. T. Free radical oxidation as link of urgent and longtime organism adaptation to environmemtal factors. Vestnik Rossiyskoy Akademii Meditsinskikh Nauk. 2001; 6: 45-52.

7. Sazontova T. G., Arkhipenko Yu. V. The importance of balance of prooxidants and antioxidants - equivalent member in metabolism. Patologicheskaya fisiologiya i eksperimentalnaya terapiya. 2007; 3: 2-18.

8. Kushnir E. M., Levitskiy A. P., Tkachuk N. I. Influence of gyposalivation on the development of experimental stomatitis in rats. Оdеskiy medychnyy zhurnal. 2012; 1 (129): 18-19.

9. Tkachuk N. I., Skiba V. Ya., Levitskiy A. P. The biochemical changes in oral tissues in rats at the restoration of stomatitis with apitoxin. Visnyk stomatologiy; 2007; 6 (60): 16-20.

10. Levitskiy A. P., Denga O. V., Makarenko O. A., Dem'yanenko S. A., Rossachanova L. N., Knava O. E. Bi-okhimicheskie markery vospaleniya tkaney rotovoy polosti: metodi-cheskie rekomendatsii [Biochemical markers of inflammation of oral tissue: method guidelines]. Оdеssа, KP OGT, 2010:16.

Поступила 14.02.13

УДК 616.36-102.2-07:616-078.33

Л.Д. Чулак, д. мед. н.1, Е. Н. Кушнир1, И. В. Ходаков2, О. А. Макаренко, д. биол. н.2

1 ГУ "Одесский национальный медицинский университет" 2 ГУ "Институт стоматологии НАМН Украины"

ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА ИЗ ЛИСТЬЕВ ВИНОГРАДА НА СОСТОЯНИЕ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ СТОМАТИТЕ И ГИПОСАЛИВАЦИИ

При моделировании у крыс стоматита с помощью пчелиного яда на фоне гипосаливации наблюдается развитие в слизистой полости рта воспаления и дисбиоза. Орошение полости рта экстрактом из виноградных листьев устраняет явления воспаления и дисбиоза.

Ключевые слова: гипосаливация, стоматит, дисбиоз, воспаление, виноград.

Л. Д. Чулак, С. М. Куштр, I. В. Ходаков, О. А. Макаренко2

ДУ "Одеський нацюнальний медичний ушверситет" ДУ "1нститут стоматологи НАМН Ук^ни"

ВПЛИВ ЕКСТРАКТУ З ЛИСТЯ ВИНОГРАДУ НА СТАН СЛИЗОВОÏ ОБОЛОНКИ ПОРОЖНИНИ РОТА ПРИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМУ СТОМАТИТ ТА ППОСЛ1ВАЦП

При моделювант у щурiв стоматиту за допомогою бджо-линоЧ отрути на тлi гiпосалiвацiï спостерiгаeться розвиток в слизовш порожнин рота запалення i дисбiозу. Зро-