CC BY
144
В1сник стоматологИ'", № 1, 2013
бует дифференцированного подхода к профилактике и лечению заболеваний слизистой оболочки полости рта различной локализации.
Выводы. 1. Из трех изученных тканей полости рта (слизистая щеки и языка, десна) самым высоким содержанием МДА и самой низкой активностью ката-лазы, а, следовательно, и самым низким уровнем индекса АПИ характеризуется слизистая языка.
2. При сочетанной патологии (гипосаливация + стоматит) наблюдается существенное увеличение в исследуемых тканях содержания МДА, снижение активности каталазы и, особенно, индекса АПИ.
3. Экстракт из виноградных листьев, содержащий Р-витаминные вещества, снижает содержание МДА и повышает активность каталазы и уровень индекса АПИ.
4. Экстракт из виноградных листьев заслуживает внимания для дальнейшего изучения в клинических условиях.
Список литературы
1. Лепский В. В. Влияние зубного эликсира "Виноградный" на уровень маркеров воспаления и дисбиоза в десне крыс с экспериментальным гингивитом / В. В. Лепский, В. В. Лепский, Л. H. Хромагина, О. Э. Кнава // Вюник стоматологи. - 2011. - № 3 (76). - С. 22-24.
2. Левицкий А. П. Лечебно-профилактическое действие оральных гелей с полифенолами при экспериментальном сахарном диабете / А. П. Левицкий, Ю. В. Цисельский, О. Ю. Билык, И. А. Селиванская // Вюник морсько'' медицини. - 2012. - № 2 (56). -С.88-92.
3. Мука из виноградных листьев - источник витамина Р в комбикормах / А. П. Левицкий, В. Т. Гулавский, И. В. Ходаков [и др.] // Зерновi продукти i комбжорми. - 2011. - № 1. - С. 30-33.
4. Andersen O. M., Markham K. R. Flavonoids: chemistry, biochemistry and applications. New York, CRC Press, 2005:1256.
5. Макаренко О. А. Антиоксидантные свойства некоторых природных биофлаваноидов / О. А. Макаренко, А. П. Левицкий, В. И. Литвиненко, И. В. Ходаков // Вюник Одеського нащонального ушверситету. - 2010. - Т. 15, вип. 6, бюлопя. - С. 15-21.
6. Величковский Б. Т. Свободнорадикальное окисление как звено срочной и долговременной адаптации организма к факторам окружающей среды / Б. Т. Величковский // Вестник РАМК -2001. - № 6. - С. 45-52.
7. Сазонтова Т. Г. Значение баланса прооксидантов и ан-тиоксидантов - равнозначных участников метаболизма / Т. Г. Са-зонтова, Ю. В. Архипенко // Пат. физиол. и экспер. терапия. - 2007. - № 3. - С. 2-18.
8. Куштр E. М. Вплив гiносалiвацiï на розвиток експери-ментального стоматиту у щyрiв / E. М. Кушшр, А. П. Левицький, H. I. Ткачук // Одеський медичний журнал. - 2012. - № 1 (129). -С. 18-19.
9. Ткачук Н. И. Биохимические изменения в тканях полости рта крыс при воспроизведении стоматита с помощью пчелиного яда /_H. И. Ткачук, В. Я. Скиба, А. П. Левицкий // Вюник стоматологи. 2007.№ 6 (60). С. 16-20.
10. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости: метод. рекомендации / А. П. Левицкий, О. В. Деньга, О. А. Макаренко [и др.] Одесса, 2010. 16 с.
REFERENCES
1. Lepskiy V. V., Lepskiy V. V., Khromagina L. N., Kna-
va O. E. The influence of dentifrice water "Vinogradnyj" upon the level of markers of inflammation and disbiosis in gums of rats with experimental gingivitis. Visnyk stomatologiy; 2011; 3 (76): 22-24.
2. Levitskiy A. P., Tsiselskiy Yu. V., Bilyk O. Yu., Selivan-skaya I. A. The therapeutic and prophylactic action of oral gels with polyphenols on experimental diabetes mellitus. Visnyk morskoi medit-syny. 2012; 2(56): 88-92.
3. Levitskiy A. P., Gulavskiy V. T., Khodakov I. V., Ta-rasenko Yu. V., Ryaguzova I. S., Tsyundyk A. G. Meal from grape
leaves - the source of vitamin P. Zernovi produkty i kombikormy. 2011; 1: 30-33.
4. Andersen O. M., Markham K. R. Flavonoids: chemistry, biochemistry and applications. New York, CRC Press, 2005:1256.
5. Makarenko O. A., Levitskiy A. P., Litvinenko V. I., Khodakov I. V. The Antioxidant characteristics of some natural bioflavonoids. Visnyk Odeskogo natsionalnogo universytetu. 2010; 15 (6); biologiya: 15-21.
6. Velichkovskiy B. T. Free radical oxidation as link of urgent and longtime organism adaptation to environmemtal factors. Vestnik Rossiyskoy Akademii Meditsinskikh Nauk. 2001; 6: 45-52.
7. Sazontova T. G., Arkhipenko Yu. V. The importance of balance of prooxidants and antioxidants - equivalent member in metabolism. Patologicheskaya fisiologiya i eksperimentalnaya terapiya. 2007; 3: 2-18.
8. Kushnir E. M., Levitskiy A. P., Tkachuk N. I. Influence of gyposalivation on the development of experimental stomatitis in rats. Odeskiy medychnyy zhurnal. 2012; 1 (129): 18-19.
9. Tkachuk N. I., Skiba V. Ya., Levitskiy A. P. The biochemical changes in oral tissues in rats at the restoration of stomatitis with apitoxin. Visnyk stomatologiy; 2007; 6 (60): 16-20.
10. Levitskiy A. P., Denga O. V., Makarenko O. A., Dem'yanenko S. A., Rossachanova L. N., Knava O. E. Bi-okhimicheskie markery vospaleniya tkaney rotovoy polosti: metodi-cheskie rekomendatsii [Biochemical markers of inflammation of oral tissue: method guidelines]. Odessa, KP OGT, 2010:16.
Поступила 14.02.13
УДК 616.36-102.2-07:616-078.33
Л.Д. Чулак, д. мед. н.1, Е. Н. Кушнир1, И. В. Ходаков2, О. А. Макаренко, д. биол. н.2
1 ГУ "Одесский национальный медицинский университет" 2 ГУ "Институт стоматологии НАМН Украины"
ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА ИЗ ЛИСТЬЕВ ВИНОГРАДА НА СОСТОЯНИЕ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ СТОМАТИТЕ И ГИПОСАЛИВАЦИИ
При моделировании у крыс стоматита с помощью пчелиного яда на фоне гипосаливации наблюдается развитие в слизистой полости рта воспаления и дисбиоза. Орошение полости рта экстрактом из виноградных листьев устраняет явления воспаления и дисбиоза.
Ключевые слова: гипосаливация, стоматит, дисбиоз, воспаление, виноград.
Л. Д. Чулак, С. М. Куштр, I. В. Ходаков, О. А. Макаренко2
ДУ "Одеський нацюнальний медичний ушверситет" ДУ "1нститут стоматологи НАМН Укра1ни"
ВПЛИВ ЕКСТРАКТУ З ЛИСТЯ ВИНОГРАДУ НА СТАН СЛИЗОВО1 ОБОЛОНКИ ПОРОЖНИНИ РОТА ПРИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМУ СТОМАТИТ ТА Г1ПОСЛ1ВАЩ1
При моделювант у щурiв стоматиту за допомогою бджо-линоЧ отрути на тлi гmосалiвацu спостерiгаeться розвиток в слизовш порожнин рота запалення i дисбiозу. Зро-
шення порожнини рота екстрактом з виноградного листя усувае явища запалення i дисбюзу.
Ключов1 слова: гiпосалiвацiя, стоматит, дисбюз, запалення, виноград.
L. D. Chulak, E .I. Kushnir, I. V. Khodakov, O. A. Makarenko
THE INFLUENCE OF THE EXTRACT FROM VINE LEAVES UPON THE STATE OF ORAL MUCOUS MEMBRANE AT EXPERIMENTAL STOMATITIS AND HYPOSALIVATION
State Establishment "Odessa National Medical University" State Establishment "The Institute of Stomatology of the NAMS"
Anti-dysbiotic and anti-inflammatory effect of phytogel "Vino-gradnyj" with the extract from vine leaves at the experimental alloxan diabetes was shown in the previous investigations. The aim of this one is to study the influence of the extract from vine leaves upon the oral mucous membrane of rats with stomatitis and hyposalivation. The water-alcohol extract from vine leaves of Isabella breed was used in the work. Hyposalivation was simulated in rats with the help of atropine and stomatitis with the applications of apitoxin on gums. The degree of microbic insemination by the activity of urease, the state of nonspecific immunity by the activity of lysozyme, the intensity of inflammation by the level of malonic dialdehyde (MDA) and activity of elas-tase, the degree of dysbiosis, were determined in mucous membrane. The simulation of the combined pathology has resulted in the growth of the level of MDA, the activity of urease and elas-tase, the reduction of lysozyme activity, the degree of dysbiosis in mucous membrane of cheek and tongue. This fact speaks of dysbiotic and inflammatory phenomena. The irrigations of rats' oral cavities with vine extract have prevented the noticed disorders. The investigation has shown the extract from vine leaves to be of treatment and preventive effect at stomatitis, developing simultaneously to hyposalivation. These findings give substantiation for the clinical studies of this extract for the prevention of prosthetic stomatites.
Key words: hyposalivation, stomatitis, dysbiosis, inflammation, grape.
Листья винограда содержат большое количество биологически активных веществ, среди которых преобладают полифенольные вещества, особенно, био-флавоноиды, которые обладают Р-витаминной активностью [1, 2].
Ранее [3] было показано антидисбиотическое и противовоспалительное действие фитогеля "Виноградный", содержащего экстракт из листьев винограда при алоксановом диабете.
Целью настоящего исследования стало изучение лечебно-профилактического действия экстракта из листьев винограда на слизистую оболочку полости рта (СОПР) крыс с экспериментальным стоматитом на фоне гипосаливации.
Материалы и методы исследования. В работе был использован экстракт из листьев винограда сорта Изабелла, полученный путем водно-спиртовой экстракции сухих измельченных листьев с последующей отгонкой спирта [3].
Эксперименты были проведены на 32 белых крысах линии Вистар (самки, 5 месяцев, живая масса 200250 г), разделенных на 4 равные группы: 1-ая - норма, 2-ая - гипосаливация, которую вызывали с помощью
атропина [4], 3-я - гипосаливация + экспериментальный стоматит, который вызывали с помощью аппликаций на СОПР пчелиного яда [5, 6], 4-ая - гипосаливация + стоматит + орошение полости рта разведенным в 5 раз виноградным экстрактом (по 2,5 мл на крысу 2 раза в день).
Продолжительность опыта составила 6 дней (4 дня гипосаливация + 2 дня аппликации пчелиного яда и орошение полости рта виноградным экстрактом). Животные 2-й и 3-й групп также умерщвлялись на 6-й день (под тиопенталовым наркозом 20 мг/кг). Иссекали слизистую щеки и языка и хранили до исследования при -30°С.
В гомогенатах слизистой определяли активность уреазы (маркера микробной обсемененности) [7], активность лизоцима (показатель неспецифического иммунитета) [7], уровень маркеров воспаления: содержание малонового диальдегида (МДА) [8] и активность эластазы [8]. По соотношению относительных активностей уреазы и лизоцима рассчитывали степень дисбиоза по Левицкому [7].
Результаты исследования и их обсуждение. В табл. 1 представлены результаты определения активности уреазы, лизоцима, а также степени дисбиоза в СОПР крыс с сочетанной патологией (гипосаливация + стоматит), получавших местно виноградный экстракт.
Как видно из представленных данных, активность уреазы достоверно увеличивается лишь при со-четанной патологии, как в слизистой щеки, так и в слизистой языка. Орошения полости рта виноградным экстрактом достоверно снижают уреазную активность. Активность лизоцима, напротив, имеет тенденцию к снижению при сочетанной патологии и явную тенденцию к повышению после воздействия виноградным экстрактом, однако во всех случаях р>0,05 из-за большого разброса данных.
В отличие от уровня уреазы и лизоцима показатель степени дисбиоза четко увеличивается при гипо-саливации и особенно при сочетанной патологии и достоверно снижается после воздействия виноградным экстрактом, причем в слизистой языка - до нормы.
В табл. 2 представлены результаты определения с СОПР уровня маркеров воспаления: МДА и эластазы. Из этих данных видно, что оба показателя достоверно возрастают лишь при сочетанной патологии и снижаются при орошении СОПР экстрактом из виноградных листьев.
Таким образом, наше исследование показало, что экстракт из виноградных листьев обладает лечебно-профилактическим действием при стоматите, развивающемся на фоне гипосаливации. Эти результаты дают основание рекомендовать данный препарат для дальнейшего исследования в клинике с целью профилактики и лечения протезных стоматитов.
Выводы. 1. При сочетании экспериментального стоматита с гипосаливацией наблюдаются более глубокие дисбиотические и провоспалительные нарушения в слизистой оболочке полости рта.
2. Орошения полости рта экстрактом из виноградных листьев устраняют явления дисбиоза и воспаления в слизистой полости рта.
6
Вiсник стоматологИ", № 1, 2013
Примечание : р - показатель достоверности различий с группой № 1; р1 - показатель достоверности различий с группой № 3.
Таблица 2
Влияние экстракта из виноградных листьев на уровень маркеров воспаления в слизистой оболочке полости рта крыс с гипосаливацией и экспериментальным стоматитом
Таблица 1
Влияние экстракта из виноградных листьев на развитие дисбиоза в слизистой оболочке полости рта крыс с гипосаливацией и экспериментальным стоматитом
Ткани и показатели 1 группа, норма 2 группа, гипосаливация 3 группа, гипосаливация + стоматит 4 группа, гипосаливация + стоматит + экстракт
Слизистая щеки
Активность уреазы, мк-кат/кг 1,02±0,24 1,65±0,55 р>0,3 2,63±0,34 р<0,01 2,06±0,23 р<0,05 р1>0,05
Активность лизо-цима, ед/кг 238±52 210±80 р>0,5 187±52 р>0,3 221±61 р>0,5 р1>0,3
Степень дисбиоза, ед. 1,00±0,10 1,84±0,21 р<0,05 3,31±0,40 р<0,01 2,17±0,25 р<0,05 р1<0,05
Слизистая языка
Активность уреазы, мк-кат/кг 2,33±0,22 2,50±0,59 р>0,6 2,89±0,08 р<0,05 1,95±0,24 р>0,05 р1<0,05
Активность лизо-цима, ед/кг 126±24 81±13 р>0,05 70±20 р>0,05 99±22 р>0,1 р1>0,05
Степень дисбиоза, ед. 1,00±0,10 1,67±0,14 р<0,05 2,25±0,23 р<0,01 1,06±0,12 р>0,3 р1<0,01
Ткани и показатели 1 группа, норма 2 группа, гипосаливация 3 группа, гипосаливация + стоматит 4 группа, гипосаливация + стоматит + экстракт
Слизистая щеки
Содержание МДА, ммоль/кг 15,1±1,1 17,6±1,2 р>0,05 19,7±0,8 р<0,05 16,0±1,0 р>0,3 р1<0,05
Активность эластазы, мк-кат/кг 30±2 33±1 р>0,05 39±3 р<0,05 34±2 р>0,05 р1>0,05
Слизистая языка
Содержание МДА, ммоль/кг 28,0±1,5 31,4±2,0 р>0,2 36,8±2,2 р<0,05 19,6±2,8 р<0,05 р1 <0,001
Активность эластазы, мк-кат/кг 43±4 49±2 р>0,2 69±4 р<0,01 55±3 р<0,05 р1<0,05
Примечание : р - показатель достоверности различий с группой № 1; р1 - показатель достоверности различий с группой № 3.
Список литературы
1. Файзулюн О. В. Вплив екстракту з листя винограду культурного на перебЬ аскорбат-шдуктивного перекисной окис-лення лшщв / О. В. Файзулкш, Л. М. Ворошна, А. Л. Загайко // Медична хiмiя. - 2005. - Т. 7, № 4. - С. 77-79.
2. Мука из виноградных листьев - источник витамина Р в комбикормах / А. П. Левицкий, В. Т. Гулавский, И. В. Ходаков [и др.] // Зерновi продукти i комбкорми. - 2011. - № 1. - С. 30-33.
3. Лечебно-профилактическое действие оральных гелей с полифенолами при экспериментальном сахарном диабете / А. П. Левицкий, Ю. В. Цисельский, О. Ю. Билык, И. А. Селиванская // Вюник морсько! медицини. - 2012. - № 2 (56). - С.88-92.
4. Левицкий А. П. Провоспалительные и преддисбиотиче-ские процессы в слизистой оболочке полости рта крыс при гипоса-ливации / А. П. Левицкий, Е. Н. Кушнир, Ю. Л. Чулак-Колотилина // Вкник стоматологи. - 2011. - № 2 (25). - С. 2-5.
5. Ткачук Н. И. Биохимические изменения в тканях полости рта крыс при воспроизведении стоматита с помощью пчелиного яда / Н. И. Ткачук, В. Я. Скиба, А. П. Левицкий // Вюник стоматологи. - 2007. - № 6 (60). - С. 16-20.
6. Кушшр E. М. Вплив гшосалiвацií на розвиток експери-ментального стоматиту у щурiв / Е. М. Кушшр, А. П. Левицький, Н. I. Ткачук // Одеський медичний журнал. - 2012. - № 1 (129). -С. 18-19.
7. Ферментативный метод определения дисбиоза полости рта для скрининга про- и пребиотиков: метод. рекомендации / А. П. Левицкий, О. А. Макаренко, И. А. Селиванская [и др.] - К.: ГФЦ, 2007. - 22 с.
8. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости: метод. рекомендации / А. П. Левицкий, О. В. Деньга, О. А. Макаренко [и др.] - Одесса, 2010. - 16 с.
REFERENCES
1. Fayzulkin О. V., Voronina L. M., Zagayko A. L. Influence of extract from the leaves of grape cultural on ascorbate-induced lipid peroxidation. Мedychna khimiya. 2005; 7(4): 77-79.
2. Levitskiy A. P., Gulavskiy V. T., Khodakov I. V., Ta-rasenko Yu. V., Ryaguzova I. S., Tsyundyk A. G. Meal from grape leaves - the source of vitamin P. Zernovi ргс^^ i tombikormy. 2011; 1: 30-33.
3. Levitskiy A. P., Tsiselskiy Yu. V., Bilyk O. Yu., Selivan-skaya I. A. The therapeutic and prophylactic action of oral gels with polyphenols on experimental diabetes mellitus. Visnyk morskoi med-itsiny. 2012; 2(56): 88-92.
4. Levitskiy A. P., Kushnir E. N., Chulak-kolotilina Yu. L. Proinflammatopy and predisbiotic processes in oral mucous membrane of rats at hyposalivation. Visnyk stomatologiy. 2011; 2 (25): 2-5.
5. Tkachuk N. I., Skiba V. Ya., Levitskiy A. P. The biochemical changes in oral tissues in rats at the restoration of stomatitis with apitoxin. Visnyk stomatologiy; 2007; 6 (60): 16-20.
6. Kushnir E. M., Levitskiy A. P., Tkachuk N. I. Influence of gyposalivation on the development of experimental stomatitis in rats. Odeskiy medychnyy zhurnal. 2012; 1 (129): 18-19.
7. Levitskiy A. P., Makarenko O. A., Selivanskaya I. A., Rossachanova L. N., Denga O. V., Pochtar V. N., Skidan K. V., Gon-charuk S. V. Fermentativnyy metod opredeleniya disbioza polosti rta dlya skrininga pro- i prebiotikov: metodicheskie rekomendatsii [Enzymatic methods for determination of oral dysbiosis for screening pro- and prebiotics: method guidelines]. Kiev, GFC, 2007: 22.
8. Levitskiy A. P., Denga O. V., Makarenko O. A., Dem'yanenko S. A., Rossachanova L. N., Knava O. E. Bi-okhimicheskie markery vospaleniya tkaney rotovoy polosti: metodi-cheskie rekomendatsii [Biochemical markers of inflammation of oral cavity tissue: method guidelines]. Odessa, KP OGT, 2010:16.
Поступила 12.02.13
вами, о чем свидетельствует снижение активности уреазы в ротовой жидкости крыс. Кроме того, предлагаемый метод профилактики предотвращал на фоне кариесогенного рациона повышение активности кислой фосфатазы в пульпе резцов, снижение активности лизоцима в слизистой оболочке щеки и содержания кальция в ротовой жидкости животных, что связано, на наш взгляд, с активирующим стрессовым воздействием на пульпу зубов повышенной концентрации озоно-кислородной смеси. Ключевые слова: крысы, запечатывание фиссур, озоно-кислородная смесь, кариеспрофилактическая эффективность.
Н. В. Бушма, О. А. Макаренко, О.В. Деньга
Кримський державнш медичний ушверситет
iм. С. I. Георгпвського ГУ «1нститут стоматологи НАМН Украины»,
ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНЕ ОБГРУНТУВАННЯ МЕТОДУ ЗАПЕЧАТУВАННЯ Ф1СУР ЗУБ1В З ЗАСТОСУВАННЯМ ВЕЛИКИХ КОНЦЕНТРАЦ1Й ОЗОНО-КИСНЕВО1 СУМ1Ш1
Проведене експериментальне до^дження показало, що за-пропонований метод профилактики карieсу, при якому для запечатування фiсур використовуеться велика концентра-щя озоно-кисневог сумiшi, ефективно запоб^ае розвитку карюзного процесу у щурiв, ят знаходились на карiесоген-ному ращот. Карiеспрофiлактична ефективтсть обробки озоном пов'язана, в першу чергу, з його вираженими бакте-рицидними властивостями, про що свiдчить зниження ак-тивностi уреази в ротовт рiдинi щурiв. Крiм того, запро-понований метод профилактики запобкав на тлi карiесо-генного рацюну тдвищенню активностi кислог фосфатази в пульт рiзцiв, зниженню активностi лiзоциму в слизовт оболонц щоки i вмiсту кальцю в ротовт рiдинi тварин, що пов'язано, на наш погляд, з активуючим стресовим впливом на пульпу зубiв тдвищеног концентрацп озоно-кисневог су-мiшi.
Ключов1 слова: щури, запечатування фiсур, озоно-киснева сумш, карiеспрофiлактична ефективтсть.
УДК 616.314-002:616.002.4:612.273
Н. В. Бушма, О. А. Макаренко, д. биол. н., О.В. Деньга, д. мед. н.
Крымский государственный медицинский университет им. С. И. Георгиевского ГУ «Институт стоматологии НАМН Украины»,
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ МЕТОДА ЗАПЕЧАТЫВАНИЯ ФИССУР ЗУБОВ С ПРИМЕНЕНИЕМ ВЫСОКИХ
КОНЦЕНТРАЦИЙ ОЗОНО-КИСЛОРОДНОЙ СМЕСИ
Проведенное экспериментальное исследование показало, что предлагаемый метод профилактики кариеса, при котором для запечатывания фиссур используется повышенная концентрация озоно-кислородной смеси, эффективно предотвращает развитие кариозного процесса у крыс, находившихся на кариесогенном рационе. Кариеспрофилакти-ческая эффективность обработки озоном связана, в первую очередь, с его выраженными бактерицидными свойст-
N. V. Bushma, O. A. Makarenko, O. V. Denga
Crimean State Medical University State Establishment «The Institute of Stomatology of the NAMS»
EXPERIMENTAL PROOF OF THE METHOD FISSURE SEALING TEETH WITH CONCENTRATION VISOKIH OZONE-OXYGEN MIXTURE
The main problem of fissure sealing being done to prevent tooth decay, is their sterilization before sealing. Dermatoglyphics complicated fissures difficult to achieve high-quality processing. One of the most active principles that can penetrate all the fissures is ozone gas.
The purpose of this study was experimental evaluation kari-esprofilaktik efficiency of the developed scheme fissure sealing c using high concentrations of ozone-oxygen mix and its influence on the parameters of hard tissue of teeth, saliva, tooth pulp. Materials and methods. In experimental studies used 40 rats Wistar breeding herd. 10 animals were on a standard diet vivarium (DV), 10 - Stephen cariogenic diet (CD), 10 - the animals that were on the cariogenic diet, fissures (3 upper left molars) were sealed by the standard technique (CD + obturation) and 10 - animals that were on the cariogenic diet, and before fissure sealing them treated with ozone-oxygen mix with ozone
