CC BY
5
наблюдали гибели животных, но отмечали появление у них функциональных изменении (угнетение активности холинэстеразы крови, снижение антитоксической и синтетической функций печени, нарушение водно-солевого обмена) при повторных дробных введениях вещества в желудок. Аналогичные данные получены нами при многократном введении в желудок белых мышей отечественного препарата в дозах, составляющих 1/6, 1/10 и 1/10 1Л)5„. Суммарная доза, равная 4,5 ЬО(0, не вызывала гибели животных. Отмечались достоверное уменьшение прироста веса тела с получения суммарной дозы (0,75 снижение потребления кислорода (после дозы 1,6 1-1)60) и фазовые изменения порогов нервно-мышечной возбудимости.
Местное действие отечественного препарата АНТИО на кожу кроликов при однократном нанесении его незначительно. Многократные аппликации приводят к развитию воспалительной реакции. Введение в глаз кролика препарата в чистом виде и в виде 10% раствора вызывает сужение глазной щели, гиперемию конъюнктивы и слезотечение.
Эксперименты с импортным препаратом послужили основанием для рекомендаций гигиенических нормативов АНТИО во внешней среде — предельно допустимых остаточных количеств в пищевых продуктах на уровне 0,2 мг/кг, ПДК в водоемах — 0,032 мг/л, максимальной разовой концентрации в атмосферном воздухе — 0,015 мг/м3, среднесуточной ПДК в атмосферном воздухе — 0,004 мг/м®, ПДК в воздухе рабочих помещений — 0,5 мг/м3.
Сопоставление полученных нами данных с литературными позволяет сделать выво о практически одинаковой токсичности отечественного и импортного препаратов АНТИО, при использовании отечественного препарата следует ориентироваться в основном на приведенные выше гигиенические нормативы. Вместе с тем, учитывая избирательную видовую чувствительность животных к АНТИО и тот факт, что порог хронического ингаляционного действия устанавливался на менее чувствительном виде животных —белых крысах целесообразно рекомендовать ПДК АНТИО в воздухе рабочей зоны на более низком уровне (0,3 мг/м3).
ЛИТЕРАТУРА. Воробьева Н. М., Лапченко В. С. Гиг. и сан., 1972, № 1, с. 35. — М и р г и я з о в а М. Г. В кн.: Вопросы санитарии и гигиены в условиях жаркого климата Узбекистана. Ташкент, 1972, с. 147. —Саноцкий И. В. (р е д.). Методы определения токсичности и опасности химических веществ. М., 1970. — Хамрабаев А. Б. В кн.: Гигиена применения, токсикология пестицидов и клиника отравлений. Киев, 1969, в. 7, с. 326.
Поступила И/И 1974 г.
УДК 615.285.7.025.1:547.562.332].016.4в
Е. Ф. Горбачевская
ВЛИЯНИЕ ДДТ НА АНТИГЕННЫЕ СВОЙСТВА НУКЛЕОПРОТЕИДОВ ПЕЧЕНИ'ЖИВОТНЫХ И ИХ ПОТОМСТВА
Всесоюзный научно-исследовательский институт гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс, Киев
В настоящее время все большее внимание придается заболеваниям, в основе которых лежат аутоиммунные процессы. Установлено, что при определенных условиях компоненты собственных клеток и тканей организма могут вызывать продукцию соответствующих аутоантител. Как известно, любой иммунологический процесс, в том числе и аутоиммунный, невозможен без наличия антигена (аутоантигена).
Богатство печени тканевыми белками и ее высокая чувствительность к воздействию экзогенных факторов позволяли предположить, что именно здесь возможно интенсивное образование аутоантигенов. Так, при помощи метода анафилаксии с десенсибилизацией в сыворотке крови животных с токсическим гелиотринным гепатитом определялись дополнительные аутоантигены, способствующие сенсибилизации организма (Ч. И. Бур-штейн). Упомянутым методом установлено образование анормальных (ауто) антигенов печени при воздействии на животных ряда канцерогенных химических соединений (Т. А. Ко-ростелева). С помощью того же метода определен анормальный печеночный аутоантиген у животных с острой интоксикацией ДДТ (Э. М. Семенчева).
Нашей целью было изучить антигенные свойства ануклеопротеидов печени крольчих, подвергавшихся хроническому воздействию ДДТ, до момента спаривания их с интактными самцами; выяснить возможность изменения антигенных свойств нуклеопротеидов печени потомства этих самок в сопоставлении с антигенными свойствами нуклеопротеидов печени потомства от заведомо интактных (контрольных) животных; установить общность или отличие антигенных свойств нуклеопротеидов печени половозрелых и новорожденных особей одного и того же вида, учитывая факт существования стадиоспецифических тканевых антигенов.
Исследование осуществляли на 18 половозрелых крольчихах породы шиншилла весом от 2500 до 3000 г. Животные были разделены на 3 группы: первые 6 ежедневно на
протяжении 4 мес получали через желудочно-кишечный тракт ДДТ в дозе 10 мг/кг (Vjo LD50) в виде 10% взвеси в подсолнечном масле; вторым вводили только лодсолнеч-ное масло в том же темпе и в той же дозе, что и кроликам предыдущей группы; оставшиеся 6 интактных животных содержались в условиях, общих для кроликов 1-й и 2-й групп. По прошествии 4 wee самок спаривали с интактными самцами. Родившие животные и их новорожденные подвергались тотальному кровопусканию, после чего у них изымали печень для выделения из нее нуклеопротеидов (по Белозерскому) и исследования их антигенных свойств при помощи реакции анафилаксии с десенсибилизацией (по Зильберу). Расчет сенсибилизирующих и десенсибилизирующих доз применительно к нуклеопротеи-дам печени осуществляли в соответствии с данными Э. М. Семенчевой. Результаты реакции узнавали по степени выраженности шока у морских свинок: отсутствие реакции (—), почесывание носа, взъерошивание шерсти (+), сильное почесывание, взъерошивание шерсти, одышка, чиханье, кашель (++), то же, но более выраженное, с явлениями резкой одышки и судорог (-J—|—(-), шок со смертельным исходом (-]—|—|—|-).
Поставленная перед нами задача решалась путем проведения 154 реакций анафилаксии с десенсибилизацией, осуществленной в 8 вариантах, с использованием при каждом из них нуклеопротеидов печени крольчих и потомства самок основной и контрольных групп.
Первый вариант включал сенсибилизацию морских свинок нуклеопротеидами печени самок, подвергавшихся воздействию ДДТ, десенсибилизацию нуклеопротеидами печени контрольных интактных крольчих и последующие разрешения нуклеопротеидами печени, использованной для сенсибилизации и десенсибилизации, а также нуклеопротеидами печени контрольных самок, получавших только растительное масло, и нуклеопротеидов печени новорожденных от самок основной и контрольных групп.
Результаты такого варианта опытов свидетельствовали о том, что нуклеопротеиды печени самок, подвергавшихся воздействию ДДТ, и нуклеопротеиды печени их новорожденных приобретали антигенные свойства, не присущие нуклеопротеидам печени контрольных животных и их потомства.
Второй вариант опытов отличался от первого тем, что сенсибилизацию морских свинок осуществляли печенью новорожденных от самок, подвергавшихся воздействию ДДТ до момента их спаривания с интактными самцами, а десенсибилизацию морских свинок — нуклеопротеидами печени новорожденных от интактных крольчих. Оказалось, что нуклеопротеиды печени новорожденных от самок основной группы отличались, как правило, в антигенном отношении от нуклеопротеидов печени контрольных животных и их потомства, но оставались сходными по антигенным свойствам с нуклеопротеидами «материнской» печени.
Следующие 2 варианта опытов отличались от рассмотренных выше тем, что сенсибилизацию морских свинок проводили нуклеопротеидами печени контрольных самок, получавших растительное масло (или интактных), десенсибилизацию — нуклеопротеидами печени интактных крольчих (или, наоборот, крольчих, получавших растительное масло); последние 2 варианта включали сенсибилизацию морских свинок нуклеопротеидами печени новорожденных от контрольных самок, получавших растительное масло (или интактных), при десенсибилизации животных нуклеопротеидами печени потомства от интактных самок (или, наоборот, от самок, получавших растительное масло). При всех вариантах разрядку проводили соответствующими нуклеопротеидами и нуклеопротеидами печени крольчих, подвергавшихся воздействию ДДТ, и их новорожденных. Во всех случаях разрядка морских свинок нуклеопротеидами, примененными для их сенсибилизации, не приводила к проявлению у животных даже минимально выраженной шоковой реакции. Таким образом, антигенные отличия нуклеопротеидов печени интактных самок и крольчих, получавших растительное масло, не были установлены. Аналогичный результат получен и в отношении нуклеопротеидов печени потомства самок обеих контрольных групп.
Между тем следующие 2 варианта реакций анафилаксии с десенсибилизацией, при которых морских свинок сенсибилизировали нуклеопротеидами «материнской» печени, а десенсибилизировали нуклеопротеидами печени собственного потомства, или, наоборот, сенсибилизировали нуклеопротеидами печени новорожденных, а десенсибилизировали нуклеопротеидами «материнской» печени, свидетельствовали об антигенном отличии нуклеопротеидов печени половозрелых особей (не подвергавшихся воздействию ДДТ) и их новорожденных. Напомним, что в условиях интоксикации организма ДДТ внутривидовые антигенные различия как бы стирались. Можно полагать, что это обстоятельство обусловливалось антигенными изменениями нуклеопротеидов печени при интоксикации организма ДДТ.
Заметим, что образование анормальных аутоантигенов нуклеопротеидов печени при интоксикации ДДТ сопровождалось проявлением у животных противопеченочных аутоан-тител. Последнее, однако, должно быть предметом специального сообщения соответствующих исследователей.
Выводы
1. Нуклеопротеиды печени половозрелых и новорожденных особей одного и того же вида (кролики) различаются между собой в антигенном отношении.
2. Вовдействие ДДТ на половозрелых крольчих оказывается на антигенной мозаике печени — в ее нуклеопротеидных фракциях появляются антигенные свойства, не присущие нуклеопротеидам печени кроликов в норме.
Нуклеопротеиды печени новорожденных от таких самок приобретают, как правило, анормальные антигенные свойства, отсутствующие у новорожденных от здоровых крольчих.
3. Приобретение нуклеопротеидами печени анормальных аутоантигенных свойств свидетельствует о развитии у животных аутоиммунного процесса.
ЛИТЕРАТУРА. Белозерский А. Н. Нуклеиновые кислоты и нуклеопротеиды растений и микроорганизмов. Дисс. докт. М., 1942. — Бурштейн Ч. И. Вестн. АМН СССР, 1967, № 2, с. 34. — 3 и л ь б е р Л. А. В кн.: Современные вопросы медицинской науки. М., 1951, с. 271. — Ко росте л ев а Т. А. Изучение иммунохи-мических свойств белков печени в процессе развития экспериментальных гепатом. Автореф. дисс. докт. Л., 1958.— Семенчева Э. М. В кн.: Гигиена и токсикология пестицидов и клиника отравлений, 1967, в. 5, с. 189.
Поступила 5/П 1974 г.
УДК 613.287:576.851.252.097.29
Канд. биол. наук Л. И. Петрушина, канд. мед. наук В. И. Бугрова, И. С. Николаева
О СВЯЗИ МЕЖДУ КОЛИЧЕСТВОМ СТАФИЛОКОККОВ И НАКОПЛЕНИЕМ ЭНТЕРОТОКСИНА ТИПА А В МОЛОКЕ
Институт питания АМН СССР и Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи АМН СССР, Москва
Пастеризованное молоко нередко бывает инкриминируемым продуктом при пищевых стафилококковых интоксикациях. Кроме того, оно используется в качестве сырья для приготовления молочных продуктов, в частности творога, который нередко вызывает пищевые отравления стафилококковой этиологии. Поэтому представлялось целесообразным изучить условия, способствующие размножению стафилококков, а следовательно, и образованию энтеротоксина при изготовлении этих продуктов.
С этой целью молоко заражали штаммом стафилококка 246, вырабатывающим энте-ротоксин типа А. Этот штамм стафилококка был получен из Англии от доктора Baird Parker А. С. Для заражения использовали две заражающие дозы — 10е и 5Х 10® клеток стафилококков на 1 мл молока по следующим соображениям: доза 10е заведомо обеспечивает накопление необходимого количества энтеротоксина, определяемого методом гельдиф-фузии, применявшимся в данном исследовании; доза 5Х 10s клеток на 1 мл молока соответствует возможному загрязнению молока при нарушении режима его пастеризации. Соответствующую дозу, приготовленную по стандарту мутности из отмытых клеток суточной агаровой культуры стафилококков, вносили в молоко, предварительно разлитое по 100 мл в стерильные конические колбы. После этого молоко инкубировали при температуре 37 и 29—30°. Температура 37° оптимальная для размножения стафилококков, а следовательно, накопления энтеротоксина в продукте. Температура 29—30° соответствует режимам, которые используют при производстве ряда кисломолочных продуктов. Размножение внесенных в молоко стафилококков и токсинообразование наблюдали каждые 2 ч инкубации до 18—24 ч, контролируя при этом рН молока. Количественно стафилококки учитывали посевом 0,1 мл различных разведений молока на поверхность молочно-солевого агара с последующим пересчетом на 1 мл посевного материала. Наличие энтеротоксина в молоке устанавливали методом гельдиффузии по Оухтерлони. В качестве антигена служили концентраты, полученные путем осаждения белков молока концентрированной молочной кислотой, с последующей гомогенизацией с фреоном, нейтрализацией 10% NaOH и концентрацией диализом против полиэтиленгликоля с молекулярным весом 40 000. Реакцию гельдиффузии ставили в агаре на предметном стекле в лунках диаметром 2,5 мм и с таким же расстоянием между ними. Для этого на обезжиренные предметные стекла наливали расплавленный 1% агар слоем 2—2,5 мм. В застывшем агаре стандартным штампом вырезали лунки, в которые вносили необходимые реагенты (антиэнтеротоксическую сыворотку и концентраты из молока). Реакцию проводили при комнатной температуре в течение 18—20 ч, во влажной камере. Положительной реакцией, указывающей на присутствие энтеротоксина, считали наличие линии преципитации между лунками с антиэнтеро-токсической сывороткой типа А и испытуемым концентратом из молока (антигеном). Отрицательной реакцией на энтеротоксин считали отсутствие подобной линии преципитации. Контролем служили концентрат культуральной жидкости штамма стафилококка 246 и концентрат незараженного молока.
Для отработки метода непосредственного определения энтеротоксина в продукте были проведены опыты на стерильном молоке, в котором создаются максимально благоприятные условия для роста стафилококков и образования энтеротоксина. С этой целью стерильное молоко заражали энтеротоксигенным стафилококком в дозе 5Х 10s клеток на 1 мл продукта и инкубировали при температуре 37 и 27° в течение 30 ч.
