CC BY
46
УДК 616.001.47.02 : 615.28.616.5.001.1 Г.Е. Григорьев, С.А. Лепехова, Л.В. Зарицкая,
О.П. Ильина, Е.В. Коваль, О.А. Гольдберг, О.Н. Постовая, Е.В. Батунова
ВЛИЯНИЕ АНТИСЕПТИКА «АНАВИДИН» НА ПОКАЗАТЕЛИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ПРИ ЗАЖИВЛЕНИИ ИНФИЦИРОВАННЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ КОЖИ
В статье изучено влияние антисептика «Анавидин» на заживление инфицированных повреждений кожи. Установлено, что применение антисептика способствует ограничению системной воспалительной реакции, сохранности неспецифической резистентности и отсутствию сенсибилизации.
Ключевые слова: иммунология, резистентность, рана, антисептики, кровь.
G.E. Grigoriev, S.A. Lepekhova, L.V. Zaritskaya, O.P. Ilyina, E.V. Koval, O.A. Goldberg,
O.N. Postovaya, E.V. Batunova
ANTISEPTIC “ANAVIDIN” INFLUENCE ON THE INDICES OF NON SPECIFIC RESISTANCE IN HEALING THE INFECTED SKIN LESIONS
Antiseptic "Anavidin" influence on healing the infected skin lesions is studied in the article. It is determined that antiseptic application promotes the system inflammatory response restriction, nonspecific resistance safety and lack of sensibilization.
Key words: immunology, resistance, wound, antiseptics, blood.
Лечение длительно незаживающих гнойно-некротических повреждений кожи относится к числу важных разделов ветеринарии, так как эта патология наносит значительный экономический ущерб крупным специализированным и фермерским хозяйствам [1, 2].
Бесконтрольное использование антибиотиков привело к возникновению антибиотикорезистентных штаммов [3-6].
Наибольшую роль в резистентности к возбудителю играют естественные антитела, комплемент и полиморфноядерные лейкоциты. По мере развития специфической иммунной реакции на инфекцию в ране включаются сложные механизмы ответной реакции иммунной системы организма [7]. Вся стройная последовательность развития иммунологической реакции нарушается, если доза микроба превышает определенный порог, или лечение неэффективно.
Нарушение любой фазы иммунного ответа способно привести к развитию иммунодефицита, что является важным маркером при оценке эффективности лечения [7,8].
Одним из способов профилактики и лечения гнойных ран является применение антисептиков, что побудило нас к оценке влияния нового сибирского антисептика «Анавидин» на некоторые показатели неспецифической резистентности организма при инфицированных повреждениях кожи.
Материалы и методы. Работа выполнена на базе научного отдела экспериментальной хирургии с виварием Научного центра реконструктивной и восстановительной хирургии СО РАМН. Животных содержали в условиях вивария при свободном доступе к воде и пище соответственно нормативам ГОСТ «Содержание экспериментальных животных в питомниках НИИ» (вет. удостоверение 238 № 0015220 от 25 марта 2009 г, служба ветеринарии Иркутской области). В эксперимент включали крыс-самцов линии Вистар в возрасте не менее 6 месяцев, весом 200-250 г. Опыты на животных выполнялись в соответствии с правилами гуманного обращения с животными, которые регламентированы «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденными Приказами МЗ СССР №742 от 13.11.84 г. «Об утверждении правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» и №48 от 23.01.85 г. «О контроле за проведением работ с использованием экспериментальных животных».
У всех экспериментальных крыс моделировали инфицированное повреждение кожи. Животные были разделены на три группы. Первую составили крысы, с ежедневным промыванием инфицированного повреждения кожи физиологическим раствором (КГ-1). Вторую - животные, которым раны обрабатывали 0,02% раствором хлоргекси-дина биглюконата (КГ-2). Третью - животные, которым раны промывали 0,02% раствором антисептика «Анавидин»
(ОГ). Забор материала для иммунологического исследования производился на 1-е, 3-и, 7-е, 11-е и 19-е сутки после внесения микст-инфекта E. coli+ Ps. aeruginosa (0,5:0,5) 109 микробных тел.
Иммунологические исследования проводили в лабораторном отделе Центральной научноисследовательской лаборатории Иркутского государственного института усовершенствования врачей. Для определения параметров фагоцитарной реакции нейтрофилов крови использовали убитые при температуре 80-90°С клетки дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Оценивали фагоцитарный показатель (фагоцитарная активность или фагоцитарный индекс) - процент фагоцитов из числа сосчитанных нейтрофилов, и фагоцитарное число - среднее число дрожжей, поглощенных одним активным нейтрофилом. Для оценки степени антигенной раздраженности неактивных in vitro гранулоцитов крови исследовали спонтанный тест восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест), выражая результаты в процентах. Активированный НСТ-тест проводили для оценки функционального кислородозависимого механизма бактерицидности фагоцитов. Определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) выполняли по стандартной методике Гриневича.
Общий анализ крови проводили стандартными методами с подсчетом количества эритроцитов, лейкоцитов и лейкоцитарной формулы.
Результаты исследований. Для оценки системной воспалительной реакции на индукцию инфицированного повреждения кожи, под влиянием антисептика «Анавидин», был проведен сравнительный анализ уровня лейкоцитов и формулы периферической крови.
При исследовании лейкоцитов венозной крови (рис. 1) оказалось, что максимальным проявлением системной воспалительной реакции на 1-е сутки исследования в КГ-1, КГ-2 и ОГ закономерно наблюдался лейкоцитоз, при этом уровень лейкоцитов в КГ-1 был максимальным по сравнению с КГ-2 (pu=0,02), ОГ (pu=0,004), а в ОГ был наименьшим, но достоверно выше нормы (pd=0,03). От нормальных величин также не отличалось количество лейкоцитов у КГ-2, но было статистически меньше по сравнению с КГ-1 (pu=0,02) и больше, чем в ОГ (pu=0,04). Высокие показатели лейкоцитоза сохранялись во всех группах до 9-х суток, однако наименьший показатель среди групп был выявлен в ОГ с санацией инфицированного повреждения кожи анавидином.
Таким образом, выявлено, что показатель лейкоцитоза у животных с обработкой инфицированного повреждения кожи анавидином был наименьшим по сравнению с группами контроля на протяжении всех суток исследования, но был существенно выше нормальных значений до 11-х суток, с нормализацией на 19-е сутки. Однако отметим, что выбранный для контроля хлоргексидин биглюконат также ограничивал лейкоцитоз, показатели в этой группе были существенно ниже, чем в контрольной группе, где инфицированные повреждения кожи просто промывали физиологическим раствором, но были существенно выше, чем в опытной группе.
УОГ ■ КГ-1 И КГ-2
15
N Л °> nN
Сутки исследования
Рис. 1. Динамика уровня лейкоцитов в группах
Обработка инфицированного повреждения кожи антисептиком «Анавидин» приводит к уменьшению воспалительного ответа, что подтверждается нормализацией к 19-м суткам уровня лейкоцитов, сегментоядерных нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов (рис. 2-5).
□ ОГ □ КГ-1 Е КГ-2
□ ОГ □ КГ-1 0 КГ-2
6
5
ос
I 4
§ 3
ГЗ
м
ГС о * 2 О
Е1 о
Сутки исследования
Сутки исследования
Рис. 2.. Количество палочкоядерных лейкоцитов в динамике исследования
Рис. 3. Количество сегментоядерных лейкоцитов в динамике исследования
□ ОГ □ КГ-1 В КГ-2
□ ОГ □ КГ-1 В КГ-2
ш 70
О
О
■&
2
5
с;
о
оо
н
и
ф
У
5
с;
о
-10
Сутки исследования
Рис. 4. Количество моноцитов в динамике исследования
О
X
о
2
5
с;
а
н
(О
п
(В
*
о
С
Сутки исследования
Рис. 5. Количество лимфоцитов в динамике исследования
При исследовании показателей фагоцитарной активности нейтрофильных лейкоцитов (рис. 6,7) обнаружено, что во всех группах экспериментальных животных на 1-е сутки имело место повышение фагоцитарного индекса. На 7-е сутки имелось несущественное снижение ФИ у ОГ и КГ-2, но показатель сохранялся выше нормы во всех группах (ро<0,05). Максимальным показатель был в группе КГ-1, что по срокам совпадает с максимальным лейкоцитозом в этой группе. При сравнении показателя в группах ОГ и КГ-1 выявлено, что в ОГ показатель существенно ниже (ри=0,0з). Эти данные указывают на активацию фагоцитарного звена иммунного ответа на инфекцию.
На 9-е сутки эксперимента ФИ был минимальным в КГ-1 по сравнению с нормой (рэ=0,002) и КГ-2 (ри=0,009), а также по сравнению с 7-ми сутками (рш=0,0001). В ОГ отмечался также повышенный фагоцитарный индекс по сравнению с КГ-1 (ри=0,005). Однако отметим, что показатель ФИ в группах КГ-2 и ОГ сохранялся существенно более высоким по сравнению с нормой (ро<0,05).
Существенное снижение ФИ к 9-м суткам у животных контрольной группы 1 совпадает с литературными данными об угнетении фагоцитоза при гнойно-некротических поражениях тканей.
К девятнадцатым суткам ФИ нормализовался в КГ-2 и ОГ, тогда как в КГ-1 показатель оставался существенно ниже нормы (ро=0,0001) КГ-2 и ОГ (ри<0,05).
□ G^ □ Kf-1 0 Kf-2
Сутки исследования
Рис. в. Показатели фагоцитарного индекса в динамике исследования
□ G^ □ Kf-1 0 Kf-2
в
s
si
(U
£2
Сутки исследования
Рис. 7. Показатели фагоцитарного числа в динамике исследования
Нами подтверждено, что санация инфицированных повреждений кожи анаведином не оказывает подавляющего влияния на фагоцитоз. Выявленная динамика ФИ совпадает с изменениями ФЧ (см. рис. 6,7).
Таким образом, установлено ограничение системной воспалительной реакции, сохранность неспецифической резистентности и отсутствие сенсибилизации при инфицированном повреждении кожи под воздействием антисептика «Анавидин». Тогда, как в контрольной группе 1 отмечали прогрессирующие расстройства неспецифической резистентности реакции организма, характерные для течения гнойных ран без лечебных воздействий.
Литература
1. Алексеева И.В. Новые разработки для лечения животных при гнойно-воспалительных процессах // Ветеринария. - 2006. - №7. - С. 105-113.
2. Амирганов Т. Профилактика травматизма у лошадей // Практик. - 2008. -№ 2. - С. 96-97.
3. Антисептик «Анавидин» для профилактики маститов у коров / Г.Е. Григорьев, О.П. Ильина, С.А. Лепе-хова [и др.] // Молочная пром-сть. - 2009. - № 4. - С. 79-80.
4. Киричек Л.Т. Антибиотики в современной химиотерапии // Междунар. мед. журн. - 2003 - Т. 9. - №1 -С. 104-108.
5. Беро Р., Кастилио Ж.Д., Генеольт Л. Проблема антибиотикорезистентности // Ветеринар. - 2009. -№2 - С. 28-34.
6. Григорьев Е.Г. Госпитальная инфекция в многопрофильной хирургической клинике // Анавидин и его применение в условиях госпитализма. - М., 2005. - С. 125.
7. Барашкин М.И., Молоканов В.А. Иммунный статус крупного рогатого скота при раневом процессе в техногенных зонах // Ветеринария. - 2004. - №8. - С. 13-15.
8. CD4+ T cells and CXC chemokines modulates the pathogenesis of Staphylococcus aureus wound infections / McLoughlin Rachel M., Solinga Robert M., Rich Jeremy [et al.l // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 2006. - № 27. -С. 10408-10413.
'--------♦-----------
