CC BY
29
4. Bylgaeva A.A. Profilaktika kontaminacii kormov plesnevymi gribami [Prevention of contamination of feed by mold fungi] // Trudy VNIIJeV im. Ja.R. Kovalenko [Proceedings of Institute of experimental veterinary medicine named after Y. R. Kovalenko]. 2009. V.75. S. 111-114. [in Russian]
5. Pohilenko V.D., Perelygin V.V. Probiotiki na osnove sporoobrazujushhih bakterij i ih bezopasnost' [Probiotics on the basis of spore-forming bacteria and their safety] // Himicheskaja i biologicheskaja bezopasnost' [Chemical and Biological Safety] №2-3 (32-33). - 2007. - S. 20-41. [in Russian]
DOI: 10.18454/IRJ.2016.53.163 Гламаздин И.Г.1, Сысоева Н.Ю.2, Верховская Г.Л.3, Панова О.А.4, Крюковская Г.М.5,
Марюшина Т.О.6, Матвеева М.В.7
1 Доктор ветеринарных наук, профессор, 2кандидат ветеринарных наук, доцент, 3заведующий лабораторией, 4кандидат биологических наук, 5кандидат ветеринарных наук, доцент, 6кандидат ветеринарных наук,
7
кандидат ветеринарных наук.
ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» ВЛИЯНИЕ АЛБЕНДАЗОЛА НА МИКРОФЛОРУ КИШЕЧНИКА
Аннотация
В статье анализируется влияние антгельминтика широкого спектра действия албендазола на кишечную микрофлору в условиях in vivo и in vitro. После дегельминтизации в кишечном микробиоценозе ягнят резко снижается количество бифидо- и лактобактерий, доминирующее положение занимают эшерихии, в том числе с атипичными ферментативными свойствами. Наблюдается рост условно-патогенной транзиторной микрофлоры. Особенно четко эти изменения проявлялись у ягнят с высокой интенсивностью инвазии гельминтами. В условиях in vitro албендазол обладает выраженными ингибирующими свойствами по отношению к бифидобактериям, лактообактериям, стафилококкам и энтерококкам.
Ключевые слова: албендазол, гельминты, микрофлора, бифидобактерии, лактобактерии, эшерихии.
Glamazdin I.G.1, Sysoeva N.Y.2, Verkhovskaya G.L.3, Panova O.A.4, Kryucovskaya G.M.5, Maryushina T.O.6, Matveeva M.V.7
1PhD in Veterinary Medicine and Science, Professor, 2PhD in Veterinary Medicine and Science, Associate Professor;
3Head of Laboratory; 4PhD in Biology; 5PhD in Veterinary Medicine and Science, Associate Professor; 6PhD in Veterinary
Medicine and Science; 7PhD in Veterinary Medicine and Science FGBOU VPO MGUPP "Moscow State University of Food Production" THE IMPACT OF ALBENDAZOLE ON INTESTINAL MICROFLORA
Abstract
The article analyzes the impact of broad spectrum anthelmintics albendazole on the intestinal microflora of the in vivo and in vitro. After deworming in the intestinal microbiocenosis lambs sharply reduced the number of Bifidobacterium and Lactobacillus, dominated by Escherichia, including atypical enzymatic properties. There is a growth of opportunistic transient microflora. Especially clearly these changes manifest in lambs with a high intensity of infestation by helminths. In vitro albendazole has strong inhibitory properties against Bifidobacterium, Lactobacillus, Enterococcus and Staphylococcus.
Keywords: Albendazole, helminths, microflora, Bifidobacterium, Lactobacillus, Escherichia.
Важнейшей функцией микрофлоры кишечного тракта является ее участие в формировании резистентности организма к различным заболеваниям и обеспечение предотвращения колонизации организма животных посторонними микроорганизмами [3]. Антгельминтики, наряду с активным гельминтоцидным действием, оказывают негативное действие на нормальный биоценоз желудочно-кишечного тракта [2]. Поэтому, изучение влияния антгельминтиков на микрофлору пищеварительного тракта животных является актуальным.
Целью нашего исследования явилось изучение влияния антгельминтика албендазола на микрофлору кишечника ягнят при спонтанной стронгилятозной инвазии.
Исследования выполнены на овцах ставропольской породы. При проведении гельминтоовоскопии пользовались методом флотации по Фюллеборну, количество яиц в 1 грамме фекалий подсчитывали с помощью счетной камеры, модернизированной в ВИГИС. Упитанность овец определяли согласно ГОСТ 5111-55. Для определения количественных показателей микроорганизмов использовали метод серийных разведений. Пробы фекалий отбирали из прямой кишки. Количество бифидобактерий определяли посевом в среду Блаурокка, лактобактерии - посевом на агар с гидролизованным молоком и мелом. Микроорганизмы семейства энтеробактерий выделяли путем посева материала на среду Эндо. Гемолитические свойства определяли на 5 % кровяном агаре. Количественное содержание бактерий рода Enterococcus определяли посевом на элективную среду Л.Е. Моисеевой. Бактерии рода Proteus выделяли по методу Шукевича. Для обнаружения Staphilococcus использовали глюкозо-солевой агар. Для определения числа споровых аэробных бактерий материал прогревали в водяной бане 20 минут при 80° С, после чего высевали на МПА в чашки Петри. Родовую принадлежность бактерий определяли на основании характерных для них культуральных, морфологических и тинкториальных свойств. Количество дрожжей и грибов рода Candida определяли посевом под агар Сабуро. Для изучения влияния антгельминтика на рост микроорганизмов in vitro использовались следующие тест-культуры: бифидобактерии, лактобактерии, E. coli, B. subtilis, стафилококки и энтерококки. Культуры высевали газоном на специальные среды в чашках Петри, антгельминтик вносили в лунки диаметром 8 мм в количестве 0,2 мл. Чашки ставили в термостат при температуре 37° С. Учет результатов
проводили через 48 часов. Измеряли диаметр зон задержки роста микроорганизмов в мм. Достоверность различий определяли при помощи критерия Манна-Уитни.
Исследования проводились на ягнятах трехмесячного возраста, выпасавшихся на пастбищах и спонтанно инвазированных стронгилятами. Опытные группы были сформированы по принципу аналогов, критериями отбора служили упитанность животных и интенсивность инвазии. В первую группу отобрали 10 ягнят ниже средней упитанности, в одном грамме фекалий которых находили 55+8 яиц стронгилят, во вторую группу - 10 ягнят средней упитанности, в одном грамме фекалий насчитывали 15+5 яиц стронгилят (р<0,01).
Бактериологические исследования фекалий ягнят проводили до дегельминтизации и на 3, 7, и 21 дни после дегельминтизации. В качестве антгельминтика использовали албендазол в виде 2,5 % суспензии в дозе 0,005 г/кг массы по активно действующему веществу (АДВ). Препарат задавали индивидуально per os. На третий и седьмой день после дегельминтизации яиц гельминтов в фекалиях обнаружено не было.
Албендазол является антгельминтиком широкого спектра действия из группы бензимидазолов, впервые был синтезирован фирмой "Smith/KlineBeechamAnimalHealth" (США) в 1972 году. Албендазол эффективен против нематод пищеварительного тракта и легких, цестод и трематод. В терапевтических дозах албендазол хорошо переносится животными, препарат малотоксичен, его токсическая доза для жвачных в 30-50 раз выше лечебной. Преимуществом этого препарата является то, что он обладает гельминто-, ларво- и овоцидным действием. О высокой эффективности албендазола против стронгилят желудочно-кишечного тракта овец сообщают многие отечественные и зарубежные авторы [1].
До дегельминтизации у ягнят первой группы с более высокой интенсивностью инвазии, доминирующей микрофлорой кишечника являлись эшерихии, которые выделяли в количестве 9,61+0,76 lg/г КОЕ, из них 7,4 % составляли эшерихии со слабой лактозной активностью и 1 % гемолитические эшерихии. Бифидо- и лактобактерии выделялись в количестве 8,27 + 0,43 lg/г КОЕ и 5,42 + 0,62 lg/г КОЕ соответственно.
У ягнят второй группы в микробиоценозе кишечника преобладали бифидобактерии, их выделяли в количестве 9,48+ 0,65 lg/г КОЕ, лактобактерии - в количестве 7,30+0,35 lg/г КОЕ. Эшерихии с гемолитическими свойствами, лактозонегативные энтеробактерии, бактерии рода Proteus и гнилостные грамотрицательные бактерии у ягнят средней упитанности не выделялись.
На третий день после дегельминтизации содержание индигенных бифидо- и лактобактерий резко снизилось по сравнению с предыдущими показателями и составляло у ягнят первой группы 6,48 + 0,62 lg/г КОЕ (р <0,01) и 4,30 + 0,53lgfr КОЕ (р <0,01) соответственно, и 7,10+ 0,44 lg/г КОЕ (р <0,01 ) и 5,59+ 0,71 lg/г КОЕ (р<0,01) у ягнят второй группы. Доминирующей микрофлорой кишечника стали эшерихии. У ягнят первой группы эшерихии выделяли в количестве 9,72 + 0,90 lg/г КОЕ (р>0,05), у ягнят второй группы - в количестве 8,25 + 0,47 lg/г КОЕ (р<0,05). При этом у ягнят первой группы увеличилось содержание эшерихий со слабой лактозной активностью до 12,5% и с гемолитическими свойствами до 3,5 %, до 16% увеличилось соотношение лактозонегативных энтеробактерий, возросло содержание протея, гнилостных грамотрицательных бактерий до 2,10 + 0,50 lg/г КОЕ. У ягнят второй группы содержание эшерихий со слабой лактозной активностью увеличилось до 5,3 %, эшерихии с гемолитическими свойствами и гнилостные грамотрицательные бактерии не выделялись. Выраженных изменений в количественном содержании стафилококков, дрожжей, плесеней, грибов рода Candida у ягнят обеих групп не наблюдалось.
На седьмой день после дегельминтизации доминирующей микрофлорой кишечника у ягнят обеих групп оставались эшерихии, при этом 7,25 % из них составляли эшерихии со слабой лактозной активностью, у ягнят первой группы 1 % приходился на эшерихии с гемолитическими свойствами. Количественное содержание бифидо- и лактобактерий практически не изменялось. В фекалиях ягнят второй группы были обнаружены лактозонегативные энтеробактерии в количестве 5 % от общего числа энтеробактерий, протей в количестве 2,0 lg/г КОЕ, гнилостные грамотрицательные бактерии в количестве 1,65 +0,3 lg/г КОЕ, которые ранее не выделялись. У ягнят первой группы лактозонегативные энтеробактерии составляли 10% от общего числа энтеробактерий, протей выделяли в количестве 2,00+0,33 lg/г КОЕ, гнилостные грамотрицательные бактерии - в количестве 2,65 + 0,6 lg/г КОЕ.
Спустя 21 день после дегельминтизации у ягнят второй группы наблюдалось полное восстановление кишечного микробиоценоза, доминирующей микрофлорой кишечника становились бифидобактерии, которые выделяли в количестве 9,13+0,32 lg/г КОЕ(р<0,05), лактобактерии выделяли в количестве 6,15 +0,60 lg/г КОЕ (р>0,05). Эшерихии выделяли в количестве 8,11 + 0,65^/г КОЕ (р>0,05 ), при этом эшерихии с атипичными свойствами, лактозонегативныебактерии, бактерии рода Proteus, гнилостные грамотрицательные бактерии не обнаруживались.
У ягнят же первой группы полного восстановления нарушений в составе кишечной микрофлоры за период наблюдения не происходило, доминирующей микрофлорой кишечника оставались эшерихии, которые выделяли в количестве 9,42+0,42^/г КОЕ (р>0,05), из них 8 % составляли эшерихии со слабой лактозной активностью. Лактозонегативные энтеробактерии составляли 4% от общего числа энтеробактерий, протей выделяли в количестве 2,15+0,18 lg/г КОЕ, гнилостные грамотрицательные бактерии в количестве 1,88+0,39 lg/г КОЕ.
Нами было установлено, что в условиях in vitro албендазол в количестве 0,2 мл (5 мг АДВ) оказывает значительное ингибирующее воздействие на рост стафилококков и бифидобактерий - диаметр зон задержки роста 25,3+0 мм и 22,3+1,5 мм соответственно, диаметр зон задержки роста лактобактерий, энтерококков составляет 17+0,7 мм и 15,7+0,4 мм, меньшее воздействие албендазол оказывает E. coli , B. subtilis. - диаметр зон задержки роста 13,3+0,4 мм и 11+0 мм соответственно [4]. Таким образом, в условиях in vitro албендазол обладает выраженными ингибирующими свойствами, в основном, по отношению к грамположительной микрофлоре (бифидобактериям, лактообактериям, стафилококкам, энтерококкам).
Одной из важнейшей функцией микрофлоры кишечника является ее участие в формировании колонизационной резистентности макроорганизма. Представители нормальной индигенной микрофлоры предохраняют организм от
проникновения и быстрого размножения патогенных и условно-патогенных микроорганизмов [3]. Паразитирование стронгилят приводит к нежелательным сдвигам в составе кишечной микрофлоры ягнят. Албендазол позволяет избавить животных от паразитов, но усугубляет нарушения в качественном и количественном составе кишечной микрофлоры, приводя к длительному дисбактериозу, особенно у ослабленных животных ниже средней упитанности, за счет резкого снижения бифидо- и лактофлоры, делая их организм более уязвимым к инфекционным и паразитарным заболеваниям.
Список литературы/ References
1. Архипов И.А. Антигельминтики: фармакология и применение. - Москва: Типография Россельхозакадемии. -2009. - 406 с.
2. Галимова В.З., Галиуллина А.М., Арсланова И.З. Патогенетическая терапия животных при гельминтозах (микробиоценоз, микробиологические и метаболические процессы в желудочно-кишечном тракте). Уфа: БГАУ. -2008. - 152 с.
3. Субботин В.В., Данилевская Н.В. Микрофлора кишечника собак: физиологическое значение, возрастная динамика, дисбактериозы. //Ветеринар. - 2002. - №1.- С.25-47.
4. Сысоева Н.Ю., Журавлева Д.А. Влияние антгельминтиков на рост микроорганизмов в условиях in vitro. Наука и образование в современной конкурентной среде. - 2016. №1 (3). - С. 3-5.
Список литературы на английском языке / References in English
1. Arkhipov I.A. Antigelmintiki: pharmacologiya i priminenie [The anthelmintic: pharmacology and application]./Arkhipov I.A.// - M.: Rosselkhozakademiya's printing house. - 2009. - 406 P. [in Russian]
2. Galimova V.Z., Galiullina A.M., Arslanova I.Z. Patogeneticheskaya therapy zhivotnih pri gelmintozah (microbiocenos, microbiologicheskiei metabolicheskie processi v zeludochno-kischechnom tracte) [Pathogenetic therapy of animal helminthiasis (microbiota, microbial and metabolic processes in the gastro-intestinal tract)] /Galimova V.Z.// Ufa: BGAU. -2008. - 152 P. [in Russian]
3. Subbotin V.V., Danilevskaya, N.V Mikroflora kishechnika sobak: fiziologicheskoe znachenie, vozrastnaja dinamika, disbakteriozy [Intestinal microflora of dogs: physiological value, age dynamics, dysbacterioses] /Subbotin V.V.// Veterinar [Vet.] - 2002. - N. 1. - P. 25-47. [in Russian]
4. Sysoeva N.Y., Zhuravleva D.A. Vlijanie antgel'mintikov na rost mikroorganizmov v uslovijah in vitro [The effect of Anthelmintics on the growth of microorganisms in vitro] /Sysoeva N.Y/ Nauka i obrazovanie v sovremennoj konkurentnoj srede [Science and education in today's competitive environment] . - 2016. №1 (3). - P. 3-5. [in Russian]
DOI: 10.18454/IRJ.2016.53.111 Костеша Н.Я.1, Иванов А.Г.2, Дементьева Е.С.3
1 Доктор биологических наук, профессор, 2кандитат ветеринарных наук, доцент, 3кандидат биологических наук, доцент, ФГБОУ ВО Новосибирский ГАУ Томский сельскохозяйственный институт - филиал
РОЛЬ РЕГУЛЯТОРНЫХ СИСТЕМ ОРГАНИЗМА ТЕЛЯТ В УСЛОВИЯХ ПРИМЕНЕНИЯ БИОВЕСТИНА
Аннотация
Показана эффективность применения препарата «Биовестин», при выращивании молодняка. У животных, получавших препарат, со стороны эндокринной системы наблюдалась картина, характеризующая формирование адаптационных процессов организма телят опытной группы: исследование сыворотки крови показало, что в опытной группе телят содержание кортизола достоверно увеличивалось относительно контрольной группы. Содержание эритроцитов периферической крови телят увеличивалось относительно контрольной группы. Масса телят опытной группы достоверно увеличивалась с 7-х суток исследования до 20% относительно контрольной группы.
Ключевые слова: резистентность, продуктивность, сохранность, пробиотик, биовестин, стресс, адаптация.
Kostesha N.Y.1, Ivanov A.G.2, Dementeva E.S.3
1PhD in Biology, Professor, 2PhD in Veterinary Medicine and Science, Associate Professor, 3PhD in Biology, Associate Professor, FGBOU VO in Novosibirsk HAU Tomsk Institute of Agriculture-Branch THE ROLE OF THE REGULATORY SYSTEMS OF THE ORGANISM CALVES IN BIOVESTIN
Abstract
The efficiency of the drug "Biovestin " is shown in rearing of calf. The animals that received the drugs from the endocrine system observed pattern that characterized the forming of the adaptation processes of the organism of experimental group of calves: the study of blood serum showed that the content kartizola increased significantly in the test group calves relatively to the control group. The contents of erythrocytes in peripheral blood of the experimental group of calves was increased relative to the control group. Mass(weight) calves experimental group was significantly increased from the 7 th days of the study up to 20% relative to the control group.
Keywords: resistance, productivity, safety, probiotic, biovestin, stress, adaptation.
СТАТЬЯ ИЗЪЯТА
