CC BY
26
культивирования тимоцитов с нативными или трансформированными ТЭК регистрируется апоптоз соответственно 37.2% и 82,5% тимоцитов сверх контрольного уровня. Способностью индуцировать апоптоз тнмоии-тов обладают также гуморальные продукты ТЭК; активность супернатанта нативных ТЭК была выше, чем целых клеток (апоптоз 66,4% тимоцитов).
Среди выживающих тимоцитов преобладали клетки фенотипов СТ)4'С08', СП4*С08' и 004008*, т.е. наименее и наиболее зрелые формы. Для формирования розеток между ТЭК и тимоцитами требуется сохранение жизнеспособности клетками обоих типов. Ингибиторный анализ показал энергозависимость процесса формирования контактов, важность сохранения нативных элементов цитоскелета в ТЭК (в меньшей степени в ти-моцитах),атакже сохранности биосинтеза белкавтимо-цитах. Розетки не формируются, и апоптоз не происходит в присутствии ЭГГА. Обработка тимоцитов цикло-гексимидом подавляет индукцию их апоптоза.
Заключение. Нативные и трансформированные ТЭК при совместном культивировании с тимоцитами индуцируют апоптоз С04' СГ)8> клеток. Этому предшествует формирование контактов между ТЭК и тимоцитами, однако в индукции апоптоза, наряду с контактами, участвуют гуморальные факторы, выделяемые ТЭК. Формирование кон-
Таблица. ВЛИЯНИЕ АДРЕНАЛИНА И СЕЛЕКТИВНЫХ АНТАГОНИСТОВ <х1- И а2-ДДРЕН0РЕЦЕПТ0Р0В НА ПРОЛИФЕРАТИВНЫЙ ОТВЕТ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ3
Препарат и его конечная Без ФГА, мкг/мл
концентрация митогена 12.5 25 50 100 200
Контроль 3.5864± 3.7002± 4.1060± 4.1450± 3.9181 ± 3.5146±
0.1338 0.2294 0.1543 0,1585 0.1962 0.2046
(3859) (5014) (12764) (13965) (8282) (3271)
Адреналин 3.4576± 3.5314± 3.7668± 3.8997± 3.6303± 3.5198±
1 мкг/мл (4,55*10* М) 0.0757 0.1111 0.1053" 0.1781' 0.1631 0.1305
Йохимбин (2868) (3340) (5845) (7938) (4269) (3310)
3.4378± 3.5113± 3.9906± 3.8597± 3.5287± 3.6983±
10* М 0.1049 0.0717 0.1069 0.2099" 0.3559 ' 0.1458
Йохимбин (2741) (3246) (9786) (7240) (3379) (4993)
3.4653± 3.5103± 3.8015± 3.9532± 3.6617± 3.5108±
10* М+ адреналин 0.0726 0.1214 0.1885'' 0.1646Т 0,2057" 0.1456
1 мкг/мл (2920) (3238) (6331) (8978) (4589) (3242)
Празозин 3.4593± 3.6925± 3.8635± 3.8365± 3.6991 ± 3.5010±
10* М 0.0307 0.1081 0.1136" 0.1963" 0.18021 0.1622
(2880) (4926) (7303) (6863) (5001) (3170)
Празозин 3.4348± 3.5455± 3.9671 ± 3.8556± 3.7168± 3.5303±
10' М+ адреналин 0.0644 0.1098 0.1645 * 0.1881" 0.1862 0.1371
1 мкг/мл (2722) (3512) (9271) (7172) (5210) (3391)
* Приведены значения М+ш для 1од|0 имп/мин (включение 3Н-тимидина), а в скобках — средние геометрические имп/мин (антилогарифм из М 1од10 имп/мин); число наблюдений во всех вариантах культур равно 8;
■ /^О,05; # - р <0,01; ## - /г <0,01 по сравнению с контролем по парному /-критерию Стьюдента; * - р <0,05 по сравнению с контролем по W-критерию суммы рангов Вилкоксона; т - то же по парному знаковому Т-критерию Вилкоксона; • - р<0,05 по отношению к культурам с одним адреналином.
тактов и иидукция апоптоза тимоцитов — энергозависимые процессы, происходящие с участием компонентов цитоскелета и зависящие от биосинтеза белка в тимоцитах.
Влияние адреналина и селективных антагонистов а- и а-адренорецепторов на пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови
Шилов Ю.И., ГеПн С.В.
Институт экологии и генетики микроорганизмов
УрОРАН
Пермь, Россия
В настоящее время общепринято представление о ведущей роли стимуляции Р- адренорецепторов в механизме иммунодепрессивного эффекта адреналина. Роль и а,-адренорецепторов изучена недостаточно.
Цель настоящей работы — изучить эффекты адреналина и селективных антагонистов а, - и а_,-адрекорецепто-ров на пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови здоровых людей на фитогемагглютинин (ФГА).
Лейкоциты периферической крови здоровых люден в возрасте от 18 до 43 лет культивировали с различными
концентрациями ФГА в 96-луночных круглодонных планшетах в среде 199 с добавлением 10% аутоплазмы, 2 мМ Ь-глутамина и 10 мМ НЕРЕБ (концентрация клеток 2* 10'/ лунку) в течение 72 часов. Адреналина гидрохлорид (1 мкг/мл), йохимбина гидрохлорид (антагонист а2-адре-норецепторов, 10-6 М), празозина гидрохлорид (антагонист с^-адренорецепторов, 10'6 М) вносили в культуры в момент их постановки. Все культуры ставили одномоментно с клетками одних и тех же людей.
Установлено, что адреналин в концентрации, приближающейся к уровню катехоламинов в периферических лимфоидных органах, угнетал пролис|>еративный ответ на оптимальные концентрации ФГА (см. таблицу на стр. 25). Йохим-бин и празозин как сами по себе, так и в сочетании с адреналином оказывали самостоятельное угнетающее действие на бласттрансформацию лимфоцитов, то есть действовали как агонисты. Эффект зависел от концентрации митогена.
Празозин отменял угнетающий эффект адреналина в культурах с концентрацией ФГА 25 мкг/мл.
Таким образом, проведенные исследования указывают на то, что в адренергическую регуляцию пролиферативного ответа лимфоцитов вовлечены и а-адренорецепторы.
Влияние эстрадиола на фагоцитарную активность нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов периферической крови
Шилов Ю.И., Груздева Е.А.
Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермский государственный университет Пермь, Россия
Как было показано ранее с использованием методов, основанных на регистрации клиренса, эстрогены активируют клетки системы мононуклеарных фагоцитов [1]. Влияние эстрогенов на функции других фагоцитирующих клеток и, в частности, на фагоцитарную активность гранулоцитов изучено в значительно мень-
шей степени. В настоящем сообщении проанализированы данные по влиянию однократного введения эстрадиола на фагоцитарную активность циркулирующего в крови пула фагоцитирующих клеток у крыс.
Эксперимент выполнен на овариэктомированных крысах-самках популяции Вистар. Исследовали показатели крови, взятой из сосудов хвоста до инъекции гормона (исходный фон) и в динамике через 6, 24,48 часов и 7 суток после нее. Эстрадиола дипропионат вводили подкожно в дозе 0,025 мг/животное. Для оценки фагоцитарной активности лейкоцитов к 25 мкл крови добавляли 12,5 мкл формалинизированных эритроцитов барана (200-10"/ мл, объекты фагоцитоза) и 12,5 мкл питательной среды (среда 199 с добавлением 2 мМ Ь-глутамина и 10 мМ НЕРЕБ) в пластиковых микропробирках с силиконовым покрытием. Пробы инкубировали 20 мин. при 37“С. На окрашенных по Романовскому препаратах дифференцированно учитывали показатели нейтрофильного, эозинофильного и моноцитарного фагоцитоза [2].
Установлено, что через 6 часов после введения эстрадиола имеет место статистически значимое увеличение абсолютного числа нейтрофилов периферической крови. Интегральные показатели фагоцитарной активности нейтрофилов в относительном выражении (процент фагоцитоза, фагоцитарное число и индекс) в этот срок не отличались от исходного уровня, однако в абсолютном выражении (число фагоцитирующих нейтрофилов и захваченных ими ФЭБ в расчете на 1 мкл крови) они значительно повышались. Через 24 и 48 часов абсолютное число нейтрофилов в крови возвращалось к исходному уровню. В эти сроки отмечено снижение фагоцитарного индекса (р<0,05), однако абсолютные показатели не отличались от контроля. На 7 сутки отмечено снижение как относительных, так и абсолютных показателей нейтрофильного фагоцитоза, а также абсолютного числа нейтрофилов. Абсолютные (но не относительные) показатели моноцитарного фагоцитоза и общее число моноцитов увеличивались через 6 часов. В последующие сроки абсо-
Таблица. ВЛИЯНИЕ ХТРАДИОЛА НА ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ ЭОЗИНОФИЛОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ОВАРИЭКТОМИРОВАННЫХ КРЫС-САМ0К ПОПУЛЯЦИИ ВИСТАР (М±т)
Срок исследования Абсолютное число эозинофилов (в 1 мкл крови) Процент фагоцитоза Фагоцитарное число Фагоцитарный индекс Абсолютное число фагоцитирующих клеток (в 1 мл крови) Абсолютное число объектов фагоцитоза (в 1 мл крови)
исходный фон через 6 часов через 24 часа через 48 часов через 7 суток 918,1 ±157,1 692,0*114,9|Т 670,6*200,4" 710,7±141,9 406,5±100,8™ 22,4*2,6 14,9*2.1™ 16,8±2,4 9,3*1, І** 17,7±2,3 0,3332±0,053 0,173*0,030™ 0,218±0,038т 0,127*0,016™ 0,236±0,034т 1,423±0,079 1,183*0,081™ 1,268*0,056" 1,380*0,118 1,321*0,058 209,9*49,9 91,5*18,0™ 101,4*24,1™ 64,8*13,7™ 61,0*14,0™ 320,3*92,2 117,0*31,0™ 124,0*26,9™ 82,4*14,2™ 74,6*14,3™
' - /К0,05 в сравнении с исходным фоном по парному ^критерию Стьюдента; т - то же по парному знаковому Т-критерию Вилкоксона; * - то же по \1\Г-критерию суммы рангов Вилкоксона; число животных (п) во всех выборках равно 10.
