CC BY
32
концентрациями ФГА в 96-луночных круглодонных планшетах в среде 199 с добавлением 10% аутоплазмы, 2 мМ Ь-глутамина и 10 мМ НЕРЕБ (концентрация клеток 2* 10'/ лунку) в течение 72 часов. Адреналина гидрохлорид (1 мкг/мл), йохимбина гидрохлорид (антагонист а2-адре-норецепторов, 10-6 М), празозина гидрохлорид (антагонист с^-адренорецепторов, 10'6 М) вносили в культуры в момент их постановки. Все культуры ставили одномоментно с клетками одних и тех же людей.
Установлено, что адреналин в концентрации, приближающейся к уровню катехоламинов в периферических лимфоидных органах, угнетал пролис|>еративный ответ на оптимальные концентрации ФГА (см. таблицу на стр. 25). Йохим-бин и празозин как сами по себе, так и в сочетании с адреналином оказывали самостоятельное угнетающее действие на бласттрансформацию лимфоцитов, то есть действовали как агонисты. Эффект зависел от концентрации митогена.
Празозин отменял угнетающий эффект адреналина в культурах с концентрацией ФГА 25 мкг/мл.
Таким образом, проведенные исследования указывают на то, что в адренергическую регуляцию пролиферативного ответа лимфоцитов вовлечены и а-адренорецепторы.
Влияние эстрадиола на фагоцитарную активность нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов периферической крови
Шилов Ю.И., Груздева Е.А.
Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермский государственный университет Пермь, Россия
Как было показано ранее с использованием методов, основанных на регистрации клиренса, эстрогены активируют клетки системы мононуклеарных фагоцитов [1]. Влияние эстрогенов на функции других фагоцитирующих клеток и, в частности, на фагоцитарную активность гранулоцитов изучено в значительно мень-
шей степени. В настоящем сообщении проанализированы данные по влиянию однократного введения эстрадиола на фагоцитарную активность циркулирующего в крови пула фагоцитирующих клеток у крыс.
Эксперимент выполнен на овариэктомированных крысах-самках популяции Вистар. Исследовали показатели крови, взятой из сосудов хвоста до инъекции гормона (исходный фон) и в динамике через 6, 24,48 часов и 7 суток после нее. Эстрадиола дипропионат вводили подкожно в дозе 0,025 мг/животное. Для оценки фагоцитарной активности лейкоцитов к 25 мкл крови добавляли 12,5 мкл формалинизированных эритроцитов барана (200-10"/ мл, объекты фагоцитоза) и 12,5 мкл питательной среды (среда 199 с добавлением 2 мМ Ь-глутамина и 10 мМ НЕРЕБ) в пластиковых микропробирках с силиконовым покрытием. Пробы инкубировали 20 мин. при 37“С. На окрашенных по Романовскому препаратах дифференцированно учитывали показатели нейтрофильного, эозинофильного и моноцитарного фагоцитоза [2].
Установлено, что через 6 часов после введения эстрадиола имеет место статистически значимое увеличение абсолютного числа нейтрофилов периферической крови. Интегральные показатели фагоцитарной активности нейтрофилов в относительном выражении (процент фагоцитоза, фагоцитарное число и индекс) в этот срок не отличались от исходного уровня, однако в абсолютном выражении (число фагоцитирующих нейтрофилов и захваченных ими ФЭБ в расчете на 1 мкл крови) они значительно повышались. Через 24 и 48 часов абсолютное число нейтрофилов в крови возвращалось к исходному уровню. В эти сроки отмечено снижение фагоцитарного индекса (р<0,05), однако абсолютные показатели не отличались от контроля. На 7 сутки отмечено снижение как относительных, так и абсолютных показателей нейтрофильного фагоцитоза, а также абсолютного числа нейтрофилов. Абсолютные (но не относительные) показатели моноцитарного фагоцитоза и общее число моноцитов увеличивались через 6 часов. В последующие сроки абсо-
Таблица. ВЛИЯНИЕ ХТРАДИОЛА НА ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ ЭОЗИНОФИЛОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ОВАРИЭКТОМИРОВАННЫХ КРЫС-САМ0К ПОПУЛЯЦИИ ВИСТАР (М±т)
Срок исследования Абсолютное число эозинофилов (в 1 мкл крови) Процент фагоцитоза Фагоцитарное число Фагоцитарный индекс Абсолютное число фагоцитирующих клеток (в 1 мл крови) Абсолютное число объектов фагоцитоза (в 1 мл крови)
исходный фон через 6 часов через 24 часа через 48 часов через 7 суток 918,1 ±157,1 692,0*114,9|Т 670,6*200,4" 710,7±141,9 406,5±100,8™ 22,4*2,6 14,9*2,1™ 16,8±2,4 9,3*1,1'™ 17,7±2,3 0,3332±0,053 0,173*0,030'™ 0,218±0,038т 0,127*0,016™ 0,236±0,034т 1,423*0,079 1,183*0,081™ 1,268*0,056й 1,380*0,118 1,321*0,058 209,9*49,9 91,5*18,0™ 101,4*24,1™ 64,8*13,7™ 61,0*14,0™ 320,3*92,2 117,0*31,0™ 124,0*26,9™ 82,4*14,2™ 74,6*14,3™
' - /К0,05 в сравнении с исходным фоном по парному ^критерию Стьюдента; т - то же по парному знаковому Т-критерию Вилкоксона; * - то же по \1\Г-критерию суммы рангов Вилкоксона; число животных (п) во всех выборках равно 10.
"Дни иммунологии в СПб '99 "
Медицинская иммунология
лютное число моноцитов возвращалось к исходному уровню, но имело место повышение относительных показателей моноцитарного фагоцитоза. Как видно из таблицы, введение эстрадиола приводило к значительному снижению показателей эозинофильного фагоцитоза. В целом, полученные результаты указывают на различия в действии эстрогенов на разные типы фагоцитирующих клеток периферической крови.
1. Кеворков Н.Н., Шилов Ю.И., Ширшев С.В., Черешнев В. А. Гормоны репродукции в регуляции процессов иммунитета.— Екатеринбург: УИФ "Наука”, 1993.— 172 с.
2. Шилов Ю.И., Владыкина В.П., Атнагузина А.Т. // Пермский медицинский журнал.—1998. — Том 15.—№ 2, —С. 3-9.
Влияние циклоспорина А на фагоцитарную активность нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов периферической крови in vitro
Шилов Ю.И., Козлов Е.Б.
Институт экологии и генетики микроорганизмов
УрОРАН
Пермь, Россия
Циклоспорин А - препарат, широко использующийся в клинической практике для подавления реакций трансплан-тационного иммунитета, а также для лечения аутоиммунных заболеваний. Считается, что в основе иммунодепрес-сивного и противовоспалительного действия циклоспорина А лежит подавление экспрессии цитокиновых генов в Т-лимфоцитах, связанное со взаимодействием препарата с циклофилинами. Последние участвуют в образовании комплекса с кальцииеврином, что необходимо для усиления на уровне транскрипции экспрессии цитокиновых генов. Однако наличие циклофилинов в иелимфоидных клетках позволяет предполагать возможность его действия и на другие клеточные типы. Помимо этого, в исследованиях in vitro циклоспорин А может служить удобным инструментом для выяснения роли специфичных для него сигнальных путей в активации других клеток.
Цель работы—исследовать влияние циклоспорина А на функции фагоцитирующих клеток в условиях преин-кубации их in vitro с разными концентрациями препарата.
Эксперимент проведен на крысах-самцах популяции Вистар. Периферическую кровь получали из сосудов хвоста, В опытных пробах 25 мкл крови преинкубировали с 12,5 мкл различных концентраций циклоспорина А (Sandimmun®) на полной питательной среде (ППС, среда 199 с добавлением 2 мМ L-глутамина и 10 мМ HEPES) в течение 1 часа при 37°С в пластиковых микропробирках с силиконовым покрытием. В контрольные пробы вместо циклоспорина А вносили 12,5 мкл ППС. Затем во все пробирки вносили по 12,5 мкл формалинизированных эрит-
роцитов барана (ФЭБ; 200-106/мл ППС, объекты фагоцитоза). Пробы инкубировали 20 мин. при 37°С. На мазках, окрашенных по Романовскому, дифференцированно учитывали показатели нейтрофильного, моноцитарного, эозинофильного и общего лейкоцитарного фагоцитоза.
Установлено, что циклоспорин А угнетал фагоцитарную активность нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов (таблица). Эозинофилы и нейтрофилы оказались наиболее чувствительными к супрессивному действию препарата. Ингибирующий эффект был выражен даже в наименьшей из исследованных концентраций (15,625 нг/ мл). Показатели моноцитарного фагоцитоза изменялись в меньшей степени, статистически значимые изменения выявлены при концентрациях 62,5 и 8000 нг/мл. Сходные закономерности отмечены при анализе других показателей фагоцитоза. Учитывая, что препарат контактировал с клетками в течение относительно короткого времени, можно полагать, что он оказывает прямой эффект на фагоцитирующие клетки, так как синтез цитокинов (в частности, интерлейкина-2) Т-лимфоцитами начинается спустя несколько часов после их активации. Полученные результаты указывают на возможную роль опосредуемого через циклофилины и кальценеврин сигнального пути в регуляции функций фагоцитирующих клеток, хотя этот вопрос требует дальнейших исследований.
Таблица. ВЛИЯНИЕ ЦИКЛОСПОРИНА А НА ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ, ЭОЗИНОФИЛОВ, МОНОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ КРЫС ПОПУЛЯЦИИ УМЭТАИ*
Конечная концентрация циклоспорина А, нг/мл Нейтрофилы Эозинофилы Моноциты
Контроль (преинкубация в ППС) 0,661+0,114 0,453+0,053 0,318+0,080
15,625 нг\мл 0,520+0,100" 0,288+0,024™ 0,257+0,022
31,25 нг\мл 0,466+0,097™ 0,232+0,035'™ 0,353+0,100
62,5 нг\мл 0,374+0,059™ 0,245+0,018'™ 0,154+0,024'
125 нГ\мл 0,411+0,065' 0,188+0,047'™ 0,250+0,025
250 нг\мл 0,357+0,072'™ 0,184+0,034™ 0,273+0,063
500 нг/мл 0,360+0,063'™ 0,210+0,040™ 0,249+0,078
1000 нг/мл 0,376+0,097' 0,251+0,048'™ 0,211+0,047
2000 нг/мл 0,520+0,117" 0,250+0,057™ 0,211+0,032
4000 нг\мл 0,342+0,081^ 0,216+0,056™ 0,252+0,055
8000 нг\мл 0,392+0,101" 0,186+0,052™ 0,123+0,025™
* - Приведены значения М±т для показателей фагоцитарного числа; надстрочными индексами показана достоверность различий в сравнении с контролем: 1 - /><0,05 по парному /-критерию Стьюдента; т - то же по парному знаковому Т-критерию Вилкоксона; * - то же по ^/-критерию суммы рангов Вилкоксона.
