CC BY
12
Научная статья
УДК 636.393.9 + 612.015.3
doi: 10.47737/2307-287 3_2022_3 9_102
ВАРИАТИВНОСТЬ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КРОВИ У КОЗ ЗААНЕНСКОЙ ПОРОДЫ В ПЕРВЫЕ МЕСЯЦЫ ЛАКТАЦИИ
©2022. Виктория Борисовна Лейбова1, Марина Владимировна Позовникова2,
1,2 Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных - филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный исследовательский центр животноводства — ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста», Пушкин, Россия 1 leib1406@yandex.ru, 2pozovnikova@gmail. com
Аннотация. У высокопродуктивного молочного скота, не имеющего клинических признаков заболеваний, биохимические показатели крови в первые месяцы лактации могут не соответствовать референтным интервалам (РИ). Это связано с установлением РИ без учёта физиологического периода. Исследование было направлено на описание динамичности изменения биохимических показателей сыворотки крови у коз зааненской породы в первые три месяца лактации и их соответствия референтным значениям. Работа была проведена на первородящих козах, выращиваемых в Ленинградской области в условиях промышленного содержания. Кровь для проведения биохимических исследований отбирали трёхкратно: на 20-30 сут., 50-60 сут. и 80-90 сут. после окота. В сыворотке крови определяли концентрацию общего белка, альбумина, мочевины, креатинина, глюкозы, общего холестерина, триглицеридов, общего билирубина, а также активность ферментов аспарта-таминотрансфераза (АСТ), аланинаминотрансфераза (АЛТ) и щелочной фосфатазы (ЩФ). Из одиннадцати биохимических параметров средние значения двух показателей выходили за пределы РИ. Концентрация креатинина на 20-30 сут. и 80-90 сут. после окота была меньше на 8,5% и 17,5% соответственно (p<0,001) по сравнению с 50-60 сут. и на 1,2 % и 10,8 % ниже РИ. Содержание общего билирубина у коз в конце 1-го и 2-го месяца лактации было выше по сравнению с 3-м месяцем в 2,0-1,7 раза и превышало верхнюю границу РИ на 83% -52,1% соответственно. Концентрация мочевины в сыворотке крови в конце 3-го месяца лактации, находящаяся на верхней границе РИ, имела положительную корреляционную связь с интервалом от окота до плодотворного осеменения (r=0,486, p<0,05). Полученные результаты могут стать вкладом в лучшее понимание метаболических процессов, происходящих у молодых коз в первые месяцы лактации, а также использоваться в диагностических целях.
Ключевые слова: козы, биохимия крови, референтные интервалы, общий билирубин, кре-атинин, мочевина, триглицериды
Введение. Биохимические показатели крови являются одним из инструментов мониторинга состояния коз. Для интерпретации результатов лабораторных исследований решающее значение имеет диапазон референтных интервалов, т.е. принятые за норму данные,
полученные в 95% случаев. Однако их использование осложняется большим количеством значений, выходящих за пределы опубликованных референтных интервалов (РИ) у клинически здоровых животных, намного превышающих ожидаемые 5% [1]. Это может быть
обусловлено тесной связью между концентрацией метаболитов и активностью ферментов с физиологическими событиями у животных [2]. К сожалению, референтные значения, представленные в справочных пособиях, не учитывают как физиологического периода, так и направления продуктивности коз. Кроме того, на биохимические показатели крови оказывают влияние кормление и система содержания [3], возраст [4], генетический фон и продуктивность [5, 6]. Поскольку существующие РИ затрудняют трактование полученных данных, некоторые исследователи рекомендуют в средних и крупных стадах овец или коз устанавливать собственные эталонные значения [7].
Цель нашего исследования - определение динамики биохимических показателей крови в первые три месяца лактации у первородящих коз зааненской породы (в условиях промышленного содержания) и их соответствие референтным интервалам.
Задачи:
1. Сформировать выборку животных в зависимости от времени окота (различие по дате окота не более десяти дней).
2. Провести трёхкратный отбор образцов крови в конце первых трёх месяцев лактации.
4. Выполнить сравнительный анализ показателей удоя, выхода молочного жира и белка за четыре месяца лактации.
5. Проанализировать временные изменения уровней циркулирующих метаболитов и ферментов в сыворотке крови и их соответствие РИ.
Методика. Работа была проведена в хозяйстве Ленинградской области в 2020 году (весенне-летний период). Отбор проб крови проводили у коз после первого окота (п=31); данные по воспроизводству и молочной про-
дуктивности, в связи с последующей продажей части животных, были получены на 23 особи. Кровь для проведения биохимических исследований отбирали трёхкратно: на 20-30 сут., 50-60 сут. и 80-90 сут. после окота. В сыворотке крови определяли концентрацию общего белка, альбумина, мочевины, креати-нина, глюкозы, общего холестерина, тригли-церидов, общего билирубина, а также активность ферментов аспартатаминотрансфераза (АСТ), аланинамино-трансфераза (АЛТ) и щелочной фосфатазы (ЩФ) и коэффициент де Ритиса (КДР - соотношение АСТ/АЛТ). Лабораторные исследования проводили на автоматическом анализаторе «PKL 125» (Paramedical, Италия) с использованием реагентов фирмы «Витал Девелопмент Корпор-эйшн» (Россия). Полученные данные были обработаны методом однофакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями при помощи программы SigmaPlot 12,5 (SystatSoftware, Inc., США). Достоверность различия сравниваемых средних значений оценивали с использованием критерия Холма-Сидака, при этом был принят уровень значимости p<0,05; для вычисления корреляционных связей применяли коэффициент Пирсона. Полученные биохимические показатели сыворотки крови коз сравнивали с РИ, представленными в монографии «Репродукция коз» Аксёновой и Ермакова (2015) [8].
Результаты. Анализ биохимического профиля крови у коз в первые три месяца после окота проводили с учётом динамики молочной продуктивности за четыре месяца лактации. Установлено, что удой на 2-й месяц после окота вырос на 24,2% (р<0,001), между 2-м и 3-м месяцами лактации не обнаружено достоверных различий, а на 4-й месяц после окота показано снижение удоя на 7,2% (р<0,001) по сравнению с 3-м месяцем (рис. 1А).
Рис. 1 Молочная продуктивность первородящихкоз в первые четыре месяцалактации. А - удой коз в первые четыре месяца лактации. Достоверные различия: a-b; с-d p<0,001. В - показатели МДЖ и МДБ. Достоверные
различия: a-b; с-d p<0,001.
Fig. 1. MUk productivity of primiparous goats in the fist four months of lactation. A - the milk yield of goats in the first four months of lactation. Significant differences: a-b; c-d p<0.001. B - MWA and CBM indicators. Significant differences: a-b; c-d p<0.001.
Наиболее высокая массовая доля белка и жира в молоке (МДБ и МДЖ) была определена на 20-30 сут. после окота (рис. 1В). МДБ была снижена к концу 50-60 сут. лактации (р<0,001) и далее достоверно не изменялась, МДЖ продолжила своё понижение до 80-90 сут. по сравнению с 50-60 сут. (р<0,001).
Анализ данных показал, что в первые три месяца лактации большинство биохимических показателей крови находилось в пределах «нормального» диапазона [8], имея значительную вариативность по месяцам лактации.
Содержание общего белка в сыворотке крови на 50-60 сут. лактации было выше на 7,5-10,4% (р<0,001), по сравнению с 20-30 сут. и 80-90 сут., тогда как содержание альбумина в течение трёх месяцев последовательно возрастало: на 1,9% и 2,5% соответственно (р<0,001). Концентрация глюкозы к концу третьего месяца лактации находилась на нижней границе РИ, что на 25-26% ниже по сравнению с 20-30 сут. и 50-60 сут. после окота (р<0,001). В работе Antunovic е1 а1 (2017) [9] показано её уменьшение у молочных коз до 140 сут. после окота.
Таблица 1
Динамика биохимических показателей крови у первородящих коз в течение трёх месяцев лактации (п=31)
Показатели Сутки после окота Норма
20-30 50-60 80-90
Общий белок, г/л 65,0±1,0a 69,9±0,7b 65,3±0,9a 61-75
Альбумин, г/л 31,7±0,3a 32,3±0,3a'b 33,1±0,3b 23-36
Мочевина, ммоль/л 6,52±0,28a 6,11±0,34a 9,15±0,31b 4,5-9,2
Креатинин, мкмоль/л 59,3±1,4a 64,8±1,3a'b 53,5±1,0b 60-135
Глюкоза, ммоль/л 3,20±0,05a 3,18±0,09a 2,65±0,05b 2,7-4,2
Триглицериды, ммоль/л 0,105±0,008a 0,190±0,027b 0,148±0,012b -
Общий холестерин, ммоль/л 1,91±0,06a 2,11±0,05b 2,18±0,07b 1,7-3,5
АСТ, ед/л 95,4±2,2 96,1±3,4e 92,3±2,5 f 66-230
АЛТ, ед/л 15,5±0,7 c 18,5±1,2 d 21,6±2,8 d 15-52
КДР, ед/л 6,46±0,31 a 5,70±0,33 a 5,31±0,51 b -
ЩФ, ед/л 186±56a 201±58a 210±56b 61-289
Общий билирубин, мкмоль/л 7,87±0,42 a 6,54±0,43 a-b 3,90±0,17 b 1,7-4,3
Примечание. Достоверные различия по месяцам лактации: a,b p<0,001; c,d p<0,01; e,f p<0,05.
Концентрация мочевины на 80-90 сут. после окота (перед началом сезона разведения) превысила результаты, полученные для
1-го и 2-го месяцев лактации на 40,3% и 49,8% соответственно (р<0,001), и достигла верхних границ референтных значений.
Рис. 2. Корреляционная связь между концентрацией мочевины на 3-м месяце лактации и интервалом от окота до плодотворного осеменения Fig. 2. Correlation between the concentration of urea in the 3rd month of lactation and the interval from
lambing to fruitful insemination
Была установлена однонаправленная связь между содержанием мочевины в крови на 80-90 сут. лактации (перед началом периода разведения) и интервалом от окота до плодотворного осеменения в последующем случном сезоне (p<0,05) (рис. 2). Уровни активности АСТ и ЩФ не изменялись в первые два месяца после окота, но к 3-му месяцу лактации активность АСТ была снижена по сравнению со 2-м месяцем на 4,0 % (p <0,05), тогда как у ЩФ она увеличилась на 4,5 % (p <0,001).
Активность АЛТ также выросла ко 2-3-му месяцу лактации на 19,4% - 39,5 % (p <0,01), а коэффициент де Ритиса к 3-му месяцу по сравнению с 1-м и 2-м упал на 7,3% -21,7% соответственно (p <0,001).
Направленность изменений показателей липидного обмена была сходной в рассматриваемый период. Концентрация общего холестерина и триглицеридов в сыворотке была выше на 2-3-й месяц лактации не менее чем на 6,5% и 41% соответственно, относительно 2030 сут. после окота (p<0,001). Информация по РИ триглицеридов в крови отсутствовала как в монографии [8], так и в общеизвестном спра-
вочнике Капеко е1 а1 (2008) [10]. В предыдущей работе на первородящих козах этой популяции (4-5-й месяц лактации) были получены результаты, аналогичные данным 2-го и 3-го месяцев в текущем исследовании [11]. Более низкое содержание триглицеридов в первый месяц после окота могло быть обусловлено повышенной потребностью молочной железы в синтезе молочного жира, а также их интенсивной аккумуляцией печенью во время отрицательного энергетического баланса [12].
В нашем исследовании значения двух показателей выходили за пределы РИ. Так, концентрация креатинина на 20-30 сут. и 80-90 сут. после окота была меньше по сравнению с 50-60 сут. на 8,5% и 17,5 % соответственно (р<0,001), что на 1,2 % и 10,8 % ниже минимальных референсных значений. Вероятно, это обусловлено изначально более низкой живой массой у коз первого окота по сравнению с козами двух и более лактаций, так как известно, что содержание креатинина в крови тесно связано с мышечной массой животного [13]. Кроме того, в первые недели после окота, в условиях отрицательного энергетического
баланса у молодых самок, наряду с использованием жировых запасов тела, активно мобилизуются мышечные резервы [4, 11]. Снижение концентрации креатинина к 80-90 сут. могло быть обусловлено дальнейшим использованием эндогенных аминокислот, метамо-билизируемых для поддержания уровня глюкозы крови в период наибольшей молочной продуктивности при недостаточной сбалансированности рациона и, соответственно, сопровождаться уменьшением мышечной массы тела.
В конце 1-го и 2-го месяцев лактации содержание общего билирубина у коз было выше по сравнению с 3-м месяцем в 2,0-1,7 раза и превышало верхнюю границу РИ на 83%-52,1% соответственно. Вероятно, это связано с интенсивной липомобилизацией в послеродовом периоде, которая инициирует ли-пидную инфильтрацию печени, сопровождающуюся ростом концентрации общего билирубина в сыворотке крови. Однако эти значения не были сопряжены с проявлением клинических признаков заболевания.
Выводы. В первые месяцы лактации некоторые биохимические показатели могут иметь значения, существенно отличающиеся
от референтных интервалов, представленных в справочной литературе. Так, концентрация общего билирубина в 1-й и в 2-й месяцы после окота была выше верхней границы «нормальных» значений на 83%-52,1%. Концентрация креатинина в 1-й и 3-й месяц лактации, наоборот, ниже на 1,2-10,8%. Таким образом, при анализе результатов лабораторного исследования необходимо учитывать предварительные факторы, связанные с возрастом, стадией лактации и управлением. Кроме того, было установлено, что концентрация мочевины в сыворотке крови в конце 3-го месяца лактации, средние значения которой находились на верхней границе референтных значений (9,15±0,31 ммоль/л), имела положительную корреляционную связь с интервалом от окота до плодотворного осеменения (r=0,486, p<0,05). Полученные результаты могут стать вкладом в лучшее понимание метаболических процессов, происходящих у молодых коз в первые месяцы лактации, а также использоваться в диагностических целях.
Источник финансирования: исследование выполнено в рамках ГЗ № 121052600354-7.
Список источников
1. Vojta A., Shek-Vugrovecki A., Radin L., Efendic M., Pejakovic J., Simpraga M. Hematological and biochemical reference intervals in Dalma-tian sheep estimated from reduced sample size by bootstrap resampling // Veterinary Archive. 2011. № 81. P. 25-33.
2. Cepeda-Palacios R., Fuente-Gomez M.G., Ramirez-Orduna J.M., Garcia-Alvarez A., Llinas-Cervantes X., Angulo C. Effects of pregnancy and post-kidding stages on haematochemical parameters in cross-bred goats // Journal of Applied Animal Research. 2018. № 46(1). P. 269-273.
3. Mohammed S.A., Razzaque M.A., Omar A.E., Albert S., Al-Gallaf W.M. Biochemical and hematological profile of different breeds of goat maintained under intensive production system // Afr. J. Biotechnol. 2016. № 15. P. 1253-01257.
4. Zamuner F., DiGiacomo K., Cameron A., Leury B. Endocrine and metabolic status of commercial dairy goats during the transition period // Journal of Dairy Science. 2020. Vol.103. № 6. P. 5616-5628.
5. Лейбова В.Б., Позовникова М.В. Биохимический профиль крови в послеотельный период у коров-первотелок в связи с полиморфными вариантами гена SCD1 и репродуктивной способностью // Аграрный вестник Урала. 2020. № 4(195). С. 56-63.
6. Milosevic-Stankovic I.D. Dependence of the bodily conditions and blood parameters in the peripartal period, production and productive re-sults of the Alpine goat breed // Doctoral dissertation. University of Bel-grade. Faculty of Agriculture. 2020. 148 p.
7. Castillo C., Abuelo A., Hernandez J. Usefulness of metabolic profil-ing in the assessment of the flock's health status and productive perfor-mance // Small Ruminant Research. 2016. № 142. P. 28-30.
8. Аксенова П.В., Ермаков А.М. Биология репродукции коз. СПб.: Издательство «Лань», 2015. 272 с.
9.Antunovic Z., Speranda M., Novoselec J., Didara M., Mioc B., Klir Z., Samac D. Blood metabolic profile and acid-base balance of dairy goats and their kids during lactation // Veterinary Archive. 2017. Vol. 87. № 1. P. 43-55.
10. Kaneko J.J., Harvey J.W., Brass M.L. Clinical Biochemistry of Domestic Animals. 6th ed. San Diego, CA: Academic Press, London. 2008. 896 p.
11. Лейбова В. Б., Позовникова М. В. Продуктивные качества и особенности метаболического профиля крови в середине лактации у коз зааненской породы (Capra hircus) с разным возрастом первого окота // Известия Нижневолжского агроуниверситетского комплекса: Наука и высшее профессиональное образование. 2021. № 3(63). С. 234244.
12.Batista C.P., Castro S.M., Correa H.J., Gonjalves R.S., de Faria Va-le S., Gonzalez F. Relation between liver lipid content and plasma bio-chemical indicators in dairy cows //Acta Scientiae Veterinariae. № 48. P. 122-124.
13. Kokkonen T., Taponen J., Anttila T., Syrjala-Qvist L., Delavaud C., Chilliard Y., Tuori M., Tesfa A.T. Effect of body fatness and glucogen-ic supplement on lipid and protein mobilization and plasma leptin in dairy cows // J. Dairy Science. 2005. № 88. P. 1127-1141.
14. Siachos N., Panousis N., Oikonomou G., Valergakis G. Role of fat and muscle mass and mobilization of transition dairy cows on milk yield and reproduction // EAAP 69th Annual Meeting. Dubrovnik. 2018. 364 p.
VARIABILITY OF BIOCHEMICAL PARAMETERS OF BLOOD IN GOATS OF THE SAANEN BREED IN THE FIRST MONTHS OF LACTATION
©2022. Viktoria B. Leibova1, Marina V. Pozovnikova2
12 Russian Research Institute for Farm Animal Genetics and Breeding - Branch of the L. K. Ernst Federal Science Center for Animal Husbandry (RRIFAGB), Pushkin, Russia 1 leib1406@yandex.ru, 2pozovnikova@gmail. com
Abstract. In highly productive dairy cattle that do not have clinical signs of disease, blood biochemical parameters in the first months of lactation may not correspond to the reference intervals (RI). This is due to the establishment of RI without taking into account the physiological period. The study was aimed at describing the dynamics of changes in the biochemical parameters of blood serum in goats of the Saanen breed in the first three months of lactation and their correspondence to the reference values. The work was carried out on primiparous goats grown in the Leningrad region under industrial conditions. Blood for biochemical studies was taken three times: on days 20-30, 50-60 and 80-90 after lambing. In blood serum, the concentration of total protein, albumin, urea, creatinine, glucose, total cholesterol, triglycerides, total bilirubin, as well as the activity of the en-zymes aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), and alkaline phosphatase (AP) were determined. Of the eleven biochemical parameters, the average values of two parameters were outside the RI. Creatinine concentration on 20-30 days and 80-90 days after lambing was less by 8.5% and 17.5%, respectively (p<0.001) compared with 50-60 days and 1.2% and 10.8% below the RI. The content of total bilirubin in goats at the end of the 1st and 2nd months of lactation was 2.0-1.7 times higher compared to the 3rd month and exceeded the upper limit of RI by 83%-52.1%, respectively. The concentration of urea in the blood serum at the end of the 3rd month of lactation, which was at the upper limit of RI, had a positive correlation with the interval from lambing to fruitful insemination (r=0.486, p<0.05). The results obtained can contribute to a better understanding of the metabolic processes occurring in young goats in the first months of lactation, as well as be used for diagnostic aim.
Keywords: goats, blood biochemistry, reference intervals, total bilirubin, creatinine, urea, triglycerides
Referenees
1. Vojta A., Shek-Vugrovecki A., Radin L., Efendic M., Pejakovic J., Simpraga M. Hematological and biochemical reference intervals in Dalmatian sheep estimated from reduced sample size by bootstrap resampling, Veterinary Archive, 2011, No. 81, pp. 25-33.
2.Cepeda-Palacios R., Fuente-Gomez M.G., Ramirez-Orduna, J.M., Gar-cia-Alvarez A., Llinas-Cervantes X., Angulo C. Effects of pregnancy and post-kidding stages on haematochemical parameters in cross-bred goats, Journal of Applied Animal Research, 2018, No. 46(1), pp. 269-273.
3.Mohammed S.A., Razzaque M.A., Omar A.E., Albert S., Al-Gallaf W.M. Biochemical and hematological profile of different breeds of goat maintained under intensive production system, Afr. J. Biotechnol, 2016, No. 15, pp. 1253-01257.
4.Zamuner F., DiGiacomo K., Cameron A., Leury B. Endocrine and met-abolic status of commercial dairy goats during the transition period, Journal of Dairy Science, 2020, Vol.103, No. 6, pp. 5616-5628.
5.Lejbova V.B., Pozovnikova M.V. Biohimicheskij profil' krovi v posleotel'nyj period u korov-pervotelok v svjazi s polimorfnymi variantami gena SCD1 i reproduktivnoj sposobnost'ju (Postpartum blood biochemical profile in heifers in connection with polymorphic variants of the SCD1 gene and reproductive ability), Agrarnyj vestnik Urala, 2020, No. 4(195), pp. 56-63.
6.Milosevic-Stankovic I.D. Dependence of the bodily conditions and blood parameters in the peripartal period, production and productive results of the Alpine goat breed, Doctoral dissertation. University of Belgrade. Faculty of Agriculture, 2020, 148 p.
7.Castillo C., Abuelo A., Hernandez J. Usefulness of metabolic profiling in the assessment of the flock's health status and productive performance, Small Ruminant Research, 2016, No. 142, pp. 28-30.
8. Aksenova P.V., Ermakov A.M. Biologija reprodukcii koz (Biology of goat reproduction), SPb, Izdatel'stvo «Lan'», 2015, 272 p.
9.Antunovic Z., Speranda M., Novoselec J., Didara M., Mioc B., Klir Z., Samac D. Blood metabolic profile and acid-base balance of dairy goats and their kids during lactation, Veterinary Archive, 2017, Vol. 87, No. 1, pp. 43-55.
10.Kaneko J.J., Harvey J.W., Bruss M.L. Clinical Biochemistry of Domes-tic Animals. 6th ed. San Diego, CA, Academic Press, London, 2008, 896 p.
11.Lejbova V. B., Pozovnikova M. V. Produktivnye kachestva i osobennosti metabolicheskogo profilja krovi v seredine laktacii u koz zaanenskoj porody (Capra hircus) s raznym vozrastom pervogo okota (Productive qualities and features of the metabolic blood Profile in the middle of lactation in saanen goats (Capra hircus) with different ages of the first kidding), Izvestija Nizhnevolzhskogo agrouniversitetskogo kompleksa, Nauka i vysshee professional'noe obrazovanie, 2021, No. 3(63), pp. 234-244.
12.Batista C.P., Castro S.M., Correa H.J., Goncalves R.S., de Faria Vale S., Gonzalez F. Relation between liver lipid content and plasma biochemical indicators in dairy cows, Acta Scientiae Veterinariae, No. 48, pp. 122-124.
13. Kokkonen T., Taponen J., Anttila T., Syrjala-Qvist L., Delavaud C., Chilliard Y., Tuori M., Tesfa A. T. Effect of body fatness and glucogenic sup-plement on lipid and protein mobilization and plasma leptin in dairy cows, J. Dairy Science, 2005, No. 88, pp. 1127-1141.
14. Siachos N., Panousis N., Oikonomou G., Valergakis G. Role of fat and muscle mass and mobilization of transition dairy cows on milk y ield and re-production, EAAP 69th Annual Meeting. Dubrovnik, 2018, 364 p.
Сведения об авторах
В.Б. Лейбова1 -канд. биол. наук; М-В.Позовникова1 - канд. биол. наук;
1,2 Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных - филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный исследовательский центр животноводства — ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста» (ВНИИГРЖ), 196601, г. Санкт-Петербург, Пушкин, Московское ш. 55А, Россия
Information about the authors
V.B. Leibova1 - Cand. Biol. Sci.; M.V. Pozovnikova2 - Cand. Biol. Sci.
1,2 Russian Research Institute for Farm Animal Genetics and Breeding - Branch of the L. K. Ernst Federal Science Center for Animal Husbandry (RRIFAGB), 196601, St. Petersburg, Pushkin, Moskovskoe sh. 55A, Russia
Конфликт интересов: авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Conflict of interest: the authors declare that they have no conflicts of interest.
Стат ья поступила в редакцию 07.06.2022; одобрена после рецензирования 10.06.2022; принята к публикации 25.08.2022. The article was submitted 07.06.2022; approved after reviewing 10.06.2022; accepted for publication 25.08.2022.
