CC BY
32
сии, соответственно, 328 нм и 393 нм. В качестве стандарта использовали 7-метилкумарин (ICN Biomedicals Inc.). Инкубацию производили в присутствии специфичного ингибитора сери-новых протеаз фенилметилсульфонилфторида (ФМСФ, Boehringer Mannhein, Germany) в концентрации 0,5 мМ. Для активации ММП применяли специфический активатор AФМА (аминофенилмеркурий-ацетат) в конечной концентрации 1 мМ. Для определения проформ и активных форм ММП-2 и ММП-9 использовали желатиназную зимографию (Mini-PROTEAN Tetra Cell, 165-8000, Bio Rad Inc, USA). Концентрацию ТИМП-1 и ТИМП-2 определяли в ткани легких и в сыворотке крови мышей количественно методом ИФА с помощью соответствующих коммерческих наборов для мышей (Ray Biotech Inc., USA).
Результаты. Развитие опухоли (на 20-е сут по сравнению с 15-ми сут) характеризовалось увеличением общей активности ММП (активная форма + проММП) в ткани опухоли за счет преобладания проММП. Выявлена положительная корреляционная связь между весом опухоли и проММП в ткани опухоли мышей с АЛЛ. В ткани легких интактных животных преобладала проММП. Развитие метастазов в легких сопровождалось увеличением общей активности ММП на всех исследованных сроках (7, 15 и 20-е сут после перевивки опухоли) за счет увеличения активной формы и снижения проММП.
Выявлена положительная корреляционная связь между общей активностью ММП и активной формой ММП в ткани легких мышей с АЛЛ. Обнаружено, что соотношение проформ и активных форм ММП в ткани опухоли отличается от соотношения этих показателей в ткани легких с метастазами, что указывает на различную роль проформ и активных форм ММП в клетках опухоли и метастазах. Активность ММП в сыворотке крови носит волнообразный характер: повышение на 7-е сут развития опухоли, снижение на 15-е сут (развитие метастазов и прогрессирование АЛЛ), и вновь повышение к 20-м сут. Обнаружено, что содержание ТИМП-1 в сыворотке крови мышей выше по сравнению с интактными животными в динамике роста опухоли на всех исследованных сроках (7, 15 и 20-е сут после перевивки). В сыворотке крови интактных мышей концентрация ТИМП-2 почти в 4 раза выше в сравнении с ТИМП-1. Уровень ТИМП-2 повышен только на поздней стадии развития опухолевого процесса (20-е сут) по сравнению с сывороткой интактных животных и мышей с АЛЛ на более ранних сроках развития (7-е и 15-е сут). В ткани легких концентрация ТИМП-1 значительно ниже у мышей с АЛЛ (7-е сут) по сравнению с легкими интактных животных. Содержание ТИМП-2 в ткани легких выше на 7-е и 20-е сут развития опухолевого процесса по сравнению с интактными мышами.
ЦИТОСТАТИЧЕСКИЙ ЭФФЕКТ КОМПЛЕКСА ЛИПОПРОТЕИНОВ очень низкой плотности с кортизолом на рост и развитие опухолевых клеток в культуре
р.а. Князев, ж.и. гринюк
НИИ биохимии СО РАМН, г. Новосибирск
Актуальность. Анализ литературных данных свидетельствует о том, что интерес исследователей к участию липопротеинов (ЛП) и их белкового компонента апоЛП в регуляции митотической активности клеток, экспрессии генов, механизмов иммунного ответа существует давно. Показано, что липопротеины высокой плотности проявляют пролиферативный эффект,
обусловленный действием биологически активного комплекса тетрогидрокортизол-апоА-!, который образуется в макрофагах. Выяснен молекулярный механизм его действия, обусловленный усилением экспрессии многих генов в соматических клетках (гепатоцитах). Показано также, что апоЕ и апоЕ-содержащие липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) пода-
вляют биосинтез ДНК и белка, как в нормальных, так и в опухолевых гепатоцитах. Интерес к изучению регуляторной роли липопротеинов и их белкового компонента в механизмах противоопухолевой защиты с каждым годом возрастает. Известно, что глюкокортикоиды относятся к индукторам апоптоза. В данном исследовании предполагалось усилить антипролиферативный эффект ЛПОНП добавлением глюкокортикоид-ного гормона кортизола.
Цель исследования. Изучение влияния ли-попротеинов очень низкой плотности при их совместном добавлении с кортизолом на процессы пролиферации в культуре опухолевых клеток.
Материал и методы. В работе использовались мыши линии А^п с асцитной НА-1
гепатомой (Институт цитологии и генетики СО РАН). Клетки перитонеального экссудата получали после вскрытия брюшной полости для последующего культивирования. Эксперимент проводился на 4 группах: чистый контроль (физиологический раствор), ЛПОНП, кортизол и ЛПОНП+кортизол. Липопротеины очень низкой плотности добавляли в объеме 0,2мл (концентрация белка 00 мкг/мл) на 1мл питательной среды. В контрольную группу добавляли 0,2 мл физиологического раствора.
Концентрация кортизола в 1 мл инкубационной среды была 10-6М. Биосинтез ДНК измеряли по включению 3Н-тимидина. Время инкубации составляло 1,5 ч.
Результаты. Выявлено, что добавление ЛПОНП совместно с кортизолом оказывает цитостатическое действие на рост и развитие НА-1 гепатомы, определяемое по включению 3Н-тимидина. Показано, что в группах ЛПОНП+кортизол происходит снижение скорости биосинтеза ДНК на 52 % по сравнению с контролем. В группах с инкубацией в присутствии одного гормона снижение составило 25-30 %. Аналогичный эффект наблюдался в группах с добавлением ЛПОНП без кортизола.
Выводы. Несмотря на то, что антипроли-феративный эффект наблюдался во всех трех опытных группах, наиболее выраженным он был в группе ЛПОНП+кортизол. Вероятно, это связано с образованием активной транспортной формы липопротеин-гормон. Возможно, данный комплекс проявляет свое действие по иному биохимическому пути, через рецептор-опосредованный механизм проникновения гормона в клетку, который, в свою очередь, является более эффективным.
АКТИВНОСТЬ и субъединичный состав протеасом в гиперплазированном и неоплазированном ЭНДОМЕТРИИ
В.Д. КОВАЛЬ, Л.В. СПИРИНА, О.В. ЗАМКОВА
НИИ онкологии СО РАМН, г. Томск
Актуальность. Пролиферативные заболевания эндометрия являются одним из наиболее распространенных видов онкогинекологиче-ской патологии. Протеолитические системы могут играть важную роль в патогенезе новообразований, в связи с этим большой интерес представляет изучение «ракового деградома» - комплекса протеаз, экспрессируемых опухолью. Одной из наиболее значимых систем внутриклеточного протеолиза является про-теасомная система. Однако на сегодняшний день исследований, посвященных изучению протеасомной системы при новообразовани-
ях эндометрия, немного, и они проводятся, главным образом, на клеточных линиях и культурах.
Цель исследования - изучение активности протеасом в тканях гиперплазированного эндометрия (ГЭ), рака эндометрия (РЭ) и субъеди-ничного состава протеасом в тканях РЭ.
Материал и методы. Первую группу составили 49 больных с морфологически верифицированным диагнозом РЭ 1-11 стадии (средний возраст - 56,8 ± 1,5 года). Все больные РЭ получали лечение в соответствии с рекомендованным алгоритмом объемов диагностики
