CC BY
47
нутах воздействия соответственно. Достоверно возрастало количество актов верчения - в 18 и 15 раз соответственно при 5 и 10 минутах воздействия. При воздействии в течение 10 минут достоверно возрастало количество актов урина-ции и дефекации - в 5 и 4,2 раза соответственно. Таким образом, при воздействии некогерентного импульсного излучения наблюдалось возрастание уровня тревожности крыс, которое более выражено при воздействии в течение 10 минут. Так как в ряде работ отмечается, что электромагнитные излучения вызывают активацию гипофизарно-адреналовой системы, которая играет ключевую роль в особенностях форм тревожно-депрессивных расстройств, то можно
предположить, что основной вклад в поведение животных при воздействии некогерентным импульсным излучением вносит электромагнитная компонента.
Выводы. Воздействие некогерентным импульсным излучением оказывает влияние на нервную систему крыс с экспериментальной перевитой лимфосаркомой. При воздействии в течение 5 и 10 минут наблюдается достоверное снижение ориентировочно-исследовательской деятельности животных и возрастание актов верчения. При воздействии в течение 10 минут наблюдается достоверное возрастание эмоционально-тревожного состояния животных.
РОЛЬ ИЗМЕНЕНИЙ АКТИВНОСТИ ММП ПРИ ОПУХОЛЕВОМ РОСТЕ И МЕТАСТАЗИРОВАНИИ АДЕНОКАРЦИНОМЫ ЛЕГКИХ ЛЬюИС У МЫшЕЙ
Я.А. КИСАРОВА, Т.А. КОРОЛЕНКО
НИИ физиологии СО РАМН, г. Новосибирск
Актуальность. Матриксные металлопротеа-зы (ММП) экспрессируются и секретируются различными опухолевыми клетками, принимая участие в деградации компонентов внеклеточного матрикса, способствуя инвазии и диссе-минации опухолевых клеток (Nagase H., 1999; Overall C., 2009).
Цель исследования - изучить роль изменений активности ММП-2,-7,-9 при опухолевом росте и метастазировании аденокарциномы легких Льюис (АЛЛ) у мышей.
Материал и методы. Использовали перевиваемую опухоль мышей - аденокарциному легких Льюис, которая метастазирует в легкие. Активность ММП-2,-7 в гомогенатах опухоли, легких и в сыворотке крови определяли при pH 7,5, используя флюоресцентный субстрат MCA-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2 (American Peptide Company, Inc, USA), расщепляющий связь Gly~Leu (Knight C.G., 1992). Флюоресценцию оценивали при длине волн возбуждения и эмиссии, соответственно 328 нм и 393 нм. В качестве стандарта использовали 7-метилкумарин (ICN Biomedicals Inc.). Для исключения влияния
сериновых протеаз в расщеплении используемого субстрата в отдельных пробах параллельно проводили определение активности ММП-2,-7 в присутствии специфического ингибитора сериновых протеаз - фенилметилсульфонилфто-рида (ФМСФ, Boehringer Mannhein, Germany) в концентрации 0,5 ммоль/л. Для активации ММП-2,-7 применяли специфический активатор АФМА (аминофенилмеркурий-ацетат) в конечной концентрации 1 мМ. Для определения проформ и активных форм ММП-2 и ММП-9 использовали желатиназную зимографию (Mini-PROTEAN Tetra Cell, 165-8QQQ, Bio Rad Inc, USA).
Результаты. Показано, что ингибитор ФМСФ снижал скорость гидролиза субстрата ММП, поэтому анализировали лишь данные, полученные в присутствии этого ингибитора. Активатор АПМА повышал активность ММП-2,-7 почти в 2 раза. В легких интактных мышей обнаружена наиболее высокая активность ММП-2,-7 по сравнению с селезенкой и печенью, у мышей с АЛЛ активность ММП-2,-7 также была наибольшей в легких. Наиболее
низкая активность ММП-2,-7 отмечена в ткани опухоли по сравнению со всеми исследуемыми органами. Опухоленосительство сопровождалось повышением активности ММП-2,-7 в селезенке. В ткани опухоли при сравнении с легкими (органом, из которого произошла опухоль) активность ММП-2,-7 значительно снижена (в 2,5 раза). В ткани легких мышей с АЛЛ активность ММП-2,-7 выше по сравнению с аналогичными показателями интактных животных, что, возможно, обусловлено развитием метастазов. В сыворотке крови мышей с опухолью активность ММП-2,-7 значимо ниже по сравнению с показателями интактных животных. В ткани опухоли преобладала проММП-9,
не обладающая ферментативной активностью, что, возможно, объясняет снижение общей активности ММП. Выявлено, что концентрация белка в исследуемых органах интактных животных и мышей с АЛЛ не изменялась, что указывает на изменения удельной активности ММП (в расчете на мг белка).
Выводы. Увеличение активности ММП-2,-7 характерно для метастазирования АЛЛ мышей, в то время как активность ММП-2,-7 в ткани опухоли ниже, чем в легких и других органах опухоленосителей. В ткани опухоли преобладала проММП-9, не обладающая ферментативной активностью, что, вероятно, подтверждает снижение общей активности ММП.
ИЗМЕНЕНИЯ РЕАЛИЗАЦИИ АПОПТОТИЧЕСКОЙ ПРОГРАММЫ ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ КЛЕТОК ЛИНИИ JURKAT И МОНОНУКЛЕАРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ СУЛЬФИДА ВОДОРОДА
Л.А. КЛЕПЦОВА, Е.Г СТАРИКОВА, ю.В. СТАРИКОВ, Е.В. КАЙГОРОДОВА
ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет», кафедра патофизиологии, г. Томск
Актуальность. Исследования последних лет продемонстрировали, что опухолевая трансформация, как и опухолевая прогрессия, обусловлены изменениями молекулярных механизмов, контролирующих апоптоз. В последние годы внимание исследователей приковано к изучению нового класса регуляторных молекул, к которым относится сульфид водорода. Однако информация об участии данного газотрансмиттера в механизмах дизрегуляции апоптоза опухолевых клеток малочисленна и противоречива.
Цель - определить влияние сульфида водорода (H2S) на реализацию апоптотической программы клеток линии Jurkat и мононуклеарных лейкоцитов здоровых доноров.
Материал и методы. В работе использованы клетки линии Jurkat (T-лимфобластная лейке -мия) и мононуклеарные лейкоциты (выделяли из крови у 10 здоровых доноров путем центрифугирования на слое фиколла («Pharmacia», Швеция) плотностью 1,077). Клетки инкубировали при температуре 37°С в полной питательной
среде с добавлением различных концентраций донора сульфида водорода (натрий гидросульфид гидрат (NaHS) («Sigma», USA). Количество клеток с признаками некроза оценивали методом световой микроскопии при окраске трипа-новым синим («Serva», США). Апоптотически измененные клетки регистрировали с помощью TUNEL-метода с использованием флуоресцентной микроскопии («Webstain», США).
Результаты. Для определения роли сульфида водорода в реализации апоптоза клетки линии Jurkat и мононуклеарные лейкоциты культивировали в присутствии различных концентраций NaHS (от 10 мкм до 1 мМ) в течение 15 мин. Результатом инкубации клеток с 1 мМ и 500 мкм донора H2S являлся некроз клеток. Указанные концентрации не использовались в дальнейшем для определения влияния сульфида водорода на программированную гибель клеток. Установлено, что инкубация клеток линии Jurkat в течение 15 мин с 10 мкм NaHS приводила к увеличению числа апоптотически измененных
