CC BY
29
клеток в 2,2 раза, с 50 мкм - к достоверному снижению исследуемого параметра, со 100 мкм - к увеличению апоптотической гибели в 1,5 раза по сравнению с контролем. При этом добавление в культуральную среду 100 мкм NaHS сопровождалось некротической гибелью более 50% клеток, 50 мкм - увеличением числа некротизированных клеток в 5 раз, при воздействии на клетки 10 мкм NaHS количество лимфоцитов с признаками некроза превосходило аналогичный параметр в интактной культуре в 1,7 раза. Полученные данные свидетельствуют, что проапоптотическая для клеток линии Jurkat доза донора сульфида водорода (10 мкм) не вызывала изменений программированной гибели мононуклеарных лейкоцитов, полученных у
здоровых доноров. Более того, увеличение числа некротических клеток в культуре мононуклеа-ров здоровых доноров относительно контроля наблюдалось только при воздействии 100 мкм NaHS, при этом не было изменения числа TUNEL-положительных мононуклеаров.
Выводы. Клетки Т-лимфобластной лейкемии более сенсибилизированы к действию сульфида водорода, чем мононуклеарные лейкоциты, полученные у здоровых доноров. NaHS в концентрации 10 мкм обладает проапоптоти-ческими свойствами в отношении клеток линии Jurkat и может быть использован для изучения молекулярных механизмов влияния сульфида водорода на реализацию апоптотической программы клеток.
ЭКСПРЕССИЯ ЦИРКАДИАННЫХ ГЕНОВ В ТКАНЯХ ПЕЧЕНИ И ОПУХОЛЯХ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПРИ СТАРЕНИИ ТРАНСГЕННЫХ МЫшЕЙ HER-2/NEU
С.Н. КОЛОМЕЙЧУК1, Э.В. ГУРОВ1, Т.С. ПИСКУНОВА2, М.Л. ТЫНДЫК2, В.Н. АНИСИМОВ2
Институт биологии Карельского научного центра РАН, г. Петрозаводск 1 НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий, г. Санкт-Петербург2
Актуальность. Одним из регуляторов физиологических ритмов у человека и животных является смена циркадианного цикла дня и ночи. При значительных отклонениях циркадианных ритмов, связанных с генетическим дефектом или воздействием факторов внешней среды, могут возникать серьезные нарушения различных физиологических процессов. Нарушение циркадианных ритмов может являться фактором риска в развитии различных новообразований, в том числе и рака молочной железы. Целью работы являлось выявление роли генов циркадианного ритма в развитии рака молочной железы при старении трансгеннных мышей HER-2/neu.
Материал и методы. В опытах были использованы архивные образцы залитых в парафин тканей трансгенных мышей линии HER-2/neu (возраст от 8 до 15 мес). Всего было исследовано 23 образца опухоли молочной железы и 11 образцов нормальной ткани (печень). Парафиновые срезы толщиной 5-6 мкм были подготовлены
с помощью гистологической станции Thermo Scientific (Thermo Scientific, Финляндия). Полученные срезы помещали в микропробирку и проводили выделение РНК. Уровень экспрессии генов оценивали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени. В качестве флуорофора для детекции продуктов использовали интеркалирующий краситель SYBR Green. Экспрессию генов оценивали по соотношению интенсивности сигналов, соответствующих гену-мишени и гену-рефери. Достоверность различий между контрольными и опухолевыми образцами определяли с помощью критерия Вилкоксона-Манна-Уитни.
Результаты. Было обнаружено, что относительный уровень экспрессии гена Perl достоверно снижен в опухолевой ткани молочной железы мышей в возрасте от 8 до 15 месяцев по сравнению с нормальной тканью печени животных (p<0,05). Исключением явилась точка 9 месяцев, где не было отмечено достоверных
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2Q1Q. Приложение № 1
различий. Нами была исследована экспрессия гена Per2 в нормальной ткани печени и ткани опухолей молочной железы у мышей HER-2/ neu. Уровень экспрессии гена Per2 был в ткани печени в большинстве случаев выше, чем в опухолях. Различие было достоверным у мышей в возрасте 11 месяцев (p<0.05). Белковый продукт гена Cry-1 является репрессором экспрессии генов clock и bmal1, поэтому мы сравнивали уровень его экспрессии в нормальной печени и опухолевой ткани молочной железы животных. Экспрессия гена Cry-1 у мышей в возрасте от 8,5 до 15 месяцев достоверно не отличалась в этих тканях. Однако у мышей в возрасте 8 месяцев в опухолевой ткани экспрессия данного гена была в 1,4 раза выше, чем в печени (p<0,05).
Выводы. Полученные данные свидетельствуют о снижении экспрессии генов циркадианного ритма Рег1 и Рег2 в опухоли молочной железы у трансгенных мышей HER-2/neu. Измененная экспрессия циркадианных генов, в свою очередь, может влиять на активацию сигнальных путей, контролирующих клеточный цикл и апоптоз, потенцируя онкогенез.
Работа выполнена при частичной поддержке гранта Президента РФ «Ведущие научные школы» НШ-306.2008.4, гранта Фонда содействия отечественной науке «Молодые кандидаты наук РАН» 2008-2009 и гранта РФФИ 09-04-90779 моб_ст по Программе РФФИ «Мобильность молодых ученых».
ВОЗМОЖНОСТИ ЗОНДОВОЙ ЭНДОСКОПИЧЕСКОЙ УЛЬТРАСОНОГРАФИИ В ДИАГНОСТИКЕ ОПУХОЛЕЙ ПИщЕВОДА
К.А. КОРНЕЕВ, Д.И. ЖИТОВ, В.Г. ЛАЛЕТИН, В.В. КУКАРИН
ГУЗ Иркутский областной онкологический диспансер, кафедра госпитальной хирургии
с курсом онкологии Иркутского ГМУ
Актуальность. Рак пищевода в настоящее время остается одной из актуальных проблем в торакальной онкологии, хотя за последние годы заболеваемость по России снизилась, показатель заболеваемости составляет 6,7 на 100 тысяч населения. Основными методами диагностики являются эндоскопический и рентгенологический. В последнее время стал широко применяться метод эндоскопической ультрасонографии. В Иркутском ООД данный вид исследования применяется с 2007 г. Эндосонография высоко эффективна в определении глубины инвазии опухоли в стенку полого органа и позволяет оценить стадию опухолевого процесса (Т) до лечения и на фоне проводимой терапии, диагностировать инвазивный рост прилежащих к пищеводу образований. Методика дает возможность оценить не только количество, размеры, но и характеристику л/у. Гиперплазированные и метастатические л/у имеют разную структуру (критерий N в стадировании). Эндо-УЗИ позволяет точно определить уровень резекции, так как
при стандартном эндоскопическом исследовании, подслизистая инфильтрация, особенно в начальной стадии, не определяется, а при оперативном вмешательстве хирург не всегда может пальпаторно точно установить метастатический отсев в стенку пищевода.
Цель исследования - определение возможности метода в диагностике изменений в слизистой оболочке пищевода, диагностика подслизистых образований, визуализация пораженных лимфоузлов вокруг пищевода.
Материал и методы. За период 2008-2009 гг. выполнено 138 транспищеводных исследований ультразвуковым зондом им 3R фирмы «01утр^» с частотой 20 МГц. Он применяется при проведении эзофагоскопии обычным гастроскопом, проводится через биопсийный канал аппарата. Всего проведено 132 исследования, 76 пациентов имели рак пищевода, 32 человека с подслизистыми образованиями, 30 больных обследовалось по поводу сдавления пищевода извне.
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2010. Приложение № 1
