CC BY
37
раторных технологий. ЛИС предоставляет полный комплект приложений, которые охватывают все сферы деятельности лаборатории.
Лабораторная информационная система применяемая в Центре лабораторных технологий позволяет эффективно накапливать и обрабатывать информацию, обеспечивает высокую степень автоматизации процессов управления и коммуникации. Применение данной системы позволяет повести стандартизацию документации и упрощение документооборота и архивирования, быстрый и своевременный поиск базы данных пациента, что способствует увеличению пропускной способности лаборатории.
Отдаленные точки регистрации в других медицинских организациях, по сути являющиеся одним из модулей данной системы, позволяют развить свою сеть и другим поликлиникам города, путём интегрирования с дополнительными программами информационной сети.
На основании выше изложенного можно сделать следующие выводы:
1. Применение новых инновационных технологий в лабораторном производстве имеет очевидное преимущество, особенно при проведении централизованных исследований.
2. Оптимизация расходов и рентабельность данного технологического продукта позволяет возможность внедрения ЛИС для всех лабораторных служб здравоохранения.
Литература
1. Кишкун А.А., Гузовский А.Л. // Лабораторные информационные системы и экономические апекты деятельности лаборатории.- 2007 г.- с. 256.
2. Шипова В.М., Пахомова И.Г. // Оптимизация деятельности лабораторной службы ЛПУ.- 2001 г.
3. Штерн П., Кратохвила И., Фридеску Б. // Экономика контроля качества в клинических лабораториях. Клин. Лаб. Диагностика.1997.- №7.- С.48-49.
4. Титов В.Н. Автоматизация в клинической биохимии. // Клиническая лабораторная диагностика. -1997.- №3. - С. 25-32.
5. Поташова А.М., Курылев В.А. Принципы оценки качества деятельности клинико- диагностических лабораторий в условиях рыночной экономики. // Клиническая лабораторная диагностика. -1999.- №3.
6. Назаренко Г.И., Полубенцева Е.И. (ред.) Проектирование медицинских технологических процессов. // Учеб.-метод.пособие. - М.2001г.
ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЯ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК АФФИНИТЕТНОЙ АСЦИТНОЙ ОПУХОЛИ ЯИЧНИКА КРЫС (АФОЯ) ПРИ СОЧЕТАННОМ ДЕЙСТВИИ ЦИТОСТАТИКОВ
М.Т. Абенова, Б.Б. Тайлаков. ГККП «Онкологический диспансер», г. Астана
Природа и механизмы апоптозной гибели опухолевых клеток, несмотря на накопленное значительное количество фактов, до конца не выяснены и требуют дальнейшего изучения. С этой целью нами проанализированы цитологические микропрепараты органотропного штамма аффинитетной асцитной опухоли яичника крыс -АфОЯ-16 для изучения апоптоза клеток при сочетанном действии цитостатика (циклофосфана-ЦФ) с модификатором - финоптином (ФП). АфОЯ-16 обладает изначально низкой чувствительностью к ряду цитостатиков (этопозид, платинол, метотрексат) и умеренной чувствительностью к циклофосфану. Резистентность органотропного штамма АфОЯ-16 к циклофосфану вырабатывали по схеме: внутривенной - внутрибрюшинной - внутривенной перевивки опухолевых клеток. Доза внутривенной перевивки суспензии опухолевых клеток АфОЯ-16 составила 80-100 х 103 клеток на крысу. Лечение начинали на 3 сутки после внутрибрюшинной перевивки опухоли. Сроки появления асцитной опухоли составили 7-10 суток.
Результаты опытов по действию циклофосфана на асцитный вариант АфОЯ-16 представлены в таблице 1.
Таблица 1 - Действие циклофосфана на асцитную опухоль АфОЯ
Пассаж РД,мг/кг СД,мг/кг Объем асцита,мл3 Рост торможения опухоли в % Р
контроль опыт
7 20,0 180,0 25,5±9,7 8,5±3,0 66,6
8 20,0 160,0 26,5±3,2 12,1 ±1,7 54,3 +++
9 20,0 120,0 28,9±1,3 14,2±1,7 50,7 +++
14 20,0 80,0 19,7±3,5 15,0±1,9 24,0
22 20,0 80,0 21,8±4,0 18,4±5,6 15,8
24 20,0 100,0 24,1 ±1,0 13,5±3,2 44,0 ++
25 20,0 100,0 29,5±1,1 22,7±1,4 23,0 +++
29 20,0 100,0 21,5±3,6 19,6±1,4 9,6
30 20,0 100,0 22,6±4,8 17,4±1,4 23,1
31 20,0 100,0 22,3±2,1 17,7±4,4 20,6
32 20,0 100,0 28,3±3,0 23,8±3,5 15,0
33 100,0 100,0 28,7±3,1 17,0±3,2 40,0 ++
34 100,0 100,0 26,1±2,7 22,5±2,2 13,8
35 100,0 100,0 28,3±3,0 23,9±1,5 15,5
36 100,0 100,0 26,3±2,4 17,7±3,6 32,6 +
Примечание: + -достоверность различий между группами;
+ - р < 0,05; ++ - р <0,01; +++ - р < 0,001.
В контроле максимальный объем асцитической жидкости наблюдался на 9, 25, 32, 33 и 35 пассажах. Надо отметить, что высоких колебаний в этой группе не наблюдалось ( мах.- 29,5; min - 19,7). В опыте разброс значений был от 23,9 до 8,5 и носил волнообразный характер. Причем на 7 пассаже количество асцитической жидкости в опытной группе в 3 раза меньше, чем в контроле. Затем объем жидкости постепенно увеличивается до 24 пассажа, где наблюдается спад до 13,5. На 25 пассаже наблюдали резкое повышение этого значения до 22,7. Максимальный пик выпадает на 35 пассаж - 23,9.
При анализе торможения роста опухоли до 9 пассажа сохранялась чувствительность опухолевых клеток АфОЯ-16 к цитостатику в пределах 66,6-50,7%. При постоянной перевивке асцитных клеток от леченных животных, с увеличением генерации, чувствительность к ЦФ ослабевала, изменение реакции на химиопрепарат не носила характер одного внезапного скачка. В некоторых генерациях (24, 33 пассажи) этого штамма отмечалось однозначное увеличение чувствительности к ЦФ, несмотря на интенсивное воздействие цитостатиком. Торможение роста опухоли (ТРО) повысилось до 44-40,7%. В последующих пассажах резких изменений чувствительности не наблюдалось.
Для изучения влияния модифицирующих агентов преодоления химиорезистентности было изучено влияние ФП на устойчивую сублинию АфОЯ-16. ФП является веществом антагонистом, который характеризуется низкой молекулярной массой, гидрофобностью и наличием ароматического кольца в молекуле, что усиливает проницаемость клеточной мембраны.
Результаты влияния финоптина на лечебное действие ЦФ у крыс с индуцированной устойчивостью АфОЯ/ЦФ представлены в таблице 2.
Введение ФП увеличивало лечебное действие ЦФ у крыс и исходным штаммом рака яичника. Средняя продолжительность жизни животных, пролеченных ЦФ+ФП, была несколько выше, чем в монорежиме с ЦФ. При этом УПЖ в исходном штамме животных пролеченных в монорежиме с ЦФ в дозе 100 мг/кг составило 124,8%, тогда как на фоне модификатора отмечалось возрастание этого показателя до 168,9% и 172,4%. В 3 и 4 группах применение ФП вызывало излечение в 12,5% вне зависимости от комбинации введения препарата, что не отмечалось в контроле и в монорежиме одного ЦФ.
Введение ФП в группе животных с устойчивой сублинией АфОЯ/ЦФ также достоверно увеличивал среднюю продолжительность жизни, чем в монорежиме с ЦФ (35,5 дней; 34,2 дня и 26,3 дня соответственно). Кроме того, в 7 и 8 группах наблюдали 25,0% излечения. Также увеличивалось значение УПЖ, леченных в комбинации ФП+ЦФ и ЦФ+ФП (174,8% и 168,4% соответственно).
При этом средняя продолжительность жизни и УПЖ выше в группе животных с АфОЯ-16, где модификатор вводился за несколько минут до цитостатика. Аналогичный эффект отмечался и при лечении исходного штамма.
Таблица 2 - Результаты влияния финоптина на лечебное действие ЦФ у крыс с индуцированной устойчивостью АфОЯ/ЦФ
№ группа Воздействие Доза, мг/кг СПЖ , дни М±т УПЖ, в % к контролю % Выжив. живот.
1 АфОЯ/исх К - 14,5±3,7 - 0
2 АфОЯ/исх ЦФ 100,0 18,1 ±3,0 124,8 0
3 АфОЯ/исх ФП+ЦФ 10,0+100,0 25,0±2,7* 172,4 12,5
4 АфОЯ/исх ЦФ+ФП 100,0+10,0 24,5±2,7* 168,9 12,5
5 АфОЯ/ЦФ К - 20,3±1,4 - 0
6 АфОЯ/ЦФ ЦФ 100,0 26,3±3,0 129,5 7,7
7 АфОЯ/ЦФ ФП+ЦФ 10,0+100,0 35,5±0,5 ***/++ 174,8 25,0
8 АфОЯ/ЦФ ЦФ+ФП 100,0+10,0 34,2±5,5* 168,4 25,0
Примечание: * - сравнение с контрольной группой; + - сравнение с предыдущей группой.* - р<0,05; ***- р< 0,001; ++ - р< 0,01.
Имелась определенная цитоморфологическая последовательность в динамике спонтанных изменений структуры клеточных субпопуляций АфОЯ-16 после внутрибрюшинной прививки животным.
Поскольку мезотелиальные клетки составляют основную часть клеточной популяции асци-тической жидкости, то индукция их гибели, наряду с опухолевыми клетками, в результате противоопухолевой терапии должна играть важную роль в благоприятном исходе заболевания. В связи с этим, нами изучалась структура не только опухолевых, но и мезотелиальных клеток, касающаяся как их прогрессирования, так и гибели в процессе серийного (внутрибрюшинного) пассирования опухоли на животных, леченных циклофосфаном.
На 5-е сутки после прививки опухоли в цитограммах встречались интактные опухолевые клетки округлой формы с крупным гиперхромным ядром и цитоплазмой в виде узкого ободка, а также перстневидные клетки. Признаков повреждения в клетках мы не наблюдали. Лишь в цитоплазме некоторых клеток выявлены в небольшом количестве вакуоли и набухания клеток не наблюдалось. Отмечено небольшое количество мезотелиальных клеток.
На 7- е сутки после прививки опухоли в цитограммах наблюдали небольшое увеличение размеров опухолевых клеток. Содержание мезотелиальных клеток в эти сроки значительно превышало количество опухолевых клеток. Обнаруживались начальные стадии формирования блеббингов цито-плазматической мембраны, как опухолевых клеток, так и клеток мезотелия.
На 12-е и 14-е сутки после прививки опухоли наблюдалась выраженная вакуолизация цитоплазмы. В мезотелиальных клетках зачастую выявлялись начальные этапы морфологического проявления апоптоза: маргинация хроматина - агрегация ее в плотные гранулярные массы под ядерной оболочкой и кариорексис - распад ядра на отдельные фрагменты (рисунок 1). Реже наблюдалось образование протуберанцев (выпячиваний) цитоплазматической мембраны, которые затем отделялись от клеток с образованием везикул, покрытых плазматической мембраной (апоптозные тельца-АТ) с конденсированным ядерным материалом.
Кроме того, выявлялся фагоцитоз АТ макрофагами и опухолевыми клетками. В то же время в опухолевых клетках каких-либо апоптотических изменений обнаружить не удалось.
Циклофосфан вводили внутрибрюшинно в терапевтической дозе, которая составляла 100 мг/ кг (20 мг/кг х 5), начиная с 3-х суток после прививки опухоли.
В результате цитологического исследования клеток, после 16 пассажа опухоли под воздействием цитостатика, обнаружено увеличение размеров опухолевых (в том числе перстневидных форм) и единичных мезотелиальных клеток.
Рисунок 1. Кариорексис. Окраска по-Романовскому-Гимза. Ув.400.
Повышалась чувствительность клеточной мембраны опухолевых клеток к воздействию цикло-фосфана, что приводило к ее повреждению и развитию отека, сопровождаемый набуханием клетки или появлением в цитоплазме вакуолей. Вакуолизация наблюдалась и в мезотелии. Встречались дву-ядерные мезотелиальные клетки. Наблюдалась конденсация хроматина опухолевых и мезотелиаль-ных клеток в плотные массы. Однако, другие апоптотические признаки, такие как кариорексис и АТ наблюдались только в мезотелии. Часто выделялись отдельные субпопуляции опухолевых клеток с крупным ядром и узкой цитоплазмой, свидетельствующие о нарушении ядерно-цитоплазматического отношения. Встречались «голые» ядра опухолевых клеток.
После 24 пассажа наблюдалось усиление цитоплазматических повреждений и появление изменений в ядре. На большом количестве мезотелиальных клеток обнаружены блеббинги на всех стадиях развития. Иногда блеббиноги достигали очень крупных размеров.
В опухолевых клетках также наблюдали развитие сильного отека с образованием цитоплазматических выростов округлой формы с вакуолями. При отеке цитоплазмы, отмечен набухание ядра: ядро становилось светлым гомогенным, очертания хроматина стирались (хроматолиз), появлялись ядерные протрузии (рисунок 2).
На 26 пассаже исследование проводили в динамике роста асцита (на 5, 7, 12, 14-е сутки после прививки опухоли), по мере увеличения дозы препарата (20 мг/кг, 40 мг/кг, 80мг/кг, 100 мг/кг). Апоптоз в мезотелиальных клетках, включающий все стадии, выявлялся уже в ранние сроки после прививки опухоли (на 5-е сутки), при дозе циклофосфана 20 мг/кг.
Рисунок 2 - Отек ядра с образованием ядерных протрузий. Цитоплазматические выросты округлой формы с вакуолями. Окраска по-Романовскому-Гимза. Ув.400.
*
В опухолевых клетках наблюдался только лизис цитоплазмы. В то же время в цитограммах обнаружены изменения структуры ядер, что проявлялось в формировании гипертрофированных нуклеол - явного признака повышения степени злокачественности клеток. В некоторых клетках выявлена зернистая структура хроматина, что является следствием цитостатического действия химиопрепарата. Усиление гранулообразования хроматина, переход от розеткообразного расположения гранул в диффузное. Следствием прохождения адаптационных перестроек является уменьшение количества гранул. Ранними признаками изменения ядерного метаболизма являются: перемещение ядрышек к периферии ядра, обратимое умеренное набухание ядер, диссоциация (разрыхление) ядрышек как следствие торможения и прекращения ядрышковой транскрипции, что типично для энергетического дефицита клетки в условиях воздействия повреждающих факторов.
Блеббинги мезотелиальных клеток находились только на ранних стадиях своего формирования. В дальнейшей динамике посттрансплантационного периода по мере увеличения суммарной дозы цитостатика (80 мг/кг и 100 мг/кг) обнаружены другие типы повреждения ядер: вакуолизация центральной части ядра.
Эти процессы, как известно, обычно предшествуют кариолизису. Наблюдали коагуляцию хроматина с превращением ее в резко базафильную гомогенную массу - кариопикноз, отчетливое сокращение всего ядерного вещества с последующей ее фрагментацией- кариорексис. Иногда в одном ядре можно было наблюдать сразу два типа повреждения- лизис и пикноз. Зачастую в цитограммах наблюдали деформацию поврежденного ядра и выталкивание его из клетки (рисунок 3). Отмечено появление «терапевтических гигантов» и образование в них включений различного типа, в том числе и гранул.
Рисунок 3 - Выталкивание ядра из клетки. Окраска по-Романовскому-Гимза. Ув.400.
I • # %
На 33 пассаже животных разделили на 5 групп: 1 группа- продолжение лечения по обычной схеме (20 мг/кг х 5); 2 группа - однократное введение циклофосфана в дозе 100 мг/кг на 3 сутки после прививки опухоли; 3 группа - введение циклофосфана в дозе 100 мг/кг и через 15 минут внутрибрю-шинное введение финоптина в дозе 10 мг/кг на 3 сутки после прививки опухоли; 4 группа - введение финоптина в дозе 10 мг/кг и через 15 минут циклофосфана на 3 сутки после прививки опухоли в дозе 100 мг/кг; 5 группа- без лечения.
Таким образом, результаты проведенных экспериментальных исследований влияния цитоста-тика ЦФ в сочетании с модификатором ФП на исходный и индуцированно-устойчивый штамм аффи-нитетной асцитной опухоли яичника крыс -АфОЯ-16 показывают, что ФП усиливает лечебный эффект ЦФ на 12,5% и 25,0% в исходном и устойчивом штамме соответственно (р<0,05). В группе животных, где ФП вводили за 15 минут до введения цитостатика средняя продолжительность жизни животных увеличивалась до 25,0 ±2,7 дней (р<0,05) в и 35,5 ± 0,5 дней соответсвенно (р<0,001).
В зависимости от интенсивности, длительности воздействия, сохранности репарационных и энергетических резервов клеток имелась определенная морфологическая последовательность в динамике изменений клеточных субпопуляций АфОЯ-16. После внутрибрюшинной прививки у животных, которым лечение не проводилось, биоматериал на цитологическую оценку апоптоза брали на 5, 7 , 12 и 14 сутки. В цитограммах наблюдались явления спонтанной дистрофии в опухолевых клетках и начальные признаки морфологического проявления апоптоза в мезотелиальных клетках. В опухолевых клетках каких-либо апоптотических изменений обнаружить не удалось.
В цитограммах, полученных после воздействия цитостатика, по мере увеличения дозы (20 мг/
кг, 40 мг/кг, 80 мг/кг, 100 мг/кг) уже на 5 сутки в мезотелии наблюдали все стадии апоптоза (блеббенги, маргинация хроматина, кариорексис, АТ, фагоцитоз). В опухолевых клетках наблюдали лизис цитоплазмы, зернистую дистрофию в ядрах, появление гипертрофированных нуклеол. Продолжающая экспозиция повреждающих факторов приводит к более глубоким необратимым процессам. При некрозе наблюдали разрушение цитоплазмы, а затем ядерной мембраны на фоне выраженного воспалительного компонента. При апоптозе наблюдается морфологически иной необратимый комплекс изменений: деградация хроматина, нарушение цитоплазматической и ядерной мембран, образование АТ и фагоцитоз погибших клеток.
Литература
1. Залесский В.Н., Фильченков А.А. Апоптоз клеток опухоли желудочно-кишечного тракта при фотодинамической терапии// Вопросы онкологии, 2004,т.50, № 1.- с 9-19.
2. Фильченков А.А. Стойка Р.С. Апоптоз и рак.-Киев:Морион,1999.- 184 с.
3. Bowen J.,Bowen S., Jones A. Mitosis and Apoptosis. Matters of Life and Death.- London:Chapman and Hall, 1998.- 182p.
4. Лушников Е.Ф., Загребин В.М. Апоптоз клеток: морфология, биологическая роль, механизмы развития// Арх.патол.-1987.-Вып.2.- С.84-89.
5. Ефимов М.Л., Сейтказина Г.Д., Васильева Г.С. О некоторых путях повышения эффективности химио-лучевой терапии опухолей// Сб.:Онкология и радиология Казахстана- 30 лет (1960-1990).-А-Ата.-1990.-С.100-106.
6. Балмуханов Т.С. Действие ультрафиолетового излучения и ионизирующей радиации на биологические макромолекулы и организмы: автореферат ... докт.биол.наук:.03.00.01.- Астана: КазГМА,2008.- 36с.
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ХИМИОЛУЧЕВОЙ ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ МЕЛКОКЛЕТОЧНЫМ РАКОМ ЛЕГКИХ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ПРОВЕДЕННОГО ЛЕЧЕНИЯ
Б.Т. Жусупова ГККП «Онкологический диспансер» г.Астана
Введение. В настоящее время мелкоклеточный рак легкого (МРЛ) среди всех случаев рака легкого составляет около 10-20% у мужчин и 10-30% у женщин [2]. Основными характеристиками МРЛ является четкая тенденция к ранней диссеминации и достаточно высокая чувствительность к лучевой и химиотерапии. Наряду с классификацией МРЛ по системе TNM, в клинической практике широко применяется классификация VALG (Veterans Administration Lung Group) [7]. В соответствии с последней, все больные с опухолью и региональными узлами, ограниченными одним гемитораксом, относятся к ограниченной стадии мелкоклеточного рака легкого. При этом только 40% больных имеют распространение опухоли в указанных пределах, что связано с высокой агрессивностью опухоли [1]. Проведение химиотерапии значительно улучшает выживаемость больных, а сочетание химио- и лучевой терапии в лечении пациентов с ограниченной стадией МРЛ по данным двух мета-анализов, позволяет добиться абсолютного улучшения 2- и 3-летней выживаемости - на 5,4% [5,6]. По сравнению с пациентами, которые не получали лечения, внедрение современных схем химиотерапии в лечебные программы привело к увеличению медианы выживаемости в несколько раз. Однако до настоящего времени не существует единого мнения в вопросах приоритетности раннего и позднего начала хими-олучевого лечения [3,4], нет четких рекомендаций по дозам и графикам введения химиопрепаратов, а так же по дозам лучевой терапии.
Цели и задачи исследования. Изучить эффективность химиолучевой терапии больных мелкоклеточным раком легких в зависимости от последовательности проведенного лечения.
Материал и методы. Для изучения эффективности разной последовательности проведения одновременного химиолучевого лечения, проведено проспективное, сравнительное, рандомизированное исследование. Критерии для включения больных в исследование были следующие: 1) возраст от 18 до 70 лет; 2) активность по шкале ECOG < 2; 3) наличие морфологически подтвержденного диагноза МРЛ; 4) больные с ограниченной стадией (согласно VALG); 5) пациенты предварительно не должны были получать какого-либо противоопухолевого лечения по поводу МРЛ; 6) отсутствие декомпенсированной сопутствующей патологии (нестабильная стенокардия, нарушение ритма сердечной деятельности, и т.д.).
На следующем этапе нашего исследования всех больных распределили в две различные группы в зависимости от кратности и дозы введения цисплатина. В I группе на первом этапе выполнялась одновременная химиолучевая терапия. В первый день лечения больным начинали проведение химиотерапии по схеме: цисплатин 80 мг/м2 в 1 день, с предварительным введением противорвотных средств
