CC BY
9
сивность проявлений судорожного синдрома как в условиях развившегося киндлинга, так и при развивающимся киндлинге, а также увеличивает латентный период проявления первых судорог (в сравнении с референс-препаратами - карбамазепином, вальпроевой кислотой и левитирацетамом), выраженность которых зависит от дозы.
Summary
INFLUENCE OF NEW XYLARATE GERMANIUM COMPLEXE (IV) WITH POTASSIUM ON CHRONIC SEIZURE INTENSITY IN KINDLING MODEL IN MICE Varbanets O.I.
Key words: xygerm-3, seizures, kindling.
The purpose of our work was to estimate anticonvulsive activity of new xylarate-3 germanium complex under different kindling models of chronic seizure activity (electrostimulating and drug-induced kindling). It has been found out the b/'s(^-xylarato) dihydrogermanate (IV) with potassium (xygerm-3) reliably diminishes the frequency of occurrence and intensity of seizure syndrome under these conditions and increases the duration of the latent period of the first seizures (by comparison to drug-references as carbamazepin, valproic acid and levetyracetam), which intensity depends on a dose.
УДК: 616.22-006.6+575 Гасюк Ю.А.
ЦИТОГЕНЕТИКА ПЛОСКОКЛ1ТИННИХ КАРЦИНОМ ГОРТАН1
ВДНЗУ «Украшська медична стоматолопчна акаде1^я», м. Полтава
За результатами цитогенетичних досл{джень визначено, що в комплексах плоскоклтинног ка-рциноми гортан гз зроговтням часто спостер{гаеться патолог{я профази мтозу у вигляд{ кон'югацп хромосом, яка на стадп метафази та анафази дае початок багатополюсному мтозу. В подальшому в результат1 патологи телофази утворюються пол{плогдш багатоядерн клти-ни. В комплексах плоскоклтинног карциноми гортан без зроговтня внасл{док фрагментацп ге-терохроматину в профазу, конденсацп гетерохроматину в метафазу та формуванню мтро-ядер в анафазу в{дбуваеться поетапна трансформац{я кл{тин в пол{плогдн1 або анеуплогдт. Кр{м того, в результат1 тших цитогенетичних змт, а саме кон'югацп хромосом в профазу, комкуватог метафази та появи в цитоплазм{ апоптозних ядерних тшець, в окремих дшянках пухлинних комплекЫв виникають явища паракератозу. В комплексах базальноклтинног карциноми гортан часто визначаеться кон'югац{я хромосом в профазу гз наступним нер{вном1рним розташуванням хромосом на метафазних пластинках. При подальшому нер{вном{рному розхо-дженнг хромосом в анафазу виникають трьохполюсн та багатополюсн м1този, в результат1 яких утворюються анеуплогдн1 клтини, що м1стять мтроядра.
Ключов1 слова: плоскоктлтинна карцинома гортаы, цитогенетика.
Публ1кац1я е фрагментом планово!' науково-дослщно! роботи ВДНЗ УкраТни «УкраТнська медична стоматолопчна академ1я» «Розробка нових медичних технологш в д1агностиц1 та лкуванж патологи верхых дихальних шлях1в», номер держреестрацп: 0111 и006761.
Вступ
Злоякюы новоутворення виникають в результат необмеженоТ пролiферацil кл^инного клону, яка забезпечуеться певними особливостями не-опластичних кттин, а саме самодостатнютю в пролiферативних сигналах, зниженням чутливо-ст до рютчнпбуючих сигналiв та вщсутнютю ре-плкативного старшня (iмморталiзацN) [6; 7].
Висока пролiферативна активнють штин при неопластичних процесах супроводжуеться час-тими патолопчними мтозами, як складають 3046% та виникають внаслщок порушення функцп пухлинних супресорiв та протоонкогешв, що ре-гулюють кл^инний цикл. Патолопя мтотичного подту обумовлюе генетичну нестабтьнють неопластичних кл^ин, яка в свою чергу виникае внаслщок: зниження точност реплкаци ДНК та сегрегацп хромосом пщ час мтозу, порушень в системах репарацп пошкоджень ДНК, послаб-лення функцш чекпойн^в кттинного циклу, що активуеться у вщповщь на пошкодження геному,
а також послабления шдукци апоптозу. Таким чином, генетична нестабтьнють дозволяе закрн пити в наступних рядах кл^инних генерацш рiз-номаштш змiни геному неопластичних кл^ин [6; 9; 10; 13; 15; 16].
Отже, в результат генетично! мiнливостi та селекци, яка виникае в ходi пухлинно! прогресс, в популяци клiтинного клону постшно виникають та вiдбираються все бтьш автономнi та агреси-вн субклони [6; 7; 14; 16; 18].
В залежност вiд наслщш всi форми патоло-гiчних мiтозiв умовно розподiляють на три групи: полтло'щы, анеуплоТднi та мiтози, як виклика-ють апоптоз [3; 5; 8].
Площнють хромосомного набору в ракових кл^инах являе собою надважливу прогностичну ознаку, яка корелюе iз агресивнiстю пухлинного процесу, чутливiсть карциноми до опромшення та хiмiотерапiТ, частотою виникненням рециди-вiв, а також виживанням хворих [1; 4; 11; 12; 17].
В зв'язку з цим, важливе прогностичне зна-
В1СНПК ВДНЗУ «Украгнсъка медична сгпомагпологгчна академ1я»
чення патологи м^отичного подту ракових кт-тин спонукае до подальших досniджень цитоге-нетики пnоскокniтинних карцином горташ.
Мета дослiдження
Мета дослщження - визначення цитогенети-чних змш, якi виникають при пnоскокniтинних карциномах горташ.
Об'ект та методи дослвдження
Досniдження проводились на пiдставi ретроспективного анаniзу кniнiко-анатомiчного матерн алу, який отримали пiд час дiагностичних бю-псiй, взятих у 124 хворих на I - II стадiях раку горташ складковоТ лока™заци. За результатами дослщження бюпта^в iдентифiкованi наступнi п-столопчш рiзновиди пnоскокniтинноТ карциноми: пnоскокniтинний рак i3 зроговiнням - 76 випадмв (61,3%), пnоскокniтинний рак без зроговшня - 44 випадки (35,5%) та базальнок^тинна карцинома - 4 випадки (3,2%).
1з отриманого матерiаnу за загальноприйня-тою методикою виготовляли пстолопчш препа-рати, якi фарбували гематоксилш-еозином. Ци-тогенетичнi досniдження препаратiв проводились на iмерсiйному збinьшеннi цифрового св^-лового мiкроскопу фiрми «Olympus BX-41» iз ви-користанням об'ективу х100, а Тх фотозйомка -на цифрову фотокамеру фiрми «Olympus C 4040». В процес дослщжень спочатку проводив-ся пщрахунок проniферативноТ активностi ракових кттин в промinях (кinькiсть мiтозiв на 1000 штерфазних кniтин), згiдно юнуючих рекоменда-цiй [2]. В подальшому вiд загальноТ кinькостi мн тозiв визначали вiдсоток патоnогiчних мiтозiв.
Згщно рекомендацiям [3; 5; 8], в залежносл вiд насniдкiв, всi форми патолопчних мiтозiв умовно розподinяnись на три групи: полтлоТдш, анеупnоТднi та мтози, якi викликають апоптоз. Так фрагмента^я (пуnьверизацiя) хромосом, моноцентричний мтоз та нерiвномiрне розхо-дження хромосом в анафазу («мости») викликае полтлоТдш кл^ин. Анеупло^я, як насniдок патологи мiтозiв, виникае при наступних формах: асиметричний мтоз, трьох- або багатополюсний мiтоз, а також при вщставанш хромосом або Тх фрагмент в метафазу, анафазу або телофазу. Апоптоз кл^ин викликають патоnогiчнi мтози коnхiцинового типу, а саме К-мтоз iз злипанням хромосом, К-мiтоз iз розсiюванням хромосом, а також пола метафаза.
Результати дослщження та обговорення
За результатами проведених дослщжень встановлено, що поряд iз зонами початковоТ або ранньоТ швази карциноми визначаються дinянки диспnазiТ багатошарового плоского епiтеniю, а також дтянки «раку на мiсцi», якi характеризуются нечiтким розмежуванням.
Власнi цитогенетичш дослiдження свiдчать, що в дтянках дисплази багатошарового плоского ештелш третього ступеня спостерiгаeться ви-сокий рiвень мтотичноТ активностi епiтелiоцитiв. При цьому, поряд iз типовими мтозами, визначаються рiзнi форми патолопчних мiтозiв. Останнi представленi переважно багатополюс-ними мiтозами, а також конденса^ею гетеро-хроматину в метафазу. Очевидно, що внаслщок таких форм патологи мiтозiв в дiлянках дисплази ештелш виникае виражений клiтинний та ядер-ний полiморфiзм.
В iнвазивних комплексах плоскокл^инноТ карциноми iз зроговшням спостерiгаеться значно бiльша кiлькiсть патолопчних мiтозiв. При бага-тополюсних мтозах на стадiТ метафази в цито-плазмi клiтин визначаеться базофiльний гетеро-хроматин, представлений у виглядi дектькох глибок. В результатi такоТ форми патологи мто-зiв утворюеться три, або нав^ь бiльше клiтини, що й обумовлюе чисельне збiльшення штинноТ популяцiТ в комплексах карциноми.
В шших ракових клiтинах визначаеться пато-логiя профази, метафази та телофази мтотич-ного подiлу. Внаслiдок патологи телофази мто-тичного подiлу в единш цитоплазмi клiтини визначаеться одразу дектька ядер, якi не розшш-лися пiд час ТТ подiлу. Очевидно, що патологiя профази у виглядi кон'югацiТ хромосом на стади метафази та анафази дае початок багатополюс-ному мiтозу. В подальшому в результат патологи телофази утворюеться багатоядерна клiтина (рис. 1).
В пухлинних комплексах плоскокл^инноТ' карциноми без зроговiння також спостер^аеться велика кiлькiсть патологiчних мiтозiв, якi умовно моа^фоздтити надв1 групи.
V вЯЙЖЯУй*
111
т ж »
Рис. 1. Пaтологiчнi мiтози в комплекс плоскоклтинноТкарциноми горmанi iз зроговнням: 1. - багатополюсний мь тоз; 2. - профаза iз кон'юга^ею хромосом; 3. - iнтерфазна клтина. Заб. гематоксилн-еозином. 1мерсйне зб. 100*10.
Рис. 2. Патолог1чн1 м1този в комплекс! плоскокл!тинноГка-рциноми гортан1 без зрогов1ння: 1. - нтерфазн! кл1тини; 2. - фрагментац1я гетерохроматину в профазу; 3. - конден-сац!я гетерохроматину в метафазу; 4. - формування мк-роядер. Заб. гематоксилн-еозином. 1мерсйне зб. 100*10.
Рис. 3. Патолог1чн1 м1този в комплекс! базальнокл!тинноГ
карциноми гортан!: 1. - кон'югац!я хромосом в профазу; 2. - багатополюсний м!тоз в анафазу; 3. - пол!морфноядерн! !нтерфазн! клти-
ни. Заб. гематоксил!н-еозином. 1мерайне зб. 100*10.
До першоТ групи можна вщнести наступн фо-рми патологи мтотичного подту: фрагментацш гетерохроматину в профазу, яка проявляеться riперхромiею ядер, а також конденсацш гетерохроматину в метафазу iз формуванням в цито-плазмi кттин окремих мiкроядер. Так форми па-толопчних мiтозiв визначаються на фон штер-фазних полiморфноядерних кл^ин, як мають крупнобрильчату або середньобрильчату сту-пiнь конденсацiТ гетерохроматину (рис. 2).
Разом з тим, в ракових кл^инах спостер^а-ються також iншi цитогенетичнi змiни, а саме: кон'юга^я хромосом в профазу, комкувата ме-тафаза та поява апоптозних ядерних ттець в цитоплазмi. Так форми патолопчних мiтозiв пе-реважно визначаються на фон iнтерфазних клн тин, якi мають середньобрильчату або дрiбно-брильчату ступiнь конденсацiТ гетерохроматину.
Таким чином, на пiдставi власних цитогене-тичних дослiджень можна припустити, що в шва-зивних комплексах плоскокл^инноТ' карциноми без зроговiння вщбуваеться два взаемно проти-лежних процеси. Перший процес характеризуемся поступовою трансформацiею ракових клн тин, як мають крупнобрильчату ступiнь конден-сацп гетерохроматину, в полiплоТднi або анаеп-лоТднi. Вiн вiдбуваеться поетапно внаслщок фрагментацiТ гетерохроматину в профазу, кон-денсацiТ гетерохроматину в метафазу та фор-муванню мiкроядер в анафазу. Очевидно, що
саме таким чином в комплексах плоскокл^инноТ карциноми без зроговшня виникае виражений кл^инний та ядерний полiморфiзм. Разом з тим, зовам шший процес вiдбувaеться в штерфазних ракових клiтинaх, якi мають дрiбнобрильчaту ступiнь конденсацп гетерохроматину. Патолопя мiтотичного подiлу остaннiх проявляеться кон'юга^ею хромосом в профазу, комкуватою метафазою та появою в цитоплaзмi апоптозних ядерних ттець. Очевидно, що в результат таких цитогенетичних змш в окремих дтянках швазив-них комплешв плоскоклiтинноТ карциноми без зроговiння виникають явища паракератозу.
В швазивних комплексах базальнокл^инноТ карциноми спостерiгaеться особливо велика к-лькiсть пaтологiчних мiтозiв. При цьому досить часто визначаеться патолопя мтотичного подту ракових кл^ин у виглядi кон'югaцiТ хромосом в профазу. Внаслщок цього на метафазних пластинках хромосоми розташовуються нерiвномiр-но: на одному iз полюсiв вони бтьш кон'юговaнi, а на шшому - бiльш рихлi. В подальшому нерiв-номiрне розходження хромосом в анафазу обу-мовлюе виникнення трьохполюсних та багато-полюсних мiтозiв. В результат анеуплоТди фор-муються мiкроядрa iз неповним набором хромосом. Очевидно, що саме так цитогенетичн змши викликають виражений ядерний та кл^инний полiморфiзм в комплексах базальнокл^инноТ карциноми (рис. 3).
Висновки
1. В комплексах плоскокл^инноТ карциноми горташ iз зроговiнням досить часто спостер^а-еться пaтологiя профази мiтозу у виглядi кон'югaцiТ хромосом, яка на стади метафази та анафази дае початок багатополюсному мтозу. В подальшому в результат пaтологiТ телофази утворюються полтлоТды бaгaтоядернi клiтини.
2. В комплексах плоскокл^инноТ карциноми гортaнi без зроговшня внаслщок фрагментацп гетерохроматину в профазу, конденсацп гетерохроматину в метафазу та формуванню мiкро-ядер в анафазу вщбуваеться поетапна транс-форма^я клiтин в полiплоТднi або анеуплоТднк Разом з тим, в результат iнших цитогенетичних змiн, а саме кон'югаци хромосом в профазу, ко-мкуватоТ метафази та появи в цитоплaзмi апоптозних ядерних ттець, в окремих дтянках пух-линних комплешв виникають явища паракера-тозу.
3. В комплексах базальнокттинноТ карциноми горташ спостер^аеться особливо велика к-льксть пaтологiчних мiтозiв, серед яких досить часто визначаеться кон'юга^я хромосом в профазу iз наступним нерiвномiрним розташуван-ням хромосом на метафазних пластинках. При подальшому нерiвномiрному розходженнi хромосом в анафазу виникають трьохполюсн та ба-гатополюсн мiтози, в результaтi яких утворюються анеуплощш клiтини, що мютять мiкрояд-ра.
В1СНПК ВДНЗУ «Украгнсъка медична стоматологгчна академ1я»
Перспективи подальших дослщжень. Дослн 9. Ког,ан Е„ А. Патология митоза и ап°п1оза при о,пУхолев™р°с-
^ м . ^ м те / Е. А. Коган, С. В. Демура, М. А. Пальцев // Врач - 2001. -
дження цитогенетичних змш дозволить оптимн № 9. - с. 16-19.
зувати дiагн0стику та прогнозування плоскоклн 10. Копнин Б. п. Мишени действия онкогенов и опухолевых суп-
-tmliljmv i/onnuunii • рессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцероге-
тинних карцином г0ртанi. неза / Б. П. Копнин // Биохимия. - 2000. - T. 65. - C.5-33.
11. Краевский Н.А. Исследование патологии митоза в клинической онкоморфологии / Н. А. Краевский, И. А. Казанцева, И. Г.
Л^ература
1. Автандилов Г. Г. Плоидометрия в повышении качества пато- С^ыш^км // Архив гататгии. - 1984. - № 1. - С. 16-21. гистологической диагностики / Г. Г. Автандилов, К. Б. Саниев // 12. Николаева Т. Г. Метод проточной ДНК-цитометрии в прогно-Архив патологии. - 2002. - №3. - С.31-35. зировании клинического течения рака слизистой оболочки по-
2. Алов И. А. Определение митотического режима ткани в пато- лости рта и гортани / Т. Г. Николаева, А. А. АхУндов, С. О. П°-гистологической диагностике предраковых процессов и рака двязников, Я. В. Добрынин // Современная онкология. - 2°°2. (методические указания ) / Алов И. А., Аспиз М. Е., Казанцева - Т. 4, № 3. - С. 28-36.
И. А. - М. : Медицина, 1973. - 37 с. 13. Evan G. I. Proliferation, cell cycle and apoptosis in cancer / G. I.
3. Алов И. А. Цитофизиология и патология митоза / Алов И. А. - Evan K. N. V°usden // |\Ыиге. - 2001. - V. 411. - р. 342-348. М. : Медицина, 1972. - 263 с. 14. Foulds L. Neoplastic development / Foulds L. - London-N.Y. :
4. Ахундов А. А. Клиническое значение плоидности ДНК при с^гсЫП Uvrng^o^ 1969. - 401 p.
плоскоклеточных раках слизистой оболочки полости рта и го- 15. Gleich L. L. Molecular genetics of head and neck cancer / L. L.
ртани : автореф. дис. на здобуття наук. ступеня докт. мед. на- Gleich, F. N. Salamone // Cancer Control. - 2002. - V. 9, № 5. -
ук : спец. 14.00.15 «Патологическая анатомия» / Ахундов А. А. P. 369-378.
- М., 2001. - 24 с. 16. Ponder B. A. Cancer genetics / B. A. Ponder // Nature. - 2001. -
5. Ганина К. П. Цитогенетическая диагностика в онкоморфологии V. 411. - P. 336-341.
/ Ганина К. П. - К. : Наукова думка, 1980. - 175 с. 17. Valle-Zapico A. D. Prognostic Value of Histopathologic Parame-
6. Заридзе Д. Г. Канцерогенез / Заридзе Д. Г. - М. : Медицина, ters and DNA Flow Cytometry in Squamous Cell Carcinoma of the 2004. - 576 с. Pyriform Sinus / A. D. Valle-Zapico, F. F. Fernandez, A. R.
7. Имянитов Е. Н. Современные представления о злокачествен- Suarez. [et al.] // Laryngoscope. - 1998. - V. 108. - P. 269 - 272. ной трансформации / Е. Н. Имянитов, К. П. Хансон // Практи- 18. Barnes Eds. L. World Health Organization of Tumor's Pathology ческая онкология. - 2006. - Т. 6, № 1. - С.7-12. and Genetics of Head and Neck Tumours / Eds. L. Barnes, J.
8. Казанцева И. А. Патология митоза в опухолях человека / Ка- Eveson, P. Richard, D. Sidransky. - Lyon : IARC Press, 2005. -занцева И. А. - М. : Медицина, 1981. - 260 с. 430 p.
Реферат
ЦИТОГЕНЕТИКА ПЛОСКОКЛЕТОЧНЫХ КАРЦИНОМ ГОРТАНИ Гасюк Ю.А.
Ключевые слова: плоскоклеточная карцинома гортани, цитогенетика.
В результате цитогенетических исследований установлено, что в комплексах плоскоклеточной карциномы гортани с ороговением часто наблюдается патология профазы митоза в виде конъюгации хромосом, которая на стадии метафазы и анафазы дает начало многополюсному митозу. В дальнейшем в результате патологии телофазы образуются полиплоидные многоядерные клетки. В комплексах плоскоклеточной карциномы гортани без ороговения вследствие фрагментации гетерохроматина в профазу, конденсации гетерохроматина в метафазу и формирования микроядер в анафазу происходит поэтапная трансформация клеток в полиплоидные или анеуплоидные. Кроме того, в результате других цитогенетических изменений, а именно конъюгации хромосом в профазу, комковатой метафазы и появления в цитоплазме апоптозных ядерных телец, в отдельных участках опухолевых комплексов возникают явления паракератоза. В комплексах базальноклеточной карциномы гортани часто определяется конъюгация хромосом в профазу с последующим неравномерным расположением хромосом на метафазных пластинках. При дальнейшем неравномерном расхождении хромосом в анафазу возникают трех полюсные и многополюсные митозы, в результате которых образуются анеуплоидные клетки, содержащие микроядра.
Summary
CYTOGENETIC OF LARYNGEAL SQUAMOUS CELL CARCINOMAS Gasyuk Yu.A.
Keywords: laryngeal squamous cell carcinoma, cytogenetic.
Cytogenetic researches have demonstrated in the complexes of laryngeal squamous cell carcinoma with cornification the pathology of mitosis prophase in the form of chromosomes conjugation is often observed, which on the stage of metaphase and anaphase gives rise to multi-polar mitosis. Subsequently due to the pathology of telophase the polyploid multi-nuclear cells are formed. In the complexes of laryngeal squamous cell carcinoma without cornification due to the fragmentation of heterochromatin in prophase, condensation of heterochromatin in metaphase and the formation of micronuclei in anaphase the step-by-step transformation of cells into polyploid or aneuploid is observed. Moreover, as a result of other cytogenetic changes, such as chromosome conjugation in prophase, clot metaphase and appearance of apoptotic nuclear bodies in the cytoplasm in some areas of tumor complex the phenomenon of parakeratosis may be seen. In the complexes of laringeal basal-cell carcinoma the chromosomes conjugation in prophase is commonly observed with following irregular arrangement of chromosomes in the metaphase plates. Under further irregular separation of the chromosomes in anaphase the three-polar and multi-polar mitosis appear and as their result the aneuploid cells containing micronuclei are formed.
