CC BY
68
for amplification of three non-coding regions of chloroplast DNA. // Plant Mol. Biol. — 1991. — Vol. 17(5). — P. 1105-1109.
20. Li C., Ayako Shimono, Haihua Shen, Yanhong Tang. Phylogeography of Potentilla fruticosa, an alpine shrub on the Qinghai-Tibetan Plateau. // Journal of Plant Ecology. — 2012. — Vol. 3 (1). — P. 9-15.
21. Njuguna W., Liston A., Cronn R., et al. Insights into phylogeny, sex function and age of Fragaria based on whole chloroplast genome sequencing. // Mol Phylogenet Evol. — 2012. — S1055-7903(12)00352-1.
22. Kress W.J, Wurdack K.J., Elizabeth A.Z., et al. Use of DNA barcodes to identify flowering plants. // Proceedings of the National Academy of Sciences (PNAS). — 2005. — Vol. 102 (23). — P. 83698374.
23. Sass C., Damon P. Little, Dennis Wm. Stevenson, Chelsea
D. Specht. (2007) DNA Barcoding in the Cycadales: Testing the Potential of Proposed Barcoding Markers for Species Identification of Cycads. PLoS ONE www.plosone.org 1 November /Issue 11/ e1154-1163.
24. Selvaraj D., Rajeev Kumar Sarma, Ramalingam Sathishkumar 2008. Phylogenetic analysis of chloroplast matK gene from Zingiberaceae for plant DNA barcoding. Bioinformation; 3(1): 24-27.
25. Lahaye R., van der Bank M., Bogarin D., et al. DNA barcoding the floras of biodiversity hotspots. // Proc Natl Acad Sci USA. — 2008. — Vol. 105. — P. 2923-2928.
26. Cue'Noud P., Savolainen V., Chatrou L.W., et al. Molecular phylogenetics of caryophyllales based on nuclear 18S rdna and plastid rbcl, Atpb, and matK dna sequences. // American Journal of Botany. — 2002. — Vol. 89 (1). — P. 132-144.
Информация об авторах: Ч. Еруулт — старший преподаватель кафедры фармакологий, e-mail: eruultch@yahoo. com, Улаанбаатар, улица Чойдог-4, Монгольский государственный медицинский университет, биомедицинский институт, кафедра фармакологии; М. Наранхажид — старший преподаватель, к.биол.н., e-mail: narankhajid@ gmail.com; Г.Чойжамц — заведующий кафедрой фармакологии, профессор, к.м.н., e-mail: [email protected]; И.Пурэвдорж — заведующий кафедрой молекулярной биологии и генетики, профессор, к.биол.н.,
e-mail: [email protected]
© ГОРЯЧКИНА Е.Г., БУИНОВ М.В., ФЕДОСЕЕВА Г.М. — 2013 УДК 615:322
ТОВАРОВЕДЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ СЫРЬЯ ЗОЛОТАРНИКА ДАУРСКОГО
Елена Геннадьевна Горячкина, Максим Владимирович Буинов, Галина Михайловна Федосеева (Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармакогнозии и ботаники, зав. — д.ф.н. В.М. Мирович)
Резюме. В работе представлены результаты изучения показателей подлинности и доброкачественности, послуживших основой составления проекта нормативной документации на сырьё золотарника даурского. Установлены требования, определяющие основные морфологические и анатомо-диагностические признаки сырья «Трава золотарника даурского» в цельном, измельчённом и порошкованном видах. Приведены оригинальные фотографии микропризнаков сырья. Указаны качественные реакции на основную группу действующих веществ, а также описана методика их количественной оценки. Числовые показатели определяют требования, обеспечивающие чистоту и безопасность данного вида сырья.
Ключевые слова: золотарник даурский, проект нормативной документации.
MERCHANDISING INDICATORS OF RAW MATERIALS OF A SOLIDAGO DAURICA
E.G. Goryachkina, M.V. Buinov, G.M. Fedoseeva (Irkutsk State Medical University, Russia)
Summary. In work results of studying of indicators of authenticity and the high quality which has formed a basis of drawing up the draft of standard documentation on raw materials of a Solidago daurica are presented. The requirements defining the main morphological and anatomo-diagnostic signs of raw materials «A grass of a Solidago daurica» in whole, crushed and powdered forms. Shows original photos microanatomical and diagnostic features of raw materials. Specified quality response to a core group of active substances, as well as describe the methodology of quantitative evaluation. The figures define requirements to ensure the purity and safety of this type of stuff.
Key words: Solidago daurica, the project of standard documentation.
Разработка нормативной документации (НД) — важный этап внедрения лекарственного растительного сырья в официнальную медицину. Практическую основу НД составляют предварительные фармакогностиче-ские исследования: ресурсоведческие, морфологические, анатомические, химические, а также фармакологические [2, 3].
Требования гармонизации способствуют значительным изменениям НД [1, 4]. Фармацевтический рынок в современных условиях развивается не только в направлении расширения ассортимента используемых растений, но и в направлении новых технологических форм с большей степенью измельчённости (порошкованного сырья), новых упаковочных материалов (полимерных, фильтр-пакеты), массам фасовки (более мелких).
Все эти нововведения учитываются при разработке проектов фармакопейных статей на перспективные виды лекарственных растений.
Цель работы: Составить проект нормативной доку-
ментации на сырьё золотарника даурского для внедрения в практическую медицину.
Материалы и методы
Объектом исследования послужили золотарник даурский — Solidago daurica Kitag. представитель семейства астровых (или сложноцветных) Asteraceae (Compositae). В качестве лекарственного растительного сырья предлагается использовать надземную часть — траву, содержащую наибольшее количество действующих веществ (ДВ), заготовленную в фазу бутонизации и начала цветения. В траве, собранной в период массового цветения, во время сушки биохимические процессы затихают постепенно, что способствует образованию и созреванию плодов. Плоды, имеющие буроватые хохолки (образующиеся в больших количествах) снижают качество сырья, затрудняют дозирование и уменьшают количество ДВ в навеске.
В Г
Рис. 1. Микродиагностические признаки травы золотарника даурского:
А — четковидные утолщения эпидермиса; Б — толстостенный и тонкостенный многоклеточный волоски; В — пъедестал толстостенного волоска; Г — тонкостенный трёхклеточный волосок.
Морфологические и микродиагности-ческие признаки установлены с помощью общепринятых методик, описанных нормативной документации на лекарственное растительное сырьё. Методы качественного и количественного анализа ДВ предложены на основании предварительного изучения групп биологически активных веществ, динамики накопления по органам и фазам развития растения. Числовые показатели установлены по результатам товароведческих исследований шести полупромышленных партий сырья [5].
Результаты и обсуждение
На основании проведённой нами работы предлагается следующий проект фармакопейной статьи.
Золотарника даурского трава
Solidago dauricae herba
Собранная в фазы бутонизации и начала цветения и высушенная надземная часть дикорастущего и культивируемого многолетнего травянистого растения золотарника даурского — сем. астровых (сложноцветных) —
Asteraceae (Compositae)
Внешние признаки. Цельное сырьё. Смесь оли-ственных стеблей, листьев цельных и частично измельчённых, соцветий цельных или частично осыпавшихся, недоразвитых плодов и хохолков. Стебли цилиндрические зелёные, в нижней части голые, в верхней коротковолосистые. Листья двух типов — прикорневой розетки листья на длинных черешках, стеблевые листья — на коротких черешках, длиной от 5-13 см, шириной от 2-5 см, продолговатые, яйцевидные или ланцетные, заостренные, встречаются широкояйцевидные (округлые) с закруглённой верхушкой, по краю пильчато-зубчатые, коротко-опушённые, часто опушение встречается по жилкам или практически отсутствует. Жилкование перисто-нервное. Цвет листьев — зелёный. Корзинки — 5-8 мм в диаметре, отдельные или в кистевидных, либо узкометёльчатых соцветиях, язычковые краевые цветки жёлтые, золотисто-жёлтые, внутренние трубчатые-жёл-тые, обёртка 2-3(4) рядная, листочки зелёные, наружные 1,5-2 мм длиной линейно-ланцетные, внутренние 5,5-7мм, по краям шероховатые, на верхушке коротко-приострённые или притуплённые. Плод — семянка, узкая палочковидная, в нижней половине или полностью голая.
Измельчённое сырьё. Кусочки листьев, стеблей, отдельных корзинок или цветков язычковых и трубчатых, проходящие сквозь сито с диаметром отверстий 7 мм. Цвет зелёный, беловато-зелёный с жёлтыми (золотистожёлтыми) вкраплениями.
Порошкованное сырьё. Порошок зелёного или серовато-зелёного цвета с вкраплениями белого, жёлтого (золотисто-жёлтого) цвета, проходящие сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм.
Запах слабый, вкус горьковатый.
Микроскопия. При рассмотрении листа с поверхности виден эпидермис верхней и нижней стороны многоугольный, практически прямостенный со складчатостью кутикулы. Устьица окружены 4-5 клетками (аномоцитный тип), погружённые, преобладают с нижней стороны. В большей степени клетки эпидермиса имеют четковидные утолщения. Волоски преобладают на нижней стороне листа. Встречаются волоски двух типов: простые 2-5 клеточные, толстостенные, слабо коленчато-согнутые, у основания таких волосков лежат несколько клеток эпидермиса, приподнимающиеся над поверхностью листа (пьедестал), поверхность таких волосков крупно щетинистая или слегка зазубренная, со складчатостью кутикулы; простые 2-5 клеточные, с тонкими оболочками, конечная клетка узкая, извилистая.
При микроскопии порошка обнаруживаются остатки эпидермиса с ровными стенками или с чётковидными утолщениями, устьица отдельные или с окружающими клетками или, обрывки проводящих сосудов со спиралевидным утолщением, частично цельные или изломанные толстостенные и тонкостенные волоски.
Качественные реакции. Измельчённое сырьё в количестве 1,5 г кипятят в течение 15 минут с 15 мл спирта этилового 60%. После охлаждения извлечение процеживают через вату и проводят реакции.
1. К 5 мл полученного извлечения прибавляют 0,1 г порошка магния и 1 мл кислоты хлороводородной концентрированной; при нагревании над пламенем спиртовки постепенно появляется красное (или розоватое) окрашивание (флавоноиды).
2. К 5 мл полученного извлечения прибавляют 3 мл алюминия III хлорида спиртового 2% и наблюдают желто-зелёное окрашивание (флавоноиды).
3. К 5 мл полученного извлечения прибавляют железа III хлорида 2%. Извлечение приобретает черно-зеленый цвет (дубильные вещества).
Количественное определение. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм. Около 1,0 г (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, прибавляют 100 мл спирта этилового 70%, содержащего 3% кислоты хлороводородной концентрированной. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 минут, периодически встряхивая для удаления частиц сырья со стенок. После чего колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу на 100 мл. Объем фильтрата доводят до метки спиртом этиловым 70% (раствор А).
В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 2 мл раствора А и 2 мл алюминия III хлорида в спирте этиловом 95%, доводят объем полученного раствора спиртом этиловым 95% до метки. Через 30 мин измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 430 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 2 мл извлечения, 1 капли кислоты уксусной разведенной и доведенный спиртом этиловым 95% до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.
Содержание суммы агликонов флавоноидов (Х%) в пересчете на кверцетин-стандарт в абсолютно сухом сырье вычисляют по формуле:
^ _ Р ♦ 1Пр ♦ 100 » 25 « 100 » 100
Б — оптическая плотность испытуемого раствора; Б0 — оптическая плотность ГСО кверцетина;
764,6 — удельный показатель поглощения комплекса алюминия III хлорида при 430 нм; т — масса сырья, г; т — масса ГСО кверцетина; те — потеря в массе при высушивании сырья, %. Примечание 1. Приготовление раствора кверцетина стандартного образца: около 0,0125 (т.н.) ГСО кверцетина (ТУ 64-4-127-96 НПО ВИЛАР) в пересчете на сухое вещество растворяли в спирте этиловом 95% в мерной колбе вместимостью 25 мл при нагревании на водяной бане до полного растворения. Затем раствор охлаждают и доводят его объем до метки спиртом этиловым 95 % при перемешивании.
Примечание. Приготовление спиртового раствора алюминия III хлорида 5% в спирте этиловом 95%: 5 г алюминия III хлорида (ГОСТ 3759-75, х.ч., ч.д.а.) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в 50 мл спирта этилового 95% и доводили объем раствора до метки спиртом той же концентрации.
Числовые показатели. Цельное сырьё. Сумма фла-воноидов в пересчёте на кверцетин-стандарт не менее 3,0%; влажность не более 11%; золы общей не более 3%; золы, не растворимой в кислоте хлороводородной 10%, не более 2%, отдельных корзинок и высыпавшихся цветочных корзинок не более 7%; пожелтевших и по-
буревших стеблей и листьев не более 5%, органической примеси (в том числе семянок с хохолком) не более 2%; минеральной примеси не более 1%.
Измельчённое сырьё. Сумма флавоноидов в пересчёте на кверцетин-стандарт не менее 3,0%; влажность не более 11%; золы общей не более 3%; золы, не растворимой в кислоте хлороводородной 10%, не более 2%, частиц сырья, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, не более 10%, частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,5 мм, не более 10%, органической примеси (в том числе семянок с хохолком) не более 2%; минеральной примеси не более 1%.
Порошкованное сырьё. Сумма флавоноидов в пересчёте на кверцетин-стандарт не менее 3,0%; влажность не более 11%; золы общей не более 3%; золы, не растворимой в кислоте хлороводородной 10 %, не более 2%, частиц сырья, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм, не более 7%, частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,5 мм, не более 10%, органической примеси (в том числе остатков семянок с хохолком) не более 2%; минеральной примеси не более 1%.
Упаковка. Цельное сырьё упаковывают в тюки из ткани не более 25 кг нетто и мешки тканевые либо льно-джуто-кенафные не более 10 кг.
Измельчённое сырьё фасуют по 50 г в пачки картонные.
Порошкованное сырьё расфасовывают в фильтр-пакеты по 1,5 г.
Срок годности 2 года.
Мочегонное средство.
ЛИТЕРАТУРА
1. Баландина И.А. Совершенствование принципов и методов фармакопейного анализа в системе стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных средств на его основе: Автореф. дисс. ... д-ра фарм. Наук. — М., 2004. — 40 с.
2. Горячкина Е.Г., Буинов М.В., Федосеева Г.М. Изучение состава полифенольных соединений золотарника даурского в сравнении с золотарниками канадским и обыкновенным // Вестник Бурятского государственного университета. — 2012. — Спец. С. — С. 84-88.
3. Горячкина Е.Г., Буинов М.В., Цыренжапов А.В. Золотарник даурский — перспективы использования в медицине // Материалы III-й итоговой конференции молодых ученых Иркутского государственного медицинского университета. — Иркутск: ИГМУ 2011. — С. 10.
4. Государственная фармакопея: вопросы соответствия времени // Российские аптеки, 2008. — № 23. — С. 14-16.
5. ОФС 42-00013-03 «Правила приёмки лекарственного растительного сырья и методы отбора проб».
Информация об авторах: Горячкина Елена Геннадьевна — доцент, к.ф.н.,
664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, тел. 61-31-74, e-mail: [email protected]; Буинов Максим Владимирович — аспирант; Федосеева Галина Михайловна — профессор, д.ф.н.
