CC BY
47
Дрожжи сетеугзгае оказались пригодными для оценки биологической активности противогрибковых препаратов. Антибиотики нистанин и амфотерицин, а также хитозан подавляли пенообразование в суспензии дрожжей с глюкозой, обладали фунгицидным действием (рис. 4, 5, табл.1).
Таблица 1
Влияние нистатина и амфотерицина на рост вассНатотусез сетеу1з1ае
Антибиотик Концент- рация, мг/мл Зона подавления роста, мм
Нистатин 0,5 28,0±1,0
Амфотерицин 0,1 20,0±3,0
0,3 19,7±1,67
Хорошая воспроизводимость результатов, техническая простота исполнения, доступность и дешевизна тест-объекта и самого процесса определения позволяют рекомендовать предложенный биотест для оценки биологической активности фитопрепаратов и противогрибковых антибиотиков.
Авторы выражают признательность Н.М. Будневу и
Н.И. Граниной за ценные советы и поддержку исследований в данном направлении.
Работа частично проводилась при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации (Соглашения: ГК № 14.B37.21.0785 от 24.08.12, ГК №11.519.11.5016 от 28.10.11) и Программы стратегического развития.
Рис. 4. Влияние антибиотиков на скорость подъема пены в суспензии 5. сетеугзгае.
Г
и
-J
Рис. 5. Определение чувствительности Saccharomyces cerevisiae к антибиотикам (А — нистатин 0,5 мг/мл; Б — амфотерицин 0,1 мг/мл; В — амфотерицин 0,3 мг/мл).
ЛИТЕРАТУРА
1.Вятчина О.Ф., Жданова Г.О., Стом Д.И. Экспрессный приём биологического анализа качества вод с помощью сахаромицетов // Естественные науки. Журнал фундаментальных и прикладных исследований. — 2009. — № 3 (28). — С. 86-88.
2. Государственная фармакопея СССР: Справочник. — XI издание (ГФ XI), вып. 2. «Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье». — М.: Медицина, 1990. — 400 с.
3.Нетрусов А.И. и др. Практикум по микробиологии:
Учеб. пособие для студ. вузов. / Под ред. А. И. Нетрусова. — М.: Академия, 2005. — 608 с.
4. Способ оценки активности вермипрепарата / В. А. Бы-бин, А.Э. Балаян, Д.И. Стом и др. //Патент РФ № 2413219; За-явл. 05.11.2008; Приоритет 05.11.2008; Опубл. 27.02.2011, Бюл. № 6.
5. Тимофеев Н.П. Фитоэкдистероиды: Фармакологическое использование и
Информация об авторах: Жданова Галина Олеговна — младший научный сотрудник, 664003, г. Иркутск, ул. Ленина 3, тел. (3952) 343437, e-mail: zhdanova86@yandex.ru; Вятчина Ольга Федоровна — к.б.н., доцент кафедры, 664003, г. Иркутск, ул. Сухэ-Батора, 5, e-mail: olgairk3@rambler.ru; Быбин Виктор Александрович — к.б.н., научный сотрудник, e-mail: godolin@mail.ru; Стом Дэвард Иосифович — д.б.н., ведущий научный сотрудник, 664020, г. Иркутск, ул. Бульвар Гагарина, 20, e-mail: stomd@mail.ru; Федосеева Галина Михайловна — д.ф.н., профессор кафедры, 664003, г. Иркутск, ул. Карла Маркса, 10, e-mail: rosforest@mail.ru.
© ЕРУУЛТ Ч., НАРАНХАЖИД М., ЧОЙЖАМЦ Г., ПУРЭВДОРЖ И. — 2013 УДК: 615.322.276.036.8:616.24-002.5-08
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ йАВІРНОЙА РйиГІСОВА РАСТУЩЕГО В МОНГОЛИИ
Ч.Еруулт, М. Наранхажид, Г.Чойжамц, И. Пурэвдорж (Монгольский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. Ц. Лхагвасурэн, Биомедицинский институт, директор — к.м.н., проф. Г.Батбаатар, кафедра фармакологии,
зав. — к.м.н., проф. Г.Чойжамц)
Резюме. Мало что известно о ДНК Ма1к последовательностей и филогенетического анализа пятилистника ку-старникова (БазгрНота/тиЫсова), произрастающей в Монголии. Для исследования молекулярно-генетического анализа БазгрНота/тШгсоза и филогенетические отношения связаны родов мы использовали часть последовательности ДНК хлоропластов. таК-гены 92 изолятов были амплифицированы, 48 изолятов были секвенированы для изучения филогенетических. ПЦР-анализ выполненнен с полученными последовательностями таК-гена показал> 98% сходства с Д. кустарниковая. Прямое секвенирование выбранных ампликонов определили четыре разных типа последовательности для каждого локуса, присутствующий в четырех различных комбинаций. Нуклеотидные последовательности данных, были получены из следующих инвентарными номерами М1 гаплотипов (АВ793589), М2 гаплотипов (АВ793590), Мз гаплотипов (АВ793591), М4 гаплотипов (АВ793592).
Ключевые слова: пятилистник кустарниковый, БазгрНота/тШгсоза, гаплотип, секвенс, фруктоза, полимеразная цепная реакция, матураза К, Монголия.
Сибирский медицинский журнал, 2013, № 4 MOLECULAR ANALYSIS OF POTENTILLA FRUTICOSA ISOLATED IN MONGOLIA
Ch.Yeruult, G.Choijamts, M.Narankhajid, I.Purevdorj (Health Sciences University of Mongolia)
Summary. Little is known about the matK DNA sequences and phylogenetic analysis of Dasiphora fruticosa isolated in Mongolia. To investigate the molecular genetic analysis of D. fruticosa and the phylogenetic relationships of associated genera we used part of the chloroplast DNA sequences. The matK genes of the 92 isolates were amplified, 48 isolates were sequenced for phylogenetic study. A BLAST search performed with the obtained matK gene sequences showed >98% similarity with D. fruticosa. Direct sequencing of selected amplicons defined four distinct sequence types for each locus, presented in four different combinations. Nucleotide sequence data were obtained from the following accession numbers Ml haplotype (AB793589), M2 haplotype (AB793590), M3 haplotype (AB793591), M4 haplotype (AB793592).
Key words: Dasiphora fruticosa, Mongolia, phylogenetic analysis, matK gene, haplotype.
Пятилистник кустарниковый (БазгрНота /тШгсоза) представляет большой интерес как растение с высоким запасом сырья и возможностями для производственной переработки, растёт он в степных, лесных и горных районах, встречается в 11 географических территориях Монголий, таких как Хувсгул, Хэнтий, Хангай, Мон-гольский-Дагуур, Хянган, Ховд, Монгольский-Алтай, Средний Халх, Западная-Монголия, массивы Горных Хребтов и Гови-Алтай [1-4].
Есть сведения, что в Монгольской традиционной медицине настои из листьев и цветов пятилистника кустарникового применяли при кровянистом стуле для остановки кровотечений, для повышения аппетита, улучшения пищеварения а также при некоторых эмоциональных растройствах психики [5, 7, 10], данное растение широко применяется и в российской медицинской практике [4,6,8,9,11,12].
Исследования по выявлению биологических и генетических качеств у урождённых растений, которые приспособлен-ны к климатическим условиям Монголии является теоритической основой для технологии производства эффективных специфических препаратов профилактики и диагностики. За последние годы были проведены немало геномных исследований лекарственных растений растущих в Монголий, но исследования пятилистника кустарникового растущего в Монголий находиться на начальных стадиях, поэтому исследования для установления генотипа с филогенетическим результатом пока не проведены.
Для пятилистника кустарникового растущего в Монголии, пока не проведы высоко чувствительные молекулярно-биологические исследования видовой специфичности хлоропластного генома путём установления нуклеотидной последовательности. Проведение данного молекулярно-биологического исследования даёт возможность обьяснить молекулярные механизмы эволюции и генетическую специфичность и видовую принадлежность данного вида.
В рамках данного исследования мы поставили цели (I) установить нуклеотидную последовательность гена таЖ пятилистника кустарникового растущего в Монголии и сравнить полученные данные с нуклеотидной последовательностью гена таЖ пятилистников кустарникового растущего в других районах Земли, (II) установить различия по гаплотипам и нуклеотипам генам таЖ пятилистников кустарникового растущих в разных климатических поясах Монголии, (III) построить филогенетическое древо и видовую принадлежность пяти-листника кустарникового растущего в Монголии на основании нуклеотидной последовательности гена таК.
Материалы и методы
В исследовании были собраны пятилистник кустарниковый (БазгрНота /тШгсоза) растущий в Монголии из различных климатических поясов и из различных высот выше уровня моря. По 4-8 образцов от каждого пояса и всего было собрано 92 образцов. Все образцы
были собраны в середине Июля и высушены в прохладном месте.
Полимеразная цепная реакция
Образцы пятилистника кустарникового были из-мельчины и смешаны с жидким азотом и при помощи “DNeasy Plant MiniTM genomic extraction kit; — Qiagen, CA” под руководством производителя был получен и очищен ДНК из образцов. Для увеличения количества нуклеотидов гена matK были использованы следующие праймеры, которых разработал Ooi и соавт. (1995) (табл. 1) [13].
В состав одного 25 мкл мастер субстанции ЦПР (PCR master mix Promega corporation USA) входит: осно-
ва мтДНК (1:1000 разведение) 5.0 мкл, 10X Ex Taq буфер (Promega, German) 2.5 мкл, dNTP смесь (2.5 mM каждая), (Promega, German) 2.0 мкл, 5’ наводящий праймер
1.0 мкл, 3’ остающий праймер 1.0 мкл, Taq ДНХ полимераза (Promega, German) 0.5 мкл, ddH20 13.0 мкл.
Техника определения нуклеотидных последовательностей
Для определения нуклеотидных последовательностей гена matK, пятилистника кустарникового были использованы праймеры разработаные Ooi и соавт. (1995). Состав: наводящий праймер цепи matK-AF CTA TAT CCA CTT ATC TTT CAG GAG T остающий праймер цепи matK-8R AAA GTT CTA GCA CAA GAA AGT CGA.
Для определения нуклеотидной последовательности сразу от полученного продукта после ЦПР, при помощи ABI PRISM Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction kit (Amerssham Biosciences Piscataway, NJ, USA), состав 10 мкл мастер субстанции на одного образца приготовили следующим образом. Состав: 4.0 мкл ДНК основа (1:1000 разведение), 1.0 мкл 5х буффер (BigDye version 3.1, TAKARA BIO INC., Japan), 4.0 мкл BigDye (BigDye version 3.1, TAKARA BIO INC., Japan), праймер
1.0 мкл (=1.0 pmoles).
Для установления нуклеотидной последовательности гена matK, мастер субстанция была помещена в машину ЦПР (Gene Ampa PCR System 9700 thermocycler, PE Applied Biosystem, USA) и увеличена последующим методом. Обработка данных нуклеотидных последовательностей гена matK, увеличенных методом ЦПР, была выполнена при помощи GENETYX-Mac software (version 7, Tokyo, Japan). Дальнейшее разработка нуклетидной последовательности гена matK была сделана с помощью AlignPlus" software (version 4.1) и программы MEGA 5.0 [8-9].
Результаты и обсуждение
В исследовании были проведены на 92 пробах, из цветков и листьев были выделены ДНК пятилистника кустарникового. После очищения ДНК была проведе-
Таблица 1
Праймеры которые были использованы при ЦПР для увеличения количества гена таК
Ген Праймер Последо- вательность праймера Локализация Размер продукта (bp)
matK matK-AF matK-8R CTA TAT CCA CTT ATC TTT CAG GAG T AAA GTT CTA GCA CAA GAA AGT CGA 804-828 2080-2057 1200
Таблица 2
Гаплотипы установленные на основе нуклеотидной последовательности гена matK
Название Гаплотипа Страна Локализация изменённого нуклеотида
3 5 5 5 5 5 6 6 6 6 6 7
7 1 2 4 7 9 1 5 7 8 8 3
7 6 0 6 7 0 5 3 8 7 8 9
D. fruticosa B11 (AB458585) Ъибет C G A C C C G A C C A G
D. fruticosa M1 (AB793589) Монголия T A C T T G C G T A C T
D. fruticosa M2 (AB793590) Монголия T T G C G T A C T
D. fruticosa M3 (AB793591) Монголия T T G C G T T
D. fruticosa M4 (AB793592) Монголия T A T G C G T T
на ЦРП для увеличения количества нуклеотидных генов matK хлоропластида с использованием праймеров matK-AF, matK-8F. Гелевым электрофорезом проверили результаты ЦРП и были получены 1200 пар продукта ЦПР-зы с базальной длиной.
Все 92 проба были собраны из Сухэ-Батор, Булган, Дундговь, Дорнод, Туве, Увс, Архангай, Сэлэнгэ, Завхан, Баян-Улгий, Увурхангай, Говь-Алтай, Баянхонгор, Хэн-тий, Хувсгуел аймаков/регионов. После увелечения количества ДНК путём ЦРП, в 48 пробах (собранных из Сйхбаатар, Булган, Дундгови, Тув, Сэлэнгэ, Завхан, Хув-сгул аймаков/регионов) были получены 1200 пар продукта ЦРП-зы с основной длиной.
С помощью полученного ~489 пар с основной длиной продукта нуклеотидного гена matK хлоропласти-да, мы установили нуклеотидную последовательность пятилистника кустарникового, растущего в Монголии. Полученные данные мы сравнили с 23-мя гаплотипами гена matK, который регистрирован в Genbаnk-е как D. fruticosa Ъ, Тибетская высокогорная, Китай. При сравнении установлено 4 гаплотипа. Полученные в результате исследований, 4 гаплотипа: D. fruticosa М1, D. fruticosa М2, D. fruticosa М3, D. fruticosa М4 мы сравнили с гаплотипами D. fruticosa В11 (АВ458585; Тибет, Китай), в результате чего нами установлено, что в 12 нуклеотидах произошла точечная мутация (табл. 2).
Гаплотипы М1, М2, М3, М4 мы зарегистрировали в Genbank-е под регистрационным номерами АВ793589, АВ793590, АВ793591, АВ793592.
В генетической последовательности гена matK хлор-пластида D. fruticosa Ъ., растущего в Монголии, гаплотипы расположились в следующем порядке М1 37.5% (18/48), М2 31.3% (15/48), М3 18.7% (9/48), М4 12.5% (6/48). D. fruticosa Ъ. При исследовании географической распространённости гаплотипов гена matK хлорпласти-да, нами было установлено, что гаплотип М1 распространён в Булган, Сэлэнгэ, Туве аймаках/регионах; М2 гаплотип в Завхан, Тув, Сухэ-Батор аймаках/регионах; М3 гаплотип в Сухэ-Батор, Дундговь аймаках/регионах; М4 гаплотип в Хувсгел аймаке/регионе (рис. 1).
Гаплотип М1 распространён на 42.8% территории охватывающее исследование, это лесные, степные пояса Булган, Сэлэнгэ, Тув аймаков; гаплотип М2 распросра-нён на 42.8% территории охватывающее исследование, это пояса расположенные Завхан, Туве, Сухэ-Батор аймаках. По сравнению с остальными гаплотипами, гаплотипы М1, М2 более широко распространены. Мы предположили, что это связоно с тем что пояса таёжных гор Хэнтий, горно-степные районы Хангай, горно степные районы Монголького Дагуур, степи Хянгана являются благоприятными условиями для роста D. fruticosa, растущего в Монголии. Галотип М3 распространён на 28.5% территории, это степные, засушливо степные пояса Сухэ-Батор, Дундговь аймаков. Отсюда следует, что распространённость гаплотипа гена matК D. fruticosa, растущего в Монголии, зависит климатических условий данной местности.
При сравнении широты, долготы и высоты выше над уровнем моря мест сбора проб, пятилистника кустарникового, различия гаплотипа и нуклеотида больше в районах расположенных на средней высоте выше над
уровнем моря. И чем выше или ниже над уровня моря расположена местность, тем меньше встречается различия гаплотипа и нуклеотида. (табл. 2).
Из таблицы 2 видно, если популяция пятилистника кустарникового встречаеть-ся на средней высоте выше над уровнем моря, то дифференциация гаплотипа и нуклеотида более высокая по сравнению с остальными популяциями. Это связано с тем что на средней высоте выше над уровнем моря простираются различные климатические пояса как лесные, лесо степные, степные и пустыни Монголии. Также, гаплотип М1 встречаеться на высоте около 1113 (пробы были собраны на высоте 1040 м, 1900 м, 1430 м) выше над уровнем моря, гаплотип М2 встречаеться на высоте 2165 (2900 м, 1430 м) выше над уровнем моря, гаплотип М3 встречаеться на высоте 1200 метрт, гаплотип М4 на высоте 1540 метров выше над уровнем моря.
После исключения сомнительных данных (а%п-ment), по методу Parsimony, путём сравнения наших данных с 23 гаплотипами нуклеотидного гена matK D. fruticosa выбранного нами из Genbank-а, мы составили филогенетическое древо, пятилистика кустарникового, растушего в Монголии (рис. 2).
По исследованиям установления нуклеотидной последовательности гена matK хлоропластов, по сравнительному анализу нуклеотидной информации гена matK, по исследованиям филогенетического древа доказывает, что популяция пятилистника кустарникового (D. fruticosa), растущего в Монголии в генетическом
RUSSIA
'■'» S Хукгел ) 1 A yrfть Булган 3 \ .jffl J“ Дундговь с <•> 1л U ^
ДГиоииМ! 0 Гмлегкл 44 CHINA
Рис. 1. Расположение и распространение гаплотипов нуклеотидной последовательности гена matК (п = 48), пятилистника кустарникового (Dasiphora fruticosa ), растушего в Монголий.
Рис. 2. Филогенетическое древо, вида D. fruticosa, растущего в Монголии, составленное на основе последовательности ДНК гена matK. (Мах1тит Likelihood метод).
Таблица 2
Нуклеотидная и гаплотипная дифференциация D. fruticosa
Регионы Широта Долгота Высота выше уровня моря (метр) Коли- чество проб Нуклео- тидная дифферен- циация Гаплотипная дифферен- циация
D. fruticosa (Завхан) 47o30" 97o30" 2900 7 0.356± 0.00039 0.00041± 0.00049
D. fruticosa (Булган) 48o06" 103o 17' 1900 8 0.667± 0.00063 0.00133± 0.00111
D. fruticosa (Дундгови) 46o09" 106o03" 1668 6 0.533± 0.00059 0.00062±0.00060
D. fruticosa (Хувсгул) 51 o04" 99o24" 1540 6 0.600± 0.00022 0.00078±0.00073
D. fruticosa (Тув) 48o08" 108o27" 1430 6 0.622± 0.00039 0.00103±0.00089
D. fruticosa (Сйхбаатар) 45o48" 115o18" 1200 7 0.000± 0.00000 0.000± 0.00000
D. fruticosa (Сэлэнгэ) 49o40" 107o24" 1040 8 0.000± 0.00000 0.000± 0.00000
плане не монофильная, а поли-фильная группа.
Выводы нашего исследования популяции D. fruticosa L., растущего в Монголии, путём увеличения числа гена matK хлоропластида с помощью ЦРП, совпадает с выводами Ooi и соавт. (1995) [7], Shaw и соавт. (2009) [10], Shimono и соавт.
(2010) [11], Sojok и соавт. (2008)
[12], Taberlet и соавт. (1991) [13], которые доказали, что использование праймера гена matK и выявление нуклеотидной последовательности являеться результативным методом для исследования филогенетического древа.
Было отмечено, что различия в гаплотипе нуклеотидов в популяции D. Fruticosa, растущего в Тибете, Китай напрямую зависит от высоты местности [11,14]. В то время как наши исследования показали, что у D. Fruticosa, растущего в Монголии, гаплотипные и нуклеотидные различия встречаются сравнительно реже по сравнению с D. Fruticosa, растущего в Тибете, Китай. Также гаплотип М1 распространён на высоте 1113 (пробы были собраны на высоте 1040 м, 1900 м, 1430 м) выше над уровнем моря, в лесных, лесо-степных степных поясах, гаплотип М2 распространён на высоте 2165 (2900 м, 1430 м) выше над уровнем моря, в степных, засушливых степных поясах, гаплотип М3 распространён на высоте 1200 метр, в пустыно-степных поясах, гаплотип М4 распространён на высоте 1540 метр, в таёжных высокогорьях и тайгах горы Хувсгул. Гаплотипы более широко распространены на территории Монголии, из-за того что 50% от всего территории являются для них благоприятными для роста, это лесные, степные и зашусливо степные зоны. Это также обьясняется тем что в исследовании были охвачены территории которые имеют благоприятные климатическте условия роста для Dasiphora fruticosa, ра-стушего в Монголии, такие как таёжные горы Хувсгул,
таёжные горы Хэнтий, лесо степные горы Хангай, лесо степные горы Монгольского Дагуур, леса и степи Хянга-на [1-3, 5, 7]. Мы предполагаем что различия в гаплоти-пе Базіркота /тыЫеоза, растущего в Монголии, связано с геоморфологией, климатом, географическими поясами Монголии. Но для уточнения этих данных требуеться более широко маштабные научные исследования поясов и зон Монголии.
Данное научное исследование генома таЖ хлоропласта, является первым генетическим исследованием Б. /тыЫеоза Ъ., растущего в Монголии.
При сравнении нуклеотидных последовательностей гена таКБ./тыЫеоза Ъ., растушего в Монголии, со стандартной нуклеотидной последовательностью, установило всего 12 межнуклеотидных изменений, это даёт основание считать Б./тыЫеоза Ъ., растущая в Монголии, ДНК баркод специфичная. Результаты нашего исследования совпадают с результатами предыдуших исследователей [15-18], что ген таЖ определяет специфическую ДНК баркод растения.
ЛИТЕРАТУРА
1. Грубое В.И. Конспект флоры Монгольской Народной Республики. — Ленинград: Изд-во АН СССР, 1955. — 169 с.
2. Грубое В.И. Опрепелитель сосудистых растений Мон-голий. — Ленинград, 1982. — 142 с.
3. Губанов И.А. Конспект флоры внешней Монголии (сосудистые растения). — М., 1996. — 131 с.
4. Зарбуев А.Н., Гончикова С.Ч. Эффективность применения сухого экстракта пятилистника кустарникового в комплексном лечении больных туберкулезом. // Медицинский вестник Башкортостана. — 2011. — Т. 6. №4. — С. 90-93.
5. Лигаа У. Монголын уламжлалт эмнэлэгт эмийн ургам-лыг хэрэглэх арга ба жор. — УБ, 1996. — С. 138-139.
6. Николаев С.М., Ажунова Т.А., Убашеев И.О. и др. Доклиническое токсикологическое изучение экстракта пяти-листника кустарникового. // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2002. — Т. 35. №6. — С. 67-69.
7. Санчир Ч. Батхуу Ж. Комацу К. Фушима Х. Болдсайхан Б. Монгол орны ашигт ургамлын зурагт лавлах. — УБ, 2003. — 210.
8. Федосеев А.П., Федосеева Г.М., Мирович В.М. и др. Перспективы внедрения в медицинскую практику некоторых видов лекарственных растений Прибайкалья // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2001. — Т. 27. №3. — С. 70-75.
9. Хобракова В.Б., Николаев С.М., Цыдендамбаев П.Б. Экстракт пятилистника кустарникового — перспективный регулятор иммунологических реакций организма. // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2012. — Т. 114. №7. —
С. 100-103.
10. Хайдав Ц. Алтанчимэг Б. Варламова Т.С. Лекарственные растения в монгольской медицине. — Улан-Батор, 1985. — 122 с.
11. Чекина Н.А., Чукаев С.А., Хобракова В.Б. Фармако-
логическая эффективность пятилистника кустарникового в профилактике и лечении сахарного диабета. // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН. — 2010. — №3. — С. 379-382.
12. Юмтарова З.А. Экстракт пятилистника кустарникового в комплексной терапии воспалительных заболеваний влагалища и шейки матки. // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2006. — Т. 64. №6. — С. 78-82.
13. Ooi K., Endo Y., Yokoyama J., Murakami N. Useful primer designs to amplify DNA fragments of the plastid gene matK from angiosperm plants. // Journal of Japanese Botany. — 1995. — Vol. 70. — P. 328-331.
14. Tamura K., Nei M., Kumar S. Prospects for inferring very large phylogenies by using the neighbor-joining method. // Proceedings of the National Academy of Sciences (USA). — 2004. — Vol. 101. — P. 11030-11035.
15. Tamura K., Peterson D., Peterson N., et al. MEGA5: Molecular Evolutionary Genetics Analysis using Maximum Likelihood, Evolutionary Distance, and Maximum Parsimony Methods. // Mol Biol Evol. — 2011. — Vol. 28. — P. 2731-2739.
16. Shaw J., Lickey E., Beck J.T., et al. The tortoise and the hare II: relative utility of 21 noncoding chloroplast DNA sequences for phylogenetic analysis. // Am. J. Bot. — 2005. — Vol. 92(1). — P. 142-166.
17. Shimono A., Ueno S., Gu S., et al. Range shifts of Potentilla fruticosa on the Qinghai-Tibetan Plateau during glacial and interglacial periods revealed by chloroplast DNA sequence variation. // J. Heredity. — 2010. — Vol. 104. — P. 534-542.
18. Sojok J. Notes on Potentilla XXI. A new division of the tribe Potentilleae (Rosaceae) and notes on generic delimitations. // Bot. Ja. Syst. — 2008. — Vol. 127 (3). — P. 349-358.
19. Taberlet P., Gielly L., Pautou G., Bouvet J. Universal primers
for amplification of three non-coding regions of chloroplast DNA. // Plant Mol. Biol. — 1991. — Vol. 17(5). — P. 1105-1109.
20. Li C., Ayako Shimono, Haihua Shen, Yanhong Tang. Phylogeography of Potentilla fruticosa, an alpine shrub on the Qinghai-Tibetan Plateau. // Journal of Plant Ecology. — 2012. — Vol. 3 (1). — P. 9-15.
21. Njuguna W., Liston A., Cronn R., et al. Insights into phylogeny, sex function and age of Fragaria based on whole chloroplast genome sequencing. // Mol Phylogenet Evol. — 2012. — S1055-7903(12)00352-1.
22. Kress W.J, Wurdack K.J., Elizabeth A.Z., et al. Use of DNA barcodes to identify flowering plants. // Proceedings of the National Academy of Sciences (PNAS). — 2005. — Vol. 102 (23). — P. 83698374.
23. Sass C., Damon P. Little, Dennis Wm. Stevenson, Chelsea
D. Specht. (2007) DNA Barcoding in the Cycadales: Testing the Potential of Proposed Barcoding Markers for Species Identification of Cycads. PLoS ONE www.plosone.org 1 November /Issue 11/ e1154-1163.
24. Selvaraj D., Rajeev Kumar Sarma, Ramalingam Sathishkumar 2008. Phylogenetic analysis of chloroplast matK gene from Zingiberaceae for plant DNA barcoding. Bioinformation; 3(1): 24-27.
25. Lahaye R., van der Bank M., Bogarin D., et al. DNA barcoding the floras of biodiversity hotspots. // Proc Natl Acad Sci USA. — 2008. — Vol. 105. — P. 2923-2928.
26. Cue'Noud P., Savolainen V., Chatrou L.W., et al. Molecular phylogenetics of caryophyllales based on nuclear 18S rdna and plastid rbcl, Atpb, and matK dna sequences. // American Journal of Botany. — 2002. — Vol. 89 (1). — P. 132-144.
Информация об авторах: Ч. Еруулт — старший преподаватель кафедры фармакологий, e-mail: eruultch@yahoo. com, Улаанбаатар, улица Чойдог-4, Монгольский государственный медицинский университет, биомедицинский институт, кафедра фармакологии; М. Наранхажид — старший преподаватель, к.биол.н., e-mail: narankhajid@ gmail.com; Г.Чойжамц — заведующий кафедрой фармакологии, профессор, к.м.н., e-mail: choijamtsg@yahoo.com; И.Пурэвдорж — заведующий кафедрой молекулярной биологии и генетики, профессор, к.биол.н.,
e-mail: purevdorj@yahoo.com
© ГОРЯЧКИНА Е.Г., БУИНОВ М.В., ФЕДОСЕЕВА Г.М. — 2013 УДК 615:322
ТОВАРОВЕДЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ СЫРЬЯ ЗОЛОТАРНИКА ДАУРСКОГО
Елена Геннадьевна Горячкина, Максим Владимирович Буинов, Галина Михайловна Федосеева (Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармакогнозии и ботаники, зав. — д.ф.н. В.М. Мирович)
Резюме. В работе представлены результаты изучения показателей подлинности и доброкачественности, послуживших основой составления проекта нормативной документации на сырьё золотарника даурского. Установлены требования, определяющие основные морфологические и анатомо-диагностические признаки сырья «Трава золотарника даурского» в цельном, измельчённом и порошкованном видах. Приведены оригинальные фотографии микропризнаков сырья. Указаны качественные реакции на основную группу действующих веществ, а также описана методика их количественной оценки. Числовые показатели определяют требования, обеспечивающие чистоту и безопасность данного вида сырья.
Ключевые слова: золотарник даурский, проект нормативной документации.
MERCHANDISING INDICATORS OF RAW MATERIALS OF A SOLIDAGO DAURICA
E.G. Goryachkina, M.V. Buinov, G.M. Fedoseeva (Irkutsk State Medical University, Russia)
Summary. In work results of studying of indicators of authenticity and the high quality which has formed a basis of drawing up the draft of standard documentation on raw materials of a Solidago daurica are presented. The requirements defining the main morphological and anatomo-diagnostic signs of raw materials «A grass of a Solidago daurica» in whole, crushed and powdered forms. Shows original photos microanatomical and diagnostic features of raw materials. Specified quality response to a core group of active substances, as well as describe the methodology of quantitative evaluation. The figures define requirements to ensure the purity and safety of this type of stuff.
Key words: Solidago daurica, the project of standard documentation.
Разработка нормативной документации (НД) — важный этап внедрения лекарственного растительного сырья в официнальную медицину. Практическую основу НД составляют предварительные фармакогностиче-ские исследования: ресурсоведческие, морфологические, анатомические, химические, а также фармакологические [2, 3].
Требования гармонизации способствуют значительным изменениям НД [1, 4]. Фармацевтический рынок в современных условиях развивается не только в направлении расширения ассортимента используемых растений, но и в направлении новых технологических форм с большей степенью измельчённости (порошкованного сырья), новых упаковочных материалов (полимерных, фильтр-пакеты), массам фасовки (более мелких).
Все эти нововведения учитываются при разработке проектов фармакопейных статей на перспективные виды лекарственных растений.
Цель работы: Составить проект нормативной доку-
ментации на сырьё золотарника даурского для внедрения в практическую медицину.
Материалы и методы
Объектом исследования послужили золотарник даурский — Solidago йаипса Kitag. представитель семейства астровых (или сложноцветных) Asteraceae (Compositae). В качестве лекарственного растительного сырья предлагается использовать надземную часть — траву, содержащую наибольшее количество действующих веществ (ДВ), заготовленную в фазу бутонизации и начала цветения. В траве, собранной в период массового цветения, во время сушки биохимические процессы затихают постепенно, что способствует образованию и созреванию плодов. Плоды, имеющие буроватые хохолки (образующиеся в больших количествах) снижают качество сырья, затрудняют дозирование и уменьшают количество ДВ в навеске.
