CC BY
41
© АРИУНЖАРГАЛ Н., СЭСРЭГДОРЖ С., БАРХУ Д. — 2013 УДК: 616-057:615.322
РЕЗУЛЬТАТЫ РЕНТГЕНОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ДЕЙСТВИЯ СБОРА «ЖОНШ-5»
НА КОНСОЛИДАЦИЮ ПЕРЕЛОМА
Ариунжаргал НямсYрэн1, Сэсрэгдорж СYрэнжид2, Барху Доржнамжим3 ^Восточно-Гобийский филиал Университета Науки Здоровья Монголии, 2Филиал Традиционной Медицины Университета Науки Здоровья Монголии, 3 Национальный Центр Травматологии, Улан-Батор, Монголия)
Резюме. Проведено рентгенологическое исследование действия сбора «Жонш-5» на сращение перелома. В исследовании были использованы крысы породы Вистар мужского пола, в бедренные кости которых всажены внутренние крепления и после чего было произведено моделирование закрытых переломов. Все крысы с переломами были случайно разделены на 3 группы. Крысам I группы давалась только обычная пища без применения какого-либо лекарственного средсвта, крысам II группы давали никомед кальция в дозах 0.6 мг., а крысы III группы получали сбор «Жонш-5», как добавку к пище в дозе 1.3 мг. На 14-й, 28-й, 42-й и 56-й день после перелома производили рентгеновские снимки в прямой и боковой проекциях для оценки площади сращения и других показателей по методу S.J.Warden и соавт. На 14-й и 28-й дни после перелома площадь сращения у крыс, получавших «Жонш-5», была статистически больше, чем у других групп, но на 42-й день это различие уменьшалось. При оценке по методу S.J.Warden и соавт. оказалось, что сбор «Жонш-5» статистически значимо ускорял сращение костей.
Ключевые слова: закрытый перелом, сращение перолома, спица Кришнера, сбор «Жонш-5».
THE RESULTS OF THE X-RAY INVESTIGATION OF JONSH-5 EFFECTS ON FRACTURE HEALING
Ariunjargal N1., Seesregdorj S2., Barkhuu D3.
(‘Dornogobi Branch of Health Science University of Mongolia, 2Traditional Medicine Branch of Health Science University of Mongolia 3National Traumatology Center, Ulan Bator, Mongolia)
Summary. This study we conducted in order to determine an effect of «Jonsh-5» composition on a fracture healing using X-ray research. For this purpose we took Wistar male rats into femur of whom the inner Krishner wire was introduced and artificial closed fracture was simulated. All rats with fractures were divided into 3 groups. Rats of first group were given common food without any drug addition, rats of second group took calcium Nicomed in doses 0.6 mg and rats of third group received Jonsh-5 composition in dose 1.3 mg as food supplement. For 14th, 28th and 42nd days after fracture the roentgenograms of direct and lateral projections determined square of callus and other indices using the method S.J.Warden et al. On 14th and 28th days after fractures the rats of the third group had statistically greater square of callus but on 42nd day the difference reduced. The evaluation of S.J.Warden et al method shows that the Jonsh-5 composition accelerates fracture healing with the statistical probability.
Key words: closed fracture, fracture healing, Krishner’s wire, «Jonsh-5» composition.
Излечение переломов костей в наиболее короткий срок все еще остается обьектом особого внимания ученых и исследователей. Сбор «Жонш-5», в состав которого входят 5 видов сырья растительного и минерального пройсхождения, издавна использовали в Монгольской народной медицине, как мощное средство излечения переломов костей.
Входящее в состав сбора «Жонш-5» растение Eucomia ulmoides Oliver в монгольских лечебных сутрах называлось средством для сращивания костей, сохранения губчатых костей и понижения жара [2,3]. Исследователи изучали его действие in vivo и in vitro средах и установили, что оно активизирует дифференциацию остеобластов и ингибирует деятельность остеокластов [16,22]. Растение Миробалан (Terminalia chebula) обладает болеутолящим и ускоряющим заживление ран действием [4,14]. Девясил высокий (Inula helenium) обладает противовоспалительным и антибактериальным действием [21,23]. Чертополох курчавый (Carduus crispus) отличается высоким содержанием кальция и обладает кровоостанавливающим, болеутоляющим и антиоксидантным действиями [2,8]. Плавиковый шпат, именем которого назван сбор «Жонш-5», использовался в народной медицине для «обогащения и усмирения» и его называли «питанием костей и царем камней» [2,3]. Перелом кости и его полное страстание является сложным процессом, требующим пространства и времени, и представляется, что сбор «Жонш-5» в этом процессе может играть роль противоспалительного, болеутоляющего, минерализирующего и антиоксидантного средства.
Цель исследования: уточнить влияние применения сбора «Жонш-5» в консолидации костей после переломов.
Материалы и методы
В исследовании использовано 28 крыс породы Вистар (возраст 12 недель) мужского пола, массой 250-300
г. Все оперативные процедуры проводились под наркозом, в обычных стерильных условиях. Крысы были анестезированы вдыханием изофлюренной маски и введением в брюшную полость смеси кетамина (100 мг/мл , 80 мг/кг) и залайзина (12 мг/кг).
Эксперименты выполнялись с соблюдением принципов гуманного обращения с экспериментальными животными в соответствии с «Правилами по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных целей» (Европейская конвенция, Страсбург, 1986) и «Правилами лабораторной практики» (Приказ Минздравсоцразвития РФ №708н от 23.08.2010 г.). Содержание, уход и кормление животных регламентировались санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально — биологических клиник (вивариев). Умерщвление животных проводилось методом декапитации в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденными приказом Минздрава СССР от 12.08.1977 г.
После анестезии удалялась шерсть на правой задней конечности крысы, кожа дезинфецировалась, делалось рассечение в области коленной чашечки, обнажалась эпифизная часть, затем в полость бедренной кости с помощью электрической дрели вводилась спица Криш-нера. Рана была дезинфицирована и сшита ниткой 5,0. После внутриполостного крепления, большеберцовая кость была подвергнута поперечному закрытому перелому методом Bonnarens & Einhorn (1984) [6]. После чего локализация спицы и вид перелома фиксировались на рентгенограмме в прямой и боковой проекциях.
Все крысы с переломами были разделены случайно на три группы в каждую из которых вошло по 8 крыс. Крыс 1 группы кормили их обычной пищей, им не давали никакие лекарства (контрольная группа). Крысам
Таблица 1
Показатели рентгеновских снимков, характеризующих площадь костной мозоли
Сроки измерений Группы Число n Среднее Стандартное отклюнение Р — оценка
14 дней Контрольная группа 8 7,46 0,92 *0,084
Группа, получавшая никомед кальция 8 6,63 0,34 **0,055
Группа, получавшая «Жонш-5» 8 13,60 1,67
28 дней Контрольная группа 8 14,68 0,83 *0,005
Группа, получавшая никомед кальция 8 13,90 2,6 **0,002
Группа, получавшая «Жонш-5» 8 19,75 1,89
42 дня Контрольная группа 8 42,05 0,36 *0,0001
Группа, получавшая никомед кальция 8 38,96 0,87 **0,0001
Группа получавшая «Жонш-5» 8 26,19 0,97
*Сравнение группы, получавшей «Жонш-5», с контрольной группой.
**Сравнение группы, получавшей «Жонш-5», с группой, получавшей никомед кальция.
2 группы ежедневно давали лекарственный препарат никомед кальция в дозе 0,6 мг. Крысам 3 группы назначали сбор «Жонш-5» в дозе 1,3 г, как добавку к пище. Все экспериментальные исследования были проведены с соблюдением этических правил по отношению к подопытным животным.
Контрольные рентгенограммы в прямой и боковой проекциях выполнялись через 14, 28, 42 и 56 дней. Засекреченные снимки каждой крысы изучались по отдельности двумя специалистами по рентгенографии. Сращение перелома оценивалось в баллах по методу
S.J.Warden и соавт. [20].
При обработке результатов крысы были подобраны секретно и случайно, так же была проведена и рентгенологическая оценка. При обработке количественной информации был использован метод однофакторово-го дисперсионного анализа (One way ANOVA) с сопоставлением независимых групп. Баллы рентгенографии были обработаны с помощью теста Bonferroni. Рассчитывались средние показатели количественной информации и стандартного отклонения. Статистическое различие было определено в пределах 95% (CI-95%) достоверности. Статистическая обработка была проведени с использаванием программы SPSS 17.0
Результаты и обсуждение
На 2,4,6,8-й неделе после оперативного перелома, случайно выбирали по 8 крыс из каждой группы, измеряли длину и ширину мостика сращения (мм/см2). При сравнении групп получены следующие результаты (табл. 1). Площадь костной мозоли у группы, получавшей «Жонш-5», через 14 и 28 дней оказалась статистически значимо большей, по сравнению с двумя другими группами животных.
Измерение площади мозоли на 42-й день после перелома у группы, получавшей «Жонш-5», показало, что костная мозоль статистически значимо (p<0,0001) уменьшилась, по сравнению с двумя другими группами животных (рис.1).
Исследование проводилось нами в течение 56 суток со дня перелома. К этому моменту произошла консоли-
дация перелома у животных всех групп, в связи с чем, измерение площди костной мозоли во всех группах животных стало невозможным (рис.2). На представленных снимках видно, что костные мозоли слились с основной тканью, исчезли длина и ширина мостика мозоли, костная ткань приобрела нормальный вид.
При оценке сращения перелома в баллах по методу 8.1^аЫеп и соавт. выявлено, что у группы животных, получавших сбор «Жонш-5», образование костной мозоли начинало ускоряться с 14-го дня, а на 28-й и 42-й дни оно было статистически значимо большим, чем у животных двух других групп (рис. 3). На 56-й день переломы у животных всех групп срастались и оценка этого процесса достигла 4 баллов, что не оставило возможности для сравнения между группами (рис.2).
Известно, что для ускорения образования костной мозоли при переломах, исследователи прилагают много усилий для разработки новых и оценки эффективности известных лечебных методов. Одним из таких методов является применение сбора «Жонш-5», эффективность которого подтверждается рентгенлогическими исследованиями. Существуют несколько способов создания перелома у подопытных животных. Нами выбран метод Боппагеш&ЕтЬогп, по которому создавалась модель закрытого перелома у подопытных крыс и производилось внутреннее крепление через полость бедренной кости. Данный метод отличается тем, что при его применении повреждение мягкой ткани бывает минимальным и у всех животных образовывается однотипный перелом.
Для оценки результатов применения сбора «Жонш-5», помимо контрольной группы, нами использована группа сравнения, в которую вошли животные, получавшие никомед кальция. Выбор этой группы обусловлен тем, что в составе сбора «Жонш-5» содержание кальция достигает 46% (результат не опубликован). По методу ^.Нип [11] ежедневная доза кальция для крыс контрольной и сравнительной групп предполагалась быть равной (никомед кальция входил в состав пищи животных).
Главным методом оценки интенсивности мозолео-бразования была рентгенграфия, преимуществом которой является возможность непосредственного контроля длины и ширины мостика мозоли, линии сращения перелома. Наше исследование показало, что у группы животных, получавших сбор «Жонш-5», на 14-й и 28-й дни после перелома размер мозоли увеличивался быстрее, по сравнению с двумя другими группами, а на 42-й день снижался (табл.1). Известно, процесс сращения переломов костей делится на стадии воспаления, хрящеобразования, окостенения и возобновления [12].
Результаты оценки образования костной мозоли к 42-му дню у группы, получавшей «Жонш-5», показывают, что стадия образования мозоли переходила от стадии окостенения в стадию возобновления, в области перелома образовывались ткани ламиляр-ной кости, о чем свидетельствовало уменьшение размера мостика в области перелома. На 56-й день после перелома, у группы, получавшей сбор «Жонш-5», площадь мозоли становилась немозможной для измерения, вследствие того, что течение сращения уже перешло в стадию возобновления. В группе животных, получавших никомед кальция, не выявлено заметных различий в отношении
Рис. 1. Рентгеновские снимки (прямая проекция) на 42-й день после перелома в трех исследуемых группах.
плошади костной мозоли, по сравнению с контрольной группой. Судя по материалам исследований, изучавших воздействие кальция на консолидацию переломов костей, это вешество на ранней стадии мозолеобразова-ния накапливается в ней, за счет мобилизации из скелетных структур и из поступающего с пищей [13,17]. Было установлено, что кальций, поступающий с пищей, играет важную роль только на поздней стадии процесса сращения перелома, что подтверждается и результатами наших исследований для группы крыс, получавших никомед кальция (рис.1-3).
Кол рог (по* Жаш Копров Кыъчт Жо»«лї Юхт роп larvjtn
Рис. 3. Результаты оценки снимок методом 8.1.ШагсЗеп и соавт. (2009)
Из нескольких рентгенологических имеющихся методов оценки сращения мы выбрали метод 8.1^аЫеп и соавт. Результаты исследования показали, что у группы, получавшей сбор «Жонш-5», с 14-го, на 28-й, 42-й дни сращение перелома было более быстрым, по сравнению с другими группами (рис. 3). В исследованиях по изучению сроков сращения у крыс показано, что к 14-му дню сращения костная мозоль имеет зачаточной вид без образования мостика [9,15]. По классификации
V.M. Goldberg и соавт., [8] это является I степенью, а по оценке S.J. Warden и соавт., входит в первую группу оценок. Результаты этих исследований совпадают с нашими. К этому сроку у группы животных, получавших сбор «Жонш-5», уже образовывалось начальное сращение и мостик, что свидельствует о том, что эприменяемый сбор ускоряет сращение (рис.3). На 28-ые сутки исследования сращение находится на начальной стадии, а мостик уже образовывается [9,10,15]. Это данные совпадают с результатами наших исследований. У группы животных, получавших сбор «Жонш-5», на 28-ые сутки линия сращения становилась нечеткой, что свидетельствовало о сращении перелома.
В последние годы в различных странах применяют различные факторы роста, ускоряющие сращение перелома. Например, в исследовании G. Schmidmaier, спицу Кришнера покрывали смесью TGF-ß1 и IGF-1, в результате чего на 42-ые сутки после операции у 90% крыс образовывались мостики, в тоже время как у крыс с обыкновенным креплением только у 30% образовывались мостики [19]. Takeshi Makino и другие исследователи так же давали таким крысам подобные белки и обнаруживали, что на 42-е и 5б-е сутки у этой группы крыс переломы зарастали на 100% [19]. В нашем исследовании у группы, получавшей «Жонш-5», на 42-й день посли операций образовывался мостик а, на 56-й день мостик стал невидимым и перелом полностью зарастал (табл. 1, рис. 2). Это совпадает с результатами тех исследований, в которых применялся фактор роста, что является свидетельством того, что «Жонш-5» заметно ускоряет сращение перелома. Следует учесть, что сращение перелома на рентгеновских снимках не говорит о полном структурном его заращении. На рентгеновских снимках и у человека и у подопытных животных признаки полного сращения перелома наблюдается значительно раньше чем при гистологических исследованиях [7, 20].
Таким образом, результаты проведенного исследования позволяют утверждать, что целительные компоненты, входяшие в состав сбора «Жонш-5», обладают противоспалительным, болеутоляющим, минерализирующим и активизирующим остеобласт действиями, предполагается, что высокая эффективность данного сбора в отношении сращения переломов костей, может быть обусловлена антиоксидантными свойствами, входящих в него растительных компонентов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Даваху Г. Исследование по фитохимической и биологической активности Чертополоха курчавого (Carduus crispus): Монография на соискание докторской степени и по образованию. — Улан-Батор, 2011. — 68 с.
2. Дарма марамба Лувсанчойрог. Альманах древней классической литературы монгольской медицины. — Хухэ-Хото, 2002. — 386 с.
3. Дашпунцаг. Перевор Сараннадам. Священные хрустальные четки лекарственных средств. — Улан-Хад, 1980. — 810 с.
4. Stojakowska A., Kedzia B., Kisiel W. Antimicrobial activity of 10-isobutyryloxy-8,9-epoxythymol isobutyrate // Fitoterapia — 2005. — Vol.76. — P.687-690.
5. Da Mi Jeong, Hyun Ah Jung, Jae Sue Choi. Comparative Antioxidant Activity and HPLC Profiles of Some Selected Korean Thistles // Archives of Pharma^l. Research. — 2008. — Vol.31(1). — P. 28-33.
6. Einhorn T.A. Production of a standard closed fracture in laboratory animal bone // J. Orthop. Res. — 1984. — Vol.2. — P. 97-101.
7. Frost H.M. The biology of fracture healing: an overview for clinicians // Clin. Orthop. — 1988. — Vol.248. — P. 283-309.
8. Goldberg V.M., Powel A., Shaffer J.W., et al. Bone grafting: role of histocompatibility in transplantation // J. Orthop. Res. — 1985. — Vol.3. — P. 389-404.
9. Voggenreiter G., Siozos P., Hunkemoller E., et al. Immunosuppresion with FK506 has no influence on fracture healing in the rat // Bone. — 2005. — Vol.37. — P. 227-233.
10. Huddleston P.M., Steckelberg J.M., Hanssen A.D., et al. Ciprofloxacin Inhibition of Experimental Fracture — Healing // Journal of Bone and Joint Surgery. — 2000. — Vol.82.A. — P. 161-173.
11. Hunt J.R., Hunt C.D., Zito C.A., et al. Calcium requirements of growing rats based on bone mass, structure or biomechanical strength are similar // Journal ofNutrition. — 2008. — Vol.138(8). — P.1462-1468.
12. McKibbin B. The biology of fracture healing on long bone // Journal of Bone and Joint Surgery. — 1978. — Vol. 60-B. — P. 150-162.
13. Key J.A., Odell R.T. Failure excess mineral in diet to accelerate the healing of experimental fractures // Journal of Bone and Joint Surgery. — 1955. — Vol.37A. — P. 37.
14. Li K., Diao Yu., Zhang H., et al. Tannin extracts from immature fruits of Terminalia chebula Fructus Retz. Promote cutaneous wound healing in rats. // BMC Complementary & Alternative Medicine. — 2011. — Vol. 11 (86). — P.
15. Oguz C., Ediz T., Kamil Cagri K., Yasemin B., Cahit B. Effect of strontium ranelate on fracture healing in rat tibia // Joint bone spine. — 2007. — Vol.74. — P. 590-593.
16. Qin L., Zhang G., Shi Y.Y., et al. Prevention and treatment of osteoporosis with traditional herbal medicine //. Current topics of
osteoporosis / Ed. H.W. Deng. — Hackensack, NJ: World Scientific Publisher. — 2005. — P. 513-531.
17. Singh L.M., Della Rosa R.J., Dumphy J.E. Mobilization of calcium in fractured bones in rats // Surg. Gynecol. Obstet. — 1963. — Vol. 126(2). — P.243-248.
18. Scmimmaier G., Widelmann B., Ostapowicz D., et al. Long term effects of local growth factor (IGF-I and TGF-p1) treatment on fracture healing A safety study for using growth factors // Journal of Orthopaedic Research. — 2004. — Vol.22. — P. 514-519.
19. Kokubu T., Hak D.J., Hazelwood S.J., Reddi A.H.
Development of an atrophic nonunion model and comparison to a closed healing fracture in rat femur // Journal of Orthopaedic Research. — 2003. — Vol. 21. — P. 503-510.
20. Warden S.J., Komatsu D.E., Redberg J., et al. Recombinant human parathyroid hormone (PTH1-43) and low intensity pulsed ultrasound have contrasting additive effects during fracture healing // Bone. — 2009. — Vol.44. — P.485-494.
21. Zhang R., Liu Z.G., Li C., et al. Du-Zhong (Eucomia ulmoides Oliver) cortex extract prevent OVX-induced osteoporosis in rats // Bone. — 2009. — Vol.45. — P. 553-559.
Информация об авторах: Ариунжаргал Нямсгрэн — преподаватель, докторант Восточно-Гобийского Филиала Университета Науки Здоровья Монголии, адрес: 1 баг, Сайншанд сум, Дорногоби аймаг, Монголия, e-mail: [email protected]; Сэсрэгдорж Сурэнжид — профессор, д.м.н.;
Барху Доржнамжим — врач лучевой диагностики.
© БУИНОВ М.В., ГОРЯЧКИНА Е.Г., ФЕДОСЕЕВА Г.М. — 2013 УДК: 615.322
ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ФЛАВОНОИДОВ ЗОЛОТАРНИКА ДАУРСКОГО
Максим Владимирович Буинов, Елена Геннадьевна Горячкина, Галина Михайловна Федосеева (Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармакогнозии и ботаники, зав. — д.ф.н. В.М. Мирович)
Резюме. В работе отражены результаты выделения и идентификации флавоноидов, содержащихся в надземной части золотарника даурского. Представлены результаты хроматографического исследования — бумажной и колоночной, а также ИК- и УФ-спектральные характеристики выделенных индивидуальных флавоноидов. Результаты исследования показали, что в надземной части золотарника даурского присутствуют флавоноиды как в виде агли-конов так и в виде гликозидов. Причём гликозиды являются производными кверцетина и лютеолина.
Ключевые слова: выделение флавоноидов, идентификация флавоноидов, золотарник даурский.
ISOLATION AND IDENTIFICATION OF THE FLAVONOIDS OF SOLIDAGO DAURICA
M.V. Buinov, E.G. Goryachkina, G.M. Fedoseeva (Irkutsk State Medical University)
Summary. In the work the results of selection and identification of the flavonoids, contained in the ground part of Solidago daurica are disscussed. The results of chromatographic research — paper and columnar, and also IK and UF-spectral characteristics of extracted individual flavonoids are presented. The results of research showed that in the ground part of Solidago daurica are present flavonoids both in the form of aglycons and in the form of glycosides. And glycosides are derivants of Quercetinum and Luteolinum.
Key words: Selection of flavonoids, identification of flavonoids , Solidago daurica.
Золотарник даурский (Solidago daurica) представитель семейства астровых (сложноцветных), широко распространён на территории Восточной Сибири. Траву золотарника даурского применяют в народной медицине в качестве эффективного мочегонного, камневыводящего и противовоспалительного средства. В офици-нальной медицине используется золотарник канадский, произрастающий в западной части нашей страны и в зарубежных странах. Хемотаксономический принцип позволяет предположить наличие сходных химических и фармакологических показателей этих двух видов золотарников.
Цель работы: выделить и идентифицировать фла-воноиды надземной части золотарника даурского как основные биологически активные вещества данного растения.
Материалы и методы
Образцы сырья — надземная часть золотарника даурского (Solidago daurica — были собрана в период цветения в районе деревни Большое Голоустное, Пиво-вариха, Оёк и Горячие Ключи (Иркутская область). Для идентификации использовали инфракрасные (ИК) и ультрафиолетовые (УФ) спектры поглощения выделенных веществ [2, 3, 5].
Для извлечения и очистки флавоноидов измельчённое сырьё (размер частиц 2-3 мм) помещали в колбу и
заливали 70% этанолом до зеркала. Извлечение проводили на водяной бане с обратным холодильником до полного истощения сырья. Объединённый экстракт в вакуум-роторном испарители освобождали от спирта и сгущали до небольшого объёма и фильтровали. Фильтрат переносили в делительную воронку и подвергали очистке от пигментов и смол при помощи хлороформа, далее — от дубильных веществ путём осаждения последних желатином (5% раствор желатина на изотоническом растворе). Сухой остаток хлороформной фракции, после отгонки отработанного хлороформа, проверяли на присутствие изучаемых биологически активных веществ (флавоноидов) методом бумажной хроматографии. Данных веществ на хроматограммах не обнаружено. Водную фракцию (содержащую сумму флавоноидов и фенолкарбоновых кислот) подвергали дополнительному упариванию под вакуумом и использовали для непосредственного разделения и идентификации методами бумажной и адсорбционной колоночной хроматографии (на колонке с полиамидным адсорбентом) [1].
Для проведения бумажно- хроматографического исследования: брали 5,0 г сырья, очищенное водное извлечение упаривали почти досуха, а затем разбавляли этанолом и хроматографировали. Разделение суммы флавоноидов (ФЛ) и фенолкарбоновых кислот (ФКК) проводили с помощью одномерной и двумерной бумажной хроматографии восходящим способом в системах
