CC BY
4
Поскольку ЦПВ-1 и СД-3 являются производными п-фе-нилендиамина, обладающего выраженными сенсибилизирующими свойствами, нами было поставлено несколько серий опытов на морских свинках с целью изучения возможного аллергенного действия этих веществ.
В кожу, наружной поверхности уха морской свинки однократно вводили 0,02 мл раствора ЦПВ-1 и СД-3 в дозе 0,5 мг/кг. На 10-е сутки после однократного введения ве-f ществ дополнительно проводили 7 эгшкутанных аппликаций " этими веществами в концентрациях 0,5; 0,05 и 0,005 мг/л. Всего использовали 7 групп животных, по 6 животных в каждой. Через день после последней аппликации у животных брали кровь и определяли уровень гистамина, процент лизиса эритроцитов и лейкоцитов. Результаты проведенных исследований показали, что при накожном и внутрикожном действии ЦПВ-1 и СД-3 сенсибилизирующим свойством не обладают.
Помимо этого, мы изучали возможное аллергенное действие ЦПВ-1 в условиях хронического 6-месячного опыта. Степень сенсибилизации организма оценивали по результатам реакций бляшкообразования Ерне, специфической агломерации и лизиса лейкоцитов, уровню гистамина в крови. Установлено, что при длительном введении в организм только доза ЦПВ-1, равная 0,6 мг/кг (12 мг/л), оказывала слабое сенсибилизирующее действие, выражавшееся в увеличении процента лизиса лейкоцитов и количества бляш-кообразующих антител.
Сравнение полученных пороговых концентраций по орга-
УДК 615.285.42.099+614.777:615.285.42.099
É
Новый комбинированный хлорорганический акарицид митран используется в сельском хозяйстве в качестве эффективного средства для борьбы с различными видами паутинных клещей. Рекомендован для применения на хлопчатнике, цитрусовых, виноградной лозе, яблонях.
Митран выпускается в виде 50 % смачивающегося порошка. Состоит из двух активных ингредиентов: п-хлорфе-ннл-п-хлорбензол-сулфоната (ХФХБС) и 1,1-бис(п-хлорфе-ннл)-этанола (БХФЭ).
Первое соединение представляет собой белые кристаллы с температурой плавления 86,5 °С, нерастворимое в воде, •I растворимое в ацетоне, бензоле, нестабильное к действию сильных щелочен. Второе соединение — бесцветные кристаллы с температурой плавления 69,5—70 °С, нерастворимое в воде, но растворимое в большинстве органических растворителей, устойчивое к действию щелочей, но разрушается сильными кислотами.
Целью настоящей работы явилось токсиколого-гигиени-ческое обоснование допустимой суточной дозы (ДСД) мит-рана для человека и гигиеническое нормирование в воде водоемов и продуктах питания.
В токсикологическом эксперименте изучалось влияние митрана на организм лабораторных животных в остром, подостром и хроническом опытах. В результате эксперимента установлено, что Ь05о для крыс-самцов составляет 5,2+1,3 г/кг, для крыс-самок — 4,6±1,5 г/кг, для мышей-самцов — 2,5+0,67 г/кг, самок — 2,0+0,9 г/кг.
Подобно другим хлорорганическим пестицидам, митран в больших дозах оказывает нейротропное действие. У животных, которым была введена наибольшая доза митрана щ (8 и 4 г/кг для крыс и мышей соответственно), отмечались симптомы острого отравления, свидетельствующие о действии препарата на различные отделы центральной и вегетативной нервной системы (нарушение ритма и частоты дыха-
нолептическому, общесанитарному, санитарно-токсикологи-ческому признакам вредности изученных веществ позволило рекомендовать в качестве ПДК ЦПВ-1 и СД-3 0,1 мг/л. Лимитирующий признак вредности — санитарно-токсиколо-гический.
Литература
1. Василенко N. М., Звездой В. И. // Фармакол. и токси-кол. — 1972, — № 1, — С. 108—110.
2. Величко Г. В., Денисова II. Е„ Макареня A. A./J Техника кино и телевидение.— 1979. — № 1. — С. 23—28.
3. Жаков 10. А. // Санитарная охрана водоемов от загрязнения промышленными сточными водами. — М., 1960.— Вып. 4. — С. 230—247.
4. Иличкина А. Г., Кириченко В. В., ,Бать Н. И. // Гиг. и сан.— 1974, —№ 9. —С. 100—101.
5. Саноцкий И. В., Фоменко В. Н. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм. — М., 197Э _С 96_125
6. Штабский Б. М. //Гиг. и сан. — 1973. — № 8, —С. 24— 27.
7. Environmental Effect of Photographic Chemicals. — New York, 1974, —Vol. 1—2.
8. Imada K.Jshihara Y„ Nishio O.//Toxicol. Lett. — 1983.— Vol. 16. —P. 259—269.
Поступила 05.02.86
ния, гиперсаливация, тремор головы, нарушение координации движений, малая подвижность). Гибель животных наступала в первые 3 дня опыта.
Кумулятивные свойства митрана изучались в условиях подострого опыта на белых крысах и мышах обоего пола, получавших препарат в течение 2 мес в дозе, равной Vio LD-50. За время эксперимента гибели животных и признаков отравления не было (КкУм>5). Подопытные животные по поведению и внешнему виду не отличались от контрольных. Состояние организма крыс оценивали по изменению ряда показателей: динамики массы тела, содержания гемоглобина, числа эритроцитов, лейкоцитов, ретикулоцитов, сумма-ционно-порогового показателя (СПП), скорости распространения нервного импульса по хвостовому нерву, диуреза, количества белка, хлоридов, аскорбиновой кислоты в моче, содержания мочевины в моче и сыворотке крови, активности холннэстеразы в плазме крови, эритроцитах, печени, мозге, количества белка, активности щелочной фосфатазы, аланин- и аспартатаминотрансферазы (АЛТ, ACT) в сыворотке крови. Изучалось влияние митрана на активность мо-нооксигеназной гидроксилирующей системы (МОГС) печени по деметилированию амидопирина, гидроксилированию анилина, изменению количества цитохрома Р-450 методом электронного парамагнитного резонанса в условиях низкотемпературной стабилизации жидким азотом, переписное окисление липидов (ПОЛ) по малоиовому диальдегиду.
В течение эксперимента различий в массе тела подопытных и контрольных животных не отмечалось. При исследовании морфологического состава периферической крови белых крыс выявлены только некоторые отклонения со стороны содержания лейкоцитов. Оно было повышено у крыс-самок, начиная со 2-й недели затравки (в опыте 18,76+ 1,47 г/л, в контроле 14,68=Ь1,04 г/л), и снижено в конце 1-го месяца (в опыте 12,57+0,76 г/л, в контроле 16,11±1,03 г/л). Как у самцов, так и у самок опытных групп отмечалось
Т. А. Зейналова
ТОКСИКОЛОГИЯ НОВОГО АКАРИЦИДА МИТРАНА И ЕГО КОМПЛЕКСНОЕ ГИГИЕНИЧЕСКОЕ НОРМИРОВАНИЕ В ВОДЕ ВОДОЕМОВ И ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ
ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимеров и пластических масс, Киев
Изменение некоторых показателей при хроническом воздействии митрана, Af±m
Срок исследования, мес Условия опыта Деметнлнрование амидопирина, нмоль на 1 мг белка в час Гидрокснлирование анилина, нмоль на I мг белка в час Содержание цитохрома Р = 450, отн. ед. ПОЛ. нмоль на 1 мг белка п час
0,5 Контроль 1/100Ö LD50 1/100 LD50 1/10 LD50 13,82±1,80 12,20+1,38 23,40±2,44* 31,40±2,02* 7,86±0,68 12,20±0,96* 14,20+1,92* 14,60+1,40* 32,75±1,42 39,50±1,86* 47,58±2,57* 1 ,23±0,18 1,08±0,48 1,54±0,16 2,25±0,12*
1 Контроль 1/1000 LD60 1/100 LD50 1/100 LD50 10,60±1,06 11,60+0,64 13,84±0,82* 15,80±1,00* 7,00+0,28 7,20±0,42 8,80+0,60* 11,80±1,40* 28,25+1,24 35,92+1,68* 34,17+2,30* 46,50±3,99* 1,47±0,11 1,33+0,05 1,74±0,06* 2,09+0,15*
2 Контроль 1/1000 LD50 1/100 LD50 1/10 LD50 10,70+1,32* 19,34±2,44* 23,20+2,52* 15,60±0,68* 7,20±-1 ,42 8,40±0,46 13,26+0,74* 8,68+0,26* 19,67±1,06 37,30±2,57* 41,90±3,19* 30,80+2,10* 1,05±0,11 1,29±0,05 2,02±0,13* 1,95±0,14*
6 Контроль 1/1000 LD50 1/100 LD50 8,00±1,10 8,20±0,70 13,60+3,08* 4,40±0,60 6,40±0,68* 6,20+0,60* 30,58 =h 1,51 31,17±1,51 54,50±2,84* 1,49+0,14 1,25+0,18 2,58±0,26*
9 Контроль 1/1000 LD50 1/100 LD50 13,60±1,78 12,20±0,74 14,20+1,60 7,40+1,28 6,80±0,36 7,80±0,64 31,80±0,08 34,25±2,13 54,30+2,30* 1,31 ±0,13 1,16±0,11 1,20±0,10
Примечание. Звездочка—статистически достоверные изменения при Р^0,05.
снижение активности щелочной фосфатазы и угнетение активности холинэстеразы плазмы крови. Через 2 нед после начала введения препарата активность холинэстеразы плазмы крови подопытных животных была снижена на 24,3 %. Выявлено увеличение содержания мочевины в сыворотке крови на 39,4 % по сравнению с контролем. Спустя 1 мес после начала подострого эксперимента отмечалось увеличение содержания мочевины на 27,1 % у животных опытных групп, уменьшение количества белка в сыворотке крови на 13,4 %■ При воздействии митрана в дозе '/ю ЬО50 через 2 нед. 1 и 2 мес выявлены статистически достоверные изменения в показателях МОГС печени, выражающиеся в ускорении процессов деметилирования, гндрокснлировання, увеличении количества нитохрома Р-450 по отношению к контролю. Одновременно отмечено значительное увеличение ПОЛ. Изменения скорости распространения нервного импульса по хвостовому нерву и СПП не наблюдалось. Через 1 мес затравки выявлено увеличение коэффициента массы печени.
Местно-раздражающее и кожно-резорбтивное действие изучалось при однократном и повторном нанесеннн на кожу животных суспензии митрана. Наблюдения показали, что ни однократное (2 и 1,5 г/кг для крыс и мышей соответственно), ни многократное (суммарно 5 и 2,5 г/кг для крыс и мышей соответственно) воздействие суспензии митрана на кожу животных не оказывало заметного раздражающего и общерезорбтивного действия. Изучение влияния суспензии митрана на слизистые оболочки глаз кроликов показало, что 2 % суспензия митрана вызывала слабое их раздражение, меньшие концентрации (0,-2 %) эффекта не оказывали. Сенсибилизирующего действия митрана при эпикутанном воздействии на морских свинок-альбиносов не выявлено.
При проведении хронического санитарно-токсикологиче-ского эксперимента крысам перорально вводили дозы митрана, равные 46мг/кг ('/юо ЬЭэо) и 4,6 мг/кг ('/юо Ь05о). Массу тела у животных определяли каждые 10 дней. Через 2 нед, 1, 2, 6, 9 мес после начала наблюдения исследовали показатели, изученные в подостром эксперименте.
При введении митрана в дозе 46 мг/кг у подопытных животных выявлено увеличение выделения с мочой аскорбиновой кислоты на протяжении всего опыта. Так, выделение аскорбиновой кислоты увеличивалось на 72,6, 49,4, 191,1, 179,5, 52,5 % по сравнению с контролем соответственно через 0, 5. 1, 2, 6, 9 мес. Отмечено статистически достоверное увеличение активности АЛТ через 1 мес. Через 2 мес опыта выявлено увеличение активности АЛТ на 52.8 %, a ACT на 35,7 %. При определении коэффициента массы внутренних органов установлено увеличение коэффициента массы печени через 1, 6 и 9 мес. При изучении влияния митрана на изменение активности МОГС печени белых крыс при хроническом воздействии выявлено, что митран в дозе Vioo LD50 является индуктором МОГС; это выражается в ускорении процессов деметилирования, гидроксилнрова-ния, увеличении количества цитохрома Р-450 на протяжении всего эксперимента. Одновременно отмечается усиление ПОЛ с 1-го по 6-й месяц. У животных, которым вводили митран в дозе 4,6 мг/кг, в течение эксперимента обнаружены единичные колебания показателей МОГС печени. ПОЛ по отношению к контролю не изменялось (см. таблицу).
Для определения подпороговой дозы были использованы показатели МОГС и ПОЛ, являющиеся наиболее чувствительными в реакции организма на введение митрана. Анализ данных, полученных при изучении хронического воздействия малых доз митрана, показал, что доза 46 мг/кг {'/юо LD50) является пороговой для крыс в хроническом опыте, а доза 4,6 мг/кг ('/юоо LD5o) — подпороговой. По данным проведенных исследований был выбран коэффициент запаса 100 и рассчитана ДСД для человека 0,05 мг/кг, или 2,3 мг/сут.
Чтобы определить ПДК митрана в воде водоемов, изучали его влияние на органолептическне свойства воды (запах, привкус), в том числе и при хлорировании, окраску ее, пенообразованне, общий санитарный режим водоемов (биохимическое потребление кислорода, аммиак, нитриты, нитраты, растворенный кислород, пермангаиатная окисляе-мость. активная реакция воды), интенсивность развития водной сапрофитной микрофлоры. В качестве пороговой по
влиянию на санитарный режим водоемов может быть принята концентрация 0,6 мг/л. В этих условиях количество мнтрана, которое может поступить в организм человека с водой, не превысит 1,89 мг/сут. Определение митрана в воде проводят газохроматографическим методом, чувствительность метода: ХФХБС 0,001 мг/л, БХФЭ 0,02 мг/л) или методом тонкослойной хроматографии (чувствительность метода: оба компонента — 0,003 мг/л). В пробе воды оба компонента определяются одновременно.
Для определения максимально допустимого уровня (МДУ) в продуктах питания использованы данные о фактическом содержании в них остатков пестицида. Определение остаточных количеств митрана проводилось методом газожидкостной хроматографии. Норма расхода препарата при
обработке фруктов 3 кг/га. Отбор проб осуществлялся на 1, 3, 9, 16, 22, 30 и 40-е сутки. Обработка яблок проводилась однократно, двукратно и четырехкратно, а цитрусовых— двукратно. Максимальное содержание митрана в яблоках следующее: БХФЭ 1,99 мг/кг, ХФХБС 0,16 мг/кг. При изучении цитрусовых отмечено, что в лимонах остаточных количеств митрана не содержалось, в апельсинах БХФЭ не обнаружен, а ХФХБС найден в количестве 0,001 мг/кг. С учетом суточного потребления яблок (400 г) количество митрана, которое можег поступить с этим видом продуктов, не превысит 0,86 мг/сут.
Рекомендуемый МДУ митрана для яблок 2 мг/кг, а для цитрусовых (лимоны, апельсины) 0,001 мг/кг. Поступила 18.03.86
УДК 614.777:579.841.111-078
Л. В. Алтон
ВЛИЯНИЕ ЗАГРЯЗНЕНИЯ МОРСКОЙ И РЕЧНОЙ ВОДЫ ПРОДУКТАМИ ДИЗЕЛЬНЫХ ТОПЛИВ НА РАЗВИТИЕ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ БАКТЕРИЙ
Институт экспериментальной биологии АН Эстонской ССР, Таллин
Важное место в загрязнении открытых водоемов занимают нефть и нефтепродукты, среди которых дизельное топливо (ДТ) считается одним из наиболее вредных по . своему действию на экосистемы воды. Основными де-Ь структорамн нефти и некоторых ее продуктов являются отдельные виды бактерий, способные употреблять их з качестве источника углерода [3—6, 8, 11, 13, 15]. По мнению ряда авторов [7, 9, 10, 12, 14, 16], бактерии рода Pseudomonas играют активную роль в очищении соленых водоемов от нефтяных загрязнений.
Задача данной работы — изучение способности Proteus vulgaris и некоторых видов рода Pseudomonas развиваться в средах, содержащих ДТ, а также продолжительности выживаемости Proteus vulgaris и отдельных видов Pseudomonas при разных температурах морской и речной воды, загрязненной ДТ.
Объектами исследования служили Pseudomonas aeruginosa, Ps. fluorescens, Ps. denitrificans и Proleus vulgaris, культуры которых были получены из Тартуского университета и Эстонского НИИ животноводства и ветеринарии. Перед началом экспериментов бактерии выдерживали около 1 года при разных температурах в морской и речной воде [1, 2].
Способность к развитию Proteus vulgaris и изучаемых видов Pseudomonas определяли на мясопептонном агаре Щ (МПА) и на агаризованной морской (МА) и речной (РА) воде при добавлении в них ДТ в количестве 10, 17 и 33 мл на каждые 50 мл среды, а также на синтетической среде, в состав которой входили: КН4ЫОз—1,0 г/л, К2НРО< — 1,0 г/л, MgSO., — 0,2 г/л, СаС12 — 0,02 г/л, FeCI2 — 2 капли концентрированного раствора [2]. В среду добавляли 0,5 мл ДТ и разделяли ее на две части, в одну из которых добавили 18 г/л NaCI и 2 % агар-агара, а в другую — только 2 % агар-агара. Обе части приготовленной среды стерилизовали при 0,5 атм. Proteus vulgaris и отдельные виды Pseudomonas (5 штаммов каждого вида), предварительно выращенные на МПА при 18—20°С в течение 5 сут, были высеяны на всех перечисленных средах (каждый вид отдельно на каждой среде), Посевы инкубировали при температурах 18—20, 4—6 и 0,2 "С. Необходимые сроки инкубирования посевов при разных условиях среды и температуры определяли экспериментально по продолжительности лаг-фазы. Для сравнения проведены посевы (без ДТ) на МПА, МА и РА и на синтетические среды. £ Исследовали способность Proteus vulgaris и видов Pseudomonas к деградированию ДТ в жидкой синтетической среде при ДТ в качестве единственного источника
углерода. Эксперименты проводили при температурах 18—20, 4—6 и 0—2°С. Бактерии вносили в пробирки со средой, не смешивая виды. Эксперименты проводили в трех повториостях на протяжении 6 мес при 18—20 °С и 1 год при 4—6 и 0—2°С. Исходная толщина слоя ДТ на поверхности среды в пробирках колебалась от 1 до 1,2 см.
Определяли выживаемость и способность к деградированию ДТ у Proteus vulgaris и бактерий рода Pseudomonas в морской и речной воде, покрытой пленкой ДТ. В экспериментах употребляли морскую воду из Таллинской бухты и воду из реки Пирита (Северная Эстония). Воду стерилизовали в автоклаве. Состав морской и речной воды был следующий: общий фосфор — 0,04 и 0,002 мг/л, ортофосфаты — 0,005 и 0,038 мг/л фосфора, нитраты — 0,39 и 0,44 мг/л азота, нитриты — 0,016 и 0,01 мг/л азота, аммиак — 0,35 и 0,40 мг/л азота, pH — 7,8 и 8,2. На каждые 100 мл воды добавляли по 15 и 30 мл ДТ. Бактерии вносили в каждую из приготовленных сред по одному виду, после чего воду с посевным материалом разливали по стерильным колбам и выдерживали в течение 1 года при температуре от 18 до 20, от 4 до 6, от 0 до 2 и от 8 до —12 °С. Толщина пленки Д'Г на поверхности воды составляла 0,5—1 мм (15 мл ДТ) и 1,5—2 мм (30 мл ДТ). Для определения выживаемости и адаптационной способности бактерий в морской и речной воде, загрязненной ДТ, проводили периодические (раз в 1—2 мес) посевы из воды на МПА с инкубированием их при 18—20 °С и на МА и РА при наличии в них 15 или 30 мл ДТ. Посевы на МА и РА инкубировали при 18—20, 4—6 или 0—2°С в зависимости от температуры воды.
Установлено, что отдельные штаммы Pr. vulgaris не способны к развитию па МА и РА. На МПА их рост определялся при 18—20 °С. Из 10 исходных штаммов при 4—6°С развились только 3 штамма. При добавлении более 5 мл ДТ рост бактерий Рг. vulgaris не отмечали. Бактерии Pr. vulgaris не развивались также на синтетической среде при единственном источнике углерода — ДТ. Все изучаемые виды Pseudomonas дали рост на МПА, МА и РА (без добавления в них ДТ) при температуре от 0 до 20 °С за исключением Ps. aeruginosa (табл. 1). При количестве ДТ 5 мл их развитие при температуре 18—20 и 4—6°С продолжалось, не определялся лишь рост Ps. fluorescens на МПА и РА. При увеличении количества ДТ способность к развитию потеряли Ps. denitrificans, а затем и Ps. fluorescens.
Время появления колоний отдельных видов рода Pseudomonas на МПА, РА и МА (продолжительность лаг-
