CC BY
3
влиянию на санитарный режим водоемов может быть примята концентрация 0,6 мг/л. В этих условиях количество мнтрана, которое может поступить в организм человека с водой, не превысит 1,89 мг/сут. Определение митрана в воде проводят газохроматографическим методом, чувствительность метода: ХФХБС 0,001 мг/л, БХФЭ 0,02 мг/л) или методом тонкослойной хроматографии (чувствительность метода: оба компонента — 0,003 мг/л). В пробе воды оба компонента определяются одновременно.
Для определения максимально допустимого уровня (МДУ) в продуктах питания использованы данные о фактическом содержании в них остатков пестицида. Определение остаточных количеств митрана проводилось методом газожидкостной хроматографии. Норма расхода препарата при
обработке фруктов 3 кг/га. Отбор проб осуществлялся на 1, 3, 9, 16, 22, 30 и 40-е сутки. Обработка яблок проводилась однократно, двукратно и четырехкратно, а цитрусовых— двукратно. Максимальное содержание митрана в яблоках следующее: БХФЭ 1,99 мг/кг, ХФХБС 0,16 мг/кг. При изучении цитрусовых отмечено, что в лимонах остаточных количеств митрана не содержалось, в апельсинах БХФЭ не обнаружен, а ХФХБС найден в количестве 0,001 мг/кг. С учетом суточного потребления яблок (400 г) количество митрана, которое можег поступить с этим видом продуктов, не превысит 0,86 мг/сут.
Рекомендуемый МДУ митрана для яблок 2 мг/кг, а для цитрусовых (лимоны, апельсины) 0,001 мг/кг.
Поступила 18.03.86
УДК 614.777:579.841.111-078
Л. В. Алтон
ВЛИЯНИЕ ЗАГРЯЗНЕНИЯ МОРСКОЙ И РЕЧНОЙ ВОДЫ ПРОДУКТАМИ ДИЗЕЛЬНЫХ ТОПЛИВ НА РАЗВИТИЕ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ БАКТЕРИЙ
Институт экспериментальной биологии АН Эстонской ССР, Таллин
Важное место в загрязнении открытых водоемов занимают нефть и нефтепродукты, среди которых дизельное топливо (ДТ) считается одним из наиболее вредных по . своему действию на экосистемы воды. Основными де-Ь структорамн нефти и некоторых ее продуктов являются отдельные виды бактерий, способные употреблять их з качестве источника углерода [3—6, 8, 11, 13, 15]. По мнению ряда авторов [7, 9, 10, 12, 14, 16], бактерии рода Pseudomonas играют активную роль в очищении соленых водоемов от нефтяных загрязнений.
Задача данной работы — изучение способности Proteus vulgaris и некоторых видов рода Pseudomonas развиваться в средах, содержащих ДТ, а также продолжительности выживаемости Proteus vulgaris и отдельных видов Pseudomonas при разных температурах морской и речной воды, загрязненной ДТ.
Объектами исследования служили Pseudomonas aeruginosa, Ps. fluorescens, Ps. denitrificans и Proteus vulgaris, культуры которых были получены из Тартуского университета и Эстонского НИИ животноводства и ветеринарии. Перед началом экспериментов бактерии выдерживали около 1 года при разных температурах в морской и речной воде [1, 2].
Способность к развитию Proteus vulgaris и изучаемых видов Pseudomonas определяли на мясопептонном агаре Щ (МПА) и на агаризованной морской (МА) и речной (РА) воде при добавлении в них ДТ в количестве 10, 17 и 33 мл на каждые 50 мл среды, а также на синтетической среде, в состав которой входили: КН4ЫОз—1,0 г/л, К2НР04 — 1,0 г/л, MgSO., — 0,2 г/л, СаС12 — 0,02 г/л, FeCI2 — 2 капли концентрированного раствора [2]. В среду добавляли 0,5 мл ДТ и разделяли ее на две части, в одну из которых добавили 18 г/л NaCI и 2 % агар-агара, а в другую — только 2 % агар-агара. Обе части приготовленной среды стерилизовали при 0,5 атм. Proteus vulgaris и отдельные виды Pseudomonas (5 штаммов каждого вида), предварительно выращенные на МПА при 18—20°С в течение 5 сут, были высеяны на всех перечисленных средах (каждый вид отдельно на каждой среде), Посевы инкубировали при температурах 18—20, 4—6 и 0,2 "С. Необходимые сроки инкубирования посевов при разных условиях среды и температуры определяли экспериментально по продолжительности лаг-фазы. Для сравнения проведены посевы (без ДТ) на МПА, МА и РА и на синтетические среды. £ Исследовали способность Proteus vulgaris и видов Pseudomonas к деградированию ДТ в жидкой синтетической среде при ДТ в качестве единственного источника
углерода. Эксперименты проводили при температурах 18—20, 4—6 и 0—2°С. Бактерии вносили в пробирки со средой, не смешивая виды. Эксперименты проводили в трех повториостях на протяжении 6 мес при 18—20 °С и 1 год при 4—6 и 0—2°С. Исходная толщина слоя ДТ на поверхности среды в пробирках колебалась от 1 до 1,2 см.
Определяли выживаемость и способность к деградированию ДТ у Proteus vulgaris и бактерий рода Pseudomonas в морской и речной воде, покрытой пленкой ДТ. В экспериментах употребляли морскую воду из Таллинской бухты и воду из реки Пирита (Северная Эстония). Воду стерилизовали в автоклаве. Состав морской и речной воды был следующий: общий фосфор — 0,04 и 0,002 мг/л, ортофосфаты — 0,005 и 0,038 мг/л фосфора, нитраты — 0,39 и 0,44 мг/л азота, нитриты — 0,016 и 0,01 мг/л азота, аммиак — 0,35 и 0,40 мг/л азота, pH — 7,8 и 8,2. На каждые 100 мл воды добавляли по 15 и 30 мл ДТ. Бактерии вносили в каждую из приготовленных сред по одному виду, после чего воду с посевным материалом разливали по стерильным колбам и выдерживали в течение 1 года при температуре от 18 до 20, от 4 до 6, от 0 до 2 и от 8 до —12 °С. Толщина пленки Д'Г на поверхности воды составляла 0,5—1 мм (15 мл ДТ) и 1,5—2 мм (30 мл ДТ). Для определения выживаемости и адаптационной способности бактерий в морской и речной воде, загрязненной ДТ, проводили периодические (раз в 1—2 мес) посевы из воды на МПА с инкубированием их при 18—20 °С и на МА и РА при наличии в них 15 или 30 мл ДТ. Посевы на МА и РА инкубировали при 18—20, 4—6 или 0—2°С в зависимости от температуры воды.
Установлено, что отдельные штаммы Pr. vulgaris не способны к развитию на МА и РА. На МПА их рост определялся при 18—20 °С. Из 10 исходных штаммов при 4—6°С развились только 3 штамма. При добавлении более 5 мл ДТ рост бактерий Рг. vulgaris не отмечали. Бактерии Pr. vulgaris не развивались также на синтетической среде при единственном источнике углерода — ДТ. Все изучаемые виды Pseudomonas дали рост на МПА, МА и РА (без добавления в них ДТ) при температуре от 0 до 20 °С за исключением Ps. aeruginosa (табл. 1). При количестве ДТ 5 мл их развитие при температуре 18—20 и 4—6°С продолжалось, не определялся лишь рост Ps. fluorescens на МПА и РА. При увеличении количества ДТ способность к развитию потеряли Ps. denitrificans, а затем и Ps. fluorescens.
Время появления колоний отдельных видов рода Pseudomonas на МПА, РА и МА (продолжительность лаг-
Количество растущих штаммов отдельных видов рода Pseudomonas на МПА и МА и РА Таблица 1 в присутствии ДТ
Вид бактерий Среда Количество ДТ. мл
0 5 10 17 33
температура инкубирования, °С
18 — 20 4 — 6 0-2 18-20 4-6 0-2 18 — 20 4 — 6 0-2 18-20 4-6 0-2 18-20 4—6 0-2 4
Ps. denitrificans 5 5 4 5 4
Ps. aeruginosa МПА 5 5 — 5 4 — 4 4 — 4 3 — 4 3 —
Ps. fluorescens 5 О 4 5 5 4 5 5 — 4 — — 3 — —
Ps. denitrificans 5 5 4 4 3
Ps. aeruginosa PA 5 5 — 5 5 — 4 3 — 4 3 — 3 3 —
Ps. fluorescens 5 5 3 5 5 4 5 4 — 4 — — 4 — —
Ps. denitrificans 5 4 4 3 3
Ps. aeruginosa МА 5 4 — 5 5 — 4 3 — 4 2 — 3 2 —
Ps, fluorescens 5 4 4 5 5 — 4 3 — 3 — — 2 — —
Примечание. Здесь и в табл. 2:—отсутствие роста.
фазы) было различным и зависело от их вида, температуры и состава среды (табл. 2). Бактерии развивались при температуре 18—20 °С быстрее, чем при более низких температурах инкубирования. При добавлении з среду ДТ сроки появления колоний бактерий на МПА, РА и МА (лаг-фазы) были больше, чем при той же среде и температуре, но без ДТ.
Следует отметить, что процессы обмена веществ у отдельных видов бактерий при крайне экстремальных условиях среды (низкая температура, иеоптимальиый состав и т. д.) могут протекать настолько медленно, что сроки инкубирования посевов, использованные в наших экспериментах (при 0—2СС — 90 сут), оказываются, с одной стороны, еще слишком короткими для выявления этих процессов, а с другой, не дают возможности с уверенностью их отрицать. На синтетической среде при ДТ в качестве единственного источника углерода развизались некоторые штаммы Ps. aeruginosa и i из 5 исходных штаммов Ps. fluorescens. Рост бактерий отмечен только при температуре 18—20 °С. На синтетических средах без добавления в них ДТ (контроль) колонии изучаемых видов бактерий не развивались, что подтверждает способность некоторых штаммов Ps. aeruginosa и Ps. fluorescens использовать ДТ в процессе метаболизма. Эта способность, очевидно, неодинакова у штаммов одного вида. При исследовании способности изучаемых видов Pseudomonas использовать ДТ в синтетической среде, в которой оно является единственным источником углерода, выяснилось, что значительное уменьшение толщины слоя ДТ произошло только в тех пробирках, куда был внесен Ps. aeruginosa, и только при температуре 18—20 °С, а незначи-
тельное уменьшение толщины слоя ДТ от 0,1 до 0,2 мм по сравнению с исходной в пробирках с Ps. fluorescens мы считали результатом испарения его через ватные пробки, которыми были закрыты пробирки.
Количество штаммов Pr. vulgaris, внесенных в морскую и речную воду, в течение опыта не увеличивалось, а, наоборот, постепенно уменьшалось. Они сохраняли жизнеспособность от 8 мес до 1 года (максимальный срок экспериментов). В воде, покрытой пленкой ДТ, сроки выживаемости Pr. vulgaris по сравнению с таковыми в воде без ДТ значительно сокращались.
Сроки выживаемости Pseudomonas в морской и речной воде, загрязненной ДТ, различались у их видов (табл. 3). Наиболее устойчивой к влиянию ДТ при различных температурах оказалась Ps. aeruginosa, штаммы которой оставались жизнеспособными более 1 года. Ps. denitrificans и Ps. fluorescens сохраняли жизнеспособность в воде, загрязненной ДТ, по сравнению с водой без ДТ в течение меньшего времени. Бактерии погибали раньше в тех колбах, толщина пленки в которых была больше, а также в морской воде по сравнению с речной водой при тех же условиях.
Периодические посевы на МА и РА при добавлении в них ДТ показали, что штаммы Pr. vulgaris и тех видов Pseudomonas, которые не развивались в присутствии ДТ в начале экспериментов, не приобрели этой способности и после более длительного выдерживания их в воде, покрытой пленкой ДТ.
Таким образом доказано, что способность к развитию Proteus vulgaris и изученных видов Pseudomonas на средах, загрязненных ДТ, а также сроки их выживаемости £
Таблица 2
Время (в сут) появления колоний некоторых видов рода Pseudomonas на МПА и МА и РА в присутствии ДТ
Вид бактерий Среда Количество ДТ, кл
0 5 10 17 33
температура инкубирования °с
18 — 20 4-6 0-2 18 — 20 4-6 0-2 18-20 4—6 0-2 18 — 20 4-6 0 — 2 18-20 4-6 0 — 2
Ps. denitrificans 3 17 55-60 3-5 17-20
Ps. aeruginosa МПА 4 17 — 4 17 — 4-5 17—20 — 4—5 17-20 — 4-5 20—22 _
Ps. fluorescens 4 18 55 4-6 18—22 40-50 6-8 20—22 — 6-8 — — 6-8 — —
Ps. denitrificans 11-13 30-40 50-60 13-15 35-40 — — — _ _ > — _ — —
Ps. aeruginosa PA 10—12 30-40 — 14-16 30 — 14—16 40 _ 16 35-40 _ 16—18 40—45 _
Ps. fluorescens 8-10 20-25 40-50 10-12 35-40 60 14-16 40—45 — 14—16 — _ 18—20 _ _
Ps. denitrificans 11—13 30-40 55-60 15-16 40 —
Ps. aeruginosa МА 12—14 30-40 — 14-16 35—40 — 14—16 40 — 16-18 40—45 — 18 45 __
Ps. fluorescens 10—12 25-30 45-55 16 40 — 16—18 45—50 — 18—20 — — 18-20 — —
Таблица 3
Выживаемость Proteus vulgaris и некоторых видов Pseudomonas в МА и РА, загрязненной ДТ
Вид бактерии Вариант эксперимента Температура поды. с
18- 20 •i -6 0- -2 -8 - --12
■ 1 и ■ 1 П I 11 I 11
Ps. denitrificans 1-Й 12 12 12 12 12 12 12 12
2-й 4-6 6-8 6-8 6-8 10 12 12 12
3-й 2—4 4—6 5-7 8-10 8-10 12 10—12 12
Ps. aeruginosa 1-й 12 12 12 12 12 12 10—12 12
2-й 12 12 12 12 12 1" 12 12
3-й 12 12 10—12 12 12 1 10-12 12
Ps. fluorescens 1-й 12 12 12 12 12 i.. 12 12
2-й 7-9 8—10 10—12 12 12 12 12 12
3-й 5-7 6-8 8—10 10—12 12 12 12 12
Pr. vulgaris 1-й 8—10 8—10 12 12 12 12 8-Ю 10—12
2-й 3—5 3-5 3-5 5-7 6-8 8-10 6—8 8—10
3-й 1—2 2-3 2—3 3—4 4-6 3-5 4-6 6-8
Примечание. 1-й вариант —вода без ДТ, 2-й и 3-й морская вода, II — речная вода.
в морской и речной воде, покрытой пленкой ДТ, неодинаковы у различных их видоч и отдельных штаммов одного вида. Некоторые штаммы Ps. aeruginosa способны использовать ДТ. Угнетающее действие ДТ на Pr. vulgaris, Ps. denitrificans и Ps. fluorescens усиливается с понижением температуры среды и увеличением в ней количества ДТ.
Литература
1. Алтон Л. В. //Гиг. и сан,— 1983, —№ 10. —С. 74—75.
2. Алтон Л. В. // Микробиол. журн. — 1983. — Т. 45, № 6, —С. 16—20.
3. Ворошилова А. А., Дианова Е. В. // Микробиология.— 1952, —Т. 21, № 4, —С. 408-415.
4. Горлатов С. И., Беляев С. С. //Там же,— 1984. — Т. 53, № 5. — С. 843-849.
5. Ильинский В. В., Коронелли Т. В. //Там же.— 1979.— Т. 48, № 2. — С. 346.
6. Квасников Е. И., Кмоишикова Г. М., Смирнова Г. Ф. и др.//Микробиол. журн.— 1981. — Т. 43, №5.— С. 561—563.
— вода, содержащая соответственно 15 и 30 мл ДТ; I —
7. Квасников Е. И., Клюшникова Т. М. Микроорганизмы— деструкторы нефти в водных бассейнах. — Киев, 1981.
8. Квасников Е. И., Клюшникова Т. М„ Куберская В. С. и др.//Микробиол. журн.— 1985. — Т. 47, №2.— С. 12—15.
9. Коронелли Т. В., Степанова Л. Н. // Микробиология. — 1968. —Т. 37, № 3. - С. 460—465.
10. Коронелли Т. В. Лнпиды сапрофитных микобактернй: Автореф. дис. докт бнол. наук. — М., 1980.
11. Красильников Н. А., Цыбань А. В., Коронелли Т. В.// Океанология. — 1973.— Т. 13, № 5. — С. 877.
12. Миронов О. Г. Нефтеокисляющие микроорганизмы в море. — Киев, 1971.
13. Петров Г. И. // Гидробиол. журн. — 1978. — Т. 4, №4.— С. 52—54.
14. Цыбань А. В. // Исследование экосистемы Балтийского моря. —Л., 1981, —С. 61—68.
15. Gilbert P. D., Higgins J. Y. //J. gen. Microbiol.— 1978, —Vol. 108 —P. 63.
16. Liu D„ Wong P. T. S.//International Biodegradation Symposium: 3-rd: Proceedings. — London. 1976.— P. 175.
Поступила 03.03.86
УДК 613.632.4:1615.285.7:547.2411:813.155.3
Л. В. Риза
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРЕДЕЛЬНО ДОПУСТИМОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ РИЦИДА-11 В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ ДЛЯ УСЛОВИЙ ЕГО СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОГО ПРИМЕНЕНИЯ
Львовский медицинский институт
Среди применяемых в сельском хозяйстве химических гредств защиты растений значительное место занимают фосфорорганнческие соединения, одним из которых является новый отечественный фунгицид рицид-П.
В последние годы при оценке опасности влияния ядохимикатов на организм особое значение придается определению роли режима воздействия. По данным ряда авторов [1—5, 7, 8, 10] известно, что интермиттируюшпй режим воздействия химических соединений может оказывать как более, так и менее выраженное токсическое действие на организм по сравнению с монотонным, что зависит от длительности воздействий и перерывов между ними, хи-
мической структуры и механизма токсического действия препарата.
Рицид-П (0,0-днизопропил-5-бензилтиофосфат) применяется для борьбы с пирикуляриозом риса (дву- или трехкратное авиаопрыскивание). При 18°С рицид-П — прозрачная жидкость с желтоватым оттенком, обладающая специфическим слабым запахом. Мол. масса 288,35. Плотность 1,099 г/см3. Температура кипения 132 °С (при 0,2 мм рт. ст.). Растворимость в воде 0,1% при 18 "С. Растворим также в органических растворителях.
Ингаляционное воздействие рнцида-П на лабораторных животных осуществляли ежедневно путем динамической
