CC BY
16Токсикологический вестник (122)
A.V. Karamysheva1, G.V. Son1, I.A. Maklakova1, N.M. Perova1, S.A. Uspenskiy2, P.L. Ivanov2, V.N. Khabarov2, М.А. Selyanin2
'All-Russian Scientific and Research Organization for Medical Engineering. 115522, Moscow international Research Centre «Martinex», 111123, Moscow, Russian Federation
Experimental studies of the biological action of a domestic preparation based on of hyaluronic acid (HA) and boron were performed in white rats. It was established that the drug did not have adverse effects on animals. Haematological, biochemical, and other indicators characterizing the state of systems and organs in animals exposed to neutron capture therapy did not show statistically significant differences from those of the control. Based on the first stage of the studies, the use of this non-toxic compound could be suggested for solving problems of neutron capture therapy.
Key words: hyaluronic acid, boron, neutron capture therapy, toxicity.
Материал поступил в редакцию 23.04.2013 г
УДК: 614.35:[615.273:615.9]: 613.63
ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ БП К тг, АП
Ь.П. Кузьминов, Т.С. Зазуляк, А.И.
ОЦЕНКА И ГИГИЕНИЧЕСКАЯ Галушка, О.И. Грушка, И.Ь. Паздерская
Л Л Я IT Д Я Я ЯМ ^^Я Я Я Л ЯМ Я Я Л Львовский национальный медицинский университет им. Данилы
И ЯМ £Ш II/■ Ь Ы Я #■ Я Я ЯЯ ЪШ Я ш Я Я ЯЯ Ж ЯЯ лл #1 Галицкого Минздрава Украины. 79010, г Львов, Украина
ЭСЦИНАТА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
Проведена токсикологическая оценка противоотечного препарата - L-лизина эсцината. Установлено, что L-лизина эсцинат относится к веществам умеренно опасным, обладает резорбтивно-токсическим и слабым местно-раздражающим эффектами при попадании на кожу, вызывает выраженное раздражение слизистих оболочек глаз, проявляет слабую кумулятивную активность, не создает реальной опасности развития отдаленных эффектов воздействия. ПДК L-лизина эсцината в воздухе рабочей зоны производственных помещений утверждена на уровне 2,0 мг/м3, аэрозоль, III класс опасности, с отметкой + «требует специальной защиты глаз».
Ключевые слова: L-лизина эсцинат, токсикологическая оценка, ПДК в воздухе рабочей зоны.
Введение. В XXI столетии успехи в разработке лекар- том числе путем создания новых лекарственных форм ственных средств связаны не только с синтезом новых с направленной доставкой к органу-мишени и контро-химических соединений, но и, в значительной степени, лируемой связью фармакона с рецептором [1, 2]. Перс улучшением свойств существующих препаратов, в спективным в разработке подобных лекарственных
Кузьминов Борис Павлович (Kuzminov Boris Pavlovich), д.м.н., проф., заведующий Центральной научно-исследовательской лабораторией и лабораторией промышленной токсикологии Львовского национального медицинского университета им. Данилы Галицкого (Украина), bkuzminov@yandex.ru. Зазуляк Татьяна Степановна (Zazulyak Tetyana Stepanovna), к.б.н., с.н.с.Центральной научно-исследовательской лаборатории и лаборатории промышленной токсикологии Львовского национального медицинского университета им. Данилы Галицкого (Украина),TetyanaZazulyak@gmail.com.
Галушка Александр Иванович (Galushka Aleksandr Ivanovich), с.н.с. Центральной научно-исследовательской лаборатории и лаборатории промышленной токсикологии Львовского национального медицинского университета им. Данилы Галицкого (Украина), toxcentr@rambler.ru.
Грушка Оксана Ивановна (Grushka Oksana Ivanovna), научный сотрудник Центральной научно-исследовательской лаборатории и лаборатории промышленной токсикологии Львовского национального медицинского университета им. Данилы Галицкого (Украина), toxcentr@rambler.ru.
Паздерская Ирина Богдановна (Pazderskaya Irina Bogdanovna), научный сотрудник Центральной научно-исследовательской лаборатории и лаборатории промышленной токсикологии Львовского национального медицинского университета им. Данилы Галицкого (Украина), toxcentr@rambler.ru.
сентябрь - октябрь 2013
форм является подход, базирующийся на молекулярном комплексообразовании протеиногенных аминокислот с тритерпеновыми гликозидами. Это позволяет улучшить биодоступность, повысить селективность и обеспечивает существенное снижение терапевтической дозы препарата при сохранении высокой активности [3].
С помощью этого подхода впервые на Украине создан препарат под запатентованным названием «L-лизина эсцинат» («L-lysine aescinat», код АТС С05 СХ 03), выпускающийся корпорацией «Артериум» на мощностях АООТ «Галичфарм» (г. Львов) [4]. Активно-действующим веществом препарата является водорастворимая соль эсцина (смеси тритерпеновых сапониновых глико-зидов из плодов каштана конского) и аминокислоты лизина [5].
L-лизина эсцинат обладает противовоспалительным, противоотечным и обезболивающим действием. Препарат назначают при посттравматических, интра- и послеоперационных отеках любой локализации, сотрясениях мозга и при нарушении венозного кровообращения [6, 7, 8, 9].
Учитывая характеристику терапевтического эффекта и отсутствие полных аналогов L-лизина эсцината на мировом фармацевтическом рынке, можно предвидеть активное внедрение препарата в клиническую практику через увеличение объемов его производства на отечественных предприятиях.
Промышленное производство лекарственных препаратов обуславливает необходимость эффективной профилактики их воздействия на организм работающих с проведением токсикологической оценки и обоснованием допустимого уровня содержания в воздухе рабочей зоны [10].
В связи с этим целью работы была токсикологическая оценка L-лизина эсцината и разработка гигиенического регламента допустимого содержания его в воздухе рабочей зоны.
Материалы и методы исследования. Иследования проведены на 4 видах лабораторных животных (крысах, мышах, морских свинках, кроликах) в соответствии с методическими указаниями [11, 12, 13].
Параметры токсичности L-лизина эсцината устанавливали при ингаляционном, интраназальном, перораль-ном, внутрибрюшинном и перкутанном воздействии препарата на организм подопытных животных.
Иммунотоксическое действие L-лизина эсцината изучали в соответствии с методическими рекомендациями [14].
Влияние L-лизина эсцината на репродуктивную функцию исследовали с учетом гонадотоксического и эмбриотоксического эффектов [15].
Для оценки токсичности L-лизина эсцината на альтернативных тест-системах использовали ветвистоусых рачков Daphnia magna Straus и сперматозоиды быка.
При обосновании гигиенического регламента допустимого содержания L-лизина эсцината, в соответствии с методическими указаниями [16], принимали во внимание реальные уровни загрязнения препаратом воздуха
рабочей зоны, которые определяли на рабочих местах технологической линии производства вещества (АООТ «Галичфарм», г. Львов) при помощи разработанной нами фотометрической методики [17].
Результаты и обсуждение. При пероральной затравке белых крыс и белых мышей L-лизина эсцинат вызывал поражение центральной нервной системы. Гибель животных проходила преимущественно на 1-2-е сутки эксперимента. Наиболее чувствительными к воздействию L-лизина эсцината были белые мыши, для которых DL50 составила 182 мг/кг. Этот показатель для белых крыс находился на уровне 770-815 мг/кг (III клас опасности -вещества умеренно опасные, ГОСТ 12.1.007-76).
Использование парентерального пути введения вызывало аналогичную клиническую картину острого отравления, однако гибель животных проходила в первые сутки. DL50 L-лизина эсцината при внутрибрюшинном введении составила 16,2-18,2 мг/кг и свидетельствует об умеренной токсичности (III клас токсичности) при этом пути введения.
После интратрахеального введения 50 мг L-лизина эсцината у морских свинок наблюдалась адинамия и нарушение ритма дыхания.
Однократное ингаляционное воздействие препарата в концентрациях 122,8 мг/м3 и 51,6 мг/ м3 не вызывало гибели белых крыс, однако приводило к развитию клинической картины острого отравления, в которой преобладали симптомы раздражающего действия.
Биохимическими исследованиями выявлено влияние L-лизина эсцината на мочевыделительную систему, при этом пороговая концентрация препарата находилась на уровне 51,6 мг/м3.
Исследование местно-раздражающего эффекта по стандартным методикам засвидетельствовало наличие у L-лизина эсцината выраженного повреждающего действия (9 баллов) на слизистые оболочки. При попадании на кожу препарат вызывал слабое раздражающее действие (1 балл), однако проявлял резорбтивно-токсиче-ский эффект.
Проведение подострого эксперимента с введеним нарастающих доз соединения выявило слабый кумулятивный эффект L-лизина эсцината, проявления раздражающего действия и поражение центральной нервной системы.
Введенние на протяжении 30 дней препарата в дозах 1/10, 1/50 и 1/250 DL50. приводило к проявлениям общетоксического действия, что засвидетельствовано биохимическими исследованиями.
В хроническом эксперименте L-лизина эсцинат осуществлял преимущественное влияние на мочевыдели-тельную систему, при этом гибели животных и клинических симптомов интоксикации не зафиксировано. Пороговая концентрация препарата, при которой проходили статистически достоверные изменения показателей, находилась на уровне 18 мг/м3.
При изучении гонадотоксического действия L-лизи-на эсцината с внутрижелудочным введением на протяжении 72 дней в дозах 1/50 DL50 и 1/250 DL50. установле-
Токсикологический вестник (122)
но отсутствие статистически достоверных изменений морфометрических и функциональных показателей сперматогенеза белых крыс. Отмечена тенденция снижения осмотической и кислотной резистентности, а также окислительно-восстановительных процессов в сперматозоидах крыс подопытных групп в сравнении с контролем.
Затравка беременных самок на протяжении 21 дня беременности препаратом в дозах 1/50 DL50 и 1/250 DL50. не оказывала влияния на эмбриогенез, показатели до-имплатационной, постимплатационной и общей эмбриональной летальности.
По данным литературы [18] в тесте на индукцию аберраций хромосом в культуре лимфоцитов периферической крови человека in vitro и в тесте Эймса мутагенной активности препарата не вывлено. Это, в совокупности с полученными экспериментальными данными, позволяет утверждать, что L-лизина эсцинат не создает реальной опасности развития отдаленных эффектов воздействия.
При внутрикожной сенсибилизации морских свинок L-лизина эсцинатом не выявлено достоверных изменений в периферической крови животных. Препарат не влиял на показатели клеточного и гуморального звеньев врожденного и приобретенного иммунитета. Выявлено нарушение численности иммунорегуляторных клеток, что при длительном контакте с препаратом может обуславливать развитие аутоиммунных процесов у работающих.
Исследования на альтернативных тест-системах засвидетельствовали слабую либо умеренную (в зависимости от концентрации) токсичность L-лизина эсцината на организменном уровне (жизнедеятельность дафний).
Установлено цитотоксическое влияние, которое характеризуется сниженной интенсивностью окислительных процессов, вероятно, снижением функционирования звена дыхания митохондрий и ресинтеза АТФ, что обусловливает потерю подвижности и уменьшение длительности выживания сперматозоидов быка. Это корел-лирует с данными, полученными при изучении гонадо-токсического действия на крысах.
В условиях производства L-лизина эсцинат может поступать в воздух рабочей зоны, попадать на кожу, слизистые оболочки и загрязнять спецодежду работающих на стадиях взвешивания исходного компонента и загрузки в реактор. Во время работы реактора возможно загрязнение препаратом воздушной среды через сальники мешалок и фланцевые соединения. Максимальные концентрации L-лизина эсцината в воздухе рабочей зоны достигали 1,7 мг/м3.
Для обоснования предельно допустимой концентрации L-лизина эсцината в воздухе рабочей зоны на основании полученных экспериментальных данных был рассчитан коэффициент запаса по методике К.К. Сидорова [19], который составил 8.
Принимая во внимание установленные параметры токсичности, величину порога хронического ингаляционного действия (18,0 мг/м3), коэффициент запаса, ори-
ентировочный безопасный уровень воздействия [20], предельно допустимая концентрация L-лизина эсцината в воздухе рабочей зоны рекомендована на уровне 2,0 мг/ м3, аэрозоль, III класс опасности, с отметкой + «требует специальной защиты глаз».
Выводы. 1. L-лизина эсцинат по параметрам токсичности относится к веществам умеренно опасным - III класс опасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76. Обладает резорбтивно-токсическим и слабым местно-раз-дражающим эффектами при попадании на кожу, вызывает выраженное раздражение слизистих оболочек глаз, проявляет слабую кумулятивную активность.
2. L-лизина эсцинат не создает реальной опасности развития отдаленных эффектов воздействия, однако существует возможность развития аутоиммунных процессов у работающих при длительном контакте с токсикантом.
3. Разработана и утверждена МЗ Украины предельно допустимая концентрация L-ли-зина эсцината в воздухе рабочей зоны производственных помещений - 2,0 мг/м3, аэрозоль, III класс опасности, с отметкой + «требует специальной защиты глаз».
сентя брь
- октябрь 201 3
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Толстикова Т.Г., Толстиков
A.Г., Толстиков Г.А. На пути к низкодозовым лекарствам. Вестник Российской академии наук. 2007; 77 (10). С. 867-874.
2. ХвостовМ.В., Толстикова Т.Г., Брызгалов А.О., Лифшиц Г.И., Метелева Е.С., Душки А.В. Клатрирование фармаконов -эффективный путь создания низкодозных лекарственных препаратов // Материалы III Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологи растительного сырья». Барнаул, 2007; Кн. 2. С. 73-77.
3. Яковишин Л.А., Гришковец В.И., Кравчук Ж.Н., Микитина
B.Н. ИК-фурье-спектроскопия межмолекулярного взаимодействия эсцина с L-лизином. Ученые записки Таврического национального университета им. В.И. Вернадского. 2012; 25 (64). С. 320-326.
4. Шовковий А.В. Розробка мещщв анатзу нових бюлопчно активних сполук у ряду похщних амшокислот для стандартизаци лкарських засобiв на 1х основа Автореф. дис. ... канд. фарм. наук. Харюв; 1999.
5. Куцик Р.В., Зузку Б.М., Дьячок В.А. Каштан конський (Aesculus hippocastanum L.). Провiзор. 2002; 5.
C. 36-40.
6. Поворознюк В.В., Шеремет О.Б.
Использование L-лизина эсцината в реабилитации больных с остеохондрозом пояснично-крестцового отдела позвоночника. Вюник ортопедп, травматологи та протезування. 2003; 3. С. 25-29.
7. Спасиченко П.В. Лечение больных с тяжелой черепно-мозговой травмой с применением L-лизина эсцината. Украшський нейрохiрургiчний журнал. 2003; 4 (24). С. 33^1.
8. Сапон Н.А., Спасиченко П.В. Применение препарата L-лизина эсцинат в нейрохирургии, неврологии, травматологии и ортопедии. Новости медицины и фармации. 2004; 10-11.
С. 3-5.
9. Усенко Л.В., Криштафор А.А., Слива В.И., НеживаяЮ.С. Противоотечная терапия в спинальной нейрохирургии. Медицина неотложных состояний.
2006; 4. С. 3-6.
10. Трахтенберг И. Краснокутская Л., Короленко Т., Омельянец Т., Кудря М. Принципы и методы определения допустимого содержания химических веществ в воздухе химико-фармацевтических предприятий. Вюник фармакологи та фармаци. 2007;
10. С. 50-55.
11. Методические указания (МУ № 1.1.726-98 от 12.1998) «Гигиеническое нормирование лекарственных средств в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и воде
водных объектов». М., 1999.
12. Методические указания (МУ № 2102-79 от 01.11.1979) «Оценка воздействия вредных химических соединений на кожные покровы и обоснование предельно допустимых уровней загрязнения кожи».
М., 1980.
13. Методические указания (МУ № 2196-80 от 11.08.1980) «Методические указания к постановке исследований по изучению раздражающих свойств и обоснованию предельно допустимых концентраций избирательно действующих раздражающих веществ в воздухе рабочей зоны». М., 1980.
14. Методические указания (МУ № 1.1.578-96 от 21.10.1996) «Требования к постановке экспериментальных исследований по обоснованию предельно допустимых концентраций промышленных химических аллергенов в воздухе рабочей зоны и атмосферы».
М., 1997.
15. Методические указания (МУ № 1744-77 от 10.07.1977) «Методы экспериментального исследования по установлению порогов действия промышленных ядов
на генеративную функцию с целью гигиенического нормирования». М., 1978.
16. Методические указания (МУ
№ 3138-84) «Методические указания
к проведению исследовании на производстве при обследовании, проверке и корректировке предельно допустимых концентраций (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». М., 1984.
17. Кузьмтое Ь.П., Зазуляк Т.С., Грушка О.1. Фотометрична методика вимiрювання концентраци L-лiзину есцинату у повг^ робочо! зони. Довкшля та здоров'я. 2008; 2.
С. 50-52.
18. Болтина И.В., Костик Е.Л., Лепешкин И.В., Кокшарева Н.В., Колянчук Я.В., Кузьменко А.Е. и др. Сучаст проблеми токсикологи. 2011; 4. С. 52-57.
19. Методические указания (МУ № 4000-85 от 04.11.85) «Методические указания по установлению ОБУВ вредных веществ в воздухе рабочей зоны». М., 1985.
20. Кузьм!нов Ь.П., Грушка О.1., Зазуляк Т.С. Обгрунтування орieнтовно безпечного рiвня впливу L-лiзину есцинату у повiтрi робочо! зони. Вестник гигиены и эпидемиологии. 2009; 13 (1).
С. 143-146.
B.P. Kuzminov, T.S. Zazulyak, A.I. Galushka, O.I. Grushka, I.B. Pazderskaya
Toxicological evaluation and hygiene regulation of L-Lysine aescinat at the workplace
Lviv Medical National University by Danylo Halitsky, Ministry of Health of Ukraine. 79010, Lviv
A toxicological evaluation of a decongestant L-Lysine aescinat was performed. It was found out that L-Lysine aescinat refers to moderately hazardous substances, produces resorptive and toxic, mild local irritation effects on skin, expressed irritation effect on eye mucosa, shows a mild cumulative activity and does not pose an actual hazard of the development of delayed effects. MAC of L-Lysine aescinat in occupational air is adopted at the level of 2.0 mg/m3, aerosol, hazard class 3 with a note +«requires a special eye protection» Key words: L-Lysine, aescinat, toxicological evaluation, MAC in occupational air
Материал поступил в редакцию 08.08.2013 г
