CC BY
3
РОССИЙСКИЙ Willi НШОШЕСКШ 11VII ШГРЕСС 2D23 АЛ I II
Онкогенетика
FOXO и EGFR. Сигнальные пути FOXO и EGFR контролируют широкий спектр клеточных функций, важных для он-когенеза. У пациентов с мутациями в сигнальном пути FOXO наблюдается больше двух ДХА. У таких пациентов обнаруживается сочетание трисомии 8хромосомы и изо-хромосомы 17q, моносомии 7хромосомы и транслокации t (3;12), трисомии 8 хромосомы, изохромосомы 17q и дупликации дериватной хромосомы 22. Медиана беспрогрессивной выживаемости пациентов с мутациями в сигнальных путях FOXO или EGFR составляет 16 месяцев, в то время как у больных без мутаций в сигнальных путях FOXO или EGFR медиана составила 21 месяц. У больных без мутаций в сигнальных путях FOXO или EGFR и ДХА медиана не достигнута (р = 0,039). За все время наблюдения у 60% пациентов с мутациями в сигнальных путях EGFR или FOXO БМО так и не был достигнут, несмотря на несколько линий терапии. Данный факт говорит о возможном совместном влиянии двух этих факторов на развитие резистентности.
Заключение: NGS исследование позволило выявить VUS у всех пациентов, однако, генетический ландшафт резистентных пациентов более разнообразен, чему ответивших на лечение ИТК. В группе с резистентностью наибольшее количество мутаций было обнаружено в генах участниках сигнальных путей FOXO и EGFR, а наличие их взаимосвязи с ДХА подчеркивает их важность в формировании устойчивости ктерапии ИТК.
■ ОНКОГЕНЕТИКА
ПРОТИВОМЕТАСТАТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ИНГИБИТОРОВ ГЕНОВ СТВОЛОВОСТИ
М.К. Ибрагимова, Н.В. Литвяков
Место работы: НИИ онкологии — филиал ФГБНУ «Томский НИМЦ РАН», Томск, Россия Эл. почта: [email protected]
Цель: В настоящей работе было проведено исследование механизма дедифференцироваки опухолевых клеток с использованием клеточных линий и ингибиторов генов стволовости (ГС).
Материалы и методы: Культивирование линий клеток. Исследованы стандартные клеточные линии рака молочной железы (РМЖ) ВТ474, ВТ-549, МЮА-МВ-231, МЮА-МЮ-468, SK-BR-3 и T47D. Клетки были культивированы в С02-инкубаторе в стандартных условиях. Использование ингибиторов. Для исследования влияния амплифика-ций генов стволовости на процесс дедифференцировки маммосферообразования в лунки были добавлены инги-
биторы ГС: В^1532-ингибитор гена TERT, 10058^4-инги-битор гена MYC и FLI-06-ингибитор гена NOTCH1, по одному и смесь всех трех ингибиторов. Результаты: Оценено влияние ингибиторов ГС на де-дифференцировку опухолевой линии T47D. Показано, что FLI-06 практически полностью ингибирует способность CD44- клеток к дедифференцировке, но в меньшей степени влияет на клетки дикого типа. BIBR1532 полностью ингибирует способность клеток дикого типа образовывать маммосферы, но часть клеток CD44- сохраняет способность к дедифференцировке, образуя соразмерные контролю маммосферы. Ингибитор 10058-F4 снижает количество маммосфер и в клетках дикого типа, и в популяции сортированных CD44- клетках. Все 3 ингибитора полностью ингибируют образование маммосфер. На 3 сутки после воздействия 3 ингибиторов в CD44-сортированных клетках с ИЛ6 по сравнению с клетками CD44- без ингибиторов, активно образующих маммосферы, снижена экспрессия в 2 и более раза генов BMI1, CDK6, MYC, FZD9, NOTCH1 и повышена экспрессия генов KLF5, KLF6 и SOX2.
Оценена противометастатическая активность 3 химических ингибиторов ГС на модели карциномы легких Льюис (LLC). Индукцию метастазов проводили, вводя клетки опухоли мышам C57BI/6 непосредственно в кровоток. В результате проведения эксперимента по исследованию влияния 3 ингибиторов ГС (инкубация клеток с ингибиторами перед введением опухолевых клеток, оценка жизнеспособности опухолевых клеток, внутривенное введение и оценка метастазирования в легких) достигнуто 100% ингибирование метастазирования на модели LLC. Заключение: Низкомолекулярные ингибиторы ГС обладают способностью подавлять дедифференцировку опухолевых клеток и способны предотвратить метастазирование на примере LLC. Разработка противометастатических препаратов с использованием представленных ингибиторов ГС является перспективным направлением. Финансирование: Работа поддержана грантом РНФ 21-15-00243 «Подавление способности опухолевых клеток к стволовой пластичности для предотвращения развития метастатической болезни».
ТАРГЕТНЫЙ АНАЛИЗ ФРАГМЕНТИРОВАНИЯ СЦДНК ПРИ КОЛОРЕКТАЛЬНОМ РАКЕ С ПОМОЩЬЮ ЦИФРОВОЙ КАПЕЛЬНОЙ ПЦР
А.С. Хромова1, А.П. Коваль1, К.А. Благодатских1, Я.А. Шты-кова2, Н.Е. Кушлинский3, И.В. Житарева1, Д.М. Чудаков1, Д.С. Щербо1
Место работы: 1. ФГАОУ ВО «РНИМУ им. Н.И. Пирогова» Минздрава России, Москва, Россия; 2. ФГБУ «ФЦМН» ФМБА России, Москва, Россия; 3. ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия Эл. почта: [email protected]
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том/vol. 13 #3s1 • 2023
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
ТЕЗИСЫ ПОСТЕРНЫХ ДОКЛАДОВ И ПРИНЯТЫЕ К ПУБЛИКАЦИИ
Онкогенетика
Цель: Анализ свободно циркулирующей ДНК (сцДНК), выделенной из плазмы крови, является перспективным направлением в сфере малоинвазивной диагностики онкологических заболеваний. В связи с этим актуальной задачей становится определение характеристик, отличающих сцДНК из опухолевых и здоровых клеток. Целью данной работы было исследование возможности применения цифровой капельной ПЦР для анализа показателей фрагментированности сцДНК крови пациентов с колоректальным раком. Материалы и методы: В исследовании принимали участие 63 пациента с колоректальной аденокарциномой и 36 здоровых доноров (51 мужчина и 48 женщин, средний возраст: 63,5 ± 7,7). Диагноз пациентам с аденокарциномой был поставлен после клинической и радиологической диагностик, проведенных в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России. Образцы венозной крови здоровых доноров были предоставлены ФГБУ «Федеральный центр мозга и нейротехнологий» ФМБА РФ. Подготовка образцов включала в себя выделение сцДНК из плазмы крови. Для детекции «коротких» (< 80 п. о.), ассоциированных с сцДНК из опухоли, и «длинных» (> 150 п. о.), ассоциированных с неопухолевой сцДНК, фрагментов в отобранных регионах открытого и закрытого хроматина использовался метод цкПЦР.
Для анализа значимости показателей фрагментированности сцДНК использовались критерии Колмогорова-Смирнова, Шапиро-Уилка, U-критерий Манна-Уинтни и анализ связи методом Спирмена. Для разработки решающего правила для разделения пациентов с колоректальной аденокарциномой и здоровых доноров на основе показателей фрагментированности, полученных с помощью цкПЦР, использовался метод логит-преобразования функции логистической регрессии с последующим выбором отрезной разделяющей точки. Для оценки качества классифицирующей модели использовался ROC-анализ, критерии Най-джелкерка (мера определенности), Хосмера-Лемешова (требуемый уровень значимости p > 0,05) и Хи-квадрат (требуемый уровень значимости p < 0,05). Проведение исследования было одобрено этическим комитетом ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова МЗ РФ и выполнено при финансовой поддержке Российского Научного Фонда (номер гранта: 20-75-10008). Результаты: С использованием экспериментальных данных и данных литературы были выбраны 2 геномных ло-куса, изменение конформации хроматина и паттернов фрагментирования в которых ассоциировано с наличием колоректальной аденокарциномы (локусы OCR1 и OCR2). В качестве контрольного региона был выбран локус со стабильной конформацией хроматина, обозначенный CCR. Участники исследования были распределены на две когорты согласно исследуемым геномным локусам: в первую когорту вошли участники, для которых таргетный анализ фрагментирования сцДНК проводили для регионов OCR1 и OCR2 (32 пациента и 18 здоровых доноров), во вторую — для регионов OCR1 и CCR (31 пациента и 18 здоровых доноров).
В ходе анализа литературы были разработаны и отобраны показатели фрагментированности сцДНК, которые могут быть получены с помощью анализа сцДНК в отобранных регионах методом цкПЦР. В ходе анализа значимости показателей производилась проверка соответствия распределения показателей нормальному закону распределения, проверка значимости различий значений показателей в исследуемых группах и анализ попарных корреляций. В результате анализа значимости показателей фрагментированности в исследуемых попарно локу-сах были отобраны наиболее перспективные показатели, значимо различающиеся в группах пациентов и имеющие клиническое значение. С использованием полученных данных были построены предсказательные модели для двух когорт с попарно исследуемыми регионами (OCR1-OCR2 и OCR1-CCR). Вследствие ограничений на число исследуемых показателей каждое решающее правило включало в себя до 5 переменных.
В качестве итоговой предсказательной модели было выбрано решающее правило для регионов OCR1-CCR, включавшее в себя 4 показателя (абсолютное количество копий длинных фрагментов в регионе OCR1, индекс целостности для сцДНК в регионе OCR1, количество копий длинных фрагментов в регионах OCR1 и CCR на нанограмм ДНК). Выбранная модель прошла критерии качества модели (критерий Хосмера-Лемешова — р = 0,306; Хи-квадрат — р <0,01, критерий Найджелкерка равен 0,581). На основе данных классификации была построена характеристическая кривая; площадь под кривой составила 0,896 ± 0,051 (95% ДИ [0,794; 0,996]). Отрезная точка была выбрана согласно требованию к максимальным значениям чувствительности и специфичности. Если рассчитанное значение решающего правила для пациента было больше или равно отрезной точке, то исследуемый пациент относился к группе с колоректальным раком, если меньше, то к группе здоровых доноров. Для отобранной отрезной точки, чувствительность и специфичность составили 0,903 (95% ДИ и 0,833 (95% ДИ [0,586; 0,964]) соответственно. Заключение: Таким образом, были разработаны решающие правила для разделения больных колоректальной аденокарциномой и здоровых доноров с помощью показателей фрагментированности сцДНК в трех отобранных регионах. В качестве итогового было выбрано решающее правило для регионов OCR1-CCR, включавшее в себя 4 показателя фрагментированности, значимо различающиеся в группах пациентов и имеющие клиническое значение. Была выявлена прогностическая ценность подобного подхода к диагностике колоректального рака, однако необходима дальнейшая валидация разработанных правил для улучшения точности результатов классификации.
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том/vol. 13 #3s1 • 2023
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
