CC BY
27
Раздел 6. Наследственные заболевания и врожденные пороки развития
заболевание нервной системы из группы лизосом-ных болезней накопления (ЛБН). В исследованиях лаборатории НБО МГНЦ составлен алгоритм диагностики болезни НПС, в котором использование биохимических маркеров: концентрации оксисте-ролов (холестан-3р,5а,бр-триол и 7-кетохолестерин) и активности хитотриозидазы существенно ускоряют постановку диагноза.
Материалы и методы. На основании клинических симптомов, характерных для НПС, была сформирована выборка из 300 пациентов. Анализ оксистеро-лов проводился в плазме крови с помощью метода ВЭЖХ-МС/МС. Анализ активности хитотриозидазы проводился в сухих пятнах крови стандартным флюо-риметрическим методом.
Результаты. Повышенные показатели биохимических маркеров обнаружены у 68 пациента из 300 исследуемых: у 12 пациентов повышена только концентрация оксистеролов, у 56 — повышена только активность хитотриозидазы, у 9 пациентов выявлены повышенные показатели обоих биохимических маркеров.
Проведен полный анализ генов ^С1 и NPC2 для пациентов с повышенной концентрацией окси-стеролов (и=12). У 5 пациентов выявлены мутации в компаунд-гетерозиготном состоянии в гене ^С1 и диагноз НПС был подтвержден. Для 3 пациентов с повышенными обоими маркерами в дальнейшем подтвержден диагноз Ниманна—Пика тип А/В и у одного пациента диагноз недостаточность кислой липазы. Диагноз не был установлен у 3 пациентов.
Выводы. Определение концентрации оксистеро-лов и активности хитотриозидазы позволяет не только эффективно отбирать пациентов на молекулярную диагностику НПС, но и проводить дифференциальную диагностику с другими лизосомными болезнями накопления.
ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ДНК-ДИАГНОСТИКЕ ФАКОМАТОЗОВ
Стрельников В.В., Чаплыгина М.С., Кузнецова Е.Б., Танас А.С., Залетаев Д. В.
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Медико-генетический научный центр» г. Москва
Введение. Факоматозы — тяжёлые инвалидизиру-ющие заболевания с высокой детской и юношеской смертностью; наиболее изученные из них — нейро-фиброматоз и туберозный склероз. Высокая частота встречаемости и необходимость дифференциальной диагностики для объективного медико-генетического консультирования обуславливает актуальность проведения эффективной молекулярной диагностики этих заболеваний.
Цель исследования — разработка эффективного способа диагностики нейрофиброматоза и тубероз-
ного склероза на основе современных высокотехнологичных способов анализа ДНК.
Материалы и методы. В исследование включено 167 больных с диагнозом «нейрофиброматоз» и 12 больных с диагнозом «туберозный склероз». Для скрининга мутаций в генах ^1, ^2 (нейрофиброматоз) и TSC1, TSC2 (туберозный склероз) методом высокопроизводительного параллельного секвенирования (ВПС) разработаны панели прайме-ров, обеспечивающие полное покрытие кодирующих областей и прилежащих интронных областей генов. Исключение протяженных делеций генов NF1, NF2, TSC1 и TSC2 проводилось мультиплексной лигазоза-висимой амплификацией зондов (MLPA).
Результаты. Использование ВПС позволило выявить 79 патогенных мутаций в генах ^1 и Ш.2. Мутации в гене Ш1 обнаружены у 72/167 (43,1%), в гене Ш2 — у 7/167 (4,1%) больных. Анализ MLPA выявил протяженные делеции в пределах гена Ш1 у 7/88 (7,9%) больных. В одной семье обнаружена полная делеция одного из аллелей гена Ш1 — у про-банда и его отца. Поиск мутаций у больных с клиническим диагнозом «туберозный склероз» привел к обнаружению патогенных генетических вариантов в 58% случаев, один из которых представлен мозаичной мутацией (доля мутантного аллеля в ДНК из лимфоцитов крови — 18%).
Заключение. До недавнего времени ДНК-диагностика факоматозов осложнялась их генетическим полиморфизмом, значительной протяженностью вовлеченных генов и высокой частотой мозаичных мутаций. Проблема выявления мозаичных мутаций решается только индивидуальным секвенированием множества молекул ДНК образца по отдельности, что стало возможным в последнее время благодаря внедрению методов ВПС. Кроме того, поскольку ВПС позволяет проводить одновременный поиск мутаций в нескольких генах, независимо от их протяженности, решаются и другие перечисленные выше проблемы, ранее создававшие препятствия быстрой и эффективной диагностике факоматозов.
СВЯЗЬ X-СЦЕПЛЕННОЙ УМСТВЕННОЙ ОТСТАЛОСТИ С СУБМИКРОСКОПИЧЕСКИМИ НЕСБАЛАНСИРОВАННЫМИ ПЕРЕСТРОЙКАМИ ХРОМОСОМЫ X
Юров И.Ю.123, Ворсанова С.Г.124, Зеленова М.А.1-2-4, Куринная О.С.1-2-4, Васин К.С.1-2-4, Ратников А.М.1-4, Юров Ю.Б.12 4
'ФГБНУ «Научный центр психического здоровья», г. Москва
Обособленное структурное подразделение «Научно-исследовательский клинический институт педиатрии имени академика Ю.Е. Вельтищева» ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, г. Москва
РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИК ПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2016 ROSSIYSKIY VESTNIK PERINATOLOGIII PEDIATRII, 4, 2016
ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ПЕДИАТРИИ И ДЕТСКОЙ ХИРУРГИИ
3ГБОУ ДПО Российская медицинская академия последипломного образования Минздрава России, г. Москва
4ГБОУ ВПО «Московский государственный психолого-педагогический университет», г. Москва
X-сцепленная умственная отсталость (XLID), как правило, ассоциируют с перестройками хромосомы X и вариациями числа копий (CNV), включающими X-сцепленные гены. Тем не менее, анализы XLID — ассоциированных хромосомных перестроек, проведенные при помощи микрочипов с высокой разрешающей способностью, мало описаны в доступной литературе. В данном исследовании нами были проанализированы 312 пациентов с умственной отсталостью, аутизмом и врожденными пороками развития при помощи молекулярного кариотипирования (разрешение более 1 кб) и оригинальной биоинфор-матической технологии оценки степени патогенности CNV XLID-ассоциированные генетические перестройки были обнаружены у 11 детей (3,5%). Среди них: мозаичная делеция Xp22.32p22.2 (4700 кб/жен. пол) с делецией Xp22.31 (710 кб), делеция Xp22.12 (1467 кб/жен.пол), дупликация Xp22.31 (616 кб/жен. пол), дупликация Xp21.2 (254 кб/муж.пол), мозаичная делеция Xq21.2q21.33 (8800 кб/жен.пол). Трое детей имели множественные перестройки хромосомы X. Соотношение полов составило 7/4 (девочки/мальчики). Стоит отметить, что X-сцепленный характер патологии может объяснить половой перевес в распространенности нейроповеденческих заболеваний (т.е. умственной отсталости и аутизма). В данном исследовании было показано, что XLID-ассоциированные хромосомные перестройки также распространены у пациентов женского пола. Кроме того, принимая во внимание оценки распространенности бессимптомных носителей X-сцепленных мутаций и/или перестроек хромосомы X (СКЫУ), возможно продолжить рассуждения о вкладе хромосомной/геномной патологи в болезни у человека. В данной когорте оказались широко распространены мозаичные перестройки. Принимая во внимание то, что соматический хромосомный мозаицизм был признан важным, но трудно устанавливаемым фактором, влияющим на этиологию нарушений интеллекта, наше исследование делает новый шаг в изучении роли субмикроскопических несбалансированных перестроек хромосомы X при XLID, предполагая, что такие хромосомные перестройки являются более значимыми факторами, чем считалось ранее. Исследование осуществлено при финансовой поддержке Российского научного фонда (грант № 14-35-00060).
РЕДКИЕ ГЕНОМНЫЕ БОЛЕЗНИ: ВЫСОКОРАЗРЕШАЮЩИЙ ПОЛНОГЕНОМНЫЙ АНАЛИЗ ВАРИАЦИЙ ЧИСЛА КОПИЙ ДНК (СЧУ) У ДЕТЕЙ С НАРУШЕНИЯМИ ИНТЕЛЛЕКТА, ВРОЖДЕННЫМИ ПОРОКАМИ РАЗВИТИЯ И АУТИЗМОМ
Юров И.Ю.123, Ворсанова С.Г.1-2-4, Зеленова М.А.1-2-4, Васин К.С.1'2'4, Куринная О.С.1-2-4, Шмитова Н.С.1, Ратников А.М.14, Юров Ю.Б.124
'ФГБНУ «Научный центр психического здоровья», г. Москва
Обособленное структурное подразделение «Научно-исследовательский клинический институт педиатрии имени академика Ю.Е. Вельтищева» ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, г. Москва
3ГБОУ ДПО Российская медицинская академия последипломного образования Минздрава России, г. Москва
4ГБОУ ВПО «Московский государственный психолого-педагогический университет», г. Москва
Геномными расстройствами являются состояния, вызванные (суб) хромосомными/субмикроскопическими делециями или дупликациями, произошедшими в результате специфической организации последовательности ДНК, предрасполагающей к геномным перестройкам. Среди детей с идиопатиче-скими нейроповеденческими заболеваниями геномные нарушения обычно выявляются, хотя большая часть случаев демонстрирует клиническую гетерогенность и обусловлена определенными геномными перестройками, обнаруженными исключительно при помощи высокоразрешающего полногеномного анализа вариаций числа копий (CNV). Это также справедливо для детей, имеющих аутистические расстройства. В данном исследовании мы оценили частоту геномных заболеваний у 237 детей с нарушениями интеллекта, врожденными пороками развития и аутизмом, используя полногеномное сканирование CNV и биоинформатический анализ. CNV, связанные с геномными расстройствами, были обнаружены у 17 (7,2%) пациентов из 237, и были ассоциированы со следующими синдромами: микро-делеционный синдром 1p36, микродупликационный синдром 1p36, синдром делеции 1p32p31, синдром делеции 2q23.1, синдром делеции 2q37, синдромы Ангельмана и Прадера-Вилли (делеции 15q11.2), синдром дупликации 5p13, микроделеционный синдром 15q13.3, синдром делеции 15q24, синдром дупликации 16p11.2, синдром делеции 16p11.2, микроделеционный синдром 17q21.31. Следует отметить, что 16 синдромов не были определены на основании фенотипического анализа. В дополнение к данным случаям, крупномасштабные CNV, с неустановленной клинической значимостью, были обнаружены у 45 (19%) пациентов. На основании биоинформати-ческого анализа, мы делаем предположение, согласно которому некоторые из этих аберраций могут быть рекуррентными и являются основой для геномных нарушений. Среди детей с ограниченными интеллектуальными возможностями, врожденными пороками развития и аутизмом частота встречаемости геном-
РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИК ПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2016 ROSSIYSKIY VESTNIK PERINATOLOGY IPEDIATRII, 4, 2016
