Инновационные технологии в ДНК-диагностике факоматозов Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

Раздел 6. Наследственные заболевания и врожденные пороки развития

заболевание нервной системы из группы лизосом-ных болезней накопления (ЛБН). В исследованиях лаборатории НБО МГНЦ составлен алгоритм диагностики болезни НПС, в котором использование биохимических маркеров: концентрации оксисте-ролов (холестан-3р,5а,бр-триол и 7-кетохолестерин) и активности хитотриозидазы существенно ускоряют постановку диагноза.

Материалы и методы. На основании клинических симптомов, характерных для НПС, была сформирована выборка из 300 пациентов. Анализ оксистеро-лов проводился в плазме крови с помощью метода ВЭЖХ-МС/МС. Анализ активности хитотриозидазы проводился в сухих пятнах крови стандартным флюо-риметрическим методом.

Результаты. Повышенные показатели биохимических маркеров обнаружены у 68 пациента из 300 исследуемых: у 12 пациентов повышена только концентрация оксистеролов, у 56 — повышена только активность хитотриозидазы, у 9 пациентов выявлены повышенные показатели обоих биохимических маркеров.

Проведен полный анализ генов ^С1 и NPC2 для пациентов с повышенной концентрацией окси-стеролов (и=12). У 5 пациентов выявлены мутации в компаунд-гетерозиготном состоянии в гене ^С1 и диагноз НПС был подтвержден. Для 3 пациентов с повышенными обоими маркерами в дальнейшем подтвержден диагноз Ниманна—Пика тип А/В и у одного пациента диагноз недостаточность кислой липазы. Диагноз не был установлен у 3 пациентов.

Выводы. Определение концентрации оксистеро-лов и активности хитотриозидазы позволяет не только эффективно отбирать пациентов на молекулярную диагностику НПС, но и проводить дифференциальную диагностику с другими лизосомными болезнями накопления.

ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ДНК-ДИАГНОСТИКЕ ФАКОМАТОЗОВ

Стрельников В.В., Чаплыгина М.С., Кузнецова Е.Б., Танас А.С., Залетаев Д. В.

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Медико-генетический научный центр» г. Москва

Введение. Факоматозы — тяжёлые инвалидизиру-ющие заболевания с высокой детской и юношеской смертностью; наиболее изученные из них — нейро-фиброматоз и туберозный склероз. Высокая частота встречаемости и необходимость дифференциальной диагностики для объективного медико-генетического консультирования обуславливает актуальность проведения эффективной молекулярной диагностики этих заболеваний.

Цель исследования — разработка эффективного способа диагностики нейрофиброматоза и тубероз-

ного склероза на основе современных высокотехнологичных способов анализа ДНК.

Материалы и методы. В исследование включено 167 больных с диагнозом «нейрофиброматоз» и 12 больных с диагнозом «туберозный склероз». Для скрининга мутаций в генах ^1, ^2 (нейрофиброматоз) и TSC1, TSC2 (туберозный склероз) методом высокопроизводительного параллельного секвенирования (ВПС) разработаны панели прайме-ров, обеспечивающие полное покрытие кодирующих областей и прилежащих интронных областей генов. Исключение протяженных делеций генов NF1, NF2, TSC1 и TSC2 проводилось мультиплексной лигазоза-висимой амплификацией зондов (MLPA).

Результаты. Использование ВПС позволило выявить 79 патогенных мутаций в генах ^1 и Ш.2. Мутации в гене Ш1 обнаружены у 72/167 (43,1%), в гене Ш2 — у 7/167 (4,1%) больных. Анализ MLPA выявил протяженные делеции в пределах гена Ш1 у 7/88 (7,9%) больных. В одной семье обнаружена полная делеция одного из аллелей гена Ш1 — у про-банда и его отца. Поиск мутаций у больных с клиническим диагнозом «туберозный склероз» привел к обнаружению патогенных генетических вариантов в 58% случаев, один из которых представлен мозаичной мутацией (доля мутантного аллеля в ДНК из лимфоцитов крови — 18%).

Заключение. До недавнего времени ДНК-диагностика факоматозов осложнялась их генетическим полиморфизмом, значительной протяженностью вовлеченных генов и высокой частотой мозаичных мутаций. Проблема выявления мозаичных мутаций решается только индивидуальным секвенированием множества молекул ДНК образца по отдельности, что стало возможным в последнее время благодаря внедрению методов ВПС. Кроме того, поскольку ВПС позволяет проводить одновременный поиск мутаций в нескольких генах, независимо от их протяженности, решаются и другие перечисленные выше проблемы, ранее создававшие препятствия быстрой и эффективной диагностике факоматозов.

СВЯЗЬ X-СЦЕПЛЕННОЙ УМСТВЕННОЙ ОТСТАЛОСТИ С СУБМИКРОСКОПИЧЕСКИМИ НЕСБАЛАНСИРОВАННЫМИ ПЕРЕСТРОЙКАМИ ХРОМОСОМЫ X

Юров И.Ю.123, Ворсанова С.Г.124, Зеленова М.А.1-2-4, Куринная О.С.1-2-4, Васин К.С.1-2-4, Ратников А.М.1-4, Юров Ю.Б.12 4

'ФГБНУ «Научный центр психического здоровья», г. Москва

Обособленное структурное подразделение «Научно-исследовательский клинический институт педиатрии имени академика Ю.Е. Вельтищева» ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, г. Москва

РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИК ПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2016 ROSSIYSKIY VESTNIK PERINATOLOGIII PEDIATRII, 4, 2016