CC BY
10
Внеклеточные везикулы представляют собой мембранные структуры, играющие важную роль в межклеточных коммуникациях, поскольку они обладают способностью транспортировать липиды, факторы транскрипции, мРНК и белки. Имеются данные об особой роли везикул в прогрессировании рака. Поэтому изучение влияния везикул на опухолевые сфероиды имеет важное значение. Целью данной работы является изучение влияния мембранных везикул, индуцированных цитохалазином В (иМВ), на сфероиды колоректального рака in vitro.
В этом исследовании для создания опухолевых сфероидов использовали клеточную линию колоректального рака (HCT-15). Клеточная линия глиобластомы (SNB-19) и мезенхимальные стволовые клетки, полученные из жировой ткани (МСК), были использованы для выделения МВ. Везикулы из SNB-19 (SNB-19 иМВ) и МСК (МСК иМВ) выделяли с использованием 10 мкг/мл цитохалазина В и серии последовательных центрифугирований. Добавление SNB-19 иМВ и иМВ МСК к сфероидам осуществляли в концентрациях 1, 2 и 5 мкг. Влияние SNB-19 иМВ и иМВ МСК анализировали с использованием проточной цитоме-трии, мультиплексного анализа и ПЦР в реальном времени.
После добавления МСК иМВ не было значительного изменения жизнеспособности клеток в сфероиде. Однако при добавлении иМВ SNB-19 в колоносферу наблюдалось дозозависимое повышение жизнеспособности клеток. Уровни мРНК OCT4 и Nanog повышались после добавления SNB-19 иМВ, но снижались после добавления иМВ МСК. Цитокиновый анализ показал значительные различия в 40 основных цитокинах в колонос-ферах с SNB-19 иМВ и МСК иМВ.
Таким образом, показано возможное влияние SNB-19 иМВ и МСК иМВ на опухолевые сфероиды. Необходимы дальнейшие исследования эффектов этого механизма. Данное исследование выполнено в рамках Программы стратегического академического лидерства Казанского федерального университета (ПРИ0РИТЕТ-2030) и при финансовой поддержке гранта Российского научного фонда 21-74-10021. Авторы подтверждают отсутствие конфликта интересов.
ТКАНЕВОЙ ЭКВИВАЛЕНТ ЭНДОКРИННОГО ОТДЕЛА ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
А.С. Пономарева, Н.В. Баранова, А.О. Никольская, З.З. Гоникова, И.А. Милосердов, В.И. Севастьянов
ФГБУ НМИЦ трансплантологии и искусственных органов им. академика В.И. Шумакова Минздрава России, Москва, Россия
e-mail: a.s.ponomareva@gmail.com
Ключевые слова: тканевой эквивалент поджелудочной железы, островки Лангерганса, тканеспецифический биома-трикс, децеллюляризация.
Одним из направлений технологий тканевой инженерии и регенеративной медицины для лечения сахарного диабета 1 типа является создание тканевого эквивалента эндокринного отдела поджелудочной железы (ПЖ) на основе тканеспецифического биоматрикса (ДПЖ матрикса) из децеллюляризованной панкреатической ткани [1]. Сохранение в ДПЖ матриксе структурных, биохимических и биомеханических свойств нативного ВКМ при максимально полном удалении клеточного материала позволяет имитировать микроокружение, способствующее пролонгированной функции жизнеспособных островковых клеток in vitro и in vivo [2].
Цель работы: исследовать влияние ДПЖ матрикса на инсулинпродуцирующую функцию жизнеспособных островков Лангерганса (ОЛ) крысы и человека.
Материалы и методы. ДПЖ матрикс получали в результате децеллюляризации фрагментов ПЖ крысы (Vistar) и человека с применением поверхностно-активных веществ при различных режимах обработки панкреатической ткани. ОЛ крысы и человека выделяли, используя традиционную модифицированную методику с использованием коллагеназы, и культивировали в монокультуре (контрольные группы Ккр и Кч) и в присутствии ДПЖ матрикса (опытные группы Окр и Оч). Жизнеспособность ОЛ определяли методом флуоресцентного окрашивания витальным красителем, секреторную способность — методом иммуноферментного анализа (ИФА). Изменения концентраций инсулина в опытных группах оценивали относительно контрольных групп.
Результаты исследования. ОЛ, культивированные с ДПЖ матриксами, не проявляли признаков фрагментации и деградации, оставаясь жизнеспособными в течение всего срока наблюдения (7 суток) по сравнению с монокультурой ОЛ. Базальная концентрация инсулина в опытных группах Окр повышалась по сравнению с контрольной группой Ккр на 48,7%, 102,9% и 373,6% на первые, третьи и шестые сутки культивирования, соответственно. Базальная концентрация инсулина в опытных группах Оч на первые сутки культивирования возрастала на 39,5% по сравнению с контрольной группой Кч, а на четвертые и седьмые — на 55,3% и 68,1%, соответственно. Предварительные результаты экспериментов in vivo, полученные на малой выборке лабораторных животных, подтвердили функциональную эффективность тканевого эквивалента ПЖ на основе ДПЖ матрикса и ОЛ крысы при внутрибрюшинном введении.
Заключение. Выявлено позитивное влияние аллоген-ных тканеспецифических биоматриксов на жизнеспособность ОЛ. В экспериментах in vitro и in vivo показана принципиальная возможность создания тканевого эквивалента эндокринного отдела ПЖ.
Литература:
1. Damodaran R.G., Vermette P. et. al. J Tissue Eng Regen Med.
2018. V. 12 (5). Pp 1230-1237.
2. Sevastianov V.l., Baranova N.V., Kirsanova L.A. et. al. J Gene
Engg Bio Res. 2021. V. 3 (2). Pp 17-25.
СТРУКТУРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ И ФОРМИРОВАНИЕ МЕЗОТЕЛИЯ НА ПОВЕРХНОСТИ АЦЕЛЛЮЛЯРНОГО МАТРИКСА ПРИ ИМПЛАНТАЦИИ НА ДЕСЕРОЗИРОВАННУЮ СТЕНКУ ЖЕЛУДКА КРЫСЫ
Ю.В. Пономарева1, Н.Н. Сарбаева1,
В.И. Белоконев2, М.Н. Милякова1, М.В. Королев3
1 ООО «АРТБИО», Самара, Россия
2 ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России, Самара, Россия
3 ЧУОО ВО Медицинский университет «Реавиз», Самара, Россия
e-mail: artbio_com@mail.ru
Ключевые слова: децеллюляризация, ацеллюлярный дер-мальный матрикс, мезотелий, спаечная болезнь брюшной полости.
Для снижения числа осложнений (спаечной болезни, свищей, инкапсуляции), связанных с имплантацией
синтетических эндопротезов интраперитонеально и пре-перитонеально, предложены композитные материалы, изолирующие покрытия и антиадгезивные препараты [1]. Эффект их применения краткосрочен. Ацеллюлярные ма-триксы, получаемые из тканей животных и человека, являются не только пластическим материалом, но и могут служить поверхностью для восстановления целостности брюшины, тем самым снижая число таких осложнений.
Цель — изучить структурные изменения, клеточную реакцию и формирование мезотелия на поверхности ацеллюлярного дермального матрикса (АДМ), имплантированного на десерозированную переднюю стенку желудка крысы.
АДМ получен при липодермэктомии у пациентов с вентральными грыжами по разработанной технологии [2]. Образцы АДМ 0,5x0,5 см имплантированы крысам стока Wistar обоего пола (n=21) под общей анестезией интраперитонеально на предварительно десе-розированную переднюю стенку тела желудка с фиксацией серозно-мышечными швами по периметру на 28, 45 и 90 суток. Структура АДМ и клеточная реакция исследована на гистологических срезах. Формирование мезотелия — по экспрессии HBME-1.
К 28 суткам АДМ сращен с передней стенкой желудка. Структура коллагеновых волокон АДМ сохранена. Материал диффузно инфильтрирован лимфоцитами, макрофагами, тучными клетками, фибробластами. Межфибриллярные пространства неравномерно заполнены рыхлой неоформленной соединительной тканью. На периферии многочисленные тонкостенные капилляры с эритроцитами в просвете.
К 45 и 90 суткам АДМ плотно сращен с подлежащими тканями, собственная структура сохранена. Межфибриллярное пространство равномерно заполнено соединительной тканью. Преобладающая популяция клеток — фибробласты. Между мышечным слоем передней стенки желудка и поверхностью АДМ — прослойка гипер-васкуляризованной соединительной ткани. На поверхности АДМ, обращенной к брюшине только к 90 суткам, было идентифицировано формирование слоя мезотели-альных клеток, определяемых по выраженной цитоплаз-матической и мембранной экспрессии ими HBME — 1.
Таким образом, АДМ может быть рассмотрен как перспективный имплантируемый материал, сочетающий в себе пластические, барьерные (на ранних сроках) и регенеративные свойства.
Литература:
1. Baylon R., Rodriguez-Camarillo Р., Elias-Zuniga А. et. al. Membr. 2017. V. 7. № 3. P. 47.
2. Сарбаева Н.Н., Милякова М.Н., Пономарева Ю.В. Способ получения дермального матрикса. Пат. РФ № 2694543, кл. A61L 27/38. 2019.
РЕАКТИВНЫЙ АСТРОГЛИОЗ ПРИ ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ ТРАВМЕ ЛЕГКОЙ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ И ТЕРАПИИ СИНАПТАМИДОМ
А.И. Пономаренко, И.В. Манжуло
ФГБУН Национальный научный центр морской биологии им. А.В. Жирмунского Дальневосточного отделения РАН, Владивосток, Россия
e-mail: arina.ponomarenko.93@mail.ru
Ключевые слова: N-докозагексаеноилэтаноламин; синап-тамид; легкая черепно-мозговая травма; лЧМТ; астроглия; BDNF; биомаркеры; СОД; nNOS.
По данным клинических исследований лЧМТ составляют 80-90% всех травм головы и представляют серьезную проблему современного здравоохранения в связи с развитием значительных отдаленных последствий, развивающихся в основном из-за дезадаптации глиальной реакции. Астроциты, чувствительные к изменениям во внеклеточной среде, служат критическими ранними ответчиками на повреждение головного мозга [1]. В связи с этим фармакологическое воздействие на астроглию представляется наиболее перспективной терапевтической стратегией лечения последствий лЧМТ. На сегодняшний день имеется огромное количество доклинических данных, свидетельствующих о наличии положительного терапевтического эффекта препаратов, содержащих ю-3 полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК) и их производные, при остром поражении головного мозга [2].
N-докозагексаеноилэтаноламин (синаптамид) является высокоактивным метаболитом докозагексае-новой кислоты (ДГК) с нейропротекторными, синапто-генными, нейритогенными и противовоспалительными свойствами в нервной системе [3]. Результаты данного исследования демонстрируют влияние синаптами-да на астроглиальный ответ на повреждение в острой (1 сутки) и хронической (7 суток) фазах развития лЧМТ. ВЭЖХ-МС исследование выявило увеличение концентрации синаптамида в коре головного мозга и сыворотке крови экспериментальных животных в несколько раз при подкожном введении (10 мг/кг/сут). С помощью иммуногистохимии показано, что синаптамид регулирует активацию GFAP- и SIOOß-положительной астроглии, снижает nNOS-положительное иммуноо-крашивание и стимулирует секрецию нейротрофина BDNF. Динамика продукции супероксиддисмутазы при обработке синаптамидом подтверждает анти-оксидантную эффективность тестируемого соединения. С помощью вестерн-блоттинга мы обнаружили снижение биомаркеров ЧМТ, таких как GFAP, S100ß и IL-6, в сыворотке крови экспериментальных животных, получавших синаптамид. Полученные результаты свидетельствуют о высоком терапевтическом потенциале синаптамида в снижении тяжести последствий поражения головного мозга. Работа выполнена при поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (грант 13.1902.21.0012, договор № 075-15-2020-796).
Литература:
1. Burda, J.E.; Bernstein, A.M.; Sofroniew, M.V. Exp. Neurol. 2016.
V. 275. P. 305-315.
2. Wu, A.; Ying, Z.; Gomez-Pinilla, F. J. Neurotrauma. 2011. V. 28.
P. 2113-2122.
3. Devane, W.A.; Axelrod, J. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. V.
91. P. 6698-6701.
ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ СПЕРМАТОГЕННЫХ КЛЕТОК МЫШИ В ЛИНЕЙНОМ ГРАДИЕНТЕ ФИКОЛЛА
Е.А. Пономаренко, О.В. Макарова,
А.А. Степанов, К.А. Артемьева, Н.Б. Тихонова
НИИМЧ им. акад. А.П. Авцына ФГБНУ РНЦХ им. Б.В. Петровского, Москва, Россия
e-mail: ponomarenkoea75@mail.ru
Ключевые слова: сперматогонии, сперматиды, спермато-циты, мейоз, разделение клеток.
