Научная статья на тему 'Стандартизированная технология "внутрилабораторный контроль качества питательных сред для клинических микробиологических исследований" (проект)'

Стандартизированная технология "внутрилабораторный контроль качества питательных сред для клинических микробиологических исследований" (проект) Текст научной статьи по специальности «Медицина и здравоохранение»

CC BY
79
4
Поделиться
Ключевые слова
СТАНДАРТИЗАЦИЯ / СТАНДАРТИЗИРОВАННАЯ ТЕХНОЛОГИЯ / ВНУТРИЛАБОРАТОРНЫЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА / ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ / КЛИНИЧЕСКАЯ БАКТЕРИОЛОГИЯ

Аннотация научной статьи по медицине и здравоохранению, автор научной работы — Меньшиков В.В., Козлов Р.С., Поляк М.С., Михайлова В.С., Иноземцева Л.О., Шуляк Б.Ф., Стецюк О.У., Кречикова О.И., Шепелин А.П., Суханова С.М.

В проекте представлена стандартизированная технология выполнения внутри лабораторного контроля качества питательных сред, позволяющая устанавливать пригодность наиболее распространенных питательных сред для проведения бактериологических исследований. Разработанный проект стандартизованной технологии «Внутрилабораторного контроля качества питательных сред для бактериологических исследований» предназначен для использования в клинико-диагностических лабораториях (КДЛ), выполняющих бактериологические исследования, и в бактериологических лабораториях медицинских учреждений. Применение стандартизированной технологии «Внутрилабораторного контроля качества питательных сред для бактериологических исследований» обеспечивает проведение лабораторных технологических процессов на высоком качественном уровне, позволяет повысить надежность бактериологических исследований и улучшить качество медицинского обслуживания.

Похожие темы научных работ по медицине и здравоохранению , автор научной работы — Меньшиков В.В., Козлов Р.С., Поляк М.С., Михайлова В.С., Иноземцева Л.О., Шуляк Б.Ф., Стецюк О.У., Кречикова О.И., Шепелин А.П., Суханова С.М.,

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Текст научной работы на тему «Стандартизированная технология "внутрилабораторный контроль качества питательных сред для клинических микробиологических исследований" (проект)»

ПРОЕКТЫ НОРМАТИВНЫХ ДОКУМЕНТОВ

СТАНДАРТИЗИРОВАННАЯ ТЕХНОЛОГИЯ «ВНУТРИЛАБОРАТОРНЫЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ КЛИНИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ» (ПРОЕКТ)

Разработчики:

В.В. Меньшиков1, Р.С. Козлов2, М.С. Поляк3, В.С. Михайлова1, Л.О. Иноземцева6, Б.Ф. Шуляк7, О.У. Стецюк2, О.И. Кречикова2, А.П. Шепелин5, С.М. Суханова4.

1 Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова

2 Смоленская государственная медицинская академия, НИИ антимикробной химиотерапии, г. Смоленск

3 Научный информационный центр фармакотерапии, Санкт-Петербург

4 Научный центр экспертизы средств медицинского применения, Москва

5 Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии, г. Оболенск

6 ЗАО «Даниес», Москва

7 ООО ГЕМ, Москва

Настоящая стандартизированная технология устанавливает единые требования к выполнению внутрилабораторного контроля качества наиболее распространенных питательных сред с целью определения их пригодности для проведения бактериологических исследований в клинико-диагностических лабораториях (КДЛ), выполняющих бактериологические исследования, и в бактериологических лабораториях медицинских учреждений.

1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ 1.1. Введение

Питательные и транспортные среды являются важнейшим элементом медицинского микробиологического исследования. Они разнообразны по целевому назначению и компонентному составу. Используются для транспортировки, выделения, культивирования, идентификации и дифференциации микроорганизмов. Микробиологические среды отвечают своему назначению только в случаях соответствия их стандартам качества.

Питательные среды производят специализированные отечественные и зарубежные предприятия. На рынок они поставляются в сухом виде или в форме готовых питательных сред, разлитых во флаконы, пробирки, чашки Петри.

Промышленное производство питательных сред осуществляется в соответствии с нормативно-правовыми актами, регулирующими производство, контроль качества, порядок государственной регистрации и лицензирования производства, а также порядок сертификации готовых питательных сред и их компонентов [1 —3]. Медицинские учреждения должны использовать в работе для целей лабораторной диагностики питательные среды, имеющие сертификат и регистрационное удостоверение [4]. Однако это не исключает необходимость проведения в определенных случаях (см. ниже) внутрилабораторно-го контроля качества питательных сред.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

В клинико-диагностических лабораториях (КДЛ), выполняющих бактериологические исследования, и в бактериологических лабораториях медицинских учреждений часть питательных сред может быть приготовлена непосредственно из коммерческих ингредиентов, качество которых зависит от качества основных компонентов, правильности состава, соблюдения технологии приготовления, условий упаковки и хра-

нения [5]. Существуют определенные сложности обеспечения стандартизации приготовления питательных сред в лабораториях, которые могут влиять на воспроизводимость результатов микробиологических исследований. Такие среды требуют проведения внутрилабораторного контроля с целью оценки их соответствия требуемому качеству. Настоящая стандартизированная технология устанавливает единые условия выполнения соответствующих анализов.

1.2. Цель выполнения технологии

Стандартизированную технологию «Внутри-лабораторный контроль качества питательных сред для бактериологических исследований» выполняют для установления соответствия используемых в лабораториях питательных сред стандартам качества и определения их пригодности для проведения бактериологических исследований. Стандартизированная технология состоит из отдельных оперативных процедур, включающих приготовление контрольных штаммов микроорганизмов, методику контроля качества и анализа качества питательных сред, позволяющих сделать заключение о пригодности испытуемых сред для проведения бактериологических исследований.

1.3. Область применения

Настоящая технология распространяется на клинико-диагностические лаборатории, выполняющие бактериологические исследования, и на бактериологические лаборатории медицинских учреждений, выполняющие микробиологические исследования с использованием готовых (коммерческих) питательных сред и лаборатории, использующие питательные среды собственного приготовления путем регидратации коммерческих стандартизованных основ с добавлением отдельных компонентов.

1.4. Показания для применения стандартизированной технологии

Внутрилабораторному контролю качества подлежат:

' питательные среды, приготовленные в лаборатории путем регидратации и стерилизации стандартизированных основ с добавлением одного или нескольких комплексных стандартизованных компонентов или отдельных реа-

гентов (крови, ростовых, селективных добавок и других составляющих);

• среды, сконструированные в лаборатории из многочисленных ингредиентов (например: дифференциально-диагностические среды для выявления специфических ферментов или других признаков — например, токсигеннос-ти коринебактерий);

• питательные среды, имеющие особое значение для микробиологической диагностики, внутренний контроль качества которых регламентирован соответствующими нормативными документами (например, для выделения и идентификации Corynebacterium diphtheriae, Neisseria meningitidis,Vibrio cholera);

• питательные среды для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам подлежат внутреннему контролю качества (вместе с дисками с антибиотиками) в соответствии с действующими нормативными документами по данному виду исследований [6];

• сертифицированные питательные среды, в процессе применения которых отмечаются отклонения от заявленных свойств (недостаточный или атипичный рост микроорганизмов, изменение их свойств или другие особенности; отсутствие подавления роста сопутствующей микрофлоры и т. п.). Внутрилабораторный контроль качества

не проводится для:

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

• питательных сред, условия транспортировки и состояние упаковки которых дают основание предположить возможность ухудшения их качества; изменение физико-химических показателей при визуальном осмотре — комкование, увлажнение, изменение цвета и проч. (такие среды законодательно подлежат рекламации по соответствующему регламенту без дополнительных испытаний);

• новых серий коммерческих питательных сред, поступивших в лабораторию, если в процессе их применения не возникает сомнений в их качестве. В противном случае возможно проведение проверки по упрощенной схеме (например, проверка типичности морфологических признаков).

Примечание:

' Для готовых питательных сред требующих только регидратации и стерилизации или сред готовых к употреблению, а также питатель-

ных, селективных добавок или отдельных ингредиентов при отсутствии особых обстоятельств ограничивается проверкой наличия сертификата качества/регистрационного удостоверения, соответствия упаковки, а также внешних физико-химических признаков заявленным в сертификате [4].

2. ТРЕБОВАНИЯ К ОБЕСПЕЧЕНИЮ ВЫПОЛНЕНИЯ ТЕХНОЛОГИИ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Требования к специалистам и вспомогательному персоналу

Компетентность персонала, участвующего в выполнении технологии, должна соответствовать требованиям к образованию, знаниям, и умениям специалистов согласно ГОСТ Р ИСО 15189 [7]. В выполнении данной технологии принимают участие:

— врач-бактериолог;

— биолог (специальность по бактериологи);

— специалист со средним медицинским образованием (медицинский технолог, медицинский лабораторный техник, фельдшер — лаборант, лаборант).

2.2. Требования к образованию

специалистов

Знания и умения специалистов должны соответствовать образовательным стандартам.

Врач клинической лабораторной диагностики или биолог должен иметь диплом о высшем профессиональном образовании, диплом о последипломном образовании по специальности «бактериология», сертификат специалиста только для врача бактериолога. Врач обязан в установленном порядке повышать квалификацию в форме циклов тематического усовершенствования и сертификационных курсов.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Специалисты со средним образованием должны иметь соответствующую квалификацию по диплому, сертификат специалиста, а также проходить в установленном порядке повышение квалификации.

2.3. Требования к обеспечению безопасности труда медицинского персонала

Требования по безопасности труда при выполнении технологии соответствуют общим правилам

безопасности при работе в клинико-диагностической лаборатории согласно ГОСТ Р 52905—2007. В лаборатории должны соблюдаться правила биологической безопасности, правила сбора и удаления отходов, правила работы с электроприборами и реактивами, пожарной безопасности [8].

2.4. Материальные ресурсы, необходимые для выполнения технологии

Материальные ресурсы, необходимые для выполнения внутрилабораторного контроля качества питательных сред, определяются номенклатурой исследований, включенных в лицензию на медицинскую деятельность (Приложение 1).

3. ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ПОТОК ВНУТРИЛАБОРАТОРНОГО КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

Технология выполнения исследования включает следующие последовательные этапы:

— первичный анализ информации о питательной среде и ее внешних характеристиках;

— отбор образцов питательных сред для контроля;

— визуальная инспекция питательной среды;

— проверка питательной среды на стерильность;

— процедуры обращения с контрольными штаммами микроорганизмов;

— подготовка инокулюма и посев контрольных штаммов на питательную среду;

— интерпретация результатов и заключение о качестве питательной среды.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

3.1. Первичный анализ информации о питательной среде и ее характеристиках

При поступлении в лабораторию коммерческих питательных сред регистрируют: наименование и количество полученной среды; производителя и поставщика среды; серию, срок годности и состояние упаковки.

Изготовителем или поставщиком среды должны быть указаны следующие специфические микробиологические характеристики:

— тип продукта (сухая среда, основа среды, готовая к употреблению среда);

— критерии оценки функциональных характеристик питательной среды;

— используемые контрольные штаммы;

— ожидаемые результаты общего и микробиологического тестирования;

— значение рН (если необходимо);

— информация об условиях хранения и сроке годности.

3.2. Отбор образцов питательных сред для контроля

При объеме партии питательной среды (менее 150 единиц — пробирок, чашек Петри или флаконов), пробы сред отбирают однократно в количестве не менее 2—5 единиц. При получении на любом этапе испытаний неудовлетворительного результата исследования одной или большего числа единиц таких партий сред, их признают негодными для микробиологических исследований.

При объеме партии питательных сред (свыше 150 единиц) рекомендуется отбирать для проведения проверки от 8 до 50 пробирок, чашек Петри, флаконов в зависимости от объема партии. Обнаружение после инкубации помутнения жидкой (полужидкой) среды или появление на чашках от 2 до 5 колоний (в зависимости от объема партии) или большего количества колоний свидетельствует о непригодности среды и партию выбраковывают. При меньшем числе неудовлетворительных результатов проводят повторный отбор и контроль качества такого же количества образцов, как и в первый раз. Такую партию сред признают пригодной только тогда, когда суммарное количество образцов, выдержавших контроль на каждом из этапов обеих проверок, меньше аналогичного показателя, полученного при повторном тестировании. В противном случае партию среды считают непригодной (Приложение 2).

3.3. Визуальная инспекция питательной среды

Визуальная инспекция сухих сред предусматривает проверку целостности и герметичности упаковки, гомогенность продукта по консистенции (отсутствие комков, инородных включений и пр.), соответствие цвета среды информации, содержащейся в паспорте инструкции производителя.

Приготовленная в соответствии с инструкцией и разлитая по чашкам Петри питательная среда должна быть достаточно плотной, прозрачной

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

или равномерно матовой, не иметь посторонних включений, комков и других визуальных недостатков. Цвет среды зависит от наличия в ней индикаторов или компонентов, придающих среде цвет или оттенок (например, кровь, яичный желток, сыворотка и т. п.).

Визуальная проверка самостоятельно приготовленных и готовых коммерческих сред позволяет выявить следующие дефекты:

— нарушение упаковки готовых сред;

— ошибки в маркировке питательных сред на пробирках, чашках Петри или флаконах и их упаковке;

— истекший срок годности готовых сред;

— трещины или другие повреждения чашек Петри, пробирок, флаконов со средой;

— низкая плотность агаризованной среды;

— высыхание среды;

— отслоение плотной среды от поверхности чашек Петри или пробирок;

— наличие кристаллов на поверхности или в глубине среды и другие признаки ее замораживания или расплавления;

— неравномерная заливка плотной среды в чашке;

— недостаточное количество среды в чашке Петри (толщина слоя <3 мм) или пробирке (объем менее 3—5 мл);

— гемолиз кровяных сред;

— изменение цвета среды по сравнению с регламентированным (может быть вызвано отклонениями рН среды или ростом контаминантов);

— отсутствие гладкой поверхности среды (за счет пузырей и пр.);

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

— наличие обильного конденсата;

— очевидную контаминацию микроорганизмами;

— наличие в среде инородных включений или преципитатов.

3.4. Проверка питательной среды на стерильность

Самостоятельно приготовленные неселективные питательные среды проверяют на отсутствие контаминации микроорганизмами путем инкубирования в следующих условиях:

— в аэробной атмосфере при 35°С в течение 72 ч (все среды);

— в анаэробной атмосфере при 35°С в течение 72 ч (среды, предназначенные для работы с обли-гатно-анаэробными бактериями.

Проверку на стерильность коммерческих готовых сред в лабораториях ограничивают визуальной инспекцией отобранных из каждой партии чашек Петри, пробирок или флаконов на предмет отсутствия признаков роста микроорганизмов. В случае подозрения на контаминацию отобранные чашки Петри, пробирки или флаконы с готовыми питательными средами инкубируют в аэробной атмосфере при 35°С в течение 72 ч. (см. раздел 3.2).

3.5. Процедуры обращения с контрольными штаммами микроорганизмов

3.5.1. Понятия и определения

Референтный штамм (референс-штамм, эталонный штамм): микроорганизм, определенный, по меньшей мере, до рода и вида, включенный в государственный каталог и описанный в соответствии с его характеристиками.

Референтный образец: партия емкостей, содержащих культуры, полученные путем одного посева из референтного штамма или множество емкостей из одной и той же партии референтного штамма от поставщика.

Субкультуры референтного образца: субкультуры референтного образца, хранящиеся в коллекции лаборатории в лиофилизированном состоянии или в условиях глубокой заморозки (в жидком азоте или при температуре —70°С) или на среде хранения.

Рабочая культура: культуры, подготовленные для проведения внутрилабораторного контроля качества и подлежащие однократному использованию.

Контрольный штамм: микроорганизм, применяемый для оценки отдельных методик микробиологических исследований, микробиологических характеристик питательных сред и других видов работ, требующих стандартизации исследования. Контрольный штамм может быть получен из референтного образца, полученного из национальной коллекции, либо из субкультуры референтного образца, хранящейся в рабочей

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

коллекции с обязательным одним пассажем для восстановления типичных признаков.

3.5.2. Источники контрольных штаммов микроорганизмов

Эталонные (референтные) штаммы можно получить из следующих национальных и международных коллекций:

— Национального центра государственной коллекции возбудителей бактериальной инфекции III—IV групп патогенности (Государственный НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тара-севича*) [9];

— Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ВКПМ;

— Всесоюзной коллекции непатогенных микроорганизмов ИБФМБ;

— Американской коллекции типовых культур (АТСС), а также других национальных и международных коллекций.

3.5.3. Хранение контрольных штаммов микроорганизмов

Контрольные штаммы хранят в лиофилизиро-ванном состоянии, в замороженном виде в среде с криопротектором или на среде хранения в условиях и на протяжении сроков, приведенных в табл. 1.

3.5.4. Поддержание культур контрольных штаммов микроорганизмов

Для контрольных штаммов микроорганизмов, регулярно используемых для контроля качества, при наличии низкотемпературной морозильной камеры (до —70°C) из референтного образца готовят субкультуры референтного образца в необходимом для работы количестве (50 —100 и более пробирок), которые затем хранят в коллекции лаборатории в условиях глубокой заморозки (при температуре —70°С) и используют для приготовления рабочих культур контрольных штаммов.

При отсутствии низкотемпературной морозильной камеры из референтного образца, получаемого из государственных или национальных коллекций, готовят субкультуры референтного образца в необходимом для работы количестве. Приготовленные субкультуры хранят при темпе-

Таблица 1

Хранение контрольных штаммов микроорганизмов

Контрольные штаммы Условия хранения Вид хранящейся культуры Продолжительность хранения

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Все микроорганизмы Регламентируются производителем Лиофилизи-рованные культуры До окончания срока годности

Быстро растущие нетребовательные бактерии 2—8°C <-20°с <-50°C Субкультуры референтного образца Суспензия с криопро-тектором Суспензия с криопро-тектором Не более 6 мес <12 мес Неограниченно

Облегатно-анаэробные бактерии Нетребовательные бактерии <-20°C <-50°C Суспензия с криопро-тектором Суспензия с криопротек-тором <12 мес Неограниченно

* В настоящее время ФГБУ Научный центр экспертизы средств медицинского применения Минздрава РФ.

ратуре < —20°С не более 12 месяцев в бульоне с криопротектором, или при температуре 2—8°С — не более 6 месяцев в полужидком агаре. Субкультуры референтного образца допустимо использовать многократно при отсутствии контаминации.

3.5.5. Восстановление контрольных штаммов микроорганизмов Для получения рабочих культур делают высев из субкультуры референтного образца. Со среды хранения штамм рассевают на плотные неселективные питательные среды, обеспечивающие питательные потребности соответствующих микроорганизмов (1 пассаж). Посевы инкубируют в подходящих для роста условиях. При отсутствии роста на плотной среде культуру засевают на соответствующую жидкую питательную среду. После инкубирования делают высев на плотную питательную среду (1 пассаж). Так как микроорганизмы после 1 пассажа обладают пониженной жизнеспособностью, рекомендуется в качестве рабочих культур использовать культуры 2 или 3 пассажа (Приложение 3).

3.5.6. Проверка культур контрольных штаммов

Выросшую на питательном агаре культуру контрольного штамма визуально проверяют на чистоту роста и отсутствие диссоциации или просматривая под стерескопическим микроскопом (лупой) в «проходящем свете». При выявлении контаминации или диссоциации следует уничтожить использованную пробирку с субкультурой референтного образца.

3.6. Технология оценки качества питательных сред с помощью контрольных штаммов 3.6.1. Методы оценки качества питательных сред

Оценку качества испытуемой среды по микробиологическим критериям проводят с помощью одного из методов:

— качественного;

— полуколичественного;

— количественного.

Выбор метода контроля определяется видами питательных сред и целями контроля (чувствительность, специфичность, селективность и т. д.). Перечень необходимых контрольных штаммов указывается в сертификате на данную коммерческую среду либо указан в приложении к настоящей стандартизованной технологии на основные питательные среды. (Приложение 4—8).

Качественный метод (посев штрихом) используют как ускоренный метод оценки морфологических характеристик роста микроорганизма на исследуемой питательной среде или дифференцирующих свойств питательной среды (для дифференциально-диагностических сред). Для контроля качества дифференциально-диагностических сред необходимо использовать как контрольные штаммы микроорганизмов, дающие положительный результат, так и штаммы, дающие отрицательный результат теста на данной среде (Приложение 4—6).

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Полуколичественный или количественный метод используют для оценки чувствительности или селективности питательных сред [10—12]. На испытуемую среду наносят инокулят контрольного штамма (или нескольких контрольных штаммов), указанного в приложении 6, в определенном количестве.

3.6.2. Микробиологические критерии качества питательной среды

При использовании контрольных штаммов по их росту на испытуемой питательной среде можно оценить следующие микробиологические критерии качества питательной среды:

— типичность морфологических, культураль-ных характеристик микроорганизма;

— скорость роста;

— чувствительность (продуктивность) среды;

— селективность (для селективных сред);

— специфичность выраженность отличительных признаков различных микроорганизмов для дифференциально-диагностических сред;

— величина зон задержки роста вокруг дисков с антибиотиками для контроля сред и качества дисков с антибиотиками для диско-диффузионного метода определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

Чувствительность среды — определяют по наибольшему разведению, обеспечивающему формирование колоний или визуально видимый рост во всех засеянных пробирках.

Время появления роста (скорость роста в часах) — определяют по минимальному времени инкубации посевов, через который обнаруживается отчетливый, видимый невооруженным глазом рост культуры (помутнение, пленка, осадок — в бульоне, типичные колонии на чашках). Появление роста культуры регистрируют через 12, 18, 24,48 ч инкубации.

Культуральные свойства — характер роста на среде. На плотной среде — форма и размер колоний, края колоний, цвет, консистенция, наличие и тип гемолиза, склонность к роению и т. д.

Дифференцирующие свойства питательной среды — выраженность дифференцирующего признака оценивается по структуре, цвету колоний, цвету среды вокруг колоний тестируемого штамма в сравнении со штаммом, не обладающим данными свойствами.

Показатель ингибиции — оценивается величиной соотношения среднего количества колоний, выросших на селективной среде к среднему количеству колоний на контрольной среде.

3.6.3. Процедура подготовки инокулюма контрольного штамма

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

При использовании качественного метода контроля процедура инокуляции питательной среды должна соответствовать таковой, исполь-

зуемой в рутинной лабораторной практике (одна колония, верхушки 3—5 колоний или петля культуры и т. д.).

При использовании полуколичественного или количественного метода готовят рабочие разведения контрольного штамма на 0,9% физиологическом растворе. Исходную взвесь готовят с концентрацией 108—109 КОЕ/мл, используя соответствующие стандарты мутности или нефелометры. Десятикратными разведениями доводят концентрацию микроорганизмов до необходимой для контроля. Последнее рабочее разведение должно содержать в 0,1 мл требуемое для контроля минимальное количество микроорганизмов (Приложение 8, 9).

Для количественных испытаний чашечных сред используют инокулят требуемых микроорганизмов с концентрацией 102 КОЕ. Для полуколичественных или качественных испытаний плотных питательных сред необходим инокулят, содержащий 103—104 КОЕ. Для контроля чувствительности (продуктивности) жидких сред используют инокулят, содержащий 10—100 КОЕ (Приложение 8, 9).

Для испытаний на селективность в чашку или пробирку со средой инокулируют суспензию нецелевых микроорганизмов (микроорганизмов, подавление или замедление роста которых требуется для обеспечения оптимального роста целевых микроорганизмов), содержащую от 104 до 106 КОЕ. Параллельно осуществляется контроль приготовленного инокулюма путем высева на соответствующую плотную неселективную питательную среду.

3.6.4. Интерпретация результатов оценки качества питательной среды

При использовании качественного метода контроля питательных сред оценивается скорость роста, величина колоний, морфология колоний и наличие других признаков, свойственных для контрольного штамма, например, гемолиз, пигмент и т. д. (Приложение 4, 5).

При оценке качества неселективных питательных сред полуколичественным или количественным методом чувствительность (продуктивность) питательной среды должна составлять не менее 70%. На селективных средах чувствительность среды для целевого микроорганизма должна быть не менее 50—70% (в зависимости от ви-

да среды), а рост нецелевых микроорганизмов должен частично или полностью подавляться (Приложение 6).

3.7. Заключение о соответствии питательной среды заявленным характеристикам

Результаты испытаний считают удовлетворительными, если:

• неселективные среды обеспечивают рост использованных контрольных штаммов, а те формируют в течение регламентированного срока колонии характерной морфологии и достаточного размера;

• селективная среда частично или полностью ингибирует рост одних и поддерживает рост других контрольных штаммов в соответствии с ожидаемыми результатами, а растущие на ней микроорганизмы формируют колонии определенной величины с типичной морфологией в течение регламентированного срока;

• дифференциально-диагностические среды обеспечивают дифференциацию использованных контрольных штаммов микроорганизмов (по структуре, цвету колоний, цвету среды вокруг колоний или другим признакам). Если результаты исследований с контрольными штаммами не корректны, питательная среда считается непригодной для проведения клинических исследований на практике.

3. ДОКУМЕНТАЦИЯ

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Для регистрации исследований питательных сред в лаборатории вводится журнал «Внутри-лабораторный контроль качества питательных сред». При приготовлении любого вида питательных сред в журнале должна регистрироваться следующая информация:

• порядковый номер;

• дата приготовления среды;

• название среды;

• номер серии, изготовитель;

• количество емкостей (пробирок, чашек и др.);

• стерильность;

• рост;

• ростовые свойства;

• ингибирующие свойства;

• селиктивные свойства;

• биохимические свойства;

• заключение о пригодности;

• подпись (ФИО сотрудника лаборатории).

Приложение 1

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Материально-техническое оснащение необходимое для выполнения стандартной технологии

Аппаратура

• Микроскоп бинокулярный с иммерсионной системой и встроенным осветителем.

• Термостат (анаэростат).

• Автоклав.

• Сухожаровой шкаф.

• Ламинарный бокс II класса биологической безопасности, оснащенный НЕРА-фильтром.

• Дистиллятор.

• Аппарат для приготовления питательных сред (средоварка).

• Ультрафиолетовая лампа.

• Стерильные пробирки пластиковые с пластиковыми, силиконовыми, целлюлозными пробками или стеклянные.

• Чашки Петри пластиковые.

• Калиброванные бактериальные петли и шпатели одноразовые.

• Штативы для лабораторных емкостей и предметных стекол, заливки агаризованных сред.

• Предметные стекла.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

• Устройство для фиксации и окрашивания мазков.

• Стерильные серологические пипетки.

• Автоматические дозаторы с одноразовыми наконечниками.

• Низкотемпературный холодильник.

Приложение 2

Порядок отбора проб подлежащих контролю питательных сред

Величина Кол-во отбираемых проб Результат контроля первично отобранных проб Результат контроля повторно отобранных проб

партии (ед.)

первично повторно УР НР УР НР

Однократный отбор проб

5—15 2 — 0 1 Нп Нп

16—25 3 — 0 1 Нп нп

26—90 5 — 0 1 Нп нп

91 — 150 5 — 0 1 Нп Нп

Двукратный отбор проб

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

151—280 8 8 0 2 1 2

281—500 13 13 0 2 1 2

501 — 1200 20 20 0 3 3 4

1201—3200 32 32 1 4 4 5

3201 — 10000 50 50 2 5 6 7

Обозначения. УР — удовлетворительный результат; НР — неудовлетворительный результат.

Реактивы

• Питательные среды сухие и готовые.

• Дистиллированная вода.

• Физиологический раствор.

• Набор красителей для окрашивания мазков: фуксин (сафранин), метиленовый синий, набор для окраски по Граму (генцианвиолет, фуксин (сафранин), обесцвечивающий раствор, раствор Люголя).

• Иммерсионное масло.

• Контрольные штаммы микроорганизмов.

• Криобанк.

• Стандарты мутности (отраслевой производства ФГУН ГИСК им. Л.А. Тарасевич и Мак-Фарланда) / Денситометр.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Другие расходные материалы

• Маркеры по стеклу.

• Перчатки резиновые.

• Контейнеры для сброса отходов.

• Фильтровальная бумага.

• Емкости с дезинфицирующим раствором.

• Пакеты для автоклавирования. Контрольные штаммы микроорганизмов Эталонные (референтные) штаммы национальных и международных коллекций.

Подготовка тест-]

1. Восстановление культур аэробов.

Восстановление культур из лиофилизирован-ного или замороженного (на полистироловых или стеклянных бусах) состояния, а также из среды хранения проводят с использованием жидкой и плотной питательных сред. В первых посевах микробы обладают пониженной жизнеспособностью, в связи с чем рекомендуется использовать культуру после 2—3 пассажей через питательную среду.

1-й пассаж:

— Лиофилизированная культура. Ампулу с лиофилизированной культурой вскрывают согласно инструкции, вносят в нее 0,4—0,6 мл питательного бульона или физраствора, перемешивают до получения однородной микробной взвеси и высевают на жидкую и плотную питательную среду.

— Культура со среды хранения. Культуру бактериологической петлей переносят в пробирку с питательным бульоном, перемешивают до получения однородной микробной взвеси, встряхивают, а затем делают высев на питательный агар. Посевной материал распределяют шпателем по среде для получения отдельных колоний.

— Замороженная культура. Стерильным пинцетом или иглой достают 1 бусину с культурой из пробирки Криобанк, извлеченной из морозильника. Бусину опускают в пробирку с питательным бульоном или на поверхность плотной питательной среды и инкубируют при соответствующих условиях. Бусину утилизируют в соответствии с общепринятыми правилами. Пробирку с оставшимися бусинами возвращают в морозильник.

Посевы инкубируют при 35—37°С в течение 18—20 ч.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Выросшую на питательном агаре культуру проверяют на чистоту роста и отсутствие диссоциации. Далее проводят изучение культуральных,

Приложение 3

мма для контроля

морфологических и биохимических свойств. При обнаружении более 25% полиморфных колоний, культура не может быть использована для контроля.

2-й пассаж:

Отдельную типичную колонию культуры 1-го пассажа переносят в пробирку с питательным бульоном, перемешивают и пересевают в 2—3 пробирки с бульоном и на питательный агар. Выросшую на питательном агаре культуру проверяют на соответствие культуральных, морфологических и биохимических свойств.

Восстановленную таким образом культуру используют для проведения внутрилабораторного контроля питательных сред или для других нужд

2. Восстановление культур анаэробов.

1-й пассаж:

Лиофилизированную или замороженную (на полистироловых или стеклянных бусах) культуру, а также из среды хранения переносят в пробирку с питательным бульоном для анаэробов и перемешивают до получения однородной микробной взвеси. Посевы инкубируют при 35—37°С в течение 18—20 ч в анаэробных условиях до отчетливого видимого роста культуры в виде диффузного помутнения.

2-й пассаж:

Отдельную типичную колонию культуры 1-го пассажа переносят в пробирку с питательным бульоном, перемешивают и пересевают в 2—3 пробирки с бульоном и на питательный агар. Посевы инкубируют в анаэробных условиях при 35—37°С в течение 18—20 ч. Выросшую на питательном агаре культуру проверяют на соответствие куль-туральных, морфологических и биохимических свойств.

Восстановленную таким образом культуру используют для проведения внутрилаборатор-ного контроля питательных сред или для других нужд.

Приложение 4

Минимальные требования к проверке качества отечественных питательных сред с помощью контрольных тест-штаммов* микроорганизмов

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

N п/п Питательные среды (регистрационный номер) Атмосфера, время и температура культивирования Контрольные штаммы* Наблюдаемый эффект

1 2 3 4 5

1 Питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-бульон) ФСР 2007/00002 Аэробные 24—48 ч (37 ± 1)°С Shigella flexneri 1a 8516 Образование индола (розовое окрашивание индикаторной бумаги)

Salmonella typhi H901 ГДР/ГИСК Образование сероводорода (почернение индикаторной бумаги)

Corynebacterium xerosis 1911 Диффузное помутнение среды

Staphylococcus aureus Wood-46 Диффузное помутнение среды

Pseudomonas aeruginosa 27/99 Диффузное помутнение среды

Escherichia coli 3912/41(055:K59) Диффузное помутнение среды

2 Питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-агар) ФСР 2007/00001 Аэробные 18—20 ч (37 ± 1)°С (для S. шагсевсеш 1 при (22 ± 2)°С) Shigella flexneri 1a 8516 Бесцветные прозрачные круглые колонии диаметром 1,5 ± 0,5 мм в S-форме

Shigella sonnei «S form» Бесцветные прозрачные круглые колонии диаметром 1,5 ± 0,5 мм в S-форме

Pseudomonas aeruginosa 27/29 Сплошной рост с образованием сине-зеленого пигмента

Serratia marcescens 1 Сплошной рост с образованием красного пигмента

3 Питательная среда для выделения саль- Аэробные 18—20 ч (37 ± 1)°С Salmonella typhi H901 ГДР/ГИСК Рост бесцветных колоний в S-форме диаметром 1,0—2,0 мм

хая (SS-агар) ФСР 2007/00838 Salmonella paratyphi A-225 Рост бесцветных колоний в S-форме диаметром 1,0—2,0 мм

Shigella flexneri 1a 8516 Рост бесцветных или слегка розовых колоний в S-форме диаметром 1,0—2,0 мм

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Shigella sonnei «S form» Рост бесцветных или слегка розовых колоний в S-форме диаметром 1,0—2,0 мм

Escherichia coli 3912/41 (055:K59) Колонии окрашены в малиновый цвет. Диаметр колоний не менее 1,5—2,5 мм

Proteus vulgaris HX 19 222 Рост бесцветных колоний диаметром 2,0—4,0 мм. Роение частично подавлено

Proteus mirabilis 3177 Рост бурых колоний диаметром 2,0—4,0 мм с темным центром. Роение подавлено полностью

Staphylococcus aureus Wood-46 Рост подавлен полностью

N п/п Питательные среды (регистрационный номер) Атмосфера, время и температура культивирования Контрольные штаммы* Наблюдаемый эффект

1 2 3 4 5

4 Питательная среда для выделения шигелл Аэробные 18—20 ч (37 ± 1)°С Shigella flexneri 1a 8516 Бесцветные, нежные, гладкие, круглые диаметром 1,0—2,0 мм

(АГАР ПЛОСКИ-РЕВА-ГРМ) ФСР 2008/03938 Salmonella typhi H-901 ГДР/ГИСК Бесцветные, нежные, гладкие, круглые диаметром 1,0—2,0 мм

Salmonella paratyphi A-225 Бесцветные, нежные, гладкие, круглые диаметром 1,0—2,0 мм

Shigella sonnei «S form» Бесцветные или слегка розового цвета, нежные, гладкие, круглые диаметром 1,0—2,0 мм

Escherichia coli 3912/41 (О55:К59) Малинового цвета, круглые, выпуклые, гладкие диаметром 1,5—2,5 мм

5 Питательная среда для выделения и идентификации патогенных энтеробак-терий (XLD-агар) ФСР 2010/09165 Аэробные 24—48 ч (37 ± 1)°С Shigella flexneri 1a 8516 Круглые, блестящие, бледно-розовые или цвета среды, диаметром 1,0—1,5 мм

Salmonella typhimurium 79 Круглые, блестящие, бесцветные с черным центром или без него, диаметром 1,0—3,0 мм

Salmonella enteritidis 11272 Круглые, блестящие, бесцветные с черным центром или без него, диаметром 1,0—3,0 мм

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Escherichia coli 3912/41(O55:K59) Круглые, непрозрачные, желтые, с желтой зоной вокруг, диаметром 1,5—3,0 мм

Proteus mirabilis 3177 Круглые, прозрачные, желтого цвета с темным центром, диаметром 1,0—2,5 мм

Staphylococcus aureus Wood-46 Отсутствие роста

6 Питательный бульон Аэробные (24 ± 3)ч (41,5 ± 1)°С Salmonella enteritidis 11272 Диффузное помутнение

для накопления сальмонелл по Раппапор-ту-Вассилиадису сухой (^У^-Бульон) ФСР 2010/09163 Salmonella typhimurium 79 Диффузное помутнение

Escherichia coli ATCC 25922 Отсутствие роста

7 Питательная среда с эозин-метиленовым синим сухая (СРЕДА ЛЕВИНА-ГРМ) ФСР 2008/03063 Аэробные 24—48 ч (37 ± 1)°С Shigella flexneri 1a 8516 Наличие бесцветных или слабо-розовых, прозрачных, круглых колоний диаметром 1,0—1,5 мм

Escherichia coli 168/59 (0111:K58) Наличие круглых темно-фиолетовых колоний с зеленым металлическим блеском (или без него) диаметром 1,5—2,0 мм

Staphylococcus aureus 209-P (ATCC 6538-P) Наличие бесцветных или светло-фиолетовых круглых колоний с темным центром до 1 мм

N п/п Питательные среды (регистрационный номер) Атмосфера, время и температура культивирования Контрольные штаммы* Наблюдаемый эффект

1 2 3 4 5

8 Питательная среда для выделения энте-робактерий сухая (АГАР ЭНДО-ГРМ) ФСР 2007/00375 Аэробные 18—20 ч (37 ± 1)°С Shigella sonnei «S form» Рост бесцветных или слегка розовых колоний со слабо выраженным центром, круглые, прозрачные, диаметром 1,5—2,5 мм

Shigella dysentheriae I 1362 Рост бесцветных, круглых, прозрачных колоний диаметром 1,0—1,5 мм

Escherichia coli 3912/41(055:K59) Рост круглых колоний малинового цвета с металлическим блеском диаметром 2,0—3,0 мм

Escherichia coli 168/59 (O111:K58) Рост круглых колоний малинового цвета диаметром 1,5—2,5 мм с нечетким металлическим блеском

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Staphylococcus aureus Wood-46 Полное отсутствие роста

9 Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (ВИСМУТ-СУЛЬ-ФИТ-ГРМ агар) ФСР 2008/03237 Аэробные 24—48 ч (37 ± 1)°С Salmonella typhi H 901 ГДР/ГИСК Наличие круглых, черных колоний, с блестящей зоной вокруг них, диаметром 1,0—3,0 мм; среда под колониями окрашивается в черный цвет

Salmonella typhimurium 79 Наличие круглых, черных колоний, с блестящей зоной вокруг них, диаметром 1,0—3,0 мм; среда под колониями окрашивается в черный цвет

Salmonella london 3496 Наличие круглых, черных колоний, с блестящей зоной вокруг них, диаметром 1,0—3,0 мм; среда под колониями окрашивается в черный цвет

Salmonella paratuphi A 225 Наличие круглых, зеленых, с темным центром колоний диаметром 1,0—2,5 мм

Salmonella gallinarum 665 Наличие круглых, темно-зеленых колоний диаметром 0,8—1,2 мм

Salmonella typhi «bismut» Наличие полиморфных, черных с металлическим блеском колоний или без него, диаметром 1,0—2,0 мм; среда под колониями окрашивается в черный цвет

Escherichia coli 3941/12 (055:K59) Наличие круглых, зеленовато-коричневых колоний, диаметром 0,5—1,5 мм

Proteus vulgaris HX 19 222 Наличие круглых, светло-зеленого цвета колоний диаметром 1,0—2,0 мм

Staphylococcus aureus Wood 46 Рост подавлен полностью

Klebsiella rhinoscleromatis K3 NCTC 5046 Рост подавлен полностью

N п/п Питательные среды (регистрационный номер) Атмосфера, время и температура культивирования Контрольные штаммы* Наблюдаемый эффект

1 2 3 4 5

10 Питательная среда для обнаружения бактерий группы кишечной палочки сухая (СРЕДА Аэробные 24—48 ч (37 ± 1)°С (для E. coli дополнительно 43 ± 1°С) Escherichia coli 675 Помутнение среды с образованием газа в поплавке

Klebsiella pneumoniae 418 Помутнение среды с образованием газа в поплавке

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

КЕССЛЕРА-ГРМ) ФСР 2007/00971 Citrobacter freundii 101/57 Помутнение среды с образованием газа в поплавке

Enterobacter aerogenes 10006 Помутнение среды и слабое газообразование в поплавке

Pseudomonas aeruginosa 27/99 Слабое помутнение среды без газообразования

Proteus vulgaris HX 19 222 Отсутствие роста

Staphylococcus aureus Wood-46 Отсутствие роста

11 Питательная среда для выделения и дифференциации E. coli 157:Н7 сухая (СОРБИТОЛ E. COLI O157:H7 агар) ФСР 2007/00970 Аэробные 18—20 ч (37 ± 1)°С Escherichia coli 4 (О157:Н7) Круглые, полупрозрачные, бесцветные или светло-розовые, диаметром 1,5—2,5 мм

Escherichia coli 3912/41 (055: К59) Круглые, малинового цвета со слабо выраженным металлическим блеском или без него, диаметром 1,5—2,5 мм

Salmonella typhimurium 79 Круглые, малинового цвета, с металлическим блеском, диаметром 1,0—2,0 мм

Shigella flexneri 1 a 8516 Круглые, полупрозрачные, бесцветные или светло-розовые, диаметром 1,0—1,5 мм

Staphylococcus aureus Wood-46 Полное отсутствие роста

12 Питательная среда для обнаружения и выделения Е. coli, колиформных бактерий и кишечных патогенов сухая (АГАР МАККОНКИ-ГРМ) Аэробные 18—20 ч (37 ± 1)°С Escherichia coli АТСС 25922 Круглые, гладкие от розового до красного цвета, диаметром 1,5—3,0 мм

Escherichia coli 3912/41 (055:K59) Круглые, гладкие от розового до красного цвета, диаметром 1,5—3,0 мм

ФСР 2009/05628. Shigella flexneri 1a 8516 Бесцветные или бледно-розовые, круглые, гладкие, диаметром 1,0—2,0 мм

Salmonella typhimurium 79 Бесцветные, круглые, гладкие, диаметром 1,5—3,0 мм

Proteus mirabilis 3177 Бесцветные, круглые, гладкие, диаметром 2,0—4,0 мм

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Enterococc faecalis 775 Мелкие, розово-красные, диаметром до 1,0 мм

Staphylococcus aureus 209 Р Рост подавлен

N п/п Питательные среды (регистрационный номер) Атмосфера, время и температура культивирования Контрольные штаммы* Наблюдаемый эффект

1 2 3 4 5

13 Питательная среда Аэробные 18—20 ч (37 ± 1)°С Salmonella typhimurium 79 Без изменения цвета среды

для предварительного теста на присутствие E. coli и коли- Escherichia coli ATCC 25922 Изменение цвета среды в желтый, газ

формных бактерий сухая (БУЛЬОН МАККОНКИ-ГРМ) Escherichia coli 3912/41 (О55:К59) Изменение цвета среды в желтый, газ

ФСР 2009/05627 Klebsiella pneumoniae 418 Изменение цвета среды в желтый, газ

Enterobacter aerogenes 10006 Изменение цвета среды в сиренево-желтый, газ

Shigella flexneri 1 a 8516 Без изменения цвета среды

Staphylococcus aureus 209 Р Рост подавлен

14 Питательная среда для выделения и идентификации эн-теробактерий сухая (SDS-БУЛЬОН) Аэробные 24—48 ч (37 ± 1)°С Escherichia coli 675 Помутнение и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Enterobacter aerogenes 10006 Помутнение и изменение цвета среды из зеленого в желтый

ФСР 2007/00969 Klebsiella pneumoniae 3534/51 Помутнение и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Serratia marcescens 1 Помутнение и изменение цвета среды из зеленого в желтый

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Citrobacter freundii 101/57 Помутнение и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Escherichia coli Ewing (O124K72) 227 Помутнение без изменения цвета среды

Shigella flexneri 1a 8516 Помутнение без изменения цвета среды

Staphylococcus aureus Wood-46 Полное отсутствие роста

Proteus vulgaris HX 19 222 Полное отсутствие роста

15 Питательная среда для идентификации энтеробактерий Аэробные 24—48 ч (37 ± 1)°С Salmonella typhi «bismuth» Скошенная часть малинового цвета, столбик желтого цвета. Слабое почернение по уколу.

сухая (Агар КЛИГЛЕРА-ГРМ) ФСР 2007/00968 Salmonella paratyphi B 8006 Скошенная часть малинового цвета, столбик чёрного цвета. Газообразование.

Shigella sonnei «S form» Скошенная часть малинового цвета, столбик желтого цвета.

Escherichia coli 3912/41 (055:K59) Скошенная часть и столбик жёлтого цвета. Газообразование.

Providencia alcalifaciens 1068-50 Скошенная часть малинового цвета, столбик желтого цвета. Слабое газообразование.

Proteus mirabilis Сиднеев Скошенная часть малинового цвета, столбик чёрного цвета. Газообразование.

Pseudomonas aeruginosa 613-60 Скошенная часть и столбик малинового цвета.

N п/п Питательные среды (регистрационный номер) Атмосфера, время и температура культивирования Контрольные штаммы* Наблюдаемый эффект

1 2 3 4 5

16 Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (СРЕДЫ ГИССА-ГРМ) (с лактозой, глюкозой, сахарозой, мальтозой или маннитом). ФСР 2008/03494 Аэробные 18—20 ч (37 ± 1)°С Shigella flexneri 1a 8516 Escherichia coli 3912/41 (055:K59) Shigella dysenteriae I 1362 Proteus vulgaris HX 19 222 Klebsiella pneumoniae 3534/51 Salmonella typhi 65 Staphylococcus aureus «Виотко» Каждая среда Гисса-ГРМ позволяет идентифицировать штаммы энтеробактерий по тесту ферментации одного из углеводов или маннита, содержащегося в этой среде. В случае положительной реакции происходит образование кислоты с изменением цвета среды с сине-зеленого на желто-зеленый или желтый, образование газа сопровождается появлением «пузырьков» в глубине среды или на ее поверхности. Отрицательная реакция характеризуется отсутствием изменений цвета среды.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

17 Питательная среда для первичной идентификации энтеробактерий сухая (СРЕДА РЕССЕЛЯ-ГРМ) ФСР 2008/02818 Аэробные 18—20 ч (37 ± 1)°С Shigella flexneri I a 8516 Изменение цвета столбика среды в желтый и посинение ее скошенной части

Salmonella paratyphi A-225 Изменение цвета столбика среды в желтый с образованием газа и посинением скошенной части среды

Alcaligenes faecalis 415 Изменение цвета всей среды в синий или посинение ее скошенной части

Escherichia coli 055 К 59 № 339 Изменение цвета всей среды в желтый с образование газа в столбике

18 Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Железо-глюкозо-лактозный агар с мочевиной) ФСР 2011/10006 Аэробные 18—20 ч (37 ± 1)°С Yersinia enterocolitica 287 II Столбик среды и скошенная часть ярко-малинового цвета

Yersinia pseudotuberculosis III Столбик среды и скошенная часть ярко-малинового цвета

Shigella sonnei «S form» Столбик среды желтого цвета, скошенная часть красно-малинового цвета

Escherichia coli 3912/41(055:K59) Столбик и скошенная часть среды желтого цвета, наличие в столбике пузырьков газа

Citrobacter freundii 101/57 Столбик и скошенная часть среды желтого цвета, почернение среды в столбике, наличие в столбике пузырьков газа

Proteus vulgaris HX 19 222 Почернение среды в столбике, скошенная часть ярко-малинового цвета

N п/п Питательные среды (регистрационный номер) Атмосфера, время и температура культивирования Контрольные штаммы* Наблюдаемый эффект

1 2 3 4 5

19 Питательная среда для обнаружения E. coli и колиформ-ных бактерий по признаку ферментации лактозы сухая (СРЕДА ЭЙКМАНА с лактозой) ФСР 2008/03666 Аэробные 24—48 ч (37 ± 1)°С и 18—24 ч (43 ± 1)°С (для эшерихий) Escherichia coli 3912/41 (О55:К59) Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Escherichia coli Ewing (O124K72) 227 Помутнение без изменения цвета среды

Escherichia coli ATCC 25922 Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Escherichia coli 4 (О157:Н7) Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Enterobacter aerogenes 10006 Помутнение, слабое газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Pseudomonas aeruginosa 27/99 Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в сине-зеленый

Proteus vulgaris HX 19 222 Помутнение без изменения цвета среды

20 Питательная среда для обнаружения E. coli и колиформ-ных бактерий по признаку ферментации глюкозы сухая (СРЕДА ЭЙКМАНА с глюкозой) ФСР 2008/03665 Аэробные 24—48 ч (37 ± 1)°С и 18—24 ч (43 ± 1)°С (для эшерихий) Escherichia coli 3912/41 (О55:К59) Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Escherichia coli Ewing (O124K72) 227 Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Escherichia coli ATCC 25922 Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Escherichia coli 4 (О157:Н7) Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Enterobacter aerogenes 10006 Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Pseudomonas aeruginosa 27/99 Помутнение, изменение цвета среды из зеленого в сине-зеленый

Proteus vulgaris HX 19 222 Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

21 Питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза сухая (ИЕРСИНИЯ-АГАР) ФСР 2007/00900 Аэробные 24—48 ч (28 ± 1)°С Yersinia enterocolitica 287-II Рост круглых, гладких, блестящих, сине-зеленых колоний диаметром не менее 1,5 мм

Yersinia pseudotuberculosis III Рост матовых, шероховатых, зеленовато-синих колоний с фестончатыми краями и темным выпуклым центром диаметром не менее 1,0 мм

Escherichia coli 3912/41 (055:K59) Рост ярко-желтых сочных выпуклых колоний диаметром не менее 2,0 мм

Shigella flexneri 1a 8516 Рост желтых плоских колоний диаметром не менее 1,0 мм

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Staphilococcus aureus Wood-46 Роста нет

N п/п Питательные среды (регистрационный номер) Атмосфера, время и температура культивирования Контрольные штаммы* Наблюдаемый эффект

1 2 3 4 5

22 Питательная среда для выделения кори-небактерий (КОРИНЕБАКАГАР) ФСР 2007/00003 Аэробные 48 ч (37 ± 1)°С Corynebacterium diphtheriae gravis 665 Темно-серые, шероховатые, со складчатой поверхностью и неровными (изрезанными) краями — тип «маргаритки» диаметром 2,0—3,5 мм

Corynebacterium diphtheriae mitis 6765 Темно-серые, круглые, гладкие, блестящие, с ровными краями диаметром 1,5—3,0 мм

Corynebacterium xerosis 1911 Серовато-черные, круглые, выпуклые, блестящие диаметром 1,2—2,0 мм

Corynebacterium ulcerans 675 Серовато-черные, круглые, выпуклые, блестящие диаметром 0,5—1,5 мм

Staphylococcus aureus Wood-46 Отсутствие роста

Streptococcus pyogenes Dick I Отсутствие роста

23 Питательная среда для определения ток-сигенности дифтерийных микробов сухая (КОРИ-НЕТОКСАГАР) ФСР 2007/00370 Аэробные 24—48 ч (37 ± 1)°С Corynebacterium diphtheriae gravis 665 Corynebacterium diphtheriae mitis 6765 Corynebacterium diphtheriae intermedius 619 1. Через 22—24 ч при просмотре посева под лупой в проходящем свете на темном фоне наблюдаются линии преципитации 2. Через 44—48 ч линии преципитации становятся компактнее и видны невооруженным глазом

Corynebacterium diphtheriae gravis nontoxigenic 4895 Corynebacterium diphtheriae mitis nontoxigenic 3689 Corynebacterium diphtheriae intermedius nontoxigenic 7227 Линии преципитации после инкубации не наблюдаются

24 Питательная среда для идентификации коринебактерий по тесту расщепления цистина сухая (СРЕДА ПИЗУ) ФСР 2008/03064 Аэробные 18—20 ч (37 ± 1)°С Corynebacterium diphtheriae mitis nontoxigenic 203 АГ Corynebacterium diphtheriae gravis 75 Почернение среды по ходу укола и образование «облачка» черно-коричневого цвета в глубине столбика

Corynebacterium xerosis 1911 Без изменения цвета среды (возможно появление темного пятна на поверхности среды)

Corynebacterium pseudodiphtheriticum «Соколов» Без изменения цвета среды

25 Питательная среда для выделения стафилококков сухая (СТАФИЛОКОКК-АГАР) ФСР 2011/10007 Аэробные 48 ч (37 ± 1)°С Staphylococcus aureus «Виотко» Светло-желтые, непрозрачные, выпуклые, круглые с ровными краями блестящие диаметром 2,0—4,0 мм

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Белые, непрозрачные, выпуклые, круглые с ровными краями, диаметром 1,5—3,5 мм

Staphylococcus saprophyticus CCM 883 Белые, непрозрачные, выпуклые, круглые с ровными краями, диаметром 1,5—3,5 мм

Escherichia coli 168/59(O111:K58) Отсутствие роста

Pseudomonas aeruginosa 273 Отсутствие роста

Proteus vulgaris HX 19 222 В случае роста — отсутствие «роения»

N п/п Питательные среды (регистрационный номер) Атмосфера, время и температура культивирования Контрольные штаммы* Наблюдаемый эффект

1 2 3 4 5

26 ПЕПТОН основной сухой ФСР2009/05472 Аэробные 6 ч (37 ± 1)°С Vibrio cholerae не О1 Р-9741 Формирование типичных колоний на щелочном агаре после высева из основного пептона

Vibrio cholerae О1 Р-1 (145) Формирование типичных колоний на щелочном агаре после высева из основного пептона

Vibrio cholerae О1 М-878 (890) Формирование типичных колоний на щелочном агаре после высева из основного пептона

27 Питательная среда для выделения и культивирования холерного вибриона сухая (ЩЕЛОЧНОЙ АГАР) ФСР 2009/05473 Аэробные 12 ч (37 ± 1)°С Vibrio cholerae не О1 Р-9741 Гладкие, полупрозрачные с голубоватым оттенком в проходящем свете колонии диаметром не менее 1,0 мм

Vibrio cholerae О1 Р-1 (145) Гладкие, полупрозрачные с голубоватым оттенком в проходящем свете колонии диаметром не менее 1,0 мм

Vibrio cholerae О1 М-878 (890) Гладкие, полупрозрачные с голубоватым оттенком в проходящем свете колонии диаметром не менее 1,0 мм

28 Питательная среда для выделения и культивирования возбудителя холеры и других энтеропато-генных вибрионов сухая (TCBS-агар) ФСР Аэробные 18 ч (37 ± 1)°С Vibrio cholerae не 01 P-9741 Наличие роста в виде круглых, гладких колоний желтого цвета диаметром не менее 1,0 мм

Vibrio cholerae cholerae 01 группы Р-1 (145) Наличие роста в виде круглых, гладких колоний желтого цвета диаметром не менее 1,0 мм

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Vibrio cholerae eltor 01 группы М 878 (890) Наличие роста в виде круглых, гладких колоний желтого цвета диаметром не менее 1,0 мм

Escherichia coli 3912/41 (О55:К59) Рост подавлен

Proteus vulgaris HX 19 222 Рост подавлен

29 Питательная среда для контроля стерильности сухая (ТИОГЛИКОЛЕ-ВАЯ СРЕДА) ФСР 2008/03235 Анаэробные 48 ч 34-35 °С Alcaligenes faecalis 415 Помутнение верхней части столбика среды

Clostridium novyi 198 Шарообразные колонии или диффузное помутнение среды с выраженной прозрачной зоной в верхней части столбика среды

30 Питательная среда для количественного определения микробной загрязненности (Среда № 1 ГРМ) ФСР 2011/11415 Аэробные (21 ± 3)ч (33 ± 2)°С Bacillus cereus NCTC 8035 Плоские, мелкобугристые, слегка вогнутые, матовые колонии, с волнистыми краями, диаметром 2,0-5,0 мм

Staphylococcus aureus FDA 209-P Круглые, слегка выпуклые колонии, с ровными краями, диаметром 1,5-2,0 мм

Enterobacter cloacae ГИСК A-186 Круглые колонии в S-форме, диаметром 1,5—2,0 мм

31 Питательная среда для идентификации стафилококков (СРЕДА № 10 ГРМ) ФСР 2007/00374 Аэробные (45 ± 3)ч (33 ± 2)°С Staphylococcus aureus FDA 209-Р (АТСС 6538-Р) Золотисто-желтые колонии, окруженные желтыми зонами

Escherichia coli ATCC 25922 Отсутствие роста

Pseudomonas aeruginosa ГИСК 453 Отсутствие роста

N п/п Питательные среды (регистрационный номер) Атмосфера, время и температура культивирования Контрольные штаммы* Наблюдаемый эффект

1 2 3 4 5

32 Питательная среда для культивирования и выделения бифидобактерий сухая (БИФИДУМ-СРЕДА) ФСР 2008/03236 Анаэробные 24—72 ч (37 ± 1)°С Bifidobacterium bifidum 1 Колонии типа «комет», «гвоздиков», «тяжей», «шариков» различной степени четкости, с расположенные по всему объему столбику среды и прозрачной зоной в верхней его части

Bifidobacterium adolescentis ATCC 15705

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Bifidobacterium breve ATCC 15701

Bifidobacterium infantis ATCC 15702

Bifidobacterium longum ATCC 15708

Escherichia coli 3912/41(055:K59) Диффузное помутнение столбика среды с газообразованием в виде пены на поверхности

Pseudomonas aeruginosa 27/99 Диффузное помутнение верхней части столбика среды с последующим распространением мутности вниз по среде

33 Питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам сухая (СРЕДА ТИПА АГВ) ФСР 2012/13687 Аэробные 18—20 ч (36 ± 1)°С Escherichia coli АТСС 25922 Четкие зоны ингибиции

Staphylococcus aureus АТСС 25923 Четкие зоны ингибиции

Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 Четкие зоны ингибиции

34 Питательная среда для выявления кло-стридий по сульфит-редуцирующему признаку сухая (СУЛЬФИТНЫЙ АГАР) ФСР 2009/05626 Анаэробные 24 ч (37 ± 1)°C Модификации 1,2 Модификация 3

Clostridium perfringens 13124 Колонии черного цвета по всему объему столбика среды Колонии И-формы черного или белого цвета с черным центром и частичное почернение среды

Escherichia coli 25922 Колонии белого цвета на поверхности и в столбике среды Колонии S-формы, белого цвета

Pseudomonas aeruginosa 27/99 Колонии белого цвета на поверхности среды Колонии И-формы, белого цвета

35 Питательный бульон для выделения листе-рий (ПБЛ) ФСР 2010/09161. Аэробные 48ч30°C Listeria monocytogenes 766 Помутнение среды, при встряхивании наблюдаются муаровые волны

Listeria ivanovi Помутнение среды, при встряхивании наблюдаются муаровые волны

Escherichia coli АТСС 25922 Рост подавлен

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Proteus vulgaris HX 19 222 Рост подавлен

Staphylococcus aureus Wood-46 Рост подавлен

N п/п Питательные среды (регистрационный номер) Атмосфера, время и температура культивирования Контрольные штаммы* Наблюдаемый эффект

1 2 3 4 5

36 Питательный агар для выделения листе-рий (ПАЛ) ФСР 2010/09162 Аэробные 48 ч 37°С Listeria monocytogenes 76 Наличие мелких, круглых, серо-желтого цвета колоний, диаметром 0,4—1,2 мм с образованием вокруг колоний черной зоны

Listeria ivanovi Наличие мелких, круглых, серо-желтого цвета колоний, диаметром 0,2—1,0 мм с образованием вокруг колоний черной зоны

Esherichia coli АТСС 25922 Рост подавлен

Proteus vulgaris HX 19 222 Рост подавлен

Staphylococcus aureus Wood-46» Рост подавлен

37 Питательная среда для выделения и культивирования дрожжеподобных и плесневых грибов (САБУРО МАЛЬТОЗА АГАР) ТУ ФСР 2009/05625 Аэробные 44—48 ч 25—30°С Candida albicans NCTC 885-653 Гладкие, выпуклые колонии белого цвета в виде полусферы с ровным краем, диаметром 2,0—3,0 мм

Staphylococcus aureus АТСС 6538-Р (FDA 209-P) Отсутствие роста в присутствии теллурита калия

Enterobacter cloacae ГИСК A-186 Отсутствие роста в присутствии теллурита калия

38 Набор питательных сред для ускоренного определения лекарственной чувствительности и первичной идентификации мико-бактерий туберкулеза (ТБ тест-набор) ФСР 2007/01366 Аэробные 8—12 суток (37 ± 1)°С Mycobacterium tuberculosis H37Ra Появление красной или интенсивной розовой, или фиолетовой окраски во флаконах № 1 без препаратов и во флаконе № 3 с ТКГ

39 Набор питательных сред для ускоренного определения чувствительности мико-бактерий туберкулеза к пиразинамиду ^А-тест) ФСР 2011/10830 Аэробные 8—21 суток (37 ± 1)°С Mycobacterium tuberculosis H37Ra Появление красной или интенсивной розовой, или фиолетовой окраски во флаконах № 1 без PZA

40 Питательная среда для выделения энтерококков сухая (ЭН-ТЕРОКОККАГАР) ФСР 2011/10008 Аэробные 24—48 ч (37 ± 1)°С Enterococcus faecalis ATCC 19433 Колонии круглые гладкие бордового цвета с металлическим блеском

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Enterococcus faecium ATCC 19434 Колонии гладкие круглые светло-розового цвета или с темным центром и светлым ободком

Escherichia coli ATCC 25922 Отсутствие роста

Staphylococcus aureus АТСС 25923 Отсутствие роста

N п/п Питательные среды (регистрационный номер) Атмосфера, время и температура культивирования Контрольные штаммы* Наблюдаемый эффект

1 2 3 4 5

41 Питательная среда для выделения и культивирования лактобацилл сухая (ЛАКТОБАКАГАР) ФСР 2010/09164 Анаэробные 44—48 ч (37 ± 1)°С Lactobacillus plantarum 8Р-А3 Lactobacillus brevis ATCC 367 Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus ATCC 11842 Белые, блестящие колонии с ровными краями

Pseudomonas aeruginosa 27/99 Escherichia coli 0551 3912/41 (055:K59) Отсутствие роста

42 Питательная среда для культивирования и выделения гемофильной палочки,готовая к применению (Гемофилус агар) ФСР 2011/11118 Анаэробные 24—48 ч 37°С Haemophilus influenzae 423 Рост в виде слизистых круглых полупрозрачных сероватого цвета колоний диаметром до 2 мм

Haemophilus influenzae АТСС 9006 Рост в виде слизистых круглых полупрозрачных сероватого цвета колоний диаметром до 2 мм

Streptococcus pyogenes Dick-1 Нет роста

Neisseria meningitidis A 208 Нет роста

43 Хромогенная питательная среда для обнаружения коли-формных бактерий и E. coli, сухая (ХРОМАГАР) РЗН 2013/709 Аэробные 18—20 ч (37 ± 1)°С Escherichia coli Ewing (O124K72) 227 Колонии круглые, гладкие, блестящие, синего цвета с фиолетовым ореолом или без него, диаметром от 1,0 до 2,5 мм

Escherichia coli АТСС 25922 Колонии круглые, гладкие, блестящие, синего цвета с фиолетовым ореолом или без него, диаметром от 1,0 до 2,5 мм

Citrobacter freundii 101/57 Колонии круглые, гладкие, блестящие, розового цвета, диаметром от 1,5 до 2,5 мм;

Salmonella enteritidis 11272 Колонии круглые, гладкие, блестящие, бесцветные, диаметром от 1,0 до 2,0 мм.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Enterococcus faecalis 775 Рост подавлен

44 Питательный агар для обнаружения и учёта E.coli и коли-формных бактерий, сухой (ЛАКТОЗ-НЫЙ ТТХ АГАР С ТЕРГИТОЛОМ) РЗН2013/710 Аэробные 18—20 ч (37 ± 1)°С Escherichia coli 3912/41(055:К59), Колонии круглые, слизистые, желто-оранжевого цвета с желтой зоной, диаметром 2,0—3,0 мм

Escherichia coli АТСС 25922 Колонии круглые, слизистые, желто-оранжевого цвета с желтой зоной, диаметром 2,0—3,0 мм

Klebsiella pneumoniae 418 Колонии круглые, слизистые, оранжевого цвета, диаметром 2,5—4,0 мм

Shigella sonnei «S-form», Колонии круглые, красно-коричневого цвета с синей зоной, диаметром 1,5—2,5 мм

Salmonella typhimurium 79 Колонии красно-коричневого цвета с неровным краем и с синей зоной, диаметром 2,0—3,5 мм

Staphylococcus aureus Wood-46 Рост подавлен

* Примечание. Используются контрольные тест-штаммы из Национального центра государственной коллекции возбудителей бактериальной инфекции 3—4 групп патогенности Государственное НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича.

Приложение 5

Минимальные требования к проверке качества питательных сред с помощью контрольных штаммов микроорганизмов

Питательные среды Атмосфера, время и t (X) инкубации посевов Контрольные штаммы (ATCC №)* Ожидаемый результат

Агар для облегат-но-анаэробных с дефибринированной или лизированной кровью барана Анаэробная, 24—48 ч, 35°С B. fragilis (25285) C. perfringens (13124) F. nucleatum (25586) P. anaerobius (27337) P. melaninogenica (25845) Рост Рост, бета-гемолиз Рост Рост Рост

Кровяной агар Аэробная или СО2, 18—24 ч, 35°С S. pyogenes (19615) S. pneumoniae (6305) S. aureus (25923) E. coli (25922) Рост, бета-гемолиз Рост, альфа-гемолиз Рост Рост

Триптиказо-соевый агар с кровью барана (для CAMP-теста) Аэробная, 18—24 ч, 35°С S. aureus (33862/25923) S. agalactiae (12386) S. pyogenes (19615) Рост Положительная реакция теста Отрицательная реакция теста

Колумбийский CNA агар с кровью барана Аэробная или СО2, 24—48 ч, 35°С 2 S. pyogenes (19615) S. pneumoniae (6305) S. aureus (25923) P. mirabilis (12453) Рост, бета-гемолиз Рост, альфа-гемолиз Рост Ингибирование (частичное)

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Кровяные среды на основе сердечно-мозговой вытяжки, трипти-казо-соевого бульона и сред с тиолом Аэробная, 5 дней, 35°С B. fragilis (25285) S. pneumoniae (6305) Рост Рост

Кампилобактериоз-ный агар Пониженное содержание О2, с С02, 48 ч, 42°С C. jejuni (33291) E. coli (25922) Рост Ингибирование роста (частичное)

Шоколадный агар С02, 24 и 48 ч, 35°С N. gonorrhoeae (43069) H. influenzae (10211) Рост Рост

Агар с цефсулодином, иргазаном и новоби-оцином (CIN) Аэробная, 24—48 ч, 25°С Y. enterocolitica (9610) E. coli (25922) P. aeruginosa (27853) E. faecalis (29212) Рост; красный центр прозрачные края («бычий глаз») Ингибирование роста (от частичного до полного) Ингибирование роста (от частичного до полного) Ингибирование роста (от частичного до полного)

Бролацин агар (CLED) Аэробная, 24—48 ч, 35°С E. coli (25922) P. vulgaris (8427) S. aureus (25923) Рост, колонии с желтым центром Рост, голубоватые распространяющиеся колонии Ингибирование (частичное), однотипные, темно-желтые

Забуференный угольный агар с дрожжевым экстрактом (BCYE)(CYE/BCYE) Аэробная, 48—72 ч, 35°С L. pneumophila (33152) L. bozemanii (33217) L. micdadei (33204) Рост: желто-зеленые флуоресцирующие в УФ-свете Рост: бледно-голубые, флюорецирующие в УФ-свете Рост

Питательные среды Атмосфера, время и t (C) инкубации посевов Контрольные штаммы (ATCC №)* Ожидаемый результат

Накопительный бульон для энтеробак-терий [GN], селенитовый бульон Аэробная, 18—24 ч, 35°C S. typhimurium (14028) S. sonnei (9290) E. coli (25922) Рост пересевов Рост пересевов (может ингибироваться в селенитовой среде) Ингибирование пересевов с селенитового бульона (от частичного до полного)

Среда с эозином и метиленовым синим (агар Левина, агар EMB) Аэробная, 18—24 ч, 35°C S. typhimurium (14028) E. coli (25922) E. faecalis (29212) Рост, колонии от бесцветных до янтарного цвета Рост, голубовато-черные колонии с зеленоватым металлическим блеском Ингибирование (частичное)

Гектоен энтерик агар Аэробная, 18—24 ч, 35°C S. typhimurium (14028) S. flexneri (12022) E. faecalis (29212) E. coli (25922) Рост: зеленовато-голубые колонии с черным центром Рост, колоний зелено-синие колонии Ингибирование (частичное); желтые колонии Ингибирование роста (от частичного до полного); колонии желтые — оранжевые

Агар МакКонки Аэробная, 18—24 ч, 35°C E. coli (25922) P. mirabilis (12453) S. typhimurium (14028) E. faecalis (29212) Рост, розовые колонии Рост, бесцветные, частичное ингибирование роения протея Рост, бесцветные колонии Ингибирование (частичное)

Манитол солевой агар Аэробная, 24 и 48 ч, 35°C S. aureus (25923) S. epidermidis (12228) P. mirabilis (12453) Рост, 2-суточные колонии с желтыми зонами Рост, 2-суточные колонии с красными зонами Ингибирование (частичное)

Агар PC (Burkholderia cepacia) Аэробная, 48—72 ч, 30°C B. cepacia (25416) E. coli (25922) P. aeruginosa (27853) S. aureus (25923) Рост: колонии с красной зоной Ингибирование роста (от частичного до полного) Ингибирование роста (от частичного до полного) Ингибирование роста (от частичного до полного)

Агар для сальмонелл и шигелл (SS) Аэробная, 24 ч, 35°C S. typhimurium (14028) S. flexneri (12022) E. faecalis (29212) E. coli (25922) Рост, колонии бесцветные или без черного центра Рост, бесцветные колонии Полное ингибирование роста Ингибирование роста (от частичного до полного), колонии от розовых до розово-красных с преципитатом

Селективные среды для патогенных Нейссерий CO2, 24—48 ч, 35°C N. gonorrhoeae (43069) N. meningitidis (13090) P. mirabilis (43071) E. coli (25922) N. sicca (9913) C. albicans (60193) S. epidermidis (12228) Рост Рост Частичное ингибирование роста на средах с триметопримом Частичное ингибирование Частичное ингибирование Частичное ингибирование Частичное ингибирование

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Питательные среды Атмосфера, время и t (X) инкубации посевов Контрольные штаммы (ATCC №)* Ожидаемый результат

Селективная среда для энтерококков, с азидом натрия Аэробная, 24—48 ч, 35°С E. faecalis (29212) S. pyogenes (19615) E. coli (25922) Рост, почернение вокруг колоний Ингибирование роста (от частичного до полного) Частичное ингибирование, бесцветные колонии на желчно-эскулиновом агаре

Селективная среда для энтерококков, без азида натрия Аэробная, 24—48 ч, 35°С E. faecalis (29212) S. pyogenes (19615) Рост, почернение вокруг колоний Ингибирование роста (от частичного до полного)

Тиогликолевая среда с или без индикатора Аэробная, 48 ч (герметичная пробка/крышка), 35°С B. fragilis (25285) S. aureus (25923) Рост Рост

Тиогликолевый бульон, обогащен витамином K и гемином Аэробная, 48 ч (при закрытой крышке), 35°С P. anaerobius (27337) B. vulgatus (8482) C. perfringens (13124) Рост Рост Рост

Бульон с сердечно мозговой вытяжкой Аэробная, 18—24 ч, 35°С E. coli (25922) S. aureus (25923) Рост

Триптозо-соевый бульон Аэробная, 18—24 ч, 35°С E. coli (25922) S. aureus (25923) Рост

Ксилозо-лизин дезоксихолатный (XLD) агар Аэробная, 24 ч, 35°С S. typhimurium (14028) S. flexneri (12022) E. faecalis (29212) E. coli (25922) Рост — красные колонии с черным центром Рост: красные колонии Частичное ингибирование роста Ингибирование роста (от частичного до полного); колонии желто-красные

Шоколадный агар С02, 24—48 ч, 35°С N. gonorrhoeae (43069) H. influenzae (10211) Рост Рост

Агар для кампилобак-терий Микроаэрофильная, капнофильная атмосфера, 24—48 ч, 42°С C. jejuni (33291) E. coli (25922) Рост Ингибирование (частичное)

Селективные среды для N. gonorrhoeaeb С02, 24—48 ч, 35°С N. gonorrhoeae (43069 или 43070) P. mirabilis (43071) S. epidermidis (12228) C. albicans (10231) Рост Частичное ингибирование на среде с триметопримом Частичное ингибирование Частичное ингибирование

Специальные среды для изоляции B. cepacia Аэробная, 48—72 ч, 35°С B. cepacia (25416) P. aeruginosa (27853) Рост: колонии с красной зоной Рост

Специальные среды для выделении B.pertussis С02, 48—72 ч, 35°С B. pertussis(12742), Рост

* Допустимо использовать отечественные контрольные штаммы (см. Приложение б)

Приложение 6

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Расширенные требования к качеству основных питательных сред

Питательная среда Контрольные штаммы Время и температура инкубации Инокулум Рост Примечание

Агар Бэрда- Паркера Bacillus subtilis ATCC 6633 48 ч, 35 ± 2°С 10—100 КОЕ (продуктив-ность*)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Подавляется Селективность

E.coli ATCC 8739! Подавляется Селективность

S.aureus ATCC 25923 Продуктивность >50% Черные колонии, лецитиназа ( + )

S.aureus ATCC 6538 Продуктивность >50% Черные колонии, лецитиназа (+)

S.epidermidis ATCC 12228 Продуктивность >50% Черные колонии, лецитиназа (+)

Кровяной агар S.aureus ATCC 25923 24—48 ч, 35 ± 2°С 10—100 КОЕ (продуктивность) Продуктивность >70% в-гемолиз

S.aureus ATCC 6538 Продуктивность >70% в-гемолиз

E.faecalis ATCC 19433 Продуктивность >70% у-гемолиз

E.coli ATCC 8739 Продуктивность >70% у-гемолиз

S.pyogenes ATCC 19615! Продуктивность >70% в-гемолиз

S.pneumoniae ATCC 49619 Продуктивность >70% а-гемолиз

Основа бульона Болтона Campylobacter jejuni ATCC 29428! 44—48 ч, 41,5 ± 0,5°С 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Выраженный -

E.coli ATCC 25922 Подавляется Селективность

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

S.aureus ATCC 25923 Подавляется Селективность

Агар с бриллиантовым зеленым E.faecalis ATCC 29212 24—48 ч, 35 ± 2,0°С 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Подавляется Селективность

E.coli ATCC ATCC 25922 Подавляется частично Желто-зеленые колонии, на фоне желтой среды

S.typhimurium ATCC 14028! Продуктивность >70% Розовые (красные) колонии

Сердечно- мозговой агар S.aureus ATCC 25923 24—48 ч, 35 ± 2,0°С 10—100 КОЕ (продуктивность) Продуктивность >70% -

E.faecalis ATCC 29212 Продуктивность >70% -

E.coli ATCC 8739 Продуктивность >70% -

S.pneumoniae ATCC 49619 Продуктивность >70% -

Питательная среда Контрольные штаммы Время и температура инкубации Инокулум Рост Примечание

Цетримид-ный агар E.coli ATCC 8739 24 ч, 35 ± 2,0°С 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Подавляется Селективность

S.aureus ATCC 6538 Подавляется Селективность

P. aeruginosa ATCC 9027 Продуктивность >50% Желто-зеленые или зеленые колонии

Бролацин агар (СЬЕБ) E.coli ATCC 25922 24 ч, 35 ± 2,0°С 10—100 КОЕ (продуктивность) Продуктивность >70% Желтые матовые колонии

S.typhimurium ATCC 14028 Продуктивность >70% Голубые колонии

S.aureus ATCC 25923 Продуктивность >70% Желтые матовые колонии

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Proteus vulgaris ATCC 6380 Продуктивность >70% Голубые колонии без роения

Селективный агар для С. рег-Ы^еш Clostridiun perfringens ATCC 13124 24—48 ч, 35 ± 2,0°С 10—100 КОЕ в анаэробных условиях Рост Черные колонии. Н2S( + )

Основа колумбийского агара S.aureus ATCC 6538 24 ч, 35 ± 2,0°С 10—100 КОЕ Продуктивность >70% -

E.coli ATCC 8739 Продуктивность >70% -

S.typhimurium ATCC 14028 Продуктивность >70% -

Агар Эндо E.faecalis ATCC 29212 24—48 ч, 35 ± 2,0°С 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Подавляется Селективность

E.coli ATCC 8739 Продуктивность >50% Розово-красные колонии с зеленоватым металлическим блеском

S.typhimurium ATCC 14028 Продуктивность >50% Бесцветные колонии без характерного блеска

Гектоен Энтерит агар E.faecalis ATCC 29212 24—48 ч, 35 ± 2,0°С 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Подавляется Светло-розовые мелкие колонии

E.coli ATCC 25922 Подавляется Селективность

P. mirabilis ATCC 43071 Продуктивность >50% Черные колонии, зелено-голубая среда

S.typhimurium ATCC 14028 Продуктивность >50% Черные колонии, зелено-голубая среда

S.sonnei ATCC 25923 Продуктивность >50% Зеленые (голубые) колонии

Железо- сульфитный агар E.coli ATCC 25922 24—48 ч, 55 ± 1,0°С 10—100 КОЕ (продуктивность) Продуктивность* <50% Отсутствие почернения

C.perfringens ATCC 13124 Продуктивность >50% Почернение среды

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Питательная среда Контрольные штаммы Время и температура инкубации Инокулум Рост Примечание

Агар Клиглера S.sonnei ATCC 25931 18—24 ч, 35 ± 2,0°C Посев на скошенный агар и укол в столбик среды Рост Скос: К; Столбик: Кислота ( + ), Газ (-), Н^ (-), среда желтая

E.coli ATCC 25922 Рост Скос: Кислота ( + ); Столбик: Кислота ( + ), Газ ( + ), Н^ (-), среда желтая

S.typhimurium ATCC 14028 Рост Скос: К, почернение; Столбик: Кислота (+), Газ ( + ), Н^ ( + )

Агар BCYE для легионелл L.pneumophila ATCC 33152 3—10 дней, 35 ± 2,0°C 150—300 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Рост Серо-зеленые колонии

Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Подавляется Селективность

Летиновый бульон S.aureus ATCC 6538 24 часа, 35 ± 2,0°C 10—100 КОЕ Рост -

S.typhimurium ATCC 14028 Рост -

E.coli ATCC 25922 Рост -

E.faecalis ATCC 29212 Рост -

Бульон обогащения для листерий E.coli ATCC 25922 48 ч, 35 ± 2,0°C 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Подавляется Селективность

S.aureus ATCC 6538 Подавляется Селективность

Listeria monocytogenes ATCC 19112 Рост -

МакКонки агар (MacConkey Agar) S.aureus ATCC 6538 24—48 ч, 35 ± 2,0°C 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Подавляется Селективность

E.faecalis ATCC 29212 Подавляется Селективность

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

E.coli ATCC 25922 Продуктивность >50% Темно-фиолетовые колонии с зоной преципитации

S.typhimurium ATCC 14028 Продуктивность >50% Бесцветные колонии без зоны преципитации

Маннитол-солевой агар E.coli ATCC 25922 24—48 ч, 35 ± 2,0°C 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Подавляется Селективность

S.aureus ATCC 6538 Продуктивность >50% Колонии белые, вокруг колоний среда желтая (маннит +)

S.epidermidis ATCC 12228 Продуктивность >50% Колонии бледно-розовые, вокруг колоний среда красная (маннит —)

Агар MRS (MRS Agar) E.coli ATCC 25922 48 ч — 3 дня, 35 ± 2,0°C 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Частичное подавление Инкубирование при 5% С02

Lactobacillus acidophilus ATCC 4536 Продуктивность > 50% Инкубирование при 5% С02

Агар/бульон Мюллера- Хинтона S.aureus ATCC 6538 18—24 ч, 35 ± 2,0°C 10—100 КОЕ (продуктивность) Рост -

E.coli ATCC 25922 Рост -

P. aeruginosa ATCC 27853 Рост -

E.faecalis ATCC 29212 Рост -

Питательная среда Контрольные штаммы Время и температура инкубации Инокулум Рост Примечание

Питательный агар/ бульон P. aeruginosa ATCC 27853 24—48 ч, 35 ± 2,0°C 10—100 КОЕ (продуктивность) Продуктивность > 70% -

E.faecalis ATCC 29212 Продуктивность > 70% -

E.coli ATCC 25922 Продуктивность > 70% -

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

S.typhimurium ATCC 14028 Продуктивность > 70% -

Y.enterocolitica ATCC 9610 Продуктивность > 70% -

Основа агара Oxford для листерий S.aureus ATCC 25923 24—48 ч, 35 ± 2,0°C 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Подавляется Селективность

E.coli ATCC 25922 Подавляется Селективность

L.monocytogenes ATCC 19115 Продуктивность > 50% Эскулин ( + ), почернение среды

Палкам агар для листерий S.aureus ATCC 25923 24—48 ч, 35 ± 2,0°C 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Подавляется Селективность

E.coli ATCC 25922 Подавляется Селективность

L.monocytogenes ATCC 19115! Продуктивность > 50% Эскулин ( + ), почернение среды

Агар/бульон Престона для кампи-лобактерий Campylobacter jejuni ATCC 29428 18—24 ч, 42 ± 2,0°C 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Рост В микроаэрофильных условиях

Escherichia coli ATCC 25922 Подавляется В микроаэрофильных условиях

Бульон Раппапорта-Вассили-адиса E.faecalis ATCC 29212 24 часа, 41 ± 0,5°C 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Полное подавление Восстановление на TSA

E.coli ATCC 25922 Частичное подавление Восстановление на TSA

S.typhimurium ATCC 14028 Рост Восстановление на XLD

Агар для сальмонелл и шигелл (SS агар) E.faecalis ATCC 29212 24—48 ч, 35 ± 2,0°C 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Частичное подавление 48 ч (скудный рост)

E.coli ATCC 25922 Полное подавление Селективность

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

S.typhimurium ATCC 14028 Продуктивность > 50% Бесцветные колонии с черным центром Н2S ( + )

S.flexneri ATCC 12022 Продуктивность > 50% Бесцветные колонии с прозрачным центром Н2S (-)

Селенитовый бульон E.faecalis ATCC 29212 24 часа, 35 ± 2,0°C Инокуляция из смешанной культуры Полное подавление Восстановление на TSA

E.coli ATCC 8739! Полное подавление Восстановление на TSA

S.typhimurium ATCC 14028 Хороший рост Восстановление на XLD

P. aeruginosa ATCC 27853 Подавление или скудный рост Восстановление на XLD

Питательная среда Контрольные штаммы Время и температура инкубации Инокулум Рост Примечание

Цитратный агар Симмонса P. aeruginosa ATCC 27853 24—48 ч, 35 ± 2,0°С Инокуляция чистой культуры на поверхность агара Рост Синяя среда

E.aerogenes ATCC 13048 Рост Синяя среда

E.coli ATCC 25922! Подавление роста Зеленая среда

S.flexneri ATCC 12022 Подавление роста Зеленая среда

S.typhimurium ATCC 14028 Рост Синяя среда

Тиогликоле-вый бульон S.aureus ATCC 6538 24—48 ч, 35 ± 2,0°С 10—100 КОЕ (продуктивность) Рост -

B.subtilis ATCC 6633 Рост -

P. aeruginosa ATCC 9027 Рост -

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

E.coli ATCC 8739 Рост -

C.sporogenes ATCC 19404 Рост Анаэробные условия

C.albicans ATCC 10231 Рост 48 ч

Триптон- соевый агар/бульон S.aureus ATCC 6538 24—48 ч, до 6 дней, 35 ± 2,0°С 10—100 КОЕ (продуктивность) Продуктивность >70% -

E.coli ATCC 8739 Продуктивность >70% -

Ксилоза-лизин-дезокси-холат агар ^Б) E.faecalis ATCC 29212 24—48 ч, 35 ± 2,0°С 10—100 КОЕ (продуктив-ность)/1000— 10000 КОЕ (селективность) Подавление Селективность

E.coli ATCC 8739 Частичное подавление Селективность

P. mirabilis ATCC 43071 Продуктивность >50% Бесцветные колонии с черный центром Н^ ( + )

S.typhimurium ATCC 14028 Продуктивность >50% Бесцветные колонии с черным центром Н^ ( + )

S.flexneri ATCC 12022 Продуктивность >50% Бесцветные колонии с прозрачным центром н^З (-)

* Примечание. Продуктивность количество клеток давших видимый рост выраженный в %.

Стабильность качественных характеристик разных питательных сред неодинакова. Данные американских лабораторий по этому вопросу, обобщенные в Национальном стандарте МССЬБ по контролю качества коммерческих готовых питательных сред М22-А3 [13—15], стали основой для деления питательных сред на 2 категории — освобожденные и неосвобожденные. Процедура их контроля различается: • Освобожденные питательные среды — коммерческие среды, предназначенные для поддержания соответствующих ростовых свойств с минимальными отклонениями и требующие минимальный контроль качества (проверку сертификата качества, соответствия упаковки, а также заявленных в сертификате характеристик, определяемых визуально). Отнесение сред к освобожденным не исключает возможности проведения дополнительных

Основной перечень освобожденных и

Приложение 7

тестов контроля качества (вплоть до осуществления всего комплекса проверок, предназначенного для неосвобожденных сред). Особенно тщательно следует проверять среды для привередливых микроорганизмов (анаэробов, бордетелл, буркхолдерий, кам-пилобактерий, легионелл, геликобактерий, нейссерий).

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

• Неосвобожденные питательные среды — коммерческие среды, часто дающие отклонения свойств от регламентированных, а также все среды, приготовленные самим потребителем. Неосвобожденные среды требуют проведения лабораториями наиболее полного контроля качества, включающего в зависимости от их назначения подтверждение удовлетворительных ростовых, селективных и/или дифференциальных свойств с помощью контрольных штаммов микроорганизмов.

неосвобожденных питательных сред

Питательные среды Освобожденная Неосвобожденная*

Среды общего назначения Кровяной агар Шоколадный агар Тиогликолевый бульон Уреазный агар Питательный бульон

Кровяные среды Бульон на сердечно-мозговой вытяжке Двухфазная среда для гемокультур Бульона с тиолом Триптиказо-соевый бульон Пептонный бульон

Среды для грам-положительных бактерий Колумбийский CNA агар Селективный агар для энтерококков с азидом натрия и без него LIM бульон Маннитол-солевой агар Фенил-этилспиртовой агар Селективный агар для стрептококков группы А Кровяной агар с сульфаметоксазолом/триметопримом Бульон для фекальных энтерококков (стрептококков) Бульон Тода-Хевитта Дезоксихолятный бульон Бульон транс-вагинальный Шоколадный агар с перидоксалем

Среды для гра-мотрицатель-ных бактерий Агар с цефсулодином, иргазаном, новобицином Цитратный агар Бролацин агар (CLED) Агар Левина Бульоны для грамотрицательных бавктерий Гектоен агар Агар МакКонки Агар для сальмонелл и шигелл Селенитовый бульон Тиосульфат- цитратный желчный-солевой сахарный агар Трехсахарный агар с железом Триптиказо-соевый кровяной агар с ампицилином Агар Макконки с сорбитолом Шоколадный агар с бацитрацином

Питательные среды Освобожденная Неосвобожденная*

Среды для Neisseria gonorrhoeae Ксилозо-лизин-декарбокосилазный агар Агар Тайера-Мартина модифицированный Гонококковый агар Агар Мартина-Левиса модифицированный Шоколадный агар с IsoVitaleX® Агар Нью Йорк сити"3

Среды для Bordetella pertussis Агар Реган-Лов Агар Борде-Жангу

Среды для легионелл Селективный агар для легионелл Селективный агар для легионелл с глицином, полимиксином В, ванкоми-цином и красителями

Среды для буркхолдерий Агар для В. cepacia Оксидативно-ферментативный лактозный агар с полимиксином В и бацитрацином

Среды для кампило- бактерий Угольный селективный агар с цефаперазоном, ванкомици-ном и циклогексимидом Кампилобактериозный агар с кровью, цефаперазоном, ванкомицином и амфотерицином В (среда Блазера)

Среды для обле-гатно-анаэроб-ных бактерий Кровяной агар для анаэробов Агар для анаэробов с фенилэтилалкоголем Агар с желчью и эскулином для бактероидов Агар для бруцелл Агар для бруцелл с гемином и витамином K Агар для бруцелл с кровью, канамицином и ванкомицином Агар для гемолитических анаэробов с кровью, канамици-ном и ванкомицином Агар для анаэробов с 5% лизированной бараньей кровью, канамицином и ванкомицином Желточный агар модифицированный Агар с лизированной кровью и канамицином Агар CDC для анаэробов с 5% бараньей крови и фенилэтилалкоголем

Среды для микобактерий Двухфазная среда во флаконах для быстрого теста на кис- лотоустойчивость Бульон Миддлбрука 7Н9 Среда Ловенштейна-Йенсена Агар Миддлбрука Бульон во флаконах для автоматического теста на кислото-устойчивость Агар Миддлбрука 7H10 Агар Миддлбрука 7H11 Агар Митчинсона Среда Петраньяни

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Среды для грибов Агар из кукурузного крахмала Ингибирующий агар для грибов Ингибирующий агар для грибов с гентамицином Агар из соевого пептона с циклогексимидом и хлорамфени- колом без индикатора Картофельно-декстрозный агар Агар на сердечно-мозговой вытяжке с 5% бараньей кровью/ хлорамфениколом и гентамицином Агар Сабуро с глюкозой Агар Сабуро с глюкозой, хлорамфениколом и гентамици-ном Агар из кукурузного крахмала с твином Агар на сердечно-мозговой вытяжке с 5% бараньей кровью, хлорамфенико-лом и хлоргексидином Висмут-сульфитный агар с глюкозой, глицином и дрожжевым экстрактом Агар на сердечно-мозговой вытяжке с 5% бараньей кровью, пенициллином и стрептомицином Среда для дерматофитов

* Примечание. К числу неосвобожденных сред также относятся хромогенные и флюорогенные питательные среды.

Приложение 8

Выполнение стандартной технологии с помощью калиброванной бактериологической петли

При проверке ростовых качеств плотных неселективных сред из стандартизированной взвеси контрольного штамма готовят рабочее разведение (1:100) на стерильном физиологическом растворе. Высевают одноразовой бактериологической петлей штриховым способом 10 мкл разведения на проверяемую среду в чашке Петри (посевная доза — 103—104 КОЕ/чашку).

Для контроля ростовых качеств плотных скошенных сред в пробирках высевают 10 мкл/про-бирку стандартизированного разведения контрольного штамма.

При тестировании ростовых качеств жидких сред в пробирках разводят стандартизированное разведение контрольного штамма 1:10 000 и вносят 10 мкл полученной взвеси в пробирку со средой (посевная доза 100 КОЕ/пробирку).

Для контроля ингибирующих свойств селективных сред чашки Петри с последними засевают штриховым способом калиброванными одноразовыми бактериологическими петлями 1 мкл стандартизированных разведений каждого контрольного штамма (посевная доза каждого — 104—105 КОЕ/чашку).

Контроль качества питательных сред контрольными штаммами дрожжей принципиально не отличается от аналогичных процедур, проводимых с контрольными штаммами бактерий. Колонии плесеней частично переносят на проверяемые питательные среды. При работе с культурами дерматофитов рекомендуется пользоваться следующей методикой. Переносят бактериологической петлей несколько колоний во флакон со стерильным физиологическим раствором, содержащим 0,2% бычьего сывороточного альбумина и 0,002% твина-80 и 8—12 стерильных стеклянных бус. После 10-минутного энергичного встря-

хивания и 3-часового отстаивания надосадочную жидкость переносят в стерильный флакон и доводят титр бактерий в нем до стандартизированного (соответствует 0,5 ед. по стандарту Мак-Фарланда).

Оценку дифференцирующих свойств идентификационных питательных сред проводят описанным выше для селективных сред методом. При отсутствии формирования колоний хотя бы одним из контрольных штаммов процедуру повторяют, высевая стандартизированные взвеси таких штаммов в дозе, превышающую в 10 раз первоначальную.

Результаты испытаний считают удовлетворительными, если:

• неселективные среды обеспечивают рост использованных контрольных штаммов, а те формируют в течение регламентированного срока (быстро растущие бактерии за 24—48 ч, дрожжи — за 72 ч, плесени — за 3—5 дней, медленно растущие — за 1—3 недели и более) колонии характерной морфологии и достаточного размера;

• селективная среда частично или полностью ингибирует рост одних и поддерживает рост других контрольных штаммов в соответствии с ожидаемыми результатами, а растущие на ней микроорганизмы формируют колонии определенной величины с типичной морфологией в течение регламентированного срока (см. предыдущий пункт) выше колонии характерной морфологии и достаточного размера;

• идентификационные среды обеспечивают дифференциацию использованных контрольных штаммов микроорганизмов (по структуре, цвету колоний, цвету среды вокруг колоний или другим признакам).

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Приложение 9

Приготовление инокулюма для контроля качества питательных сред

Из рабочей культуры, подготовленной из субкультуры референтного образца микроорганизма, хранящегося в коллекции лаборатории, готовят рабочие разведения путем десятикратных разведений исходного инокулюма.

Исходный инокулюм готовят по имеющемуся в лаборатории стандарту мутности или по спектрофотометру (нефелометру) с концентрацией 108 или 109 КОЕ/мл.

Характеристика стандартов мутности.

1. Отраслевой стандарт мутности согласно ОСО-42-28-85П производства ФГУН ГИСК им. Л.А. Тарасевича.

Мутность стандарта, равная 10 единицам, эквивалентна концентрации клеток в 1 мл: 0,93 х 109 КОЕ/мл микробов кишечной палочки (микроорганизмов по размерам соответвующим размерам кишечной палочки), 1,7 х 109 КОЕ/мл для Brucella spp., 5 х 109 КОЕ/мл для Franci-ella spp.

2. Стандарт МакФарланда (McFarland).

Коммерческие стандарты МакФарланда содержат латексные частицы, суспендированные в специальном буферном растворе в количестве, обеспечивающем прохождение волны света длиной 600—650 nm.

Стандарт МакФарланда Количество микробных клеток при плотности инокулюма (Х108 клеток)

0,5 1,5

1,0 3,0

2,0 6,0

3,0 9,0

4.0 12,0

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Приготовление соответствующего разведения.

По имеющемуся в лаборатории стандарту мутности готовят исходное разведение контрольного штамма и далее десятикратными разведениями готовят соответствующий инокулюм по схеме табл. 1.

К-во К-во

№ пробирки К-во физ. раствора Объем вносимой суспензии микробных клеток в 1 мл взвеси микробных клеток в0, 1 мл взвеси

1 4,5 мл 0,5 мл из исходной взвеси 108 КОЕ/мл 107 1 000 000

2 4,5 мл 0,5 мл из пробирки 1 106 100 000

3 4,5 мл 0,5 мл из пробирки 2 105 10 000

4 4,5 мл 0,5 мл из пробирки 3 104 1000

5 4,5 мл 0,5 мл из пробирки 4 103 100

6 4,5 мл 0,5 мл из пробирки 5 102 10

Примечание:

1. Исходная взвесь микроорганизмов приготовлена по стандарту МакФарланд 0,5.

2. В случае использования стандарта по ОСО-42-28-85П исходная взвесь готовится с концентрацией микроорганизмов 109 КОЕ/мл и в схему разведений вводится дополнительное разведение до концентрации 108 КОЕ/мл. Затем микробная взвесь титруется по изложенной схеме.

3. В лаборатории могут использоваться другие объемы для титрования. Например, 0,9 мл физ. р-ра и 0,1мл вносимой суспензии. Титрование в таких объемах требует работы с дозирующими пипетками соответствующих объёмов.

4. Точность приготовленного инокулюма зависит от точности титрования. На каждое разведение следует менять наконечник пипетки или пипетку.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

БИБЛИОГРАФИЯ

1. ГОСТ Р ЕН 12322—2010. Изделия медицинские для диагностики in vitro. Питательные среды для микробиологии. Критерии функциональных характеристик питательных сред.

2. ISO/TS 11133-2: 2003. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководство по подготовке и приготовлению культуральных сред. Часть 2. Практическое руководство по тестированию эффективности культуральных сред.

3. МУК 4.2.2316—08 Методы контроля бактериологических питательных сред: Методические указания. М.: ФБУЗ ФЦГ и Э Роспотребнадзора. 2008.

4. Шепелин А.П., Дятлов И.А. Современное состояние и тенденции в нормативно-правовом регулировании производства, реализации и применения питательных сред. Аналитические материалы. Протвино: А-ПРИНТ ЗАО, 2012.

5. Поляк М.С., Сухаревич В.И., Сухаревич М.Э. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. С.-Пб, 2008. 351 с.

6. МУК 4.2.1890—04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. 2004.

7. ГОСТ Р ИСО 15189—2009 Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности.

8. ГОСТ Р 52905—2007 (ИСО 15190:2003). Лаборатории медицинские. Требования безопасности.

9. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и защиты человека от 17.03.2008 № 88. Приложение № 4.

10. Михайлова В.С., Гавристова И.А., Блинкова А.П. Правила внутрилабораторного контроля качества питательных сред. Клиническая лабораторная аналитика том IV. Частные аналитические технологии в клинической лаборатории клинической микробиологии. М.: АгатМед, 2003. С. 232—254.

11. Михайлова В.С., Поляк М.С., Суханова С.М. О роли внутрилабораторного контроля качества в стандартизации питательных сред для микробиологических исследований в клинико-диагностических лабораториях // Проблемы стандартизации в здравоохранении. 2009. № 5—6. С. 8—15.

12. Михайлова В.С., Зубков М.Н. Культивирование бактерий. Методики клинических лабораторных исследований. Том III. Клиническая микробиология. М.: Лабора, 2009.

13. NCCLS National consensus standard. Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media; Approved Standard M22-A3, V. 24, 3d Ed. (Replaces M22-A2). 2004.

14. Меньшиков В.В. Стандартизация в лабораторной медицине России: первые итоги и дальнейшие планы // Проблемы стандартизации в здравоохранении. 2009. № 1. С. 20—28.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

15. Меньшиков В.В. Очередной этап стандартизации в лабораторной медицине // Проблемы стандартизации в здравоохранении. 2009. № 5—6. С. 20—28.