CC BY
530
Курский научно-практический вестник "Человек и его здоровье", 2014, № 4
УДК 616-034:579.61:579.62:579.674
СРАВНИТЕЛЬНЫЕ ИСПЫТАНИЯ ЛАКТОБАКАГАРА И MRS АГАРА
© Домотенко Л.В., Шепелин А.П., Детушев К.В.
Г осударственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии, Оболенск
E-mail: domotenko@obolensk. org
Проведены сравнительные испытания трех питательных сред для выделения и культивирования лактобацилл: Лактобакагара (Оболенск), Lactobacillus MRS Agar (HiMedia), среды МРС-4 (НИЦФ). Показано, что Лактобакагар не только не уступал, но иногда и превосходил контрольные питательные среды. Лактобакагар поддерживал типичный рост штаммов лактобацилл различных видов: Lactobacillus plantarum, L. fermentum, L. brevis и др. и обладал селективными свойствами в отношении грамотрицательных и многих грамположительных бактерий. При анализе клинического материала (кал на дисбактериоз) средняя концентрация лактобацилл составила 6,01 lg КОЕ/г на Лактобакагаре и 5,7 lg КОЕ/г на среде МРС-4 лабораторного приготовления. При исследовании молочнокислых продуктов на Лактобака-гаре выделены йогуртные, мезофильные, пробиотические культуры: L. rhamnosus, L. acidophilus, Lactococcus lactis, Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus.
Ключевые слова: Lactobacillus, выделение лактобацилл, лактобакагар, среда МРС-4.
COMPARATIVE TRIALS OF LACTOBACAGAR AND MRS AGAR
Domotenko L. V., Shepelin A.P., Detushev K. V.
State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology, Obolensk
The comparative trial of three culture media for isolation of lactobacilli: Lactobacagar (Obolensk), Lactobacillus MRS Agar (HiMedia) and MRS-4 medium (SRСF) was performed. It has been shown that Lactobacagar supports the typical growth of lactobacilli strains of various species: Lactobacillus plantarum, L. fermentum, L. brevis, etc. and has the selective properties for Gram- and many Gram+ bacteria. In the analysis of clinical material (fecal analysis in the diagnosis of disbacteriosis), the average concentration of lactobacilli was 6.01 lg CFU/g on Laktobacagar and 5.7 lg CFU/g on MRS-4 medium prepared in the laboratory. In the study of dairy products on Lactobacagar yoghurt, mesophilic and probiotic cultures: L. rhamnosus, L. acidophilus, Lactococcus lactis, Lactobacillus delbrueckii ssp. Bulgaricus have been isolated.
Keywords: Lactobacillus, isolation of lactobacilli, Lactobacagar, MRS-4 medium.
Лактобациллы (Lactobacillus spp) - неспорообразующие грамположительные палочки, широко распространены в природе [1, 8]. Они являются одними из основных представителей нормофлоры желудочно-кишечного тракта, вульвовагинальной области человека и многих теплокровных животных. Лактобациллы играют важную роль в хлебопечении, особенно при приготовлении ржаного хлеба. Их консервирующее действие используют для предохранения многих продуктов от порчи: при квашении овощей, фруктов, силосовании кормов и др. С помощью лактобацилл получают кисломолочные продукты для детского и диетического питания. В редких случаях лактобактерии могут быть возбудителями инфекционной патологии [11, 14].
Для обнаружения и количественного учета лактобактерий в клиническом материале, молочных и других продуктах используют различные методы [6, 9, 12]. Основная роль в выделении и подсчете лактобактерий принадлежить питательным средам [10, 13, 15]. Представители рода Lactobacillus не растут на простых средах, для них требуются сложные питательные среды, содержащие различные пептоны, дрожжевой и мясной экстракты. В мировой микробиологической
практике наибольшее признание получила среда de Man, Rogosa, Sharpe, которая выпускается в виде MRS агара и MRS бульона (MPC в русской транскрипции). Существует ряд модификаций данной среды, улучшающих, по мнению разработчиков, их ростовые свойства и селективность. В России получили распространение агаризованная среда МРС-4 для выделения лактобактерий и полужидкая среда МРС-2, используемая при работе с чистыми культурами.
В ФБУН ГНЦ ПМБ разработана пропись и технология производства питательной среды для выделения и культивирования лактобацилл, сухой (Лактобакагара) - аналога MRS агара и среды МРС-4, налажен промышленный выпуск (Регистрационный № ФСР 2010/09164). В ряде публикаций описано применение Лактобакагара в научных и практических целях [2, 3, 5, 7].
Цель работы - оценка диагностической ценности Лактобакагара в сравнительных испытаниях с коммерческими препаратами аналогичного назначения, выпускаемыми в соответствии с нормативной документации и в период их срока годности.
5
Экспериментальная биология и медицина
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Использованы штаммы лактобацилл, полученные из Всероссийской коллекции микроорганизмов: Lactobacillus plantarum 8Р-А3, L. planta-rum АТСС 8014, L. brevis ATCC 367, L. delbrueckii subsp. bulgaricus ATCC 11842, L. buchneri ATCC 4005, L. leichmanii B-1921, L. fermentum B-1566, L. acidophilus B-1660, L. casei ATCC 7469, L. casei ATCC 9595, Lactococcus lactis CFM 106, Lactococ-cus lactis subsp. cremoris B-1945 (CFM 131); штаммы Escherichia coli 3912/41 (055:K59), E. coli 675, Staphylococcus aureus Wood-46, Pseudomonas aeruginosa 27/99, Klebsiella pneumoniae 3534/51, Enterococcus faecalis ATCC 29212, E. faecium NCTC 7171, Candida albicans NCTC 885-65, полученные из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов «ГКПМ-Оболенск».
Штаммы микроорганизмов хранили в лиофи-лизированном состоянии при температуре не выше 4-8°С. Перед проведением контроля питательных сред лиофилизированные штаммы суспензировали в стерильном 0,9% растворе хлорида натрия, а затем субкультивировали в течение 2024 ч при температуре (37±1)°C на соответствующих средах: лактобактерии на лактобульоне; E. coli 3912/41 (О55:К59), E. coli 675, S. aureus Wood-46, P. aeruginosa 27/99, K. pneumoniae 3534/51, E. faecalis ATCC 29212, E. faecium NCTC 7171
на среде № 1 ГРМ, а C. albicans NCTC 885-65 на среде № 2 ГРМ (агар Сабуро).
Затем готовили микробную взвесь каждого штамма, соответствующую мутности 10 ед по отраслевому стандартному образцу мутности ОСО 42-28-86П. Полученные суспензии каждого штамма десятикратными разведениями (4,5 мл 0,9% раствора хлорида натрия с 0,5 мл микробной суспензии) доводили до разведения 10-6. Посев производили по 0,1 мл бактериальных суспензий из разведения 10-6 на поверхность питательных сред и учитывали результаты через 24-48 ч инкубации при температуре (37±1)°С в атмосфере
5-10% СО2.
Использована питательная среда для выделения и культивирования лактобацилл сухая (Лак-тобакагар) серии 50 (ФБУН ГНЦ ПМБ), годен до 09.2015 г. В качестве контрольных питательных сред использован Lactobacillus MRS agar, Lot 0000132483 (HiMedia), годен до 01.2016 г. и питательная среда для выделения и культивирования Lactobacillus spp, готовую к применению, МРС-4 (НИЦФ) с. 1113, годен до 05.2014 г.
Качество питательных сред оценивали по специфической активности в соответствии с требованиями МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред» [4]. Для исследования на дисбактериоз 1 г нативных фекалий растирали в ступке с 9 мл 0,9% раствора хлорида натрия (10-1 разведение).
Состав питательных сред, используемых в испытаниях
Таблица 1
Ингредиенты Lactobacillus MRS agar, Lot 0000132483 (HiMedia), г/л Лактобакагар, с. 50, г/л Среда МРС-4, г/л
Протеозопептон 10,0 - -
Панкреатический гидролизат рыбной муки - 20.0 -
Печеночная вода - - 100 мл
Г идролизат казеина ферментативный - - 17,5 мл
Ферментативный пептон - - 10.0
Экстракт пекарных дрожжей 5,0 5,0 3,0
Твин-80 1,0 мл 1,0 мл 1,0 мл
Мясной экстракт 10,0 5,0 -
Г люкоза 20,0 20,0 2,5
L-цистин - - 0,2
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 2.0 -
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 2,0 - -
Калий фосфорнокислый двузамещенный - - 2,0
Натрий уксуснокислый 3-водный 5,0 5,0 5,0
Аммоний лимоннокислый однозамещенный 2,0 2,0 2,0
Магний сернокислый 7-водный 0,1 0,1 0,2
Марганец хлористый 4-водный 0,05 0,05 0,05
Агар микробиологический 12,0 12,0-15,0 15,0
рН 6,3 5,5 5,75
6
Курский научно-практический вестник "Человек и его здоровье", 2014, № 4
Таблица 2
Рост музейных штаммов лактобацилл на различных питательных средах
Микроорганизмы Среднее количество колоний/Диаметр колоний (мм)
Лактобакагар Lactobacillus MRS agar Среда МРС-4
L. plantarum АТСС 8014 68 ± 4 69 ± 3 71 ± 3
2,0 - 2,5 1,8 - 2,5 1,8 - 2,0
L. plantarum 8Р-А3 50 ± 3 46 ± 3 43 ± 2
1,6 - 2,0 1,6 - 2,0 1,6 - 2,0
L. buchneri ATCC 4005 51 ± 3 47 ± 3 49 ± 2
1,2 -1,4 1,2 -1,4 1,0 -1,2
L. delbrueckii 50 ± 4 47 ± 3 44 ± 2
ATCC 11842 1,6 - 2,2 1,6 - 2,2 1,6 - 2,2
L. brevis ATCC 367 55 ± 3 50 ± 3 50 ± 3
1,6 -1,8 1,6 -1,8 1,6 -1,8
L. leichmanii B-1921 55 ± 3 59 ± 3 57 ± 3
1,6 - 2,0 1,6 - 2,2 1,6 - 2,0
L. fermentum B-1566 64 ± 3 60 ± 3 56 ± 6
1,0 -1,2 0,8 -1,2 0,8 -1,2
L. acidophilus B-1660 58 ± 3 56 ± 3 53 ± 3
1,0 -1,2 1,0 -1,2 0,8 -1,2
L. casei ATCC 7469 28 ± 3 26 ± 3 17 ± 3
1,6 - 2,5 2,0 - 2,5 1,8 - 2,5
L. casei ATCC 9595 32 ± 3 33 ± 3 27 ± 2
2,0 - 4,0 2,5 - 4,5 2,5 - 4,0
L. lactis CFM 106 58 ± 2 51 ± 3 56 ± 2
1,4 - 2,5 1,2 - 2,0 1,2 - 2,0
Lactococcus lactis subsp cremoris 58 ± 2 63 ± 3 52 ± 3
B-1945 (CFM 131) 0,8 -1,2 1,0 -1,2 1,2 -1,4
Затем делали десятикратные разведения в 0,9% растворе хлорида натрия до 10-7 разведения и высевали по 0,1 мл суспензии из разведений 10-5-10-7 на поверхность анализируемых сред.
При исследовании кисломолочных продуктов 1 мл йогуртов разводили в 9 мл 0,9% раствора хлорида натрия, затем десятикратными разведениями (4,5 мл 0,9% раствора хлорида натрия с 0,5 мл йогуртной суспензии) доводили до разведения 10-8. Посев производили по 0,1 мл суспензий из разведения 10-5-10-8 на поверхность Лактобакага-ра. Результаты учитывали через 24-48-72 ч инкубации при температуре (37±1)°С в атмосфере
5-10% СО2.
Идентификацию выделенных лактобактерий проводили методом прямого белкового профилирования с помощью времяпролетной масс-спектрометрии с матрично-активированной лазерной десорбцией/ионизацией, используя MALDI Biotyper Microflex, Brnker Daltonics.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Анализ составов питательных сред, используемых в испытаниях, показал, что существуют незначительные различия, касающиеся природы белкового гидролизата (табл. 1). В состав Lactobacillus MRS agar входит протеозопептон, среда МРС-4 содержит гидролизат казеина, Лак-тобакагар сконструирован из панкреатического гидролизата рыбной муки. Обращают на себя внимание незначительные отличия в величине рН: Lactobacillus MRS agar - 6,3 (возможный диапазон 6,3-6,7), Лактобакагар, с. 50 - 5,5 (диапазон 5,4-6,0), а МРС-4 - 5,75 (диапазон 5,5-5,9). Отличия также касались физического состояния сред: Lactobacillus MRS agar и Лактобакагар представляли собой сухие порошки, а МРС-4 представлен в виде студня, готовым к применению, во флаконах.
7
Экспериментальная биология и медицина
Сравнительные испытания Лактобакагар, Lactobacillus MRS agar (HiMedia), среды МРС-4 (НИЦФ) проводили с использованием музейных штаммов лактобактерий и микроорганизмов-ас-социантов. Поскольку медленнорастущие лактобациллы, такие как L. Acidophilus, через 24 ч инкубации формировали на всех исследуемых средах еле заметные колонии (или они вовсе отсутствовали), учет результатов проводили через 48 ч культивирования. Всего использовано 12 штаммов лактобактерий. Результаты посевов музейных штаммов лактобактерий на исследуемых питательных средах представлены в табл. 2.
Все штаммы лактобактерий вырастали при посеве из разведения 10-6 через 48 ч инкубации при температуре (37±1)°С в виде типичных колоний, размером более 1 мм. Штаммы L. plantarum 8Р-А3 и L. plantarum АТСС 8014 формировали на всех трех питательных средах круглые гладкие колонии белого цвета диаметром от 1,8 до 2,5 мм. Аналогичный рост наблюдали для штаммов L. delbrueckii subsp. bulgaricus ATCC 11842 и L. leichmanii B-1921. Образуемые ими колонии были белыми гладкими круглыми, незначительно различались диаметром 1,6-2,5 мм. Колонии L. buch-neri ATCC 4005 на всех трех средах имели подобную морфологию, но были несколько мельче -1,0-2,0 мм в диаметре. Рост штаммов L. casei ATCC 7469 и L. casei ATCC 9595 был типичным на всех трех средах: в виде белых гладких круг-
лых колоний, диаметром 1,6-2,5 мм для L. casei ATCC 7469 и 2,0-4,5 мм для L. casei ATCC 9595. Морфология колоний L. brevis ATCC 367 отличалась от колоний предыдущих штаммов. Штамм L. brevis ATCC 367 рос в виде сероватых колоний диаметром 1,6-1,8 мм.
Штаммы L. fermentum B-1566 и L. acidophilus B-1660 формировали на всех исследованных средах мелкие колонии. Колонии L. fermentum B-1566 были сероватого цвета, а колонии L. acidophilus B-1660 - полупрозрачными.
Среди колоний в S-форме встречались колонии в R-форме и гладкие колонии с неровными краями. Это характерно для штаммов L. brevis ATCC 367, L. fermentum B-1566 и L. acidophilus B-1660. Появление таких колоний, по-видимому, связано с высокой концентрацией на поверхности среды ингибиторов, входящих в состав сред.
Лактококки также росли на всех трех питательных средах, образовывая белые гладкие круглые колонии.
Благодаря наличию в составе среды ацетата натрия, испытуемые питательные среды обладают селективными свойствами. Ингибирующие свойства питательных сред сравнивали, используя музейные штаммы микроорганизмов нормальной микрофлоры кишечника и патогенных микроорганизмов. Результаты посева исследованных штаммов бактерий и грибов на неселективные среды приведены в табл. 3.
Ингибирующие свойства питательных сред
Таблица 3
Микроорганизмы Разведе- ние Лактобакагар Lactobacillus MRS agar Среда МРС-4 ГРМ-агар/агар Сабуро
E. coli 3912/41 (О55:К59) 10-2 нет роста нет роста нет роста сливной рост
E. coli 675 102 нет роста нет роста нет роста сливной рост
P. aeruginosa 27/99 10'3 нет роста нет роста нет роста сливной рост
K. pneumoniae 3534/51 10'3 нет роста нет роста сливной рост сливной рост
S. aureus Wood-46 10-2 24 ч - нет роста; 48 ч - еле заметный рост 24 ч - нет роста; 48 ч - еле заметный рост 24 ч - еле заметный сливной рост; 48 ч - хороший сливной рост 24 ч - сливной рост
E. faecalis ATCC 29212 10'6 Полупрозрачные колонии (1,01,2) мм Полупрозрачные колонии (1,01,2) мм Полупрозрачные колонии (1,01,2) мм Полупрозрачные колонии (1,61,8) мм на Энте-рококкагаре
E. faecium NCTC 7171 10'6 Полупрозрачные колонии (1,41,6) мм Полупрозрачные колонии (1,41,6) мм Полупрозрачные колонии (1,41,6) мм Полупрозрачные колонии (1,61,8) мм на Энте-рококкагаре
Candida albicans NCTC 885-653 10'5 Белые колонии (1,4-2,0) мм Белые колонии (1,4-2,0) мм Белые колонии (1,4-2,0) мм Белые колонии (1,8-2,2) мм на агаре Сабуро
8
Курский научно-практический вестник "Человек и его здоровье", 2014, № 4
Таблица 4
Выявление лактобактерий в йогуртах с использованием Лактобакагара
Йогурт Содержание лактобактерий, КОЕ/г MALDI TOF Score index
Питьевой клубничный, ООО «Г алактика» Valio 4х107 L. rhamnosus 1,916
Агуша, питьевой, ОАО «Вимм-Билль-Данн Продукты Питания» 6»108 L. acidophilus 1,92
Биолакт «Тема», Молочный комбинат «Петромол» 2х108 L. acidophilus 2,063
Активиа Данон, «Данон Индустри», образец 1 3х108 Lactococcus lactis ssp. lactis 2,073
Активиа Данон, «Данон Индустри», образец 2 6х108 Lactococcus lactis 2,48
Биойогурт «Тема», ОАО «Компания ЮНИМИЛК», образец 1 3х107 L. rhamnosus 1,85-
Биойогурт «Тема», ОАО «Компания ЮНИМИЛК», образец 2 8х107 не идентифицирован
Чудо-Йогурт, классический, АО «Вимм-Билль-Данн Продукты Питания» 1х106 Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus 2,19
Биойогурт «Биобаланс», ОАО «Компания ЮНИМИЛК» 6х108 Lactobacillus rhamnosus 2,01
Био Йогурт «Biomax», АО «Вимм-Билль-Данн Продукты Питания» 2х 107 Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus 2,19
На Лактобакагаре, как и на обеих контрольных средах, наблюдалось подавление роста музейных штаммов E. coli 3912/41 (О55:К59), E. coli 675, P. aeruginosa 27/99, K. pneumoniae 3534/51 из разведения 10-2. При этом на ГРМ-агаре перечисленные штаммы росли газоном. Рост энтерококков на всех средах через 24 ч культивирования также отсутствовал. Через 48 ч инкубации штаммы E. faecalis ATCC 29212 и E. faecium NCTC 7171 вырастали из разведения 10-6 в виде полупрозрачных колоний. Наряду с энтерококками на всех средах наблюдался рост штамма Candida albicans NCTC 885-653 в виде белых круглых колоний. Lactobacilli MRS agar, несмотря на высокое значение рН, равное 6,4, проявлял хорошие селективные свойства. Обращает на себя внимание слабое подавление роста стафилококка на среде МРС-4.
Селективные и ростовые свойства Лактобака-гара также изучены в клинических испытаниях при исследовании кала на дисбактериоз от 97 пациентов. Как показали результаты испытаний, в 9 образцах лактобациллы не выявлены ни на Лак-тобакагаре, ни на контрольной среде МРС-4 лабораторного изготовления. При анализе одного образца обнаружены единичные колонии плесневых грибов, выросшие на обеих средах, и при анализе двух образцов на Лактобакагаре отмечены колонии дрожжей и плесневых грибов. Выявлено значимое превышение количества лактоба-
цилл на Лактобакагаре по сравнению с контрольной средой. Содержание лактобацилл в исследованных образцах составило 6,01 lg КОЕ/г при посеве фекалий на Лактобакагар и 5,7 lg КОЕ/г на контрольной среде. Выросшие на обеих средах лактобациллы не различались друг от друга ни по морфологии колоний, ни по морфологии клеток при микроскопическом исследовании.
Основным назначением лактобакагара является выделение и культивирование лактобацилл при бактериологическом исследовании в клинической лабораторной диагностике. Помимо этого он может быть применен и в пищевой микробиологии. Следующий этап исследований посвящен использованию Лактобакагара для подсчета живых йогуртных (Lactobacillus delbrueckii ssp. bul-garicus и Streptococcus thermophilus), мезофиль-ных (Lactococcus lactis), пробиотических культур (L. acidophilus, L. rhamnosus) в коммерческих йогуртах в период их срока годности. Проанализировано 10 образцов йогуртов разных производителей. На этикетках всех исследованных йогуртов производителями заявлено, что содержание молочнокислых микроорганизмов составляет не менее 1х107 КОЕ/г. Биойогурты «Тема» и «Биобаланс» обогащены L. rhamnosus GG в концентрации не менее 1х107 КОЕ/г. Результаты количественных исследований йогуртов с использованием Лактобакагара приведены в табл. 4.
9
Экспериментальная биология и медицина
Все йогурты, взятые в исследование, содержали живые молочнокислые бактерии, которые вырастали на Лактобакагаре в виде белых полупрозрачных колоний в S-форме. Величины КОЕ практически не отличались от заявленных производителем, за исключением Чудо-йогурта. Удалось выделить следующие культуры: Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus, Lactococcus lactis, L. acidophilus, L. rhamnosus. Лишь один из основных представителей йогурт-ных культур - S. thermophilus - не удалось выделить на Лактобакагаре из-за селективных свойств питательной среды, но он выделен на среде № 1 ГРМ. Мы столкнулись со сложностью идентификации культур в биойогурте «Тема», возможно из-за смеси лактобацилл, присутствующих в биойогурте.
В ходе проведенных испытаний отмечены хорошие ростовые свойства Лактобакагара, позволяющие активно расти и размножаться штаммам лактобацилл, используемым как в научных исследованиях, так и в производстве молочнокислых препаратов. При этом Лактобакагар не уступал Lactobacillus MRS agar и среде МРС-4 при работе с музейными штаммами лактобактерий и при анализе клинического материала. Лактобака-гар обладал ингибирующей способностью в отношении штаммов эшерихий, псевдомонад, клеб-сиелл, а в отличие от контрольной среды МРС-4 -и в отношении стафилококков. Вместе с тем на Лактобакагаре, также как и на Lactobacillus MRS agar и среде МРС-4, растут энтерококки и дрожжеподобные грибы. При использовании Лактобакагара необходима бактериоскопия мазков всех подозрительных колоний и/или другие методы для идентификации.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бондаренко В.М. Молекулярно-генетические и молекулярно-биологические исследования представителей родов Bifidobacterium и Lactobacillus // Вестник РАМН. - 2006. - № 1. - С. 18-24.
2. Журавлева С.В., Прокопец Ж.Г. Биологическая и пищевая ценность пробиотических пастообразных продуктов из сырья морского генеза // Техника и технология пищевых производств. - 2012. - № 4. -С. 18-23.
3. Мелкумян А.Р., Припутневич Т.В., Анкирская А.С., Трофимов Д.Ю., Муравьева В.В., Муллабаева С.М., Завьялова М.Г. Видовой состав лактобактерий при различном состоянии микробиоты влагалища у беременных // Клин. микробиол. антимикроб. хи-миотер. - 2013. - Т. 15, № 1. - С. 72-79.
4. Методы контроля бактериологических питательных сред. Методические указания. МУК 4.2.2316-
08. - М. : Роспотребнадзор. - 2008. - 67 с.
5. Ордабаев Ж.К., Давлетова Л.Н., Жанаманова Р., Зевалкина Е.В., Урдабаева Ж.Ш., Архарова К.С., Туганбаева Б.М. Биологические свойства антагонистических штаммов лактобацилл // Лабораторная медицина. - 2011. - № 1. - С. 51-54.
6. Припутневич Т.В., Мелкумян А.Р., Анкирская А.С., Трофимов Д.Ю., Муравьёва В.В., Завьялова М.Г. Использование современных лабораторных технологий в видовой идентификации лактобактерий при оценке состояния микробиоты влагалища у женщин репродуктивного возраста // Акушерство и гинекология. - 2013. - № 1. - С. 76-80.
7. Хомич Ю.С., Бурмистрова А.Л., Самышкина Н.Е., Поспелова А.В. Изучение характера взаимоотношений Candida albicans и Lactobacillus plantarum при совместном культивировании на поверхности плотной питательной среды // Современные проблемы науки и образования. - 2006. - № 2. -С. 60-61.
8. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Т. 3: Пробиотики и функциональное питание. - М. : ГРАНТЪ, 2001. -286 с.
9. Ahlroos T., Tynkkynen S. Quantitative strain-specific detection of Lactobacillus rhamnosus GG in human faecal samples by real-time PCR // Journal of Applied Microbiology. - 2009. - Vol. 106. - P. 506-514.
10. Coeuret V., Dubernet S., Bernardeau M., Gueguen M., Vernoux J.P. Isolation, characterisation and identification of lactobacilli focusing mainly on cheeses and other dairy products // Lait. - 2003. - N 83. - P. 269306.
11. Land M.H., Rouster-Stevens K., Woods C.R., Cannon M.L., Cnota J., Shetty A.K. Lactobacillus sepsis associated with probiotic therapy // Pediatrics. -2005. - Vol. 115, N 1. - P. 178-181.
12. Martin B., Jofre A., Garriga M., Pla M., Aymerich T. Rapid Quantitative Detection of Lactobacillus sakei in Meat and Fermented Sausages by Real-Time PCR // Applied and environmental microbiology. - 2006. -Vol. 72, N 9. - P. 6040-6048.
13. Talwalkar A., Kailasapathy K. Comparison of selective and differential media for the accurate enumeration of strains of Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium spp. and Lactobacillus casei complex from commercial yoghurts // International Dairy Journal. -
2004. - Vol. 14, N 2. - P. 143-149.
14. Vahabnezhad E., Mochon A.B., Wozniak L.J., Zir-ing D.A. Lactobacillus bacteremia associated with probiotic use in a pediatric patient with ulcerative colitis // J. Clin. Gastroenterol. - 2013. - Vol. 47, N 5. -
P. 437-439.
15. Van de Casteele S., Vanheuverzwijn T., Ruyssen T., Van Assche P., Swings J., Huys G. Evaluation of culture media for selective enumeration of probiotic strains of lactobacilli and bifidobacteria in combination with yoghurt or cheese starters // International Dairy Journal. - 2006. - Vol. 16, N 12. - P. 14701476.
10
