Отечественные питательные среды для диагностики гнойных бактериальных менингитов Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

микробиология

© коллектив авторов, 2015 УДК 616.831.9-002.3-022.7-078

Подкопаев Я.в., Домотенко Л.в., Морозова Т.П., Храмов М.в., Шепелин А.П.

ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ГНОЙНЫХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ МЕНИНГИТОВ

ФБУН «ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, 142279, Московская обл., Серпуховский р-н, пос. Оболенск

Разработаны отечественные питательные среды для выделения и культивирования основных возбудителей гнойных бактериальных менингитов: гемофилус агар, шоколадный агар, ГБМ-агар. Изучены ростовые и селективные свойства разработанных питательных сред. Гемофилус агар обеспечивает рост Haemophilus influenzae, шоколадный агар, ГБМ-агар - Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae. Отечественные питательные среды не уступают по ростовым характеристикам иностранным аналогам. При использовании питательных сред с селективными добавками возможно избирательное выделение основных возбудителей гнойных бактериальных менингитов с инги-бированием роста микробов-ассоциантов.

К л ю ч е в ы е с л о в а: шоколадный агар; гемофилус агар; ГБМ-агар; селективные добавки; лабораторная диагностика бактериальных менингитов; Neisseria meningitidis; Streptococcus pneumonia; Haemophilus influenzae.

Для цитирования: Клиническая лабораторная диагностика. 2015; 60 (5): 59-64. Podkopaev Ya.V., DomotenkoL.V., Morozova T.P.,KhramovM.V., ShepelinA.P.

THE NATIONAL NUTRIENT MEDIUM FOR DIAGNOSTIC OF PURULENT BACTERIAL MENINGITIS The state research center of applied microbiology and biotechnology of Rospotrebnadzor, 142279 Obolensk, Russia

The national growth mediums were developed for isolating and cultivating of main agents of purulent bacterial meningitis - haemophilus agar, chocolate agar, PBM-agar. The growing and .selective characteristics of developed growth mediums are examined. The haemophilus agar ensures growth of Haemophilus influenzae. The chocolate agar, PBM-agar ensure growth of Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae. By growing characteristics, the national growth mediums match foreign analogues. Under application of growth mediums with selective additions it is possible to achieve selective isolation of main agents ofpurulent bacterial meningitis with inhibition of growth of microbes-associates.

Keywords: chocolate agar; PBM-agar; haemophilus agar; selective additions; laboratory diagnostic; bacterial meningitis; Neisseria meningitidis; Streptococcus pneumoniae; Haemophilus influenzae

Citation: Klinicheskaya Laboratornaya diagnostika. 2015; 60(5): 59-64.

Введение. Диагностика инфекционных заболеваний невозможна без бактериологических исследований с выделением чистой культуры возбудителя на питательных средах. Не является исключением диагностика гнойных бактериальных менингитов (ГБМ).

ГБМ вызываются широким спектром микроорганиз-мов,способныхпроникнуть через гематоэнцефалический барьер: Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Candida albicans, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa и др [6, 7, 15]. Около 90% случаев бактериальных менингитов приходится на N. meningitidis, H. influenzae тип b, S. pneumoniae [4, 8, 13, 15]. Выделение и культивирование этих микроорганизмов осложнено их питательными потребностями.

Для роста H. influenzae необходимо наличие в питательной среде факторов роста - X (гемин или гематин) и V (никотинамидадениндинуклеотид - НАД) [1, 4]. Для менингококков и пневмококков требуются среды, содержащие кровь или сыворотку крови животных. Оптимальной питательной средой для выращивания основных возбудителей бактериальных менингитов является

Для корреспонденции:

Подкопаев Ярослав Васильевич, podkopaev@obolensk.org

среда лабораторного приготовления - шоколадный агар, содержащая все необходимые для их роста питательные вещества и факторы роста [1, 2, 4]. Ростовые свойства шоколадного агара напрямую зависят от соблюдения температурного режима приготовления среды, качества и типа используемой крови, что может негативно влиять на воспроизводимость исследований с его использованием. Коммерческие питательные среды в отличие от сред лабораторного приготовления стандартны, обладают стабильными ростовыми свойствами. Иностранные производители выпускают питательные среды, в которых гретая кровь заменена сухим гемоглобином, витаминами, факторами роста [10, 14]. Эти среды, как сухие, так и готовые к применению, используются для выделения и культивирования основных возбудителей бактериальных менингитов [11, 12, 16].

Разработка и организация промышленного выпуска отечественных питательных сред, способных обеспечить рост основных возбудителей ГБМ, является актуальной задачей. В ГНЦ ПМБ разработана питательная среда для культивирования менингококков (менинго-агар). Возможности использования данной питательной среды в диагностике бактериальных менингитов ограничены из-за узкого спектра специфической активности - менингоагар не поддерживает рост H. influenzae и недостаточно хорошо поддерживает рост пневмококков.

Цель исследования - разработать состав и техноло-

гию промышленного изготовления питательных сред для выделения и культивирования основных возбудителей ГБМ, не требующих добавления крови, изучить их биологические свойства.

Материалы и методы. При конструировании питательных сред применены белковые гидролизаты производства ФБУН ГНЦ ПМБ: панкреатический гидролизат казеина сухой (ПГК) по ТУ 9385-018-78095326-2006, сернокислотный гидролизат казеина (СГК) по ТУ 9385077-78095326-2007, панкреатический гидролизат рыбной муки сухой (ПГРМ) по ТУ 9385-017-78095326-2006, сернокислотный гидролизат рыбной муки сухой (сернокислотный ГРМ марки ФКС) по ТУ 9385-069-780953262007, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов (СРГМ) по ТУ 9385-016-78095326-2007.

В качестве сред сравнения использованы питательные среды: 1) ША BD - шоколадный агар на основе GC агара (Becton Dickinson) с добавлением 1% гемоглобина (Becton Dickinson) и смеси факторов роста IsoVitaleX (Becton Dickinson); 2) ША BM - шоколадный агар со смесью факторов роста PolyViteX (bioMerieux), 3) кровяной агар на основе сердечно-мозгового агара (Brain Heart Infusion agar, Becton Dickinson) с добавлением 5% крови бараньей дефибринированной (Эколаб).

Использованы два клинических изолята S. pneumoniae сероваров 2 и 4 и штаммы микроорганизмов, полученные из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-Оболенск»: H. influenzae тип b 423, H. influenzae типа b ATCC 49247, H. influenzae типа a ATCC 9006, S. pneumoniae серотипа 5 ATCC 6305, N. meningitidis серотипа a ATCC 13090, N. meningitidis серотипа b ATCC 13077, N. meningitidis серотипа c ATCC 13102, S. aureus Wood-46, S. aureus ATCC 43300, C. albicans ATCC 60193, E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218, K. pneumoniae ATCC 700603, K. pneumoniae 3534, L. monocytogenes ATCC 11994, Listeria seligery «ГКПМ-Оболенск» В-4913, P. aeruginosa ATCC 27853, Alcaligenes faecalis ATCC 29212, Lactobacillus brevis ATCC 367, S. pyogenes Dick1, Moraxella catarrhalis ATCC 25238, Enterococcus faecium ATCC 19434, Enterococcus faecalis ATCC 51299, E. faecalis ATCC 29212, E. faecalis ATCC 19433, Gardnerella vaginalis ATCC 14018.

В качестве посевного материала использованы суточные культуры микроорганизмов, выращенные в соответствии с рекомендациями, изложенными в паспортах штаммов. Суспензии микроорганизмов для посева готовили в 0,9% растворе натрия хлорида по отраслевому стандартному образцу мутности ОСО 42-28-85 (МЕ) (исходное разведение). Для получения рабочих разведений (10-1—10-7) готовили десятикратные разведения в стерильном 0,9% растворе натрия хлорида. Культуру каждого штамма из рабочих разведений засевали по 0,1 мл на чашки Петри с питательными средами, распределяя посевной материал по поверхности среды покачиванием чашек, и инкубировали в течение 18—48 ч при температуре (37±1)°С в атмосфере 5—10% СО2 в «свечном сосуде».

Качество питательных сред оценивали по физико-химическим свойствам (pH, содержание аминного азота, хлоридов, прочность агарового студня), специфической активности (чувствительность, дифференцирующие, ингибирующие свойства сред, скорость роста, стабильность морфологических признаков микроорганизмов) в соответствии с МУК 4.2.2316-08 [5].

Чувствительность E. faecalis к ванкомицину определяли диско-диффузионным методом с использованием дисков производства Becton Dickinson на агаре

Мюллера-Хинтона II (Becton ОюЫшоп).Тестирование чувствительности L. brevis ATCC 367 проводили на среде лактобакагар (ФБУН ГНЦ ПМБ, Оболенск) - аналоге агара MRS, который успешно применяют для определения антибиотикочувствительности лактобактерий [17].

Статистический анализ данных проводили, используя программную среду вычислений R (версия 3.0.2). Рассчитывали среднее арифметическое взвешенное и среднее квадратичное отклонение диаметров колоний культур, а также среднее арифметическое и среднее квадратичное отклонение количества колоний.

Результаты и обсуждение. Разработана пропись готовой к применению питательной среды для культивирования и выделения H. influenzae (гемофилус агар), не требующей добавления крови. В качестве белковой основы среда содержит ПГК. Источниками факторов X и V в среде служат СРГМ и НАД соответственно. Введение в состав питательной среды дрожжевого экстракта, мясного пептона позволило добиться повышения чувствительности среды и увеличения скорости роста

H. influenzae. Через 18 ч культивирования штаммы H. influenzae формируют на гемофилус агаре круглые слизистые полупрозрачные колонии сероватого цвета, практически не отличающиеся от колоний, вырастающих на средах сравнения.

Гемофилус агар, помимо H. influenzae, поддерживает рост N. meningitidis и S. pneumoniae. При одинаковом количестве их колонии заметно мельче, чем на средах сравнения. Диаметр колоний S. pneumoniae на гемофилус агаре через 18 ч культивирования составляет 0,2-0,4 мм, на средах сравнения - 0,4-0,6 мм. Колонии менингококков мельче на гемофилус агаре - 0,6-0,8 мм, на средах сравнения их диаметр достигает 1,0-1,2 мм.

Разработана питательная среда, на которой рост N. meningitidis и S. pneumoniae не уступает их росту на иностранных аналогах. В качестве заменителя крови использована смесь гемоглобина и СРГМ в концентрациях

I,0 и 0,5% соответственно. Введение в состав питательной среды цианокобаламина, тиамина пирофосфата, аденина, L-глутамина, цистеина гидрохлорида позволило улучшить биологические свойства питательной среды. Колонии H. influenzae, N. meningitidis, S. pneumoniae, выращенные на новой среде, крупнее, чем выращенные на гемофилус агаре, практически не отличались ни по размеру, ни по количеству от выросших на ША BD и ША BM.

Разработанная питательная среда получила название «шоколадный агар», так как сходна по внешнему виду с агаром с гретой кровью: однородная непрозрачная светло-коричневого цвета. В зоне роста колоний S. pneumoniae на 1-е сутки культивирования наблюдается позеленение питательной среды, типичное для шоколадного агара с гретой кровью, что позволяет проводить дифференциацию пневмококка и других а-гемолитических стрептококков.

Шоколадный и гемофилус агары, являясь готовыми к применению средами, имеют срок годности один год. Для увеличения срока годности на основе шоколадного агара разработана сухая питательная среда для выделения возбудителей ГБМ (ГБМ-агар).

В ГБМ-агаре гемоглобин полностью заменен на СРГМ с конечной концентрацией в среде 1,2%. Исключение гемоглобина из состава привело к тому, что питательная среда, разлитая в чашки Петри, стала прозрачной светло-коричневого цвета. Сохранилась возможность дифференциации S. pneumoniae на питательной среде. В отличие от шоколадного агара на

Таблица 1

Средний размер колоний и среднее количество КОЕ H. influenzae, S. pneumoniae, N. meningitidis через 18 ч культивирования на различных средах

Штамм, разведение

Гемофилус агар

Шоколадный агар

ГБМ-агар

ША BD

Кровяной агар

H. influenzae 423, 10-6 H. influenzae ATCC 49247, 10-6 H. influenzae ATCC 9006, 10-6 N. meningitidis ATCC 13102, 10-6 N. meningitidis ATCC 13077, 10-6 N. meningitidis ATCC 13090, 10-6 S. pneumoniae ATCC 6305, 10-5 S. pneumoniae cepoTun 2, 10-5 S. pneumoniae ceporan 4, 10-5

1,32 ± 0,17*/68 ± 7** 1,13 ± 0,16/91 ± 11 1,21 ± 0,16/112 ± 11 Данные не приводятся Данные не приводятся Данные не приводятся Данные не приводятся Данные не приводятся Данные не приводятся

1,33 ± 0,12/73 ± 9 1,26 ± 0,18/85 ± 10 1,30 ± 0,19/119 ± 12 1,26 ± 0,15/69 ± 8 1,17 ± 0,14/94 ± 8 1,00 ± 0,14/61 ± 9 0,45 ± 0,15/56 ± 6 0,46 ± 0,16/51 ± 6 0,49 ± 0,16/98 ± 8

1,35 ± 0,18/79 ± 9 1,23 ± 0,17/82 ± 11 1,31 ± 0,18/116 ± 10 1,27 ± 0,17/67 ± 7 1,20 ± 0,14/91 ± 8 0,97 ± 0,13/64 ± 9 0,57 ± 0,13/54 ± 6 0,55 ± 0,12/56 ± 6 0,62 ± 0,12/95 ± 9

1,32 ± 0,15/75 ± 8 1,24 ± 0,18/87 ± 10 1,31 ± 0,19/108 ± 11 1,26 ± 0,16/71 ± 8 1,18 ± 0,15/97 ± 8 0,98 ± 0,14/59 ± 10 0,45 ± 0,16/59 ± 6 0,46 ± 0,14/61 ± 7 0,48 ± 0,17/91 ± 8

Нет данных Нет данных Нет данных Нет данных Нет данных Нет данных 0,64 ± 0,12/86 ± 7 0,67 ± 0,12/93 ± 6 0,72 ± 0,16/148 ± 10

П р и м е ч а н и е. * - средневзвешенный диаметр колоний и его среднее квадратичное отклонение, мм; количество колоний и его среднее квадратичное отклонение.

среднее арифметическое

ГБМ-агаре рост пневмококка сопровождается не позеленением, а обесцвечиванием питательной среды в зоне роста культуры. При одинаковом характере роста H. influenzae колонии N. meningitidis, выращенные на ГБМ-агаре, мельче выращенных на шоколадном агаре. Внесение глюкозы в концентрации 0,1% в питательную среду позволило добиться на ГБМ-агаре хорошего роста всех основных возбудителей бактериальных менингитов.

Изучены биологические показатели наработанных производственных серий питательных сред с использованием клинических изолятов и музейных штаммов. Средние размеры колоний микроорганизмов, среднее КОЕ на разработанных питательных средах без селективных добавок (СД), средах сравнения и результаты роста пневмококков на кровяном агаре через 18 ч культивирования приведены в табл. 1. Различия в характере роста исследованных штаммов на средах ША BD, ША ВМ несущественны, поэтому в табл. 1 приведены данные только для ША BD.

Морфология колоний H. influenzae на всех средах одинакова: штаммы росли в виде серых слизистых блестящих колоний. На гемофилус агаре через 18 ч культивирования у двух штаммов H. influenzae наблюдалась более низкая скорость роста; через 22-24 ч культивирования размер колоний всех исследованных штаммов ге-мофильной палочки был примерно равным на всех средах (см. табл. 1). Количество КОЕ практически одинаково на всех исследованных средах. Поскольку гемофилус агар предназначен только для выделения H. influenzae, данные о поведении менингококков и пневмококков на данной среде не приводятся.

Менингококки росли в виде полупрозрачных блестящих сероватого цвета колоний с идеально ровными краями. Размеры колоний N. meningitidis на шоколадном агаре, ГБМ-агаре, на агарах ША BD, ША ВМ не отличались друг от друга. Различия в КОЕ на всех исследованных средах несущественны.

Штаммы S. pneumoniae росли на всех средах в виде мелких полупрозрачных четко очерченных, не склонных к слиянию колоний. В период 18-24 ч культивирования колонии были полусферическими, уплощаясь на 2-е сутки роста. Вокруг колоний пневмококков на шоколадном агаре, на агарах ША BD, ША ВМ наблюдалось позеленение питательной среды, на ГБМ-агаре - обесцвечивание, на кровяном агаре - а-гемолиз. Колонии, вырос-

шие на шоколадном агаре,на агарах ША BD, ША BM, при одинаковой прочности агара незначительно мельче колоний,выросших на ГБМ-агаре. На кровяном агаре колонии всех штаммов S. pneumoniae заметно крупнее, их количество на 40-50% больше, чем на средах, не содержащих кровь.

В соответствии с нормативными документами выявление H. influenzae, S. pneumoniae, N. meningitidis осуществляют как из стерильных в норме локусов, так и из нестерильного клинического материала [4, 9]. При работе со стерильным в норме материалом используют неселективные питательные среды, при выделении возбудителей из нестерильного клинического материала дополнительно производят посев на селективные питательные среды [4].

Для выделения основных возбудителей ГБМ из кон-таминированного материала к каждой из разработанных питательных сред сконструированы селективные добавки (СД). СД к гемофилус агару содержит баци-трацин. К шоколадному агару, ГБМ-агару разработаны СД, которые позволяют избирательно выделять каждый из искомых микроорганизмов: СД-Г для выделения H. influenzae, СД-П для выделения пневмококков, СД-М для выделения менингококков. В состав СД-Г входят ба-цитрацин, амфотерицин B, ванкомицин; СД-П содержит амфотерицин B, полимиксин B, налидиксовую кислоту; СД-М состоит из амфотерицина B, полимиксина B, ван-комицина.

Разработанные питательные среды поддерживают хороший рост возбудителей ГБМ как без СД, так и с соответствующими добавками: СД или СД-Г, или СД-П, или СД-М. Селективные варианты питательных сред обладают ингибирующими свойствами в отношении многих микробов-ассоциантов. Результаты изучения ингибирующих свойств питательных сред при применении СД представлены в табл. 2.

Использование СД-Г в шоколадном агаре, ГБМ-агаре не оказывало отрицательного влияния на рост штаммов H. influenzae, полностью подавляло рост штаммов грамположительных микроорганизмов, включая S. pneumoniae. СД практически не ингибировала рост грамотрицательных микроорганизмов за исключением исследованных штаммов N. meningitides, M. catarrhalis ATCC 25238, рост которых отсутствовал через 24 ч культивирования при посеве из разведения 10-1, но наблюдался через 48-72 ч в виде единичных колоний. Подоб-

Таблица 2

Ростовые свойства разработанных питательных сред с селективными добавками

Штамм Гемофилус агар с СД Шоколадный агар и ГБМ-агар с селективными добавками

СД-Г СД-М СД-П

Н. influenzae ATCC 49247 +*/10-7** +/10-7 -/исходное -/исходное

Н. influenzae 423 +/10-7 +/10-7 -/исходное -/исходное

Н. influenzae ATCC 9006 +/10-7 +/10-7 -/исходное -/исходное

N. meningitidis ATCC 13102 -/10-2 -/10-2 +/10-7 -/исходное

N. meningitidis ATCC 13077 -/10-2 -/10-2 +/10-7 -/исходное

N. meningitidis ATCC 13090 -/10-2 -/10-2 +/10-7 - / исходное

S. pneumoniae ATCC 6305 -/исходное -/исходное -/исходное +/10-5

S. pneumoniae серотип 2 -/исходное -/исходное -/исходное +/10-5

S. pneumoniae серотип 4 -/исходное -/исходное -/исходное +/10-5

A. faecalis ATCC 27853 +/10-6 ±/10-6 -/исходное -/исходное

E. coli ATCC 25922 +/10-6 ±/10-6 -/исходное -/исходное

E. coli ATCC 35218 +/10-6 ±/10-6 -/исходное -/исходное

K. pneumoniae ATCC 700603 +/10-6 +/10-6 -/10-2 -/исходное

K. pneumoniae 3534 +/10-6 +/10-6 -/10-2 -/исходное

M. catarrhalis ATCC 25238 -/10-2 -/10-2 -/10-3 -/исходное

P. aeruginosa ATCC 27853 +/10-6 ±/10-6 -/исходное -/исходное

E. faecalis ATCC 51299 -/исходное -/исходное +/10-6 +/10-6

E. faecalis ATCC 29212 -/исходное -/исходное ±/10-6 +/10-6

E. faecalis ATCC 19433 -/исходное -/исходное -/исходное +/10-6

E. faecium ATCC 19434 -/исходное -/исходное -/исходное +/10-6

G. vaginalis ATCC 14018 -/исходное -/исходное -/исходное +/10-6

L. brevis ATCC 367 -/исходное -/исходное +/10-6 +/10-6

L. monocytogenes ATCC 11994 нет данных -/исходное -/исходное +/10-6

L. seligery В-4913 нет данных -/исходное -/исходное +/10-6

S. aureus Wood-46 -/исходное -/исходное -/10-2 +/10-6

S. aureus ATCC 43300 -/исходное -/исходное -/10-2 +/10-6

S. pyogenes Dick-1 -/исходное -/исходное -/исходное +/10-6

C. albicans ATCC 60193 +/10-5 -/исходное - /исходное -/исходное

П р и м е ч а н и е. * - характер роста: "+" - рост культуры, подавления нет; "±" - снижение скорости роста по сравнению со средой без селективных добавок; "-" - полное подавление роста. ** - минимальное разведение микроорганизма, при посеве из которого наблюдалось полное подавление роста.

ное поведение микроорганизмов отмечено при использовании СД в гемофилус агаре.

Добавление СД-М в шоколадный агар, ГБМ-агар не влияет на рост N. meningitidis, подавляет рост большинства грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, включая H. influenzae, S. pneumoniae. Для некоторых из исследованных микроорганизмов наблюдалось частичное подавление роста. K. pneumoniae, M. catarrhalis ATCC 25238 росли в виде единичных колоний через 24 ч инкубирования при посеве из разведений 10-1 и 10-2 соответственно, не росли при посеве из последующих разведений. Подобный характер подавления роста наблюдался для S. aureus. СД-М не подавляла рост L. brevis ATCC 367; оказывала неодинаковое воздействие на рост штаммов E. faecalis. СД вызывала полное подавление роста E. faecalis ATCC 19433, при этом не влияла на рост E. faecalis ATCC 51299, практически не подавляла рост E. faecalis ATCC 29212. Исследования чувствительности к ванкомицину, входящему в состав СД-М, показали, что L. brevis ATCC 367, E. faecalis ATCC 51299

являются устойчивыми, E. faecalis ATCC 29212 чувствителен к ванкомицину. Для подавления роста E. faecalis ATCC 29212 потребовалось дополнительное увеличение концентрации ванкомицина с 3,0 до 4,0 мг/л.

Добавление СД-П к шоколадному агару, ГБМ-агару не вызывало подавления роста ни одного из исследованных грамположительных микроорганизмов, в том числе S. pneumoniae; наблюдалось ингибирование роста всех исследованных штаммов грамотрицательных микроорганизмов, включая H. influenzae, N. meningitidis.

Поскольку СД для ГБМ-агара, шоколадного агара (СД-Г, СД-М и СД-П) содержат амфотерицин, на всех селективных вариантах питательных сред полностью отсутствовал рост C. albicans ATCC 60193. В составе СД нет противогрибковых компонентов, поэтому на гемо-филус агаре подавления C. albicans не происходит.

Заключение. Разработаны прописи и технологии промышленного производства питательных сред для выделения и культивирования основных возбудителей ГБН: гемофилус агар, шоколадный агар, ГБМ-агар. Гемофилус

агар обеспечивает рост H. influenzae, шоколадный агар, ГБМ-агар - рост всех основных возбудителей ГБМ (H. influenzae, N. meningitides, S. pneumoniae), при использовании СД - избирательное выделение данных микроорганизмов и подавление роста ассоциантов. Разработанные питательные среды не нуждаются в дополнительном внесении крови. Среды не уступают по ростовым свойствам иностранным коммерческим аналогам. Каждая из разработанных сред представляет собой набор реагентов, состоящий из основы, НАД-содержащей ростовой и СД. Основа ГБМ-агара - сухая, а основы гемо-филус агара, шоколадного агара - стерильные готовые к применению среды. Гемофилус агар и шоколадный агар зарегистрированы в качестве медицинских изделий (регистрационные удостоверения № ФСР 2011/11118 и № ФСР 2012/13081). ГБМ-агар в настоящий момент проходит процедуру государственной регистрации. Информация по использованию разработанных питательных сред для диагностики ГБМ изложена в методических рекомендациях МР 4.2.0078/1-13 [3].

ЛИТЕРАТУРА

1. Богданович Т.М., Стецюк О.У, Кречикова О.И., Боронина Л.Г., Катосова Л.К., Фаустова М.Е. Выделение, идентификация и определение чувствительности к антибиотикам Streptococcus pneumoniae. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2000; 2 (20): 93-109.

2. Кречикова О.И., Козлов Р.С., Богданович Т.М.,. Стецюк О.У Суворов М.М., Катосова Л.К. и др. Выделение, идентификация и определение чувствительности к антибиотикам Haemophilus influenzae. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2000; 1 (2): 88-98.

3. Методические рекомендации МР 4.2.0078/1-13. Использование питательных сред для диагностики гнойных бактериальных менингитов. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора; 2014.

4. Методические указания МУК 4.2.1887-04. Лабораторная диагностика менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора; 2005.

5. Методические указания МУК 4.2.2316-08. Методы контроля бактериологических питательных сред. М.; 2008.

6. Миронов А.Ю., Савицкая К.И., Воробьев А.А., Нестерова М.В. Микрофлора при заболеваниях ЛОР-органов и нервной системы у больных региона Московской области. Вестник оториноларингологии. 2001; 4: 31-5.

7. Миронов А.Ю., Савицкая К.И., Воробьев А.А. Условно-патогенные микроорганизмы при гнойно-воспалительных заболеваниях ЛОР-органов и менингитах. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001; 2: 21-5.

8. Миронов А.Ю., Харсеева Г.Г., Глюкина Т.В. Основы клинической микробиологии и иммунологии. Учебное пособие под ред. проф. А.Ю. Миронова. Ростов-на-Дону; ГОУ ВПО РостГМУ; 2011.

9. Приказ Министерства Здравоохранения СССР от 22.04.85 г. № 535 Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений. М.; 1985.

10. Difco & BBL Manual: Manual of microbiological culture media. 2-е изд. Becton, Dickinson and Company; 2009.

11. Gehanno P., Nguyen L., Barry B., Derriennic M., Pichon F., Goehrs J.M. Eradication by ceftriaxone of Streptococcus pneumoniae isolates with increased resistance to penicillin in cases of acute otitis media. Antimicrob. Agents and Chemotherapy. 1999; 43 (1): 16-20.

12. Johswich K.O., Zhou J., Law D.K.S., Michael F.St., McCaw S.E., Jamieson F.B. и др. Invasive potential of nonencapsulated disease isolates of Neisseria meningitidis. Infect. and Immun. 2012; 80(7): 2346-53.

13. Report WHO/CDS/CSR/EDC/99.7. Laboratory methods for the diagnosis of meningitis caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae: WHO communicable disease surveillance and response. World Health Organization: Geneva; 2008.

14. Martin Jr J.E., Billings T.E., Hackney J.F., Thayer J.D. Primary isolation of N. gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health rep. 1967; 82 (4): 361-3.

15. van Sorge N.M., Doran K.S. Defense at the border: the blood-brain barrier versus bacterial foreigners. Future microbiol. 2012; 7 (3): 383-94.

16. Vastine D.W., Dawson C.R., Hoshiwara I., Yoneda C., Daghfous T., Messadi M. Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. App. microbiol. 1974; 28 (4): 688-90.

17. Zdolec N., Filipovic I., Cvrtila Fleck Z., Marie A., Jankuloski D., Kozacinski L. h gp. «Antimicrobial susceptibility of lactic acid bacteria isolated from fermented sausages and raw cheese». Vet. Arh. 2011; 81(1): 133-41.

REFERENCES

1. Bogdanovich T.M., Stetsyuk O.U., Krechikova O.I., Boronina L.G., Katosova L.K., Faustova M.E. Isolation, Identification and Antimicrobial Susceptibility Testing of Haemophilus influenzae. Klinicheskaya Mikrobiologiya i Antimikrobnaya Khimioterapiya. 2000; 2 (20): 93-109. (in Russian)

2. Krechikova O.I., Kozlov R.S., Bogdanovich T.M., Stecjuk O.Y., Suvorov M.M., Katosova L.K. et al. Isolation, Identification and Antimicrobial Susceptibility Testing of Streptococcus pneumoniae. Klinicheskaya Mikrobiologiya i Antimikrobnaya Khimioterapiya. 2000; 1 (2): 88-98. (in Russian)

3. Methodical recommendations MR 4.2.0078/1-13. The use of culture media for the diagnosis of purulent bacterial meningitis. Moscow: Federal center of Hygiene and Epidemiology; 2014. (in Russian)

4. Methodical instructions MUK 4.2.1887-04. Laboratory diagnosis of meningococcal infection and purulent bacterial meningitis. Moscow: Federal Center of Hygiene and Epidemiology; 2005. (in Russian)

5. Methodical instructions MUK 4.2.2316-08. Methods of control of bacteriological culture media. Moscow; 2008. (in Russian)

6. Mironov A.Yu., Savitskaya K.I., Vorob'ev A.A., Nesterova M.V. Microflora in diseases of upper respiratory tract and nervous system in patients of Moscow region. Vestnik Otorinolaringologii. 2001; 4: 31-5. (in Russian)

7. Mironov A.Yu, Savitskaya K.I., Vorob'ev A.A. Opportunistic pathogens with inflammatory diseases of upper respiratory tract and meningitis. ZhurnalMikrobiologii, Epidemiologii i Immunobiologii. 2001; 2: 21--5. (in Russian)

8. Mironov A.Yu., Kharseeva G.G., Glyukina T.V. Fundamentals of Clinical Microbiology andlmmunology. TextbookEdited by Professor Mironov A.Yu. [Osnovy Klinicheskoy Mikrobiologii i Immunologii. Uchebnoe Posobie pod Redaktsiey Professora A.Yu. Mironova]. Rostov-na-Donu: GOU VPO RostGMU; 2011. (in Russian)

9. Order of the Ministry of Health USSR from 22 April 1985 № 535 On the Unification of microbiological (bacteriological) research methods used in clinical diagnostic laboratories of medical institutions. Moscow; 1985. (in Russian)

10. Difco & BBL Manual: Manual of microbiological culture media. 2-n ed Becton, Dickinson and Company; 2009.

11. Gehanno P., Nguyen L., Barry B., Derriennic M., Pichon F., Goehrs J.M. Eradication by ceftriaxone of Streptococcus pneumoniae isolates with increased resistance to penicillin in cases of acute otitis media. Antimicrob. Agents and Chemotherapy. 1999; 43 (1): 16-20.

12. Johswich K.O., Zhou J., Law D.K.S., Michael F.St., McCaw S.E., Jamieson F.B. h gp. Invasive potential of nonencapsulated disease isolates of Neisseria meningitidis. Infect. and Immun. 2012; 80(7): 2346-53.

13. Report WHO/CDS/CSR/EDC/99.7. Laboratory methods for the diagnosis of meningitis caused by Neisseria meningitidis,

Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae: WHO communicable disease surveillance and response. World Health Organization: Geneva; 2008.

14. Martin Jr J.E., Billings T.E., Hackney J.F., Thayer J.D. Primary isolation of N. gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health rep. 1967; 82 (4): 361-3.

15. van Sorge N.M., Doran K.S. Defense at the border: the blood-brain barrier versus bacterial foreigners. Future microbiol. 2012; 7 (3): 383-94.

16. Vastine D.W., Dawson C.R., Hoshiwara I., Yoneda C., Daghfous T.,

Messadi M. Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. App. microbiol. 1974; 28 (4): 688-90.

17. Zdolec N., Filipovic I., Cvrtila Fleck Z., Marie A., Jankuloski D., Kozacinski L. и др. «Antimicrobial susceptibility of lactic acid bacteria isolated from fermented sausages and raw cheese». Vet. Arh. 2011; 81(1): 133-41.

Поступила 21.01.15 Received 21.01.15

Уважаемые читатели!

Приглашаем Вас посетить сайт «Издательства "Медицина"» в Интернете

Наш адрес: www.medlit.ru