CC BY
10
46 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
структурой стероидного фрагмента. Синтезированные со- месей и получать высококачественный кристаллический единения были исследованы на способность ингибировать продукт без дополнительной очистки. каталитическую активность CYP17A1 и подавлять рост Заключение. Производимая по данной технологии суб-и пролиферацию клеток карциномы простаты. Наилучшие станция флударабин фосфат полностью соответствует тре-характеристики выявлены для алсевирона (ингибирование бованиям фармакопеи. Субстанция зарегистрирована в МЗ CYP17A1: IC50 = 0,9 ± 0,1 мкМ, подавление роста клеток РБ и производится на РУП «Белмедпрепараты». На основе LNCaP: IG50 = 5,2 мкМ и PC-3: IG50 = 12,7 мкМ). Оптими- полученной фармацевтической субстанции флударабин зирован 7-стадийный синтез алсевирона, позволяющий фосфат на предприятии разработана и внедрена в произ-получать целевой продукт с суммарным выходом 14—16 %. водство технология получения генерического лекарствен-Заключение. Полученные результаты продемонстриро- ного средства «Флударабел, порошок лиофилизированный вали высокий фармакологический потенциал алсевирона. для приготовления раствора для инъекций 50 мг» — аналога оригинального препарата «Флудара» (Германия). И.В. Кравченко, А.М. Кипнис, Т.П. Новик, Т.О. Григорян, М.А. Грецкая, Е.В. Литвинова, Е.И. Квасюк Н.В. Красногорова1, Д.В. Новиков1, С.Г. Фомина1, СПОСОБ ПРОМЫШЛЕННОГО ПОЛУЧЕНИЯ Е.Н. Горшкова1, М.А. Магомедов2, В.В. Новиков1 ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ СУБСТАНЦИИ СРАВНЕНИЕ УРОВНЕЙ ЭКСПРЕССИИ FCyRIIIa ФЛУДАРАБИН ФОСФАТ И FCyRIIIp ГЕНОВ В РАЗНЫХ ФРАКЦИЯХ РУП «Белмедпрепараты», Минск, Республика Беларусь ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У ПАЦИЕНТОВ Введение. Хронические лимфопролиферативные забо- С КОЛОРЕКТАЛЬНЫМ РАКОМ левания (хронические лимфолейкозы) относят к трудно 1ННГУ им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород, Россия; излечимым болезням крови. В начале 90 гг. для их лечения 2ГБУЗ НО «НОКОД», Нижний Новгород, Россия начали использовать ряд препаратов — производных пу- Введение. Гены иммунного ответа FcyRIIIa и FcyRIIIp, риновых нуклеозидов и нуклеотидов, позволивших сущест- относящиеся к низкоаффинным Fc-рецепторам, совпада-венно увеличить число ремиссий и продолжительность жиз- ют на 98 %. FcyRIIIa является молекулярным маркером ни пациентов. К таким препаратам относятся флударабин преимущественно натуральных киллеров, а FcyRIIIp — фосфат, клофарабин, лейкладин и появившийся немного маркером нейтрофилов, а также ряда других лейкоцитов. позднее неларабин. Использование аналогов пуриновых нук- Морфофункциональные изменения в иммуной системе леозидов, нуклеотидов и в первую очередь флударабин фос- в ответ на возникновение бактериальной инфекции зави-фата коренным образом изменило возможности химиотера- сят от присутствия липополисахарида (ЛПС), являющего-пии в лечении заболеваний данного профиля. Флударабин ся основным компонентом клеточной стенки грамотрица-фосфат применяется в основном для терапии пациентов с В- тельных бактерий. клеточным хроническим лимфолейкозом и неходжкинскими Цель исследования — сравнить относительные уровни лимфомами. Активным метаболитом флударабин фосфата мРНК FcyRIIIa и FcyRIIIp генов с количеством клеток является его 5» — трифосфат, образующийся в результате по- в мононуклеарной и нейтрофильной фракциях клеток кро-следовательного фосфорилирования нуклеозида флудараби- ви, а также определить их изменения в ответ на присутст-на (2^-араА) под действием клеточных киназ. Сам нуклео- вие ЛПС. зид, в свою очередь, образуется в результате количественного Материалы и методы. В работе использовали монону-дефосфорилирования флударабин фосфата in vivo после его клеарную и нейтрофильную фракции клеток перифериче-внутривенного введения. ской крови пациентов с колоректальным раком (КРР). Цель исследования — возрастающая потребность флу- Раздельные уровни мРНК FcyRIIIa и FcyRIIIp генов опре-дарабин фосфата для использования в химиотерапии деляли с помощью олигоспецифичных праймеров и зондов при лечении онкологических заболеваний послужила сти- методом ОТ-ПЦР с детекцией в реальном времени отно-мулом для разработки многочисленных методов его син- сительно референтного гена YWHAZ (тирозин-3-моноок-теза. С целью промышленного производства флударабин сигеназа/триптофан-5-монооксигеназа). Выделение раз-фосфата на РУП «Белмедпрепараты» освоена технология личных фракций клеток крови проводили на градиенте его получения на основе коммерчески доступного нукле- плотности фиколл-урографина (р = 1,116 и р = 1,076). озида 2^-араА. Процентное содержание клеток в полученных фракциях Материалы и методы. Синтез флударабин фосфата осу- оценивали в ходе проведения проточной цитофлуориме-ществляется путем взаимодействия флударабина с хлоро- трии. кисью фосфора в триметилфосфате, обработкой реакци- Результаты. Процентное отношение гранулярных онной смеси льдом и ее последующей нейтрализации и негранулярных клеток совпадало с отношением уровней раствором гидроксида натрия. Выделение флударабин мРНК FcyRIIIa и FcyRIIIp генов в нейтрофильной фрак-фосфата производится с помощью хроматографии на ка- ции клеток. В мононуклеарной фракции также наблюда-тионообменной смоле при контролируемой температуре ется совпадение между процентным содержанием клеток и последующей кристаллизацией целевого продукта из со- и отношением FcyRIIIa/FcyRIIIp, однако у одного паци-держащих его фракций. ента с КРР регистрировалось увеличение уровней мРНК. Результаты. Использование стадии хроматографии После инкубации в течение 30 мин в присутствии ЛПС на катионите позволяет отделить флударабин фосфат регистрировалось снижение уровня мРНК FcyRIIIa и по-от присутствующих в реакционной смеси побочных при- вышение уровня мРНК FcyRIIIp гена по сравнению
Спецвыпуск / том 16 / 2017 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
47
с контролем в нейтрофильной и мононуклеарной фракциях клеток, что может свидетельствовать об активации генов иммунной системы.
Заключение. Определение уровней экспрессии FcyRIIIa и FcyRIIIß генов, а также их отношения в мононуклеарной и нейтрофильной фракциях клеток с помощью метода ОТ-ПЦР с детекцией в реальном времени является отражением активации клеток иммунной системы. Также в некоторых случаях уровень экспрессии FcyRIIIa и FcyRIIIß генов совпадает с отношением гранулярных и негранулярных клеток. Однако для подтверждения полученных результатов необходимо увеличение объема исследуемой выборки.
М.Е. Кукушкин1, Е.К. Белоглазкина1, Н.В. Зык1, А.Г. Мажуга1, Е.М. Трещалина2 ИССЛЕДОВАНИЕ IN VIVO ПОТЕНЦИАЛЬНОГО ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ СПИРОИНДОЛИНОНОВОГО ФРАГМЕНТА 1МГУ им. М.В. Ломоносова, химический факультет, Москва, Россия;
2ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия
Введение. В настоящее время актуальной является задача поиска непептидных низкомолекулярных ингибиторов белка MDM2, который, взаимодействуя с белком р53, являющимся опухолевым супрессором, подавляет его активность. В недавних исследованиях установлено, что соединения, содержащие в своей структуре спироиндолино-новое ядро, способны эффективно блокировать белок-белковое взаимодействие р53-MDM2. В нашей лаборатории разработан подход к синтезу соединений, в структуре которых имеется жесткий каркас из трех спи-ро-сочлененных гетероциклов, основой которого является спироиндолиноновое ядро, или, иначе говоря, были получены диспироиндолиноны с весьма ограниченной конфор-мационной подвижностью за счет 2 спироузлов. Таким образом, синтезирована и протестирована in vitro большая выборка соединений и определено соединение-лидер, которое исследовалось in vivo на модели мышиного лимфо-лейкоза Р-388, а также на иммунодефицитных мышах на модели колоректального рака человека HCT-116.
Цель исследования — определить максимально переносимую концентрацию при испытаниях in vivo, а также исследование ингибирующего эффекта in vivo при различных дозировках исследуемого препарата.
Материалы и методы. Структура полученного соединения-лидера однозначно подтверждена с помощью комплекса физико-химических методов (ЯМР, ИК, масс-спек-троскопия, масс-спектрометрией высокого разрешения, рентгеноструктурным анализом), а чистота подтверждена хромато-масс-спектрометрией. Биологическая активность синтезируемых соединений исследовалась стандартным МТТ-тестом на цитотоксичность на клеточных линиях LNCap, PC3, HCT-116 p53 wt и HCT p53 (-/-). Для испытаний in vivo использовались штаммы опухолей Р-388 и HCT-116.
Результаты. Определена оптимальная дозировка для испытаний in vivo в размере 1000 или 165 мг/кг в пере-
счете на действующее вещество. Торможение роста опухоли на модели мышиного лимфолейкоза наблюдалось вплоть до 92 %, а на модели колоректального рака человека HCT-116—83 %. По окончании курса лечения резкого увеличения роста опухоли не наблюдалось. На модели Р-388 зафиксировано увеличение продолжительности жизни до 20 %.
Заключение. В рамках данной работы проведено исследование свойств диспиропроизводного соединения-лидера в испытаниях in vivo, определены свойства соединения и оценена перспективность дальнейших разработок в этой области.
Работа выполена при поддержке РФФИ, грант № 16-33-60166.
Н.Ю. Кульбачевская1, О.И. Коняева1, К.В. Лобанов2, М.А. Жученко2, В.М. Бухман1 РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛЬНОГО СОДЕРЖАНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЭНДОТОКСИНОВ ДЛЯ ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ БИОСИНТЕТИЧЕСКОГО АКАДЕЗИНА 1ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия;
2ФГБУ«ГосНИИгенетика», Москва, Россия
Введение. Препарат на основе биосинтетического ака-дезина (ПБА) признан перспективным кандидатом в препараты широкого терапевтического применения. В настоящий момент он позиционируется для ряда заболеваний, при лечении которых успех терапии зависит от повышения уровня аденозина и активации АМФ-активированной про-теинкиназы. Ограничение на использование ПБА накладывает плохая биодоступность препарата, которая обусловливает необходимость его внутривенного введения. ЛАЛ-тест считается сегодня наиболее надежным и перспективным способом проверки потенциальной пироген-ности лекарственных средств.
Цель исследования — разработать методику определения содержания бактериальных эндотоксинов (БЭ) в препарате.
Задачи исследования — определить возможность проведения анализа БЭ с помощью ЛАЛ-теста и отработать способ подготовки образца с целью проведения анализа для ПБА.
Материалы и методы. Работу осуществляли с помощью прибора Endo Scan-V Version 4.0 SP3, (Charles River, США), с использованием сертифицированных стандартных картриджей, чувствительностью 5—0,05 ЕЭ/мл в соответствии с требованиями ОФС 42-0062-07. Заявленная чувствительность и качество картриджей подтверждены путем анализа стандартной воды для ЛАЛ-теста. Все разведения испытуемого препарата готовили на воде для ЛАЛ-теста. Вспомогательные материалы, используемые при подготовке и проведении опыта, не содержали бактериальных эндотоксинов в определяемых в тесте количествах и не влияли на ход реакции. Проведены анализы 10 серий ПБА.
Результаты. Расчет предельного содержания бактериальных эндотоксинов для данного препарата проведен на основании планируемой максимальной суточной дозы
Спецвыпуск/ том 16 / 2017
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
