CC BY
8
224
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
В препаратах, окрашенных гематоксилином-эозином и трихромом по Массону, выявили хорошо развитую плотную соединительную ткань с незначительным количеством кровеносных сосудов. При этом воспаление полностью отсутствовало, кроме того, не обнаружено соединительно-тканной капсулы на границе собственных тканей животного и имплантированного матрикса. АДМ характеризовался прорастанием умеренного количества тонкостенных капилляров с нормально сформированной эндотелиальной выстилкой, о чём свидетельствует высокий уровень экспрессии эндотелиоцитами молекул клеточной адгезии 0031. Клеточный компонент имплантированного матрикса также был хорошо выражен. При этом иммунофенотипирование выявило лишь единичные СЮ68-позитивные макрофаги.
Результаты гистологического и иммуногистохимиче-ского исследования говорят о полной интеграции АДМ в собственные ткани животное, а также об отсутствии его иммуногенности. Таким образом он представляется перспективным материалом для герниопластики.
сравнение фенотипа и функциональной активности фибробластов роговицы и фибробластов, дифференцированных в кератоциты
М.А. Суровцева1, И.И. Ким1, Н.А. Бондаренко1, А.П. Лыков1, К.Ю. Краснер1, 2, E^. Чепелева1, А.Н. Трунов2, В.В. Черных2, О.В. Повещенко1
1 НИИ клинической и экспериментальной лимфологии — филиал ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, Россия
2 ФГАУ НМИЦ МНТКМикрохирургия глаза им. С.Н. Федорова Минздрава России, Новосибирский филиал, Новосибирск, Россия
e-mail: mfelde@ngs.ru
Ключевые слова: фибробласты роговицы, кератоциты, дифференцировка, пролиферация, миграция, цитокины.
Раннее было показано, что роговица человека может быть источником стромальных клеток (hCSCs): керато-цитов и фибробластов. В последние годы значительно увеличилось количество пациентов, подвергающихся лазерной коррекции миопии и астигматизма методом ReLEx SMILE, при котором в толще роговицы формируется диск (лентикула) и затем удаляется через малый разрез в роговице. Учитывая дефицит роговицы, особенно ее переднецентральной части, мы предлагаем использовать свежие лентикулы в качестве источника hCSCs. Фибробласты роговицы обладают пластичностью и могут становиться покоящимися кератоцитами при культивировании в бессывороточной среде для роста кератоцитов (KGM), с добавлением аскорбиновой кислотой, ITS и bFGF.
Цель исследования: выделение hCSCs из нового источника — стромальных ReLEx SMILE лентикул и проведение сравнительного анализа морфологии и функциональных свойств фибробластов и фибробластов, дифференцированных в кератоциты. hCSCs выделяли ферментативным способом из лентикул, полученных после коррекции зрения 30 пациентов с миопией методом ReLEx SMILE. Клетки культивировали в среде DMEM/ F12 с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), 2мМ L-глютамина и 40 мкг/мл гентамици-на при 37°С в атмосфере с 5% СО2. Дифференцировку
фибробластов роговицы в кератоциты проводили в селективной среде KGM. Фенотипы клеточных культур определяли методом проточной цитометрии. Пролиферацию и миграцию клеток оценивали с помощью анализатора клеток в реальном времени RTCA. Продукцию клетками ЭПО, BDNF, VEGF, TNF-альфа, IGF-1, SDF-1a, sICAM-1, ви-ментина, фибронектина и общего коллагена определяли иммуноферментным анализом (ИФА).
hCSCs имели морфологию и фенотип фибробластов в ростовой среде с добавлением 10% ЭТС. Они экспрес-сировали маркеры мезенхимальных клеток CD73 (99,2 ± 1,62%), CD105 (22,8 ± 2,91%), но не несли CD90, CD34, CD45, HLA-DR, а также кератокан и люмикан. После диф-ференцировки фибробластов в кератоциты, клетки имели вытянутую, дендритоподобную форму, экспрессиро-вали высокие уровни маркеров кератоцитов: кератокан (98,8 ± 1,93, %) и люмикан (81,4 ± 26,64, %), но не маркеры фибробластов. По данным анализатора клеток в реальном времени RTCA, фибробласты роговицы обладали более выраженной пролиферативной и миграционной активностью, по сравнению с кератоцитами. Кондиционная среда фибробластов содержала более высокие уровни VEGF и виментина. Фибробласты, дифференцированные в кератоциты продуцировали более высокие уровни EPO и BDNF. Уровень фибронектина, коллагена, SDF-1a, IGF-1, TNF-альфа и sICAM-1 был одинаковым в кондиционных средах фибробластов и кератоцитов.
Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что лентикулы, полученные с помощью ReLEx SMILE, могут быть источником фибробластов роговицы, которые затем могут быть дифференцированы в кератоциты для различных задач регенеративной медицины.
c-kit-позитивные стволовые клетки
в интиме аорты с аневризмой
Т.В. Сухачева, Е.В. Пеняева, М.А. Соборов,
С.В. Гарманов, В.А. Мироненко, Р.А. Серов
ФГБУ НМИЦ ССХ им. АН. Бакулева МЗ РФ, Москва,
Россия
e-mail: sukhachevat@gmail.com
Ключевые слова: аневризма аорты, интима, медия, C-kit.
У пациентов с аневризмой аорты выявлено значительное ремоделирование всех ее слоев и, в первую очередь, интимы и медии. Изменения в медии аорты связаны с преобразованием фенотипа гладкомышечных клеток с сократительного на синтетический, изменением состава и структуры межклеточного вещества, что приводит к нарушению эластичности и прочности стенки сосуда. Изменения интимы исследованы менее подробно, в то время как регенераторный потенциал этого слоя является основой сохранения целостности стенки аорты.
Проанализированы интраоперационные биоптаты восходящего отдела аорты пациентов с диаметром аорты менее 55 мм (средн. 47,3 ± 5,7 мм) (группа Aо<55, 18-76 лет, n=44) и 55 мм и более (средн. 61,6 ± 11,2 мм) (группа Ao>55, 29-84 г, n=29). Расширение диаметра аорты свыше 55 мм является фактором высокого риска для ее расслоения и показанием к протезированию. Гистологические срезы окрашены гематоксилином и эозином и по Вейгерту. На светооптическом уровне (х100) измерена толщина интимы и медии аорты, выраженность морфологических изменений определена по 4-балльной шкале. Методами иммуногистохимии в стенке аорты выявлены клетки, иммунопозитивные к гладкомышному
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
