CC BY
10
В препаратах, окрашенных гематоксилином-эозином и трихромом по Массону, выявили хорошо развитую плотную соединительную ткань с незначительным количеством кровеносных сосудов. При этом воспаление полностью отсутствовало, кроме того, не обнаружено соединительно-тканной капсулы на границе собственных тканей животного и имплантированного матрикса. АДМ характеризовался прорастанием умеренного количества тонкостенных капилляров с нормально сформированной эндотелиальной выстилкой, о чём свидетельствует высокий уровень экспрессии эндотелиоцитами молекул клеточной адгезии 0031. Клеточный компонент имплантированного матрикса также был хорошо выражен. При этом иммунофенотипирование выявило лишь единичные СЮ68-позитивные макрофаги.
Результаты гистологического и иммуногистохимиче-ского исследования говорят о полной интеграции АДМ в собственные ткани животное, а также об отсутствии его иммуногенности. Таким образом он представляется перспективным материалом для герниопластики.
сравнение фенотипа и функциональной активности фибробластов роговицы и фибробластов, дифференцированных в кератоциты
М.А. Суровцева1, И.И. Ким1, Н.А. Бондаренко1, А.П. Лыков1, К.Ю. Краснер1, 2, E^. Чепелева1, А.Н. Трунов2, В.В. Черных2, О.В. Повещенко1
1 НИИ клинической и экспериментальной лимфологии — филиал ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, Россия
2 ФГАУ НМИЦ МНТКМикрохирургия глаза им. С.Н. Федорова Минздрава России, Новосибирский филиал, Новосибирск, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: фибробласты роговицы, кератоциты, дифференцировка, пролиферация, миграция, цитокины.
Раннее было показано, что роговица человека может быть источником стромальных клеток (hCSCs): керато-цитов и фибробластов. В последние годы значительно увеличилось количество пациентов, подвергающихся лазерной коррекции миопии и астигматизма методом ReLEx SMILE, при котором в толще роговицы формируется диск (лентикула) и затем удаляется через малый разрез в роговице. Учитывая дефицит роговицы, особенно ее переднецентральной части, мы предлагаем использовать свежие лентикулы в качестве источника hCSCs. Фибробласты роговицы обладают пластичностью и могут становиться покоящимися кератоцитами при культивировании в бессывороточной среде для роста кератоцитов (KGM), с добавлением аскорбиновой кислотой, ITS и bFGF.
Цель исследования: выделение hCSCs из нового источника — стромальных ReLEx SMILE лентикул и проведение сравнительного анализа морфологии и функциональных свойств фибробластов и фибробластов, дифференцированных в кератоциты. hCSCs выделяли ферментативным способом из лентикул, полученных после коррекции зрения 30 пациентов с миопией методом ReLEx SMILE. Клетки культивировали в среде DMEM/ F12 с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), 2мМ L-глютамина и 40 мкг/мл гентамици-на при 37°С в атмосфере с 5% СО2. Дифференцировку
фибробластов роговицы в кератоциты проводили в селективной среде KGM. Фенотипы клеточных культур определяли методом проточной цитометрии. Пролиферацию и миграцию клеток оценивали с помощью анализатора клеток в реальном времени RTCA. Продукцию клетками ЭПО, BDNF, VEGF, TNF-альфа, IGF-1, SDF-1a, sICAM-1, ви-ментина, фибронектина и общего коллагена определяли иммуноферментным анализом (ИФА).
hCSCs имели морфологию и фенотип фибробластов в ростовой среде с добавлением 10% ЭТС. Они экспрес-сировали маркеры мезенхимальных клеток CD73 (99,2 ± 1,62%), CD105 (22,8 ± 2,91%), но не несли CD90, CD34, CD45, HLA-DR, а также кератокан и люмикан. После диф-ференцировки фибробластов в кератоциты, клетки имели вытянутую, дендритоподобную форму, экспрессиро-вали высокие уровни маркеров кератоцитов: кератокан (98,8 ± 1,93, %) и люмикан (81,4 ± 26,64, %), но не маркеры фибробластов. По данным анализатора клеток в реальном времени RTCA, фибробласты роговицы обладали более выраженной пролиферативной и миграционной активностью, по сравнению с кератоцитами. Кондиционная среда фибробластов содержала более высокие уровни VEGF и виментина. Фибробласты, дифференцированные в кератоциты продуцировали более высокие уровни EPO и BDNF. Уровень фибронектина, коллагена, SDF-1a, IGF-1, TNF-альфа и sICAM-1 был одинаковым в кондиционных средах фибробластов и кератоцитов.
Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что лентикулы, полученные с помощью ReLEx SMILE, могут быть источником фибробластов роговицы, которые затем могут быть дифференцированы в кератоциты для различных задач регенеративной медицины.
c-kit-позитивные стволовые клетки
в интиме аорты с аневризмой
Т.В. Сухачева, Е.В. Пеняева, М.А. Соборов,
С.В. Гарманов, В.А. Мироненко, Р.А. Серов
ФГБУ НМИЦ ССХ им. АН. Бакулева МЗ РФ, Москва,
Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: аневризма аорты, интима, медия, C-kit.
У пациентов с аневризмой аорты выявлено значительное ремоделирование всех ее слоев и, в первую очередь, интимы и медии. Изменения в медии аорты связаны с преобразованием фенотипа гладкомышечных клеток с сократительного на синтетический, изменением состава и структуры межклеточного вещества, что приводит к нарушению эластичности и прочности стенки сосуда. Изменения интимы исследованы менее подробно, в то время как регенераторный потенциал этого слоя является основой сохранения целостности стенки аорты.
Проанализированы интраоперационные биоптаты восходящего отдела аорты пациентов с диаметром аорты менее 55 мм (средн. 47,3 ± 5,7 мм) (группа Aо<55, 18-76 лет, n=44) и 55 мм и более (средн. 61,6 ± 11,2 мм) (группа Ao>55, 29-84 г, n=29). Расширение диаметра аорты свыше 55 мм является фактором высокого риска для ее расслоения и показанием к протезированию. Гистологические срезы окрашены гематоксилином и эозином и по Вейгерту. На светооптическом уровне (х100) измерена толщина интимы и медии аорты, выраженность морфологических изменений определена по 4-балльной шкале. Методами иммуногистохимии в стенке аорты выявлены клетки, иммунопозитивные к гладкомышному
а-актину, С-кй, 0034, С044. Результаты сопоставлены с данными клиники с использованием методов непараметрической статистики.
Толщина интимы */медии аорты у пациентов группы Ао<55 составила 79,3 ± 63,1 мкм/1184,0 ± 198,2 мкм, в группе Ао>55 - 162,7 ± 177,4 мкм*/1144,3 ± 288,4 мкм (*Манн-Уитни, р<0,05). У пациентов группы Ао<55 по мере дилатации аорты толщина интимы и ме-дии аорты нарастала (г=0,45; р=0,002; г=0,46; р=0,002). У пациентов группы Ао>55 дилатация аорты коррелировала с истончением ее медии (г=-0,45; р=0,003), выраженной фрагментацией эластических волокон (г=0,41; р=0,004) и кистовидной дегенерацией (г=0,44; р=0,002).
Утолщение интимы под воздействием гемодинами-ческой нагрузки сопровождалось у 27% пациентов появлением в субэндотелиальном слое дилатированной аорты С-кй+ стволовых клеток округлой формы, диаметром 6,4 мкм. С-кй+ клетки встречались в интиме аорты с наиболее утолщенной медией (г=0,60; р=0,04), размеры которой превышали 1100 мкм. Кроме того, появление С-кй+ клеток в интиме коррелировало с ее ремоде-лированием и заселением миофибробласто-подобными клетками с С034+ (г=0,33; р=0,029) и С044+ (г=0,36; р=0,028) иммунофенотипом.
Таким образом, аневризма восходящей аорты сопровождается компенсаторным утолщением интимы/ме-дии, которое коррелирует с активизацией регенераторного потенциала интимы, появлением в ней С-кй+ клеток и изменением её клеточного состава.
(1,8 ± 0,9 мкм и 1,8 ± 0,8 мкм) в группах ПЭ и контроля. В околоядерной зоне цитоплазмы и в отростках Тц выявлены цистерны гранулярного эндоплазматического ретикулума, что свидетельствовало об их высокой синтетической активности. В некоторых ФБК обнаружены ультраструктурные признаки гладкомышечной и макро-фагальной дифференцировки — фрагменты базальной мембраны, сократительные фибриллы с электронно-плотными тельцами вблизи плазмолеммы, вакуоли, ли-пидные включения, мелкие фагосомы. Подобные ФБК с длинными отростками, по-видимому, представляли собой популяцию клеток промежуточной миофибробла-стической дифференцировки, нередко имели общие черты с макрофагами. При ПЭ Тц почти отсутствовали, и переходных форм ФБК было значимо больше (р<0,05). Феномен ремоделирования мезенхимальных клеток с приобретением морфологических признаков фибро-бластов и макрофагов был ранее описан нами в плаценте [2] и в миокарде [3]. Изменение морфологии ме-зенхимальных клеток показывает, что при ПЭ меняются характеристики миометрия. Финансирование: Работа выполнена в рамках ЕГИСУ НИОКТР — 122030200534-4
Литература:
1. Cretoiu S.M., Popescu LM. Biomol Concepts. 2014. V.5. P. 353.
2. Nizyaeva N.V., Sukhacheva T.V, Serov R.A. et al. Sci Rep. 2018.
V. 8. P. 3453.
3. Sukhacheva T.V., Serov R.A., Nizyaeva N.V. et al. Cells.
2022 V.11. P.175.
телоциты и фибробластоподобные
клетки миометрия при преэклампсии
Т.В. Сухачева1, Р.А. Серов1,
М.Н. Шамаракова2, Н.В. Низяева3
1 ФГБУ НМИЦ ССХ им АН Бакулева МЗ РФ, Москва, Россия
2 Центр Планирования семьи и Репродукции (ЦПСиР), Москва, Россия
3 НИИМЧ им. акад. АП. Авцына ФГБНУ «РНЦХ
им. акад. Б.В. Петровского» МЗ РФ, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: телоциты, миометрий, макрофаги, пре-
эклампсия, фибробласты.
В работе выявлены особенности ультраструктуры фибробластоподобных клеток (ФБК) миометрия и тело-цитов (Тц) при преэклампсии (ПЭ) и при неосложненной беременности.
Исследованы образцы миометрия 22 женщин 1843 лет на сроке 27-39 недель гестации. У 12 пациенток диагностировали ПЭ, группа контроля — 10 женщин с неосложненной доношенной беременностью. Образцы миометрия получены во время кесарева сечения (вне области плацентарной площадки), препараты изучены под электронным микроскопом. Достоверность различий оценивали по U-критерию Манна -Уитни при p<0,05.
У пациенток обеих групп в интерстиции миометрия между пучками гладкомышечных клеток и вокруг маточных сосудов обнаружены ФБК веретеновидной или звездчатой формы, с длинными отростками. Некоторые из этих клеток соответствовали морфологическим критериям Тц [1]. При ПЭ отростки ФБК были толще, чем в контроле и составили 0,37 ± 0,2 мкм и 0,19 ± 0,6 мкм, соответственно; диаметр клеток был больше (3,2 ± 1,2 мкм vs 2,7 ± 1,1 мкм), а диаметр ядер не отличался
оценка проангиогенного потенциала плазмидной днк, ко-экспрессирующей гены fgf2 и vegf165, на индукцию локального ангиогенеза in vivo
В.Ю. Сыромятникова1, И.И. Салафутдинов1, М.О. Гомзикова1
Казанский (Приволжский) Федеральный Университет, Казань, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: незаживающие раны, регенерация кожи, ангиогенез, фактор роста фибробластов, фактор роста эндотелия сосудов, плазмидная ДНК.
Ежегодно миллионы людей страдают от незаживающих ран и патологических рубцов, что требует создания новых эффективных подходов к лечению повреждений кожи. Исследования показывают, что около 15 % ран остаются не вылеченными через год после обращения [1], при этом предполагается, что от 1 до 2% населения развитых стран будут иметь хронические раны в течениежизни [2]. Особое значение для успешной регенерации кожи играют проангиогенные фактора роста — фактор роста фибробластов (FGF2) и фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), которые участвуют в образовании новой сосудистой сети, необходимой для доставки питательных веществ, кислорода и иммунных клеток. Цель данного исследования — оценка проанги-огенного потенциала плазмидной ДНК pBud-VEGF165-FGF2, ко-экспрессирующей одновременно и независимо гены fgf2 и vegf165, на индукцию локального ангиоге-неза in vivo. Нами было подкожно, в составе матригеля трансплантировано 2х106 HEK293T, трансфицирован-ных pBud-VEGF165-FGF2, крысам линии Wistar (n=4). Контрольной группе животных (n=4) ввели аналогичное
