CC BY
6
Выводы. Антиглаукомные ЛП, содержащие БХ, могут в высоких концентрациях нарушать структуру и функциональные свойства ЭК. Применение данных ЛП нецелесообразно при низкой плотности ЭК роговицы и после кератопластики.
Литература:
1. Loftsson T., Jansook P., Stefansson E. Acta Ophthalmol. 2012. V.9. № 7. P. 603-608.
2. Acheampong A.A., Shackleton M., John B. et al. Drug Metab Dispos. 2002. V.30. № 4. P.421-429.
3. Lee V.H., Luo A.M., Li S.Y. et al. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1991. V.32. № 11. P. 2948-2957.
выявление инсулина и глюкагона в процессе эмбрионального гистогенеза поджелудочной железы у иглистых мышей (acomys)
К.Н. Султанова, И.С. Неофитов,
А.А. Титова, Р.В. Урсан, А.С. Плюшкина,
М.С. Калигин, А.П. Киясов
ФГАОУ ВО Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: инсулин, глюкагон, эмбриогенез, поджелудочная железа, мыши Acomys.
Мыши Acomys (иглистая мышь) — малоизученная удобная модель для изучения эмбриогенеза, так как у этих мышей более длительный период беременности 39-40 дней [1], 2-4 мышонка в помете, рождающиеся с высокой степенью морфофункциональной зрелости [2]. До сих пор нет единой точки зрения и доказательств какие из двух основных типов клеток островков Лангерганса, а- или ß-клетки, появляются первыми в процессе эмбрионального гистогенеза поджелудочной железы [3, 4]. Поэтому целью нашего исследования было изучение экспрессии инсулина и глюкагона в поджелудочной железе иглистых мышей в процессе пренаталь-ного развития.
Материалы и методы. Исследование было проведено на мышах Acomys, были изучены 15-е, 19-е, 22-е, 24-е, 28-е, 34-е, 38-е сутки (Е) гестации. До Е28 исследовали целые эмбрионы, на более поздних сутках проводили забор фетальной поджелудочной железы. Гистологические срезы окрашивали иммуногистохимически с использованием антител к инсулину (Novocastra) и глюкагону (Dako).
Результаты. Первые глюкагон-позитивные клетки были обнаружены на Е19. На сроке Е22 выявлены первые инсулин-позитивные клетки. Между Е22 и Е28 инсулин-позитивные клетки единичны, далее их количество резко увеличивается, и на сроке Е34 выявляются инсулин-позитивные клетки преимущественно в центральной части островков Лангерганса. Количество глюкагон-по-зитивных клеток растет постепенно от Е19 к Е34.
Формирование кластеров, подобных островкам, начинается со срока Е22. Островки Лангерганса становятся отчетливо различимы с Е34, в которых инсулин-позитивные клетки занимают преимущественно центральную часть островка и располагаются группами, в виде ленты, или рассеяны по всему островку неорганизованным образом. Глюкагон-позитивные клетки на поздних сроках гестации находятся преимущественно на периферической части островка, и встречаются единичные клетки в паренхиме органа.
Выводы. Таким образом, у иглистых мышей в процессе пренатального развития а-клетки появляются раньше, чем ß-клетки. Увеличение количества глюкагон-позитив-ных клеток идет постепенно, а инсулин-позитивных клеток — скачкообразно, основной момент кратного роста количества ß-клеток происходит с Е28 до ЕЗ4. У иглистых мышей островковый эндокринный аппарат поджелудочной железы сформирован к моменту рождения. Работа выполнена в рамках Программы академического стратегического лидерства Казанского Федерального Университета (Приоритет-2030).
Литература:
1. Haughton C.L., Gawriluk T.R., Seifert A.W. J.Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 2G16. V. 55(1). P. 9.
2. Pinheiro G., Prata D.F., Araújo I.M. et al. Lab. Anim. 2G18. V. 52(6). P. 565.
3. Jensen J., Heller R.S., Funder-Nielsen T. et al. Diabetes. 2GGG. V. 49(2). P. 16З.
4. Jennings R.E., Berry A.A., Kirkwood-Wilson R. et al. Diabetes. 2Gm V. 62(1G). P. З514.
морфологическая оценка отдаленных результатов использования ацеллюлярного дермального матрикса для герниопластики
И.В. Супрун, Г.П. Чупрынин, А.А. Фоменко, Е.А. Солоп, А.С. Асякина, А.А. Веревкин, Я.А. Козмай, Т.В. Русинова, К.И. Мелконян
ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России, Краснодар, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: герниопластика, ацеллюлярный дермаль-ный матрикс, иммуногистохимия.
На долю герниопластики приходится 20% всех операций в абдоминальной хирургии. При этом в 26% случаев в позднем послеоперационном периоде развивается рецидив грыжи. Натяжная герниопластика, лишённая этого недостатка, не позволяет ушивать крупные грыжи ввиду опасности развития дыхательной недостаточности. Альтернативой может служить ненатяжная пластика с использованием синтетического материала. Однако их применение сопряжено с риском рецидива, появления парестезий или хронического болевого синдрома.
Это делает актуальным поиск замены существующим материалам для пластики грыж. Перспективной альтернативой представляется ацеллюлярный дермальный ма-трикс (АДМ), получаемый путём обесклечивания дермы свиньи.
Целью исследования был морфологический анализ отдалённых результатов имплантации ацеллюлярного дермального матрикса для закрытия грыжевого дефекта в условиях экспериментальной модели.
Для моделирования вентральной грыжи у поросёнка породы Ландрас была рассечена белая линия живота. После заживания послеоперационной раны выполнили герниопластику с помощью АДМ, полученного путём обработки свиной дермы растворами Тритона Х-100 и трипсина. Через 120 дней животное вывели из эксперимента. Ткани из области ушивания грыжи подвергли гистологическому исследованию. Помимо рутинной окраски гематоксилином-эозином, использовали трихром по Массону и иммуногистохимическую реакцию с антителами к CD31, CD68 и коллагену I типа.
Гены & Клетки XVII, №З, 2G22
В препаратах, окрашенных гематоксилином-эозином и трихромом по Массону, выявили хорошо развитую плотную соединительную ткань с незначительным количеством кровеносных сосудов. При этом воспаление полностью отсутствовало, кроме того, не обнаружено соединительно-тканной капсулы на границе собственных тканей животного и имплантированного матрикса. АДМ характеризовался прорастанием умеренного количества тонкостенных капилляров с нормально сформированной эндотелиальной выстилкой, о чём свидетельствует высокий уровень экспрессии эндотелиоцитами молекул клеточной адгезии 0031. Клеточный компонент имплантированного матрикса также был хорошо выражен. При этом иммунофенотипирование выявило лишь единичные СЮ68-позитивные макрофаги.
Результаты гистологического и иммуногистохимиче-ского исследования говорят о полной интеграции АДМ в собственные ткани животное, а также об отсутствии его иммуногенности. Таким образом он представляется перспективным материалом для герниопластики.
сравнение фенотипа и функциональной активности фибробластов роговицы и фибробластов, дифференцированных в кератоциты
М.А. Суровцева1, И.И. Ким1, Н.А. Бондаренко1, А.П. Лыков1, К.Ю. Краснер1, 2, E^. Чепелева1, А.Н. Трунов2, В.В. Черных2, О.В. Повещенко1
1 НИИ клинической и экспериментальной лимфологии — филиал ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, Россия
2 ФГАУ НМИЦ МНТКМикрохирургия глаза им. С.Н. Федорова Минздрава России, Новосибирский филиал, Новосибирск, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: фибробласты роговицы, кератоциты, дифференцировка, пролиферация, миграция, цитокины.
Раннее было показано, что роговица человека может быть источником стромальных клеток (hCSCs): керато-цитов и фибробластов. В последние годы значительно увеличилось количество пациентов, подвергающихся лазерной коррекции миопии и астигматизма методом ReLEx SMILE, при котором в толще роговицы формируется диск (лентикула) и затем удаляется через малый разрез в роговице. Учитывая дефицит роговицы, особенно ее переднецентральной части, мы предлагаем использовать свежие лентикулы в качестве источника hCSCs. Фибробласты роговицы обладают пластичностью и могут становиться покоящимися кератоцитами при культивировании в бессывороточной среде для роста кератоцитов (KGM), с добавлением аскорбиновой кислотой, ITS и bFGF.
Цель исследования: выделение hCSCs из нового источника — стромальных ReLEx SMILE лентикул и проведение сравнительного анализа морфологии и функциональных свойств фибробластов и фибробластов, дифференцированных в кератоциты. hCSCs выделяли ферментативным способом из лентикул, полученных после коррекции зрения 30 пациентов с миопией методом ReLEx SMILE. Клетки культивировали в среде DMEM/ F12 с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), 2мМ L-глютамина и 40 мкг/мл гентамици-на при 37°С в атмосфере с 5% СО2. Дифференцировку
фибробластов роговицы в кератоциты проводили в селективной среде KGM. Фенотипы клеточных культур определяли методом проточной цитометрии. Пролиферацию и миграцию клеток оценивали с помощью анализатора клеток в реальном времени RTCA. Продукцию клетками ЭПО, BDNF, VEGF, TNF-альфа, IGF-1, SDF-1a, sICAM-1, ви-ментина, фибронектина и общего коллагена определяли иммуноферментным анализом (ИФА).
hCSCs имели морфологию и фенотип фибробластов в ростовой среде с добавлением 10% ЭТС. Они экспрес-сировали маркеры мезенхимальных клеток CD73 (99,2 ± 1,62%), CD105 (22,8 ± 2,91%), но не несли CD90, CD34, CD45, HLA-DR, а также кератокан и люмикан. После диф-ференцировки фибробластов в кератоциты, клетки имели вытянутую, дендритоподобную форму, экспрессиро-вали высокие уровни маркеров кератоцитов: кератокан (98,8 ± 1,93, %) и люмикан (81,4 ± 26,64, %), но не маркеры фибробластов. По данным анализатора клеток в реальном времени RTCA, фибробласты роговицы обладали более выраженной пролиферативной и миграционной активностью, по сравнению с кератоцитами. Кондиционная среда фибробластов содержала более высокие уровни VEGF и виментина. Фибробласты, дифференцированные в кератоциты продуцировали более высокие уровни EPO и BDNF. Уровень фибронектина, коллагена, SDF-1a, IGF-1, TNF-альфа и sICAM-1 был одинаковым в кондиционных средах фибробластов и кератоцитов.
Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что лентикулы, полученные с помощью ReLEx SMILE, могут быть источником фибробластов роговицы, которые затем могут быть дифференцированы в кератоциты для различных задач регенеративной медицины.
c-kit-позитивные стволовые клетки
в интиме аорты с аневризмой
Т.В. Сухачева, Е.В. Пеняева, М.А. Соборов,
С.В. Гарманов, В.А. Мироненко, Р.А. Серов
ФГБУ НМИЦ ССХ им. АН. Бакулева МЗ РФ, Москва,
Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: аневризма аорты, интима, медия, C-kit.
У пациентов с аневризмой аорты выявлено значительное ремоделирование всех ее слоев и, в первую очередь, интимы и медии. Изменения в медии аорты связаны с преобразованием фенотипа гладкомышечных клеток с сократительного на синтетический, изменением состава и структуры межклеточного вещества, что приводит к нарушению эластичности и прочности стенки сосуда. Изменения интимы исследованы менее подробно, в то время как регенераторный потенциал этого слоя является основой сохранения целостности стенки аорты.
Проанализированы интраоперационные биоптаты восходящего отдела аорты пациентов с диаметром аорты менее 55 мм (средн. 47,3 ± 5,7 мм) (группа Aо<55, 18-76 лет, n=44) и 55 мм и более (средн. 61,6 ± 11,2 мм) (группа Ao>55, 29-84 г, n=29). Расширение диаметра аорты свыше 55 мм является фактором высокого риска для ее расслоения и показанием к протезированию. Гистологические срезы окрашены гематоксилином и эозином и по Вейгерту. На светооптическом уровне (х100) измерена толщина интимы и медии аорты, выраженность морфологических изменений определена по 4-балльной шкале. Методами иммуногистохимии в стенке аорты выявлены клетки, иммунопозитивные к гладкомышному
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
