CC BY
6
или серотонином с последующей сменой среды в части лунок. В результате наблюдали повышение числа отвечающих кальцием клеток, подвергшихся длительной инкубации после воздействия гормонами, по сравнению с клетками, которые были отмыты от среды, содержащей паракринные факторы, что означает, что в формировании гетерологической сенситизации принимают участие не только внутриклеточные факторы, но и секретируе-мые паракринные факторы.
Потом мы показали, что механизм сенситизации зависит от факторов, выделенных клетками в среду, и эти факторы способны стимулировать наивные клетки на повышение их сенситизации. Для этого мы перенесли среду с клеток, стимулированных гормонами, на наивные клетки. В результате наблюдали, что в клетках, инкубированных в среде, содержащей паракрин-ные факторы, наблюдалось повышение числа отвечающих кальцием клеток, по сравнению с наивными клетками, что означает вклад паракринных факторов в сенситизацию. Таким образом, мы можем сделать вывод, что паракринные факторы играют значимую роль в развитии гетерологической сенситизации МСК. Исследование выполнено при поддержке РНФ в рамках проекта № 21-15-00311.
Литература:
1. Pittengen M.F., Dischen D.E., Péault B.M. et al. Regen Med 4, 22 (2019).
влияние на свойства nk-клеток оверэкспрессии каталитической субъединицы теломеразы и перспективы двойной модификации nk-клеток совместно с таргетным трансгеном
М.А. Стрельцова, Е.И. Коваленко
ФГБУ Институт биоорганической химии
им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова
РАН, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: генномодифицированные NK-клетки, иммунотерапия, hTERT, каталитическая субъединица теломе-разы, продолжительность жизни, натуральная цитотоксич-ность, двойная трансдукция.
Получение большого числа высокофункциональных NK-клеток для использования в клинических целях требует их предварительной активации, направленной на повышение пролиферативного потенциала и цитоток-сической активности. В данной работе были получены модифицированные геном каталитической субъединицы теломеразы (hTERT) NK-клетки и показана функциональная активность вставленного гена. Доказано, что введение гена каталитической субъединицы теломера-зы статистически повышает продолжительность жизни клеток, но не приводит к истинной иммортализации [1]. Изучена взаимосвязь эффективности ретровирусной трансдукции с наличием или отсутствием различных поверхностных маркеров NK-клеток. Были показаны различия в эффективности модификации субпопуляций, отличных по уровню экспрессии, KIR2DL2/3. NKG2C и HLA-DR [2]. Была отработана методика единовременной доставки двух трансгенов в NK-клетки. При этом показана функциональная активность трансгенов. Работа поддержана грантом РНФ№ 22-75-00110.
Литература:
1. Stneltsova M.A., Ustiuzhanina M.O., Bansov E.V. et al. Biomedi-cines. 2021. V. 9 (6): P. 662.
2. Palamanchuk A.I., Alekseeva N.A., Stneltsova M.A. et al. Int. J. Mol. Sci. 2021. V. 22. P. 13326.
анализ цитотоксичности гипотензивных лекарственных препаратов на первичной клеточной культуре эндотелия роговицы человека
А.М. Суббот, Н.В. Фисенко, Г.А. Осипян
ФГБНУ НИИ глазных болезней, Москва, Россия e-mail: [email protected]
Ключевые слова: культура эндотелиальных клеток роговицы, цитотоксичность, бримонидин, дорзоламид, тимолол, бензалкония хлорид.
Эндотелий роговицы — монослой клеток, жизненный цикл которых in vivo остановлен в Gl-фазе. Снижение плотности эндотелиальных клеток (ЭК) вызывает повышение проницаемости роговицы для внутриглазной жидкости (ВГЖ) и помутнение ее слоев. Как правило, это обусловлено наследственной патологией роговицы, повреждением ЭК при интраокулярных операциях, повышением внутриглазного давления (ВГД) и др. Для снижения ВГД применяют ряд лекарственных препаратов (ЛП). Часто в качестве консерванта в состав ЛП входит бензалкония хлорид (БХ). Цель: оценить цитотоксичность гипотензивных ЛП и БХ на ЭК роговицы человека. Материалы и методы. ЭК получали ферментативной диссоциацией десцеметовых мембран с эндотелием. Культивирование проводили на среде K-SFM при 37°C, 5% CO2, и 100% влажности. Плотные колонии ЭК расценивали как модель монослоя — аналог интактного эндотелия in vivo. Для модели отдельных ЭК (аналог поврежденного эндотелия) клетки рассеивали в более низкой плотности. Экспозицию ЭК обеих моделей проводили в течение 24 ч. с ЛП бримонидина, дорзоламида, тимолола (с БХ в составе БХ и без него), а также с БХ. Изучали цитотоксичность ЛП в разведениях, соответствующих их максимальной концентрации (Cmax) в ВГЖ (бримонидин — 1,2 мкг/мл, дорзоламид — 3 мкг/мл, тимолол — 3 мкг/мл) [1, 2, 3] и превышающих её в 10 и 100 раз. Влияние БХ изучали в концентрациях, равных его содержанию в изучаемых разведениях ЛП. Морфологические изменения монослоя и отдельных ЭК оценивали фазово-контрастной микроскопией. На модели отдельных ЭК также выполняли MTS-тест. Результаты. Выявлены патологические изменения отдельных ЭК — под действием дорзоламида (без БХ), монослоя и отдельных ЭК — под влиянием тимолола (без БХ) в концентрациях, превышающих их Cmax во ВГЖ в 10, 100 раз. Дорзоламид и тимолол (оба с БХ) в концентрациях, превышающих Cmax во ВГЖ в 10 раз, цитотоксичны для отдельных ЭК. Увеличение концентрации дорзоламида (с БХ) в 100 раз способствует умеренным изменениям монослоя и снижению выживаемости ЭК на 21,4% (p<0,05). Тимолол (с БХ) в концентрации, превышающей Cmax в 100 раз, приводит к гибели монослоя и снижает выживаемость ЭК на 79% (p<0,05). Бримонидин (с БХ) в этом разведении, вызывает апоптоз ЭК монослоя и снижение выживаемости ЭК на 68,8% (p<0,05). Сходные изменения монослоя и отдельных ЭК возникают при экспозиции с БХ в концентрациях, равных его содержанию в изучаемых ЛП в этих разведениях.
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
Выводы. Антиглаукомные ЛП, содержащие БХ, могут в высоких концентрациях нарушать структуру и функциональные свойства ЭК. Применение данных ЛП нецелесообразно при низкой плотности ЭК роговицы и после кератопластики.
Литература:
1. Loftsson T., Jansook P., Stefansson E. Acta Ophthalmol. 2012. V.9. № 7. P. 603-608.
2. Acheampong A.A., Shackleton M., John B. et al. Drug Metab Dispos. 2002. V.30. № 4. P.421-429.
3. Lee V.H., Luo A.M., Li S.Y. et al. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1991. V.32. № 11. P. 2948-2957.
выявление инсулина и глюкагона в процессе эмбрионального гистогенеза поджелудочной железы у иглистых мышей (acomys)
К.Н. Султанова, И.С. Неофитов,
А.А. Титова, Р.В. Урсан, А.С. Плюшкина,
М.С. Калигин, А.П. Киясов
ФГАОУ ВО Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: инсулин, глюкагон, эмбриогенез, поджелудочная железа, мыши Acomys.
Мыши Acomys (иглистая мышь) — малоизученная удобная модель для изучения эмбриогенеза, так как у этих мышей более длительный период беременности 39-40 дней [1], 2-4 мышонка в помете, рождающиеся с высокой степенью морфофункциональной зрелости [2]. До сих пор нет единой точки зрения и доказательств какие из двух основных типов клеток островков Лангерганса, а- или ß-клетки, появляются первыми в процессе эмбрионального гистогенеза поджелудочной железы [3, 4]. Поэтому целью нашего исследования было изучение экспрессии инсулина и глюкагона в поджелудочной железе иглистых мышей в процессе пренаталь-ного развития.
Материалы и методы. Исследование было проведено на мышах Acomys, были изучены 15-е, 19-е, 22-е, 24-е, 28-е, 34-е, 38-е сутки (Е) гестации. До Е28 исследовали целые эмбрионы, на более поздних сутках проводили забор фетальной поджелудочной железы. Гистологические срезы окрашивали иммуногистохимически с использованием антител к инсулину (Novocastra) и глюкагону (Dako).
Результаты. Первые глюкагон-позитивные клетки были обнаружены на Е19. На сроке Е22 выявлены первые инсулин-позитивные клетки. Между Е22 и Е28 инсулин-позитивные клетки единичны, далее их количество резко увеличивается, и на сроке Е34 выявляются инсулин-позитивные клетки преимущественно в центральной части островков Лангерганса. Количество глюкагон-по-зитивных клеток растет постепенно от Е19 к Е34.
Формирование кластеров, подобных островкам, начинается со срока Е22. Островки Лангерганса становятся отчетливо различимы с Е34, в которых инсулин-позитивные клетки занимают преимущественно центральную часть островка и располагаются группами, в виде ленты, или рассеяны по всему островку неорганизованным образом. Глюкагон-позитивные клетки на поздних сроках гестации находятся преимущественно на периферической части островка, и встречаются единичные клетки в паренхиме органа.
Выводы. Таким образом, у иглистых мышей в процессе пренатального развития а-клетки появляются раньше, чем ß-клетки. Увеличение количества глюкагон-позитив-ных клеток идет постепенно, а инсулин-позитивных клеток — скачкообразно, основной момент кратного роста количества ß-клеток происходит с Е28 до ЕЗ4. У иглистых мышей островковый эндокринный аппарат поджелудочной железы сформирован к моменту рождения. Работа выполнена в рамках Программы академического стратегического лидерства Казанского Федерального Университета (Приоритет-2030).
Литература:
1. Haughton C.L., Gawriluk T.R., Seifert A.W. J.Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 2G16. V. 55(1). P. 9.
2. Pinheiro G., Prata D.F., Araújo I.M. et al. Lab. Anim. 2G18. V. 52(6). P. 565.
3. Jensen J., Heller R.S., Funder-Nielsen T. et al. Diabetes. 2GGG. V. 49(2). P. 16З.
4. Jennings R.E., Berry A.A., Kirkwood-Wilson R. et al. Diabetes. 2Gm V. 62(1G). P. З514.
морфологическая оценка отдаленных результатов использования ацеллюлярного дермального матрикса для герниопластики
И.В. Супрун, Г.П. Чупрынин, А.А. Фоменко, Е.А. Солоп, А.С. Асякина, А.А. Веревкин, Я.А. Козмай, Т.В. Русинова, К.И. Мелконян
ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России, Краснодар, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: герниопластика, ацеллюлярный дермаль-ный матрикс, иммуногистохимия.
На долю герниопластики приходится 20% всех операций в абдоминальной хирургии. При этом в 26% случаев в позднем послеоперационном периоде развивается рецидив грыжи. Натяжная герниопластика, лишённая этого недостатка, не позволяет ушивать крупные грыжи ввиду опасности развития дыхательной недостаточности. Альтернативой может служить ненатяжная пластика с использованием синтетического материала. Однако их применение сопряжено с риском рецидива, появления парестезий или хронического болевого синдрома.
Это делает актуальным поиск замены существующим материалам для пластики грыж. Перспективной альтернативой представляется ацеллюлярный дермальный ма-трикс (АДМ), получаемый путём обесклечивания дермы свиньи.
Целью исследования был морфологический анализ отдалённых результатов имплантации ацеллюлярного дермального матрикса для закрытия грыжевого дефекта в условиях экспериментальной модели.
Для моделирования вентральной грыжи у поросёнка породы Ландрас была рассечена белая линия живота. После заживания послеоперационной раны выполнили герниопластику с помощью АДМ, полученного путём обработки свиной дермы растворами Тритона Х-100 и трипсина. Через 120 дней животное вывели из эксперимента. Ткани из области ушивания грыжи подвергли гистологическому исследованию. Помимо рутинной окраски гематоксилином-эозином, использовали трихром по Массону и иммуногистохимическую реакцию с антителами к CD31, CD68 и коллагену I типа.
Гены & Клетки XVII, №З, 2G22
