CC BY
4
222
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
или серотонином с последующей сменой среды в части лунок. В результате наблюдали повышение числа отвечающих кальцием клеток, подвергшихся длительной инкубации после воздействия гормонами, по сравнению с клетками, которые были отмыты от среды, содержащей паракринные факторы, что означает, что в формировании гетерологической сенситизации принимают участие не только внутриклеточные факторы, но и секретируе-мые паракринные факторы.
Потом мы показали, что механизм сенситизации зависит от факторов, выделенных клетками в среду, и эти факторы способны стимулировать наивные клетки на повышение их сенситизации. Для этого мы перенесли среду с клеток, стимулированных гормонами, на наивные клетки. В результате наблюдали, что в клетках, инкубированных в среде, содержащей паракрин-ные факторы, наблюдалось повышение числа отвечающих кальцием клеток, по сравнению с наивными клетками, что означает вклад паракринных факторов в сенситизацию. Таким образом, мы можем сделать вывод, что паракринные факторы играют значимую роль в развитии гетерологической сенситизации МСК. Исследование выполнено при поддержке РНФ в рамках проекта № 21-15-00311.
Литература:
1. Pittengen M.F., Dischen D.E., Péault B.M. et al. Regen Med 4, 22 (2019).
влияние на свойства nk-клеток оверэкспрессии каталитической субъединицы теломеразы и перспективы двойной модификации nk-клеток совместно с таргетным трансгеном
М.А. Стрельцова, Е.И. Коваленко
ФГБУ Институт биоорганической химии
им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова
РАН, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: генномодифицированные NK-клетки, иммунотерапия, hTERT, каталитическая субъединица теломе-разы, продолжительность жизни, натуральная цитотоксич-ность, двойная трансдукция.
Получение большого числа высокофункциональных NK-клеток для использования в клинических целях требует их предварительной активации, направленной на повышение пролиферативного потенциала и цитоток-сической активности. В данной работе были получены модифицированные геном каталитической субъединицы теломеразы (hTERT) NK-клетки и показана функциональная активность вставленного гена. Доказано, что введение гена каталитической субъединицы теломера-зы статистически повышает продолжительность жизни клеток, но не приводит к истинной иммортализации [1]. Изучена взаимосвязь эффективности ретровирусной трансдукции с наличием или отсутствием различных поверхностных маркеров NK-клеток. Были показаны различия в эффективности модификации субпопуляций, отличных по уровню экспрессии, KIR2DL2/3. NKG2C и HLA-DR [2]. Была отработана методика единовременной доставки двух трансгенов в NK-клетки. При этом показана функциональная активность трансгенов. Работа поддержана грантом РНФ№ 22-75-00110.
Литература:
1. Stneltsova M.A., Ustiuzhanina M.O., Bansov E.V. et al. Biomedi-cines. 2021. V. 9 (6): P. 662.
2. Palamanchuk A.I., Alekseeva N.A., Stneltsova M.A. et al. Int. J. Mol. Sci. 2021. V. 22. P. 13326.
анализ цитотоксичности гипотензивных лекарственных препаратов на первичной клеточной культуре эндотелия роговицы человека
А.М. Суббот, Н.В. Фисенко, Г.А. Осипян
ФГБНУ НИИ глазных болезней, Москва, Россия e-mail: [email protected]
Ключевые слова: культура эндотелиальных клеток роговицы, цитотоксичность, бримонидин, дорзоламид, тимолол, бензалкония хлорид.
Эндотелий роговицы — монослой клеток, жизненный цикл которых in vivo остановлен в Gl-фазе. Снижение плотности эндотелиальных клеток (ЭК) вызывает повышение проницаемости роговицы для внутриглазной жидкости (ВГЖ) и помутнение ее слоев. Как правило, это обусловлено наследственной патологией роговицы, повреждением ЭК при интраокулярных операциях, повышением внутриглазного давления (ВГД) и др. Для снижения ВГД применяют ряд лекарственных препаратов (ЛП). Часто в качестве консерванта в состав ЛП входит бензалкония хлорид (БХ). Цель: оценить цитотоксичность гипотензивных ЛП и БХ на ЭК роговицы человека. Материалы и методы. ЭК получали ферментативной диссоциацией десцеметовых мембран с эндотелием. Культивирование проводили на среде K-SFM при 37°C, 5% CO2, и 100% влажности. Плотные колонии ЭК расценивали как модель монослоя — аналог интактного эндотелия in vivo. Для модели отдельных ЭК (аналог поврежденного эндотелия) клетки рассеивали в более низкой плотности. Экспозицию ЭК обеих моделей проводили в течение 24 ч. с ЛП бримонидина, дорзоламида, тимолола (с БХ в составе БХ и без него), а также с БХ. Изучали цитотоксичность ЛП в разведениях, соответствующих их максимальной концентрации (Cmax) в ВГЖ (бримонидин — 1,2 мкг/мл, дорзоламид — 3 мкг/мл, тимолол — 3 мкг/мл) [1, 2, 3] и превышающих её в 10 и 100 раз. Влияние БХ изучали в концентрациях, равных его содержанию в изучаемых разведениях ЛП. Морфологические изменения монослоя и отдельных ЭК оценивали фазово-контрастной микроскопией. На модели отдельных ЭК также выполняли MTS-тест. Результаты. Выявлены патологические изменения отдельных ЭК — под действием дорзоламида (без БХ), монослоя и отдельных ЭК — под влиянием тимолола (без БХ) в концентрациях, превышающих их Cmax во ВГЖ в 10, 100 раз. Дорзоламид и тимолол (оба с БХ) в концентрациях, превышающих Cmax во ВГЖ в 10 раз, цитотоксичны для отдельных ЭК. Увеличение концентрации дорзоламида (с БХ) в 100 раз способствует умеренным изменениям монослоя и снижению выживаемости ЭК на 21,4% (p<0,05). Тимолол (с БХ) в концентрации, превышающей Cmax в 100 раз, приводит к гибели монослоя и снижает выживаемость ЭК на 79% (p<0,05). Бримонидин (с БХ) в этом разведении, вызывает апоптоз ЭК монослоя и снижение выживаемости ЭК на 68,8% (p<0,05). Сходные изменения монослоя и отдельных ЭК возникают при экспозиции с БХ в концентрациях, равных его содержанию в изучаемых ЛП в этих разведениях.
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
