CC BY
7
способность висцеральных МСК ЖТ с СД2Т увеличивать липидные капли в составе здоровых адипоцитов, а также стимулировать накопление жирных кислот. Сокультивирование висцеральных МСК ЖТ с здоровыми зрелыми адипоцитами усиливало образование триглицеридов в здоровых адипоцитах, в то время как висцеральные МСК ЖТ НГТ пациентов активировали метаболизм здоровых адипоцитов. Секретом висцеральных МСК ЖТ пациентов с НГТ характеризовался наличием высоких концентраций провоспалительных ци-токинов, а также хемоаттрактантов миелоидных клеток и факторов ангиогенеза по сравнению с висцеральными МСК ЖТ с СД2Т.
Таким образом, представленное исследование демонстрирует критически важную роль паракринных взаимодействий между висцеральной и подкожной жировыми тканями как на уровне прогениторных, так и на уровне зрелых клеток. Механизмы данных взаимодействий могут быть различными и два из них продемонстрированы в представленной работе: прямой обмен метаболитами и секреция цитокинов. Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда № 22-15-00365.
эффективность применения нейротрофина-3 при совместной трансплантации с клетками обонятельной выстилки в посттравматические кисты спинного мозга
О.В. Степанова1, А.Д. Воронова1, А.В. Чадин1, Г.А. Фурса1, Е.К. Карсунцева1, М.П. Валихов1, 3, А.С. Семкина1, 3, И.В. Решетов2, В.П. Чехонин1, 3
1 ФГБУ НМИЦ ПН им. В.П. Сербского МЗ РФ, Москва, Россия
2 УКБ № 1 ФГАОУ ВО Первого МГМУ
им. И.М. Сеченова МЗ РФ, Москва, Россия
3 ФГАОУ ВО РНИМУ им. НИ. Пирогова МЗ РФ, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: нейротрофин-3; обкладочные клетки; обонятельная выстилка; кисты спинного мозга; клеточная терапия; регенеративная медицина.
Травмы спинного мозга являются причиной формирования кист, которые сдавливают спинной мозг, препятствуют проведению нервных импульсов и нейрореге-нерации. Клеточная терапия — перспективная стратегия для лечения посттравматических кист спинного мозга. Как известно, важную роль в регенерации нервной ткани после повреждения играют нейротрофические факторы. Так, нейротрофин-3 (NT-3) может регулировать выживание нейронов, стимулировать рост аксонов, формирование синапсов и другие процессы нейропластичности [1]. Экспрессия нейротрофинов значительно снижена в хронической фазе повреждения спинного мозга, что требует их экзогенного введения [2]. Целью данной работы является оценка эффективности применения NT-3 при совместной трансплантации с клетками обонятельной выстилки в посттравматические кисты спинного мозга.
В исследовании были использованы образцы обонятельной выстилки, полученные при плановом хирургическом вмешательстве в Отделении пластической хирургии УКБ № 1. Были получены информированные согласия от всех пациентов. Эксперименты на крысах линии Вистар проводили в соответствии с «Правилами проведения
работ с использованием экспериментальных животных». Все исследования были одобрены Локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова МЗ РФ. Из обонятельной выстилки человека и крыс были получены обкладочные клетки по разработанным нами протоколам [3]. Образование кисты подтверждали методом МРТ через 4 недели после экспериментальной травмы спинного мозга крыс. Обкладочные клетки человека и крыс в количестве 750 тысяч и комбинированные препараты из того же количества клеток и NT-3, 500 нг. в образце, трансплантировали в область кист (n=10 для каждого исследуемого образца) через 4 недели после травмы. Контрольной группе вводили среду без клеток (n=10). В течение 4 недель после трансплантации оценивали восстановление подвижности задних конечностей крыс, используя 21-балльную шкалу открытого поля (ВВВ).
В результате было показано, что NT-3 усиливает эффективность применения обкладочных клеток обонятельной выстилки человека для улучшения подвижности задних конечностей крыс при посттравматических кистах спинного мозга. Эффективность применения NT-3 при совместной трансплантации с обкладочными клетками крыс не была выявлена. Комбинированный препарат из аутологичных обкладочных клеток человека и NT-3 в будущем может применяться в области нейрохирургии для лечения пациентов с посттравматическими кистами спинного мозга. Работа выполнена при поддержке государственного задания № 056-00017-20-00 от 25.12.2019 г.
Литература:
1. Keefe K.M., Sheikh I.S., Smith G.M. Int. J. Mol. Sci. 2017. V. 18. P. 548. doi:10.3390/ijms18030548.
2. Lin X.-Y., Lai B.-Q., Zeng X. et al. Cell Transplantation. 2016. V. 25. P. 1425-1438.
3. Stepanova O.V., Voronova A.D., Chadin A.V. et al. Stem Cells Dev. 2019. V. 28. № 18. P. 1253-1263.
вклад паракринных факторов в развитие гетерологической сенситизации мультипотентных мезенхимных стромальных клеток
Д.А. Степанова, В.И. Чечехин, К.Ю. Кулебякин, П.А. Тюрин-Кузьмин
Кафедра биохимии и мол. медицины, Факультет фундаментальной медицины МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: мультипотентные мезенхимные стро-мальные клетки, гетерологическая сенситизация, норадре-налин, серотонин.
Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки (МСК) — стволовые клетки стромы, способные к диф-ференцировке в остеобласты, миоциты, хондроциты, адипоциты, и к паракринной саморегуляции [1]. Ранее мы обнаружили присущий МСК феномен, при котором норадреналин и серотонин вызывают повышение чувствительности тех же клеток к норадреналину, который был назван гетерологической сенситизацией. Цель данной работы: определить вклад паракринных факторов в развитие гетерологической сенситизации МСК.
Сначала мы показали, что смена среды уменьшает степень развития сенситизации, вызванной гормонами. Для этого мы преинкубировали клетки с норадреналином
или серотонином с последующей сменой среды в части лунок. В результате наблюдали повышение числа отвечающих кальцием клеток, подвергшихся длительной инкубации после воздействия гормонами, по сравнению с клетками, которые были отмыты от среды, содержащей паракринные факторы, что означает, что в формировании гетерологической сенситизации принимают участие не только внутриклеточные факторы, но и секретируе-мые паракринные факторы.
Потом мы показали, что механизм сенситизации зависит от факторов, выделенных клетками в среду, и эти факторы способны стимулировать наивные клетки на повышение их сенситизации. Для этого мы перенесли среду с клеток, стимулированных гормонами, на наивные клетки. В результате наблюдали, что в клетках, инкубированных в среде, содержащей паракрин-ные факторы, наблюдалось повышение числа отвечающих кальцием клеток, по сравнению с наивными клетками, что означает вклад паракринных факторов в сенситизацию. Таким образом, мы можем сделать вывод, что паракринные факторы играют значимую роль в развитии гетерологической сенситизации МСК. Исследование выполнено при поддержке РНФ в рамках проекта № 21-15-00311.
Литература:
1. Pittengen M.F., Dischen D.E., Péault B.M. et al. Regen Med 4, 22 (2019).
влияние на свойства nk-клеток оверэкспрессии каталитической субъединицы теломеразы и перспективы двойной модификации nk-клеток совместно с таргетным трансгеном
М.А. Стрельцова, Е.И. Коваленко
ФГБУ Институт биоорганической химии
им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова
РАН, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: генномодифицированные NK-клетки, иммунотерапия, hTERT, каталитическая субъединица теломе-разы, продолжительность жизни, натуральная цитотоксич-ность, двойная трансдукция.
Получение большого числа высокофункциональных NK-клеток для использования в клинических целях требует их предварительной активации, направленной на повышение пролиферативного потенциала и цитоток-сической активности. В данной работе были получены модифицированные геном каталитической субъединицы теломеразы (hTERT) NK-клетки и показана функциональная активность вставленного гена. Доказано, что введение гена каталитической субъединицы теломера-зы статистически повышает продолжительность жизни клеток, но не приводит к истинной иммортализации [1]. Изучена взаимосвязь эффективности ретровирусной трансдукции с наличием или отсутствием различных поверхностных маркеров NK-клеток. Были показаны различия в эффективности модификации субпопуляций, отличных по уровню экспрессии, KIR2DL2/3. NKG2C и HLA-DR [2]. Была отработана методика единовременной доставки двух трансгенов в NK-клетки. При этом показана функциональная активность трансгенов. Работа поддержана грантом РНФ№ 22-75-00110.
Литература:
1. Stneltsova M.A., Ustiuzhanina M.O., Bansov E.V. et al. Biomedi-cines. 2021. V. 9 (6): P. 662.
2. Palamanchuk A.I., Alekseeva N.A., Stneltsova M.A. et al. Int. J. Mol. Sci. 2021. V. 22. P. 13326.
анализ цитотоксичности гипотензивных лекарственных препаратов на первичной клеточной культуре эндотелия роговицы человека
А.М. Суббот, Н.В. Фисенко, Г.А. Осипян
ФГБНУ НИИ глазных болезней, Москва, Россия e-mail: [email protected]
Ключевые слова: культура эндотелиальных клеток роговицы, цитотоксичность, бримонидин, дорзоламид, тимолол, бензалкония хлорид.
Эндотелий роговицы — монослой клеток, жизненный цикл которых in vivo остановлен в Gl-фазе. Снижение плотности эндотелиальных клеток (ЭК) вызывает повышение проницаемости роговицы для внутриглазной жидкости (ВГЖ) и помутнение ее слоев. Как правило, это обусловлено наследственной патологией роговицы, повреждением ЭК при интраокулярных операциях, повышением внутриглазного давления (ВГД) и др. Для снижения ВГД применяют ряд лекарственных препаратов (ЛП). Часто в качестве консерванта в состав ЛП входит бензалкония хлорид (БХ). Цель: оценить цитотоксичность гипотензивных ЛП и БХ на ЭК роговицы человека. Материалы и методы. ЭК получали ферментативной диссоциацией десцеметовых мембран с эндотелием. Культивирование проводили на среде K-SFM при 37°C, 5% CO2, и 100% влажности. Плотные колонии ЭК расценивали как модель монослоя — аналог интактного эндотелия in vivo. Для модели отдельных ЭК (аналог поврежденного эндотелия) клетки рассеивали в более низкой плотности. Экспозицию ЭК обеих моделей проводили в течение 24 ч. с ЛП бримонидина, дорзоламида, тимолола (с БХ в составе БХ и без него), а также с БХ. Изучали цитотоксичность ЛП в разведениях, соответствующих их максимальной концентрации (Cmax) в ВГЖ (бримонидин — 1,2 мкг/мл, дорзоламид — 3 мкг/мл, тимолол — 3 мкг/мл) [1, 2, 3] и превышающих её в 10 и 100 раз. Влияние БХ изучали в концентрациях, равных его содержанию в изучаемых разведениях ЛП. Морфологические изменения монослоя и отдельных ЭК оценивали фазово-контрастной микроскопией. На модели отдельных ЭК также выполняли MTS-тест. Результаты. Выявлены патологические изменения отдельных ЭК — под действием дорзоламида (без БХ), монослоя и отдельных ЭК — под влиянием тимолола (без БХ) в концентрациях, превышающих их Cmax во ВГЖ в 10, 100 раз. Дорзоламид и тимолол (оба с БХ) в концентрациях, превышающих Cmax во ВГЖ в 10 раз, цитотоксичны для отдельных ЭК. Увеличение концентрации дорзоламида (с БХ) в 100 раз способствует умеренным изменениям монослоя и снижению выживаемости ЭК на 21,4% (p<0,05). Тимолол (с БХ) в концентрации, превышающей Cmax в 100 раз, приводит к гибели монослоя и снижает выживаемость ЭК на 79% (p<0,05). Бримонидин (с БХ) в этом разведении, вызывает апоптоз ЭК монослоя и снижение выживаемости ЭК на 68,8% (p<0,05). Сходные изменения монослоя и отдельных ЭК возникают при экспозиции с БХ в концентрациях, равных его содержанию в изучаемых ЛП в этих разведениях.
