ИЗМЕНЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЛИМБА ПОД ВЛИЯНИЕМ КОНДИЦИОННОЙ СРЕДЫ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК ЛИМБА РОГОВИЦЫ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

34

МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ

мы провели серию экспериментов по определению особенностей инсулиновой сигнализации в МСК из жировой ткани у инсулинорезистентных, пожилых и здоровых доноров. Мы выявили, что МСК из жировой ткани инсу-линорезистентных и сенесцентных доноров отвечает на инсулин кальциевыми осцилляциями; клетки раннего пассажа здорового донора отвечали низкоамплитудным, но продолжительным по времени приростом внутриклеточного уровня кальция. Ответы у пожилых и инсулинорезистентных доноров были существенно более выражены. Ингибиторный анализ с использованием ингибитора фосфолипазы C (PLC) показал, что инсулиновая сигнализация в МСК инсулинорезистентных и пожилых доноров протекает по PLC-независимому механизму, в отличие от клеток молодого донора на ранних пассажах. Наши эксперименты показали, что при развитии инсулиноре-зистентности наблюдается усиление инсулин-зависимой кальциевой сигнализации.

Литература:

1. Palmen AK, Gustafson B, Kirkland JL, Smith U. Diabetologia. 2019;62(10):1835-1841.

2. Louwen F, Ritten A, Kreis NN, Yuan J. Obes Rev. 2018;19(7):888-904.

3. Konnicka K, Houston J, Manycz K. Stem Cell Rev Rep. 2018;14(3):337-345.

4. Conley SM, Zhu XY, Einin A, et al. Gene. 2018; 644:101-106.

ИЗМЕНЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЛИМБА ПОД ВЛИЯНИЕМ КОНДИЦИОННОЙ СРЕДЫ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК ЛИМБА РОГОВИЦЫ

Н.А. Бондаренко1, М.А. Суровцева1, И.И. Ким1,

A.П. Лыков1, И.А. Искаков2, А.Н. Трунов2,

B.В. Черных2, О.В. Повещенко1

1 НИИКЭЛ- филиал ФИЦ ИЦИГ СО РАН, Новосибирск, Россия

2 ФГАУ НМИЦ МНТКМикрохирургия глаза им. академика С.Н. Федорова, 630096, Новосибирск, Россия

e-mail: bond802888@yandex.ru

Ключевые слова: мезенхимальные стволовые клетки, лимб, лимбальные эпителиальные стволовые клетки, кондиционная среда, кератоциты, фибробласты роговицы, пролиферация, миграция

Лимб представляет собой переходную зону роговицы глаза и считается местом, где находятся лимбальные стволовые клетки [1]. Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) лимба расположены в «нише» и питают лимбальные эпителиальные стволовые клетки (ЛЭСК [2]). Нередко возникает дефицит ЛЭСК из-за химических и термических ожогов, физического повреждения роговицы, а также при врожденных заболеваниях [3]. В связи с этим считается, что возникновение лимбальной недостаточности связано или с функциональной несостоятельностью ЛЭСК, или с нарушением функциональной активности МСК лимба. Поэтому большой интерес представляет собой изучение взаимовлияния МСК лимба с ЛЭСК.

В связи с этим целью нашей работы являлось изучение влияния кондиционной среды от ЛЭСК на функциональную активность МСК лимба человека.

МСК и ЛЭСК получали из области лимба энуклеи-рованных по плановым медицинским показаниям глаз. МСК культивировали в среде DMEM/F12 c добавлением 10 % FCS. ЛЭСК культивировали на амниотической мембране в стандартных условиях в среде CECBM (Conneal Epithelial Cell Basal Medium) без FCS. Интенсивность пролиферации МСК лимба оценивали в МТТ тесте под влиянием кондиционной среды. Миграционная активность МСК лимба была исследована в тесте закрытия раны с помощью микроскопа Axio Observer. Продукцию ФНО-а, BDNF, SDF-1a, виментина, общего коллагена, фи-бронектина, ICAM-1, IGF определяли методом ИФА в соответствии с рекомендациями производителя.

Показано, что кондиционная среда от ЛЭСК статистически значимо снижает пролиферативную активность МСК на 38% по сравнению с контролем. В тесте по оценке миграционной активности МСК лимба установлено, что под влиянием кондиционной среды от ЛЭСК миграции клеток не наблюдается на всем протяжении эксперимента (48 ч), закрытие раны не происходит. В кондиционной среде ЛЭСК обнаружена повышенная концентрация VEGF, TNF-а, пониженная концентрация BDNF, вименти-на, фибронектина.

Полученные данные вносят вклад в понимание взаимодействия клеток в нише лимба, необходимого для поддержания клеточного гомеостаза в лимбе роговицы.

Литература:

1. Kinoshita S., Adachi W., Sotozono C. et.al. Prog. Retin. Eye Res.

2001. Vol. 20, P. 639-673.

2. Jin H., He M., Liu H. et. al. Cornea. 2019. Vol. 38. P. 446-453.

3. Pellegrini G., Rama P., Di Rocco A, et.al. Stem Cells. 2014. Vol.32,

P. 26-34.

ИССЛЕДОВАНИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ПЕГИЛИРОВАННОГО РЕКОМБИНАНТНОГО ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ИНТЕРФЕРОНА-ЛЯМБДА-1 НА КЛЕТКИ ЭПИТЕЛИЯ КОНЪЮНКТИВЫ

Н.А. Бондаренко, Н.А. Кихтенко, О.В. Повещенко, М.А. Суровцева., И.И. Ким, П.Г. Мадонов

НИИКЭЛ-филиал ИЦИГ СО РАН, Новосибирск, Россия

e-mail: bond802888@yandex.ru

Ключевые слова: интерферон, интерферон лямбда, пегили-рование, конъюнктива человека, цитотоксичность, пролиферация; клетки нормальной конъюнктивы

На сегодняшний день отсутствуют эффективные универсальные противовирусные препараты для лечения вирусных заболеваний передней поверхности глаза. Известно, что интерферон-Х (ИНФ-Х) играет важную роль во врожденной противовирусной, противогрибковой защите слизистых [1]. В исследованиях продемонстрировано, что ИНФ- Х регулирует функциональную активность нейтрофилов для снижения воспаления роговицы, вызванного вирусом простого герпеса. Также при на несении ИНФ-Х на роговицу наблюдается подавление инфильтрации иммунными клетками роговицы, что значительно снижает воспаление [2]. Модификация белковых молекул нативных препаратов позволяет значительно улучшить их фармакодинамические свойства. Поэтому представляется актуальным создание противовирусных препаратов для офтальмологии на основе пегилирован-ного интерферона-Х1 (ПЭГ ИФН-Х1).

Гены & Клетки XVII, №3, 2022