CC BY
6
мы провели серию экспериментов по определению особенностей инсулиновой сигнализации в МСК из жировой ткани у инсулинорезистентных, пожилых и здоровых доноров. Мы выявили, что МСК из жировой ткани инсу-линорезистентных и сенесцентных доноров отвечает на инсулин кальциевыми осцилляциями; клетки раннего пассажа здорового донора отвечали низкоамплитудным, но продолжительным по времени приростом внутриклеточного уровня кальция. Ответы у пожилых и инсулинорезистентных доноров были существенно более выражены. Ингибиторный анализ с использованием ингибитора фосфолипазы C (PLC) показал, что инсулиновая сигнализация в МСК инсулинорезистентных и пожилых доноров протекает по PLC-независимому механизму, в отличие от клеток молодого донора на ранних пассажах. Наши эксперименты показали, что при развитии инсулиноре-зистентности наблюдается усиление инсулин-зависимой кальциевой сигнализации.
Литература:
1. Palmen AK, Gustafson B, Kirkland JL, Smith U. Diabetologia. 2019;62(10):1835-1841.
2. Louwen F, Ritten A, Kreis NN, Yuan J. Obes Rev. 2018;19(7):888-904.
3. Konnicka K, Houston J, Manycz K. Stem Cell Rev Rep. 2018;14(3):337-345.
4. Conley SM, Zhu XY, Einin A, et al. Gene. 2018; 644:101-106.
ИЗМЕНЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЛИМБА ПОД ВЛИЯНИЕМ КОНДИЦИОННОЙ СРЕДЫ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК ЛИМБА РОГОВИЦЫ
Н.А. Бондаренко1, М.А. Суровцева1, И.И. Ким1,
A.П. Лыков1, И.А. Искаков2, А.Н. Трунов2,
B.В. Черных2, О.В. Повещенко1
1 НИИКЭЛ- филиал ФИЦ ИЦИГ СО РАН, Новосибирск, Россия
2 ФГАУ НМИЦ МНТКМикрохирургия глаза им. академика С.Н. Федорова, 630096, Новосибирск, Россия
e-mail: bond802888@yandex.ru
Ключевые слова: мезенхимальные стволовые клетки, лимб, лимбальные эпителиальные стволовые клетки, кондиционная среда, кератоциты, фибробласты роговицы, пролиферация, миграция
Лимб представляет собой переходную зону роговицы глаза и считается местом, где находятся лимбальные стволовые клетки [1]. Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) лимба расположены в «нише» и питают лимбальные эпителиальные стволовые клетки (ЛЭСК [2]). Нередко возникает дефицит ЛЭСК из-за химических и термических ожогов, физического повреждения роговицы, а также при врожденных заболеваниях [3]. В связи с этим считается, что возникновение лимбальной недостаточности связано или с функциональной несостоятельностью ЛЭСК, или с нарушением функциональной активности МСК лимба. Поэтому большой интерес представляет собой изучение взаимовлияния МСК лимба с ЛЭСК.
В связи с этим целью нашей работы являлось изучение влияния кондиционной среды от ЛЭСК на функциональную активность МСК лимба человека.
МСК и ЛЭСК получали из области лимба энуклеи-рованных по плановым медицинским показаниям глаз. МСК культивировали в среде DMEM/F12 c добавлением 10 % FCS. ЛЭСК культивировали на амниотической мембране в стандартных условиях в среде CECBM (Conneal Epithelial Cell Basal Medium) без FCS. Интенсивность пролиферации МСК лимба оценивали в МТТ тесте под влиянием кондиционной среды. Миграционная активность МСК лимба была исследована в тесте закрытия раны с помощью микроскопа Axio Observer. Продукцию ФНО-а, BDNF, SDF-1a, виментина, общего коллагена, фи-бронектина, ICAM-1, IGF определяли методом ИФА в соответствии с рекомендациями производителя.
Показано, что кондиционная среда от ЛЭСК статистически значимо снижает пролиферативную активность МСК на 38% по сравнению с контролем. В тесте по оценке миграционной активности МСК лимба установлено, что под влиянием кондиционной среды от ЛЭСК миграции клеток не наблюдается на всем протяжении эксперимента (48 ч), закрытие раны не происходит. В кондиционной среде ЛЭСК обнаружена повышенная концентрация VEGF, TNF-а, пониженная концентрация BDNF, вименти-на, фибронектина.
Полученные данные вносят вклад в понимание взаимодействия клеток в нише лимба, необходимого для поддержания клеточного гомеостаза в лимбе роговицы.
Литература:
1. Kinoshita S., Adachi W., Sotozono C. et.al. Prog. Retin. Eye Res.
2001. Vol. 20, P. 639-673.
2. Jin H., He M., Liu H. et. al. Cornea. 2019. Vol. 38. P. 446-453.
3. Pellegrini G., Rama P., Di Rocco A, et.al. Stem Cells. 2014. Vol.32,
P. 26-34.
ИССЛЕДОВАНИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ПЕГИЛИРОВАННОГО РЕКОМБИНАНТНОГО ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ИНТЕРФЕРОНА-ЛЯМБДА-1 НА КЛЕТКИ ЭПИТЕЛИЯ КОНЪЮНКТИВЫ
Н.А. Бондаренко, Н.А. Кихтенко, О.В. Повещенко, М.А. Суровцева., И.И. Ким, П.Г. Мадонов
НИИКЭЛ-филиал ИЦИГ СО РАН, Новосибирск, Россия
e-mail: bond802888@yandex.ru
Ключевые слова: интерферон, интерферон лямбда, пегили-рование, конъюнктива человека, цитотоксичность, пролиферация; клетки нормальной конъюнктивы
На сегодняшний день отсутствуют эффективные универсальные противовирусные препараты для лечения вирусных заболеваний передней поверхности глаза. Известно, что интерферон-Х (ИНФ-Х) играет важную роль во врожденной противовирусной, противогрибковой защите слизистых [1]. В исследованиях продемонстрировано, что ИНФ- Х регулирует функциональную активность нейтрофилов для снижения воспаления роговицы, вызванного вирусом простого герпеса. Также при на несении ИНФ-Х на роговицу наблюдается подавление инфильтрации иммунными клетками роговицы, что значительно снижает воспаление [2]. Модификация белковых молекул нативных препаратов позволяет значительно улучшить их фармакодинамические свойства. Поэтому представляется актуальным создание противовирусных препаратов для офтальмологии на основе пегилирован-ного интерферона-Х1 (ПЭГ ИФН-Х1).
В связи с этим целью работы было оценить цито-токсическое влияние рекомбинантного человеческого ИФН-Х1 и его пегилированной формы, на клетки конъюнктивы человека.
ИНФ-Х-1 использовали в концентрациях 37 мкг/ мл, 370 мкг/мл и ПЭГ ИНФ- Х-1, полученного методом электронно-лучевой иммобилизации, в концентрациях 42 мкг/мл, 420 мкг/мл. Оба препарата произведены в АО «СЦФБ» (Россия). Степень чистоты препаратов> 97%. Для культивирования использовали культуру клеток нормальной конъюнктивы человека Chang conjunctiva clone 1-5c-4. Цитотоксическое действие препаратов оценивали в МТТ-тесте. Пролиферативную активность клеток изучали на клеточном анализаторе xCELLigence System (Roche Applies Science, США).
По результатам МТТ-теста жизнеспособность клеток конъюнктивы под влиянием ИНФ-Х-1 в концентрации 37 мкг/мл и ПЭГ ИНФ- X в концентрации 42 мкг/ мл была сопоставимой и составила 92%, 90%, соответственно. Десятикратное увеличение концентрации ИФН-Х1 и ПЭГ ИФН-Х1 снижало жизнеспособность клеток на 15-20%. Также пролиферативная активность клеток конъюнктивы после добавления ИНФ-Х1 и ПЭГ ИНФ-X была сопоставима с пролиферативной активностью клеток в контроле в течение 48 часов наблюдения в режиме реального времени.
Таким образом, препараты ИНФ-X-1 и ПЭГ ИНФ-Х-1 не обладают выраженной цитотоксичностью на клетки конъюнктивы человека и могут считаться безопасными в качестве активных фармацевтических субстанций для разработки лекарственных препаратов в лечении вирусных поражений конъюнктивы.
Литература:
1. Ye L., Schnepf D., Staeheli P. Nat. Rev. Immunol. 2019. Vol. 19.
N.10. P. 614-625.
2. Antony F., Pundkar C., Sandey M et al. Immunol. 2021. Vol. 206.
N.8. P. 1866-1877.
ПРИМЕНЕНИЕ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПРИ
ПОВРЕЖДЕНИИ ГОЛОСОВОГО ОТДЕЛА
ГОРТАНИ
Н.А. Бояринова
ЦГМА ДПО ФГБУ Управления делами Президента
Российской Федерации, Москва, Россия
e-mail: boyarinova.natasha98@yandex.ru
Ключевые слова: стволовые клетки, рубцовые повреждения голосовых складок.
Острые и хронические воспаления гортани; травмы различной этиологии, в том числе ятрогенные; ожоги — все это, в итоге, становится причиной формирования рубцов, которые приводят к нарушению нормального смыкания голосовых складок и стенозу гортани. В результате возникает стойкое нарушение голосовой и дыхательной функций [1]. К сожалению, существующее многообразие методик по реабилитации голосовой функции не приводит к полному ее восстановлению и регрессу нарушений в структуре голосовых складок [2].
Целью данной работы является обзор литературных данных для изучения возможностей стволовых клеток в восстановлении структуры и функций голосовых складок при их повреждении.
Были проанализированы статьи за период с 2010 по 2021. Для поиска использовалась база данных
Medline (Pubmed). Статьи представляли собой преимущественно доклинические исследования на животных.
Рубцовая ткань представляет собой хаотично расположенные пучки коллагеновых волокон. В результате пространственной дезорганизации экстрацеллюлярного матрикса собственной пластинки слизистой оболочки и дисбаланса белков, голосовая складка, представленная такой тканью, не может выполнять свои функции. Стволовые клетки способны увеличивать регенерацию голосовых складок, приводя к образованию ткани, по морфологическим и биомеханическим свойствам приближающейся к строению нативной [3]. Стволовые клетки ингибируют профибротические эффекты фибро-бластов, усиливают экспрессию фактора роста фибро-бластов, фактора роста гепатоцитов, нормализуют экспрессию генов проколлагена, TGF pi, ИЛ-1р, ИЛ-17р и фактора некроза опухоли, оказывая тем самым анти-фибротическое действие и моделируя воспалительную реакцию, чем усиливают регенерацию голосовых складок и улучшают их вибрационные свойства [4].
Клеточная терапия демонстрирует перспективу в репарации структуры и функций голосового отдела гортани. Стволовые клетки эффективно восстанавливают поврежденные голосовые складки, приближая их строение к нативным структурам.
Литература:
1. G. de Bonnecaze, Laryngoscope, 2016.
2. V.M. Svistushkin, Vestn. RAMN, 2016.
3. V.L. Wingstrand, PLOS One, 2016.
4. Y.-M. Kim, Ann Otol Rhinol Laryngol, 2013.
ПЕРСПЕКТИВНЫЙ ИНГИБИТОР
КАЛЬЦИФИКАЦИИ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ
СИСТЕМЫ — КРЕНИГАЦЕСТАТ (LY3039478)
Н.В. Боярская1, О.С. Качанова1, А.А. Лобов1,
А.А. Шишкова1, Б.Р. Зайнуллина2,
A.А. Пичугин1, А.А. Филиппов1,
B.Е. Успенский1, А.Б. Малашичева1
1 ФГБУ НМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия;
2 Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург, Россия;
e-mail: nad.vb@yandex.ru
Ключевые слова: кальцификация сердечно-сосудистой системы, ингибитор кальцификации
Кальцификация сердечно-сосудистой системы может происходить в результате осложнений различных заболеваний или являться самостоятельной патологией. Значительную часть этой патологии занимает кальцинирующая болезнь аортального клапана (КБАК). Заболевание смертельно и единственным вариантом лечения является хирургическая замена клапана.
Основой развития КБАК является остеогенная диф-ференцировка интерстициальных клеток клапана (ИКК). В предыдущих исследованиях показана роль сигнального пути Notch как в развитии КБАК, так и в остеогенной дифференцировке ИКК. Таким образом использование ингибиторов передачи сигналов Notch в ИКК может рассматриваться как перспективный подход для лечения КБАК.
Цель данной работы — тестирование ингибиторов сигнального пути Notch для подавления остеогенной дифференцировки первичный культур ИКК, полученных
