CC BY
142
УДК 579
Н. С. ХИШТОВА
СРАВНЕНИЕ АНТИБАКТЕРИЦИДНОЙ АКТИВНОСТИ E. COLI M-17 ИЗ ПРЕПАРАТА КОЛИБАКТЕРИН И КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ, ВЫДЕЛЕННЫХ ПРИ ДИСБАКТЕРИОЗЕ
Кафедра общей гигиены и микробиологии АФ КГМУ, г. Майкоп
Введение
Персистенция бактерий рассматривается как «комплекс различных признаков атакующего и защитного характера, обеспечивающих возбудителю длительное выживание в организме хозяина» [1]. К секретируемым факторам бактерий, инактивирующих защиту хозяина, относят антилизоцимный (АЛА), антиинтерфероновый (АИА), антикомплементарный (АКА), антитрипсиновый (АТА), антитромбоцитарный катионно-белковый (ТКБ), антиглобулиновый и др. признаки [2]. Совокупность этих и других признаков и определяет устойчивость возбудителей к бактерицидной активности сыворотки крови (БАС).
Цель нашей работы - определить и сопоставить антибактерицидную активность штамма Е. coli М-17 из коммерческого биотерапевтического препарата (БТП) колибактерин и культур бактерий, выделенных при дисбиозе кишечника.
Материалы и методы
Бактерицидную активность сыворотки определяли по изменению оптической плотности МПБ при росте в нем микробов с добавлением и без добавления сыворотки здорового человека. Для определения БАС нами использовался нефелометрический метод [3].
Суточную культуру исследуемых штаммов (ИШ) на МПБ мл, выделенных при дисбиозе кишечника, центрифугировали при 1500-2000 об. /мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость удаляли, а осадок ресуспен-зировали в физиологическом растворе с доведением до 500 ЕД ОД (синий светофильтр, 10 мл, правый барабан). Контролем служила дистиллированная вода. В пробирки с 0,1 мл сыворотки и 0,2 мл МПБ вносили 0,2 мл охлажденной микробной стандартизованной сус-пензиии. После измерения оптической плотности (ОД
опыт 1) ко всем пробам добавляли по 5 мл 2%-ного МПБ и смесь инкубировали при 37° С еще 2,5 часа. Затем проводился замер оптической плотности на ФЭКе 2М по правому барабану против чистого 2%-ного МПБ (синий светофильтр) (ОД опыт 2). При расчете БАС контролем служила оптическая плотность штамма E. coli M-17 без контакта с сывороткой через 10 минут (ОД контр. 1) и через 2,5 часа (ОД контр. 2). Бактерицидную активность сыворотки в процентах по отношению к ИШ определяли по формуле:
ОД опыт 2 - ОД опыт 1
БАС =________________________________* 100% ОД.
конт. 2 - ОД конт.2
Так как БАС выражают в показателях угнетения оптической плотности, а в наших опытах наблюдается нарастание оптической плотности, для получения БАС от 100% вычитали процент нарастания оптической плотности. Дополнительно определяли БАС по отношению к БТП E. coli M-17. Определяли оптическую плотность на ФЭКе Е. coli М-17 без добавления сыворотки (контроль) и после контакта с сывороткой (опыт) через 10 минут (ОД1) и 2,5 часа (ОД2) инкубации.
Результаты
1. Определение анти-БАС БТП E. coli М-17 (табл. 1)
Исходная оптическая плотность Е. coli М-17 при 10-минутном культивировании без добавления сыворотки (ОД к 1) составила (М±м) 224,4±15,3 (n=13). Через 2,5 часа инкубации ОД к 2 составила (М±м) 283,4±4,9 (n=14). Нарастание оптической плотности произошло в
1,3 раза ( р=0,001; t=3,7), разница статистически достоверна.
Таблица 1
Изменение оптической плотности (ОД) Е. соїі М-17 в процессе культивирования (М±т)
Экспозиция Значение оптической плотности Кратность нарастания ОД n
Без сыворотки
10 мин 224,4+15,3 1,3 13 n=27
Е. соїі М-17 t=3,7
2,5 часа 283,6+4,9 14 p=0,001
С сывороткой
10 мин 224,4+15,3 13 n=39
Е. соїі М-17 1,2 t=2,4
2,5 часа 263,8±5,6 26 p<0,02
При культивировании с добавлением сыворотки ОД опыт 1 через 10 минут равнялось (М±м) 224,4±15,3; ОД опыт 2 (через 2,5 часа) (М±м) - 263,8±5,6. Отмечается нарастание оптической плотности опыта в 1,2 раза (n=39 , t=2,4, р<0,02), разница статистически достоверна. Процент устойчивости E. coli М-17 к БАС производили по формуле:
(263,8 - 224,4 )
анти-БАС =______________________*100 = 68,4% ,
283,6 - 224,4
т. е. 68,4% микробной массы E. coli М-17 не подавляется бактерицидным действием сыворотки. Т. к. наблюдается нарастание оптической плотности, в нашем случае БАС равна 100% - 68,4% =31,6%. При сопоставлении нарастания оптической плотности штамма E. coli М-17 через 2,5 часа инкубации без сыворотки (ОД к. 2) и с добавлением сыворотки (ОД оп. 2) (М ± м - 283,6 ±4,9 и 263,8±5,6 соответственно) происходило угнетение оптической плотности микробной массы после экспозиции с сывороткой в 1,1 раза (n=40, t=2,7, р <0,01), разница статистически достоверна.
2. Определение анти-БАС ИШ
ИШ были разбиты на две группы (табл. 2):
1-я - представлена энтеробактериями (n=56), в т. ч. Klebsiella spp. - 12, Enterobacter spp. - 11, Citrobacter
spp. - 9, E. coli (lac -) - 12, E. coli (Hly+) - 7, диареегенные E. coli O -124, O-151 - 5 штаммов.
2-я - патогенными стафилококками (n = 78).
Исходное значение оптической плотности микробной массы энтеробактерий через 10 минут после контакта с сывороткой (ОД опыт 1) составило (М±т) 278,8 ±12,3% (n=28); через 2,5 часа после контакта (ОД опыт 2) - 302,7 ±5,3% ( n=28). Расчет анти-БАС проводили по приведенной выше формуле, где ОД контролей служит оптическая плотность штамма E. coli М-17 без контакта с сывороткой через 10 минут (ОД контр. 1) и через 2,5 часа (ОД контр. 2).
(302,7 - 278,8 )
Анти-Бас =__________________________* 100 = 40,4%.
283,6 - 224,4
Следовательно, чувствительность энтеробактерий к БАС составляет 100% - 40,4% = 59,6±9,3%.
Анти-БАС активность энтеробактерий в 1,7 раза ниже, чем у E. coli М-17 (n=58, t=2,1, р < 0,05) (табл. 3). В опыте нарастание оптической плотности энтеробактерий произошло в 1,1 раза (табл. 3).
Во второй группе оптическая плотность в опыте после 10-минутного контакта с сывороткой составила (ОД опыт 1) (М±т) 192,3±19,7, после 2,5 часа инкубации (ОД опыт 2) (М±т) 226,5±4,4, т. е. нарастание
Таблица 2
Изменение оптической плотности ИШ в процессе культивирования (М±т%)
№ п/п Наименование культур Экспозиция 10 мин, ОД Кратность нарастания ОД Экспозиция 2,5 часа, ОД
1 Энтеробактерии 278,8 ± 12,3 1,1 302,7 ± 5,3 n=56 t=1,78 p>0,05
2 Патогенные стафилококки 192,3 ± 19,7 1,2 226,5 ± 4,4 n=78 t=1,69 p>0,05
3 E. coli M-17 (контроль) 224,4 ± 15,3 1,3 283,6+ ± 4,9 n =27 t =3,7 p=0,001
Таблица З
Анти-БАС активность ИШ и E. coi! М-17 (М ±m %)
№ п/п Наименование культур Анти-БАС, % Число исследований, n
1 Энтеробактерии 40,4 ± 9,3 56 t= 2,1 p<0,05
2 Патогенные стафилококки 57,8 ± 5,6 78 t= 0,9 p>0,05
3 E. coli M-17 68,4 ± 9,9 66
УДК 613.955 (470.621)
оптической плотности микробной массы стафилококков произошло в 1,2 раза (табл. 2). Анти-БАС, рассчитанная по формуле, составила:
(226,5 - 192,3)
Анти-БАС =____________________*100 = 57,8 ± 5,6%.
(283,6 - 224,4)
Следовательно, патогенные стафилококки проявляют чувствительность к БАС в 42,2 ±5,6% (t=1,69, p>0,05, n=78). Анти-БАС активность стафилококков в 1,2 раза ниже, чем у штамма E. coli M-17 (t= 0,9, p>0,05, n=30); результаты статистически недостоверны.
Обсуждение
При культивировании в течение 2,5 часа без присутствия сыворотки здорового человека наблюдается нарастание оптической плотности ОД у E. coli M-17 в 1,3 раза, в присутствии сыворотки кратность нарастания ОД снижается до 1,2 раза, т. е. наблюдается угнетение плотности микробной массы в 1,1 раза, или на 59,2%. АнтиБАС активность E. coli M-17 составляет 68,4±9,9%.Таким образом, более чем в 50% случаев рост E. coli M-17 не подавляется действием БАС. Нарастание оптической плотности энтеробактерий при их культивировании в присутствии сыворотки происходит в 1,1 раза, или на 23,9%, что меньше, чем у E. coli M-17, на 35,3%. Анти-БАС активность энтеробактерий невысокая - составляет 40,4± 9,3%. Рост патогенных стафилококков составляет 226,5 ±
4,4 после 2,5 часа культивирования, нарастание оптической плотности ОД произошло в 1,2 раза, или на 34,2 %, чем показатель после 10 минут инкубирования. Анти-БАС активность меньше, чем у E. coli M-17, в 1,2 раза, но выше, чем у энтеробактерий, и составляет 57,8 ± 5,6%.
Выводы
Наибольшая устойчивость к бактерицидному действию сыворотки выявилась у штамма E. coli M-17 из БТП колибактерин. Отмечаются высокие способности
секретировать бактериальные субстанции, направленные на инактивацию механизмов иммунитета организма, у S.aureus (57,8%) анти-БАС ниже, чем у E. coli M-17, только в 1,2 раза.
Снижение анти-БАС активности в нашем опыте наблюдается в ряду: E. coli M-17 > S. aureus > энтеробактерии.
Поступила 26.09.2006
ЛИТЕРАТУРА
1. Бухарин О. В. Персистенция патогенных бактерий. М.: Медицина. 1999. С. 332.
2. Обгольц А. А. Механизмы персистирования бактерий // Журн. микробиол. 1992. № 4. С. 72-74.
3. Смирнова С. Т., Кузьмина Л. Т. Упрощенный фотонефе-лометрический метод определения бактерицидной активности сыворотки. ОГМИ. 1966.
N. C. HISHTOVA
COMPARATIVE OFANTIBACTERICIDAE AC-TIVITYOFE.COLIM- 17STRAIN OF COLIBAC-TERIN PREPARATIONS AND CULTURES OF BACTERIA ALLOCATED AT DYSBACTERIOSIS
Antibactericidal activity of strain E.coli M-17 from BTP Colibacterin and indicator strains (IS) of enterobacteria and S. aureus allocated from patients with dysbacteriosis of intestine using nephelometric method is studied. In presence of healthy person serum the oppression of microbic mass at 2, 5 hours incubation of the studied cultures is not the same in comparison with the initial value of optical density. The most anti — BAC activity has the strain E. coli M-17 - 68, 4 ± 9,9%.
Kew words antibactericidal activity, value of optical, colibacterin, staphylococci, enterobacteria.
А. Я. ЧАМОКОВА
ГИГИЕНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА МОДЕРНИЗАЦИИ ОБУЧЕНИЯ И ВОСПИТАНИЯ ДЕТЕЙ В РЕСПУБЛИКЕ АДЫГЕЯ
Кафедра общей гигиены и микробиологии Адыгейского филиала Кубанского государственного медицинского университета, г. Майкоп
В соответствии с Постановлением Правительства Российской Федерации от 23.03.01 г. № 224 в стране осуществляется эксперимент по модернизации образовательного процесса в общеобразовательной школе. Целью проводимого эксперимента является повышение качества образования и совершенствование его структуры, укрепление здоровья учащихся и обеспечение психологического комфорта участникам образовательного процесса.
Впервые в стране перестройка образования производится в интересах охраны здоровья обучающихся. Одним из главных побудительных мотивов проводимой
модернизации школьного образования является существенное ухудшение состояния здоровья современных детей и подростков: увеличение заболеваемости практически по всем классам болезней, ухудшение физического развития, снижение уровня физической подготовленности на фоне выраженной гипокинезии и гиподинамии школьников [1, 2, 4, 6-15]. Однако широкомасштабный эксперимент по модернизации структуры и содержания образования не имеет должного научного и медицинского обеспечения, что не позволяет судить о его результатах с точки зрения сохранения
