CC BY
32
ISSN 2304-9081
Учредители: Уральское отделение РАН Оренбургский научный центр УрО РАН
Бюллетень Оренбургского научного центра
УрО РАН
2015 * № 2
Электронный журнал On-line версия журнала на сайте http://www.elmag.uran.ru
© Коллектив авторов, 2015 УДК: 547.964:571.27
1 1 1 2 3
М.А. Добрынина , В.А. Зурочка , А.В. Зурочка , В.А. Гриценко ,
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ВЛИЯНИЯ СИНТЕТИЧЕСКОГО ПЕПТИДА АКТИВНОГО ЦЕНТРА ГРАНУЛОЦИТАРНО-МАКРОФАГАЛЬНОГО КОЛО-НИЕСТИМУЛИРУЮЩЕГО ФАКТОРА - ZP2 НА РОСТ МУЗЕЙНЫХ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ РОДОВ STAPHYLOCOCCUS И ESCHERICHIA IN VITRO
1 Институт иммунологии и физиологии УрО РАН, Екатеринбург, Россия
2 Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, Оренбург, Россия
о
Оренбургский научный центр УрО РАН, Оренбург, Россия
Цель. Сравнить особенности влияния синтетического пептида активного центра гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) - ZP-2 на рост в жидкой питательной среде музейных культур бактерий родов Staphylococcus и Escherichia.
Материалы и методы. Опыты in vitro проведены на музейных культурах Staphylococcus aureus 209Р, Staphylococcus epidermidis №711 и Escherichia coli К12. В экспериментах использовали синтетический пептид активного центра ГМ-КСФ - ZP2, полученный на синтезаторе «Applied Biosystems 430A». Влияние разных концентраций (10, 30 и 100 мкг/мл) данного пептида на рост изученных штаммов бактерий в мясопептонном бульоне (МПБ) определялось путем динамического замера оптической плотности ^Д) бактериальных культур на 0, 2, 4, 6 и 24 часах и расчета Индекса ингибирования их роста.
Результаты. Синтетический пептид активного центра ГМ-КСФ - ZP2 дозо-зависимо ингибировал рост изученных музейных штаммов стафилококков и эшерихий в жидкой питательной среде. При этом ингибирующий эффект ZP2 зависел от таксономической принадлежности бактерий и фазы роста бактериальной культуры.
Заключение. Синтетический пептид активного центра ГМ-КСФ - ZP2 оказывает на рост стафилококков и эшерихий в жидкой питательной среде ингибирующее действие, особенности которого зависят от концентрации вещества, таксономической принадлежности бактерий и фазы развития бактериальной культуры.
Ключевые слова: гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ), активный центр, синтетический пептид, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, рост, ингибирование.
1 1 1 2 3
M.A. Dobrynina , V.A. Zurochka , A. V. Zurochka , V.A. Gritsenko '
COMPARATIVE ANALYSIS OF THE IMPACT OF SYNTHETIC PEPTIDE THE ACTIVE SITE OF GRANULOCYTE-MACROPHAGE COLONY-STIMULATING FACTOR - ZP2 ON GROWTH OF THE MUSEUM'S CULTURES BACTERIA GENERA STAPHYLOCOCCUS AND ESCHERICHIA IN VITRO
1 Institute of Immunology and Physiology UrB RAS, Ekaterinburg, Russia
9
Institute of Cellular and Intracellular Symbiosis UrB RAS, Orenburg, Russia 3 Orenburg Scientific Centre UrB RAS, Orenburg, Russia
Objective. Compare the features of the influence of the synthetic peptide of the active site of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) - ZP-2 on the growth in a liquid medium, the Museum of cultures of bacteria of the genera Staphylococcus and Escherichia.
Materials and methods. In vitro experiments conducted on Museum cultures of Staphylococcus aureus 209P, Staphylococcus epidermidis No. 711 and Escherichia coli K12. In the expe-
riments used a synthetic peptide of the active site of GM-CSF - ZP2 obtained by synth "Applied Biosystems 430A". Influence of different concentrations (10, 30 and 100 ^g/ml) of the peptide on the growth of studied bacteria strains in meat-peptone broth (BCH) were determined by dynamic measurement of optical density (OD) of bacterial cultures at 0, 2, 4, 6 and 24 hours and calculate the Index of inhibition of their growth.
Results. A synthetic peptide of the active site of GM-CSF - ZP2 dose-dependently inhibited the growth of the studied Museum strains of Staphylococcus and E. coli in a liquid medium. This inhibitory effect ZP2 depended on taxonomic affiliation of bacteria and growth phases of bacterial culture.
Conclusion. A synthetic peptide of the active site of GM-CSF - ZP2 has on the growth of Staphylococci and E. coli in a liquid medium, the inhibitory effect, features which depend on the concentration of a species, taxonomic origin, in those particular bacteria and development phases of bacterial culture.
Keywords: granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), the active center, synthetic peptide, Gram-positive cocci, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, growth, inhibition.
Введение
В структуре этиологических агентов эндогенных бактериальных инфекций основное место занимают энтеробактерии, в частности эшерихии, и грампозитивная кокковая флора, в том числе золотистые и коагулазоотрица-тельные стафилококки [1]. Данные микроорганизмы, обладающие комплексом факторов патогенности и персистенции, траслоцируясь из естественных биотопов (кишечник, верхние дыхательные пути и др.) во внутреннюю среду макроорганизма, способны колонизировать инфицированные ткани и органы, вызывая в ряде случаев (на фоне иммунобиологической компрометированно-сти) развитие инфекционно-воспалительного процесса и соответствующей патологии [2, 3]. При этом в формирование воспалительной реакции вовлекаются клетки иммунной системы и синтезируемые ими различные цитоки-ны, выполняющие регуляторную функцию [4].
В системе цитокинов важную роль выполняет гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ), активирующий костномозговое кроветворение, в частности рост и дифференцировку гемо-поэтических клеток таких линий, как гранулоциты, макрофаги и эозинофилы [5]. Однако, кроме этой основной функции, данный цитокин и синтетические аналоги его активного центра проявляют поливалентное биологическое воздействие, обладая иммуномодулирующей, репарационной и антибактериальной активность [6, 7]. Указанный плейотропный эффект данных соединений и, в частности, синтетического пептида активного центра ГМ-КСФ - ZP2, который отличался высокой активностью во всем диапазоне указанных биоэф-
2
фектов [8, 9], определяет перспективность их использования при создании новых лекарственных препаратов для клинической практики, в том числе терапии эндогенных бактериальных инфекций [3].
В то же время характер воздействия синтетического пептида ZP2 на стафилококки и энтеробактерии, отличающиеся между собой по строению клеточной стенки, пока не изучен.
Цель данного исследования - сравнить особенности влияния синтетического пептида активного центра гранулоцитарно-макрофагального коло-ниестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) ZP-2 на рост в жидкой питательной среде музейных культур бактерий родов Staphylococcus и Escherichia.
Материалы и методы
Опыты in vitro проведены на музейных культурах Staphylococcus aureus 209Р (ATCC 6538-P), Staphylococcus epidermidis №711 (из коллекции ИКВС УрО РАН) и Escherichia coli К12 (АТСС 25922).
В опытах использован синтетический пептид активного центра ГМ-КСФ - ZP2 (химическая формула - THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO), синтезированный твердофазным способом на синтезаторе «Applied Biosystems 430A». Влияние данного пептида на рост бактерий в жидкой питательной среде определялось при внесении в нее ZP2 с градиентом концентраций: 10, 30 и 100 мкг/мл.
Исследование влияния ZP-2 на рост музейных штаммов стафилококков и энтеробактерий осуществлялось путем инкубации бактериальных культур в течение 24 часов в микроячейках стерильной пластиковой планшеты в при-
о
сутствии ZP-2. Для этого 25 мкл бактериальной взвеси, содержащей 5х10 КОЕ/мл, приготовленной из суточной агаровой культуры бактерий, и 25 мкл раствора с определенной концентрацией ZP-2 (в контроле использовали 25 мкл изотонического раствора NaCl) вносились в микроячейки, содержащие 200 мкл мясо-пептонного бульона (МПБ), с последующей инкубацией в термостате при 37°С. Развитие бактерий в жидкой питательной среде оценивалось по динамике оптической плотности культуры ^Д), замеряемой в каждой микроячейке при длине волны (X) 492 нм на Multiscan Accent (Thermo Labsystems, Финляндия). Измерение ОД культур проводилось на 0 (исходный уровень), 2, 4, 6 и 24 часах инкубации. Каждый вариант опыта и контроля делался в 5 повторностях.
Для определения степени влияния ZP-2 на рост бактериальных культур
3
рассчитывали Индекс ингибирования (ИИ) по формуле [10]:
ИИ= ОДк - ОДо/ОДк* 100%,
где ИИ - Индекс ингибирования (%); ОДк и О До - оптическая плотность контрольной и опытной культур соответственно. Индекс ингибирования бактериальных популяций оценивался на 2, 4, 6 и 24 часах.
Экспериментальные данные обработаны методами вариационной статистики с вычислением из 5 измерений средней арифметической и ее ошибки (M±m). О достоверности отличий между контролем и опытом судили по критерию Стьюдента - t [11].
Результаты и их обсуждение
Из рисунка видно, что синтетический пептид активного центра ГМ-КСФ - ZP2, добавленный в МПБ, существенно и дозо-зависимо влиял на рост всех изученных музейных штаммов бактерий - S. aureus 209P, S. epidermidis №711 и E. coli К12, снижая их биомассу, оцениваемую по величине оптической плотности контрольных и опытных культур в динамике их развития.
Рис. Влияние на рост популяции S. aureus 209P (А), S. epidermidis №711 (Б) и E. coli К12 (В) в МПБ (ОД, усл. ед.) ZP2 при разной концентрации (мкг/мл): 1 - 10; 2 - 30; 3 - 100; К - контроль; * - достоверные отличия контрольных культур от опытных культур (p<0,05).
Общей закономерностью ингибирующего эффекта ZP2 в отношении стафилококков являлось то, что его выраженность нарастала в промежутке с 2 до 6 часов инкубации (табл. 1).
Таблица 1. Зависимость Индекса ингибирования (ИИ, %) роста в МПБ S. aureus 209P и S. epidermidis №711 от концентрации ZP2 и фазы культивирования
Время инкубации Индекс ингибирования (ИИ, %) роста стафилококков при разной концентрации ZP2 в питательной среде
10 мкг/мл 30 мкг/мл 100 мкг/мл
S. aureus 209P S. epidermidis №711 S. aureus 209P S. epidermidis №711 S. aureus 209P S. epidermidis №711
2 час -1,1±0,2 0,1±0,1 1,1±0,4 -3,8±0,4 3,3±0,3 -2,6±0,4
4 час 11,2±0,4* 16,9±0,3* 14,6±0,5* 20,2±0,4* 16,6±0,5* 23,6±0,3*
6 час 14,7±0,6* 21,4±0,7* 18,8±0,6* 25,0±0,6* 20,3±0,7* 32,1±0,8*
24 час 4,2±0,5* 24,7±0,7* 8,2±0,8* 25,0±0,5* 16,5±0,7* 25,3±0,6*
Примечание: * - достоверные отличия от контроля (p<0,05).
Следует отметить, что через 2 часа культивирования стафилококков в присутствии ZP2 заметного ингибирования роста бактерий не наблюдалось. Более того в отношении S. epidermidis №711 регистрировалась слабо выраженная (3,8±0,4 и 2,6±0,4%) стимуляция роста бактерий под действием ZP2 в концентрациях 30 и 100 мкг/мл соответственно. Такой «парадоксальный», но более выраженный (13,3-15,3%), стимулирующий эффект ZP2 ранее описан нами в отношении M. luteus var. lysodeikticus (АТСС 4698) [12]. Очевидно, реакция на данный пептид бактериальных клеток грамположительных кокков, взятых из периодических культур в стационарную фазу развития, отличается от таковой микроорганизмов, находящихся в стадии роста, - первые проявляют к нему большую устойчивость, чем вторые, возможно, за счет тех изменений бактериальной стенки, которые характерны для стафилококков, переходящих в стационарное состояние - увеличение количества слоев му-реинового пептидогликана и пептидных «перекрестно-связывающих мостиков», накопление тейхоевых и липотейхоевых кислот и др. [13, 14]. Кстати, подобное явление мы наблюдали в экспериментах по влиянию препарата лейкодефенсинов «Интерцида» на некоторые штаммы кишечной палочки (в частности, Escherichia coli К12, E. coli М17 из «Колибактерина» и изоляты, выделенные из различных источников, в том числе от больных с эндогенными бактериальными инфекциями - пиелонефритом, простатитом и др.), когда на ранних сроках инкубации у 40,0-80,0% культур наблюдался стимулирую-
5
щий эффект антибактериального препарата, который затем менялся на инги-бирующий [10].
Это явление наблюдалось и у стафилокков при воздействии ZP2 (табл. 1). Так, уже на 4 часах инкубации биомасса опытных культур стафилококков была заметно (на 11,2-23,6%, p<0,05) меньше, чем в контроле, вне зависимости от видовой принадлежности бактерий, хотя Индексы ингибирования S. epidermidis №711 превышали таковые S. aureus 209P, что свидетельствовало о большей их чувствительности к антибактериальному действию ZP2. К 6-ому часу культивирования ингибирующий эффект синтетического пептида ZP2 нарастал, достигая для S. aureus 209P уровня 14,7-20,3%, а для S. epider-midis №711 - 21,4-32,1% (в обоих случаях - дозо-зависимо от концентрации пептида).
Отметим одну зарегистрированную особенность действия ZP2 на рост S. aureus 209P и S. epidermidis №711 - Индексы ингибирования золотистого стафилококка к 24 часам снижались (относительно 6 часов) и не превышали 4,2-16,5%, в то время как значения этого показателя для эпидермального стафилококка оставались практически на тех же уровнях (24,7-25,3%). Возможно, это связано с различиями в репродуктивном потенциале изученных штаммов стафилококков (рис. А и Б) - в контроле после 24 часов культивирования биомасса S. epidermidis №711 была на 36,7% ниже, чем биомасса S. aureus 209P (ОД - 0,348 против 0,550).
Принципиально иначе синтетический пептид ZP2 влиял на динамику роста в МПБ музейного штамма Escherichia coli К12 (рис. В). Как и в случае со стафилококками, он дозо-зависимо (в диапазоне изученных концентраций 10-100 мкг/мл) ингибировал накопление биомассы кишечной палочки, но в отличие от грамположительных кокков максимально сильно тормозил ее прирост на самых ранних этапах развития культуры (на 2 часах - 17,625,9%), постепенно снижая свое ингибирующее действие на более поздних сроках инкубации (на 4 и 6 часах) до 13,9-22,5% и 11,8-19,6% соответственно, которое достигало минимума на 24 часах - 9,9-11,0% (табл. 2). Иначе говоря, эшерихии исходно проявляли более выраженную чувствительность к данному пептиду, а затем, очевидно, путем «включения» каких-то адаптивных механизмов (например, за счет изменения химического состава, степени гидрофильности/гидрофобности, архитектоники клеточной стенки и др. [15]) приспосабливались к его антибактериальному действию.
Таблица 2. Зависимость Индекса ингибирования (ИИ, %) роста E. coli К12 в МПБ от концентрации ZP2 и фазы культивирования
Время культивирования Индекс ингибирования (ИИ, %) роста бактерий при разной концентрации ZP2 в питательной среде
10 мкг/мл 30 мкг/мл 100 мкг/мл
2 час 17,6±1,1* 20,0±1,2* 25,9±1,0*
4 час 13,9±1,2* 18,5±1,4* 22,5±1,3*
6 час 11,8±1,0* 15,7±1,1* 19,6±1,5*
24 час 9,9±0,9* 10,4±1,1* 11,0±0,8*
Примечание: * - достоверные отличия от контроля (p<0,05).
Анализируя характер влияния синтетического пептида активного центра ГМ-КСФ - ZP2 на рост музейных штаммов стафилококков и кишечной палочки, следует подчеркнуть имеющееся сходство и выявленные таксономические отличия реакции этих бактерий на данный пептид. Вне зависимости от родовой/видовой принадлежности микроорганизмов они реагировали на присутствие в жидкой питательной среде синтетического пептида ZP2, который дозо-зависимо ингибировал их рост. Однако динамика ингибирующе-го эффекта ZP2 была, в известном смысле, видо- (или штаммо-) специфична, поскольку каждая изученная культура бактерий демонстрировала своеобразную (фазо-зависимую) кинетику накопления биомассы в присутствии указанного пептида.
Заключение
Представленные данные о влиянии синтетического пептида активного центра ГМ-КСФ - ZP2 на рост музейных штаммов стафилококков и эшери-хий в жидкой питательной среде свидетельствуют о дозо-зависимом и «ви-доспецифичном» ингибировании развития бактериальных культур в присутствии этого пептида, что в целом согласуется с ранее полученными результатами [12]. Важно отметить, что клетки E. coli К12, взятые из «стационарных» (суточных) агаровых культур оказались более чувствительными к антибактериальному действию пептида ZP2, чем стафилококки.
Поскольку стафилококки и энтеробактерии, вызывающие многие ин-фекционно-воспалительные заболевания, в том числе эндогенной природы, нередко проявляют устойчивость к используемым в клинике антибиотикам и химиопрепаратам, разработка новых эффективных лекарственных препара-
7
тов для борьбы с данной патологией остается актуальной проблемой. В этом плане синтетический пептид активного центра ГМ-КСФ - ZP2 является весьма перспективным кандидатом, так как обладает не только антибактериальной активностью в отношении грампозитивной и грамнегативной микрофлоры, но и проявляет широкий спектр иных «полезных» биоэффектов [3, 6-9].
В то же время изложенный фактический материал следует оценивать как исходную (методически ценную) информацию для планирования и выполнения дальнейших исследований по изучению влияния указанного синтетического пептида на бактерии, в том числе возбудителей эндогенных бактериальных инфекций.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гриценко В.А., Иванов Ю.Б. Роль персистентных свойств в патогенезе эндогенных инфекций. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2009. 4: 66-71.
2. Мавзютов А.Р., Бондаренко В.М., Жеребцова Н.Ю., Валишин Д.А. Факторы патоген-ности оппортунистических энтеробактерий и их роль в развитии диареи. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2007. 1: 89-96.
3. Гриценко В.А., Аминин Д.Л., Зурочка А.В. и др. Некоторые биологические эффекты иммономодуляторов естественного и синтетического происхождения in vitro как основа создания новых лекарственных средств для борьбы с эндогенными инфекциями. Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. 2012. 3: 1-17 (URL: http:// el-mag.uran.ru/magazine/Numbers/2012-3%20/Articles/15GricenkoVA-ADL-ZAV.pdf).
4. Иммунология: структура и функции иммунной системы / Под ред. Р.М. Хаитова. М., 2013. 280 с.
5. Murphy J.M., Young I.G. IL-3, IL-5, and GM-CSF signaling: crystal structure of the human beta-common receptor. Vitam. Horm. 2006. 74: 1-30. DOI:10.1016/S0083-6729(06)74001-8.
6. Зурочка А.В., Зурочка В.А., Суховей Ю.Г. и др. Иммунотропные и биологические эффекты синтетических пептидов активного центра ГМ-КСФ. Вестник уральской медицинской академической науки. 2011. 2/2 (35): 23-24.
7. Зурочка А.В., Зурочка В.А., Костоломова Е.Г. и др. Антибактериальные, иммунотропные и репарационные свойства пептидов активного центра ГМ-КСФ, различных де-фенсинов и веществ, полученных из супернатантов CD34+45--клеток - предшественников гемопоэза. Российский иммунологический журнал. 2012. Т. 6 (14). 3 (1): 78-79.
8. Зурочка А.В. Зурочка В.А., Костоломова Е.Г. и др. Сравнительная характеристика антибактериальных свойств синтетических пептидов активного центра GM-CSF и веществ, полученных из супернатантов CD34+45dim клеток-предшественников гемопоэза. Цитокины и воспаление. 2012. 11 (2): 96-99.
9. Зурочка А.В., Зурочка В.А., Добрынина М.А., Зуева Е.Б., Гольцова И.А., Гриценко В.А. Новые подходы к изучению спектра биологической активности синтетических пептидов активного центра ГМ-КСФ. Российский иммунологический журнал 2014. Т. 8 (17). 3: 690-693.
10. Бухарин О.В., Гриценко В.А. Влияние in vitro препарата лейкоцитарного катионного белка "Интерцид" на Escherichia coli. Антибиот. и химиотер. 2000. 45 (1): 16-20.
11. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. 352 с.
12. Зурочка В.А., Добрынина М.А., Зурочка А.В., Гриценко В.А. Особенности влияния синтетического пептида активного центра ГМ-КСФ на рост грамположительных кокков in vitro. Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. 2015. 1: 1-10 (URL:
http://elmag.uran.m:9673/magazinemumbers/2015-1/Articles/VAZ-2015-1.pdf).
13. Кислухина О.В., Калунянц К.А., Аленова Д.Ж. Ферментативный лизис микроорганизмов. Алма-Ата: Рауан, 1990. 200 с.
14. Дерябин Д.Г. Функциональная морфология клетки. М.: КДУ, 2005. 320 с.
15. Yeaman M.R., Yount N.Y. Mechanisms of Antimicrobial Peptide Action and Resistence. Pharmacol. Rev. 2003. 55: 27-55.
Поступила 9.06.2015
(Контактная информация: Добрынина Мария Александровна - аспирант Института иммунологии и физиологии УрО РАН; адрес: 620049, г. Екатеринбург, ул. Первомайская, 106; тел.: +7(343)374-00-70; E-mail: secretar@iip.uran.ru;
Зурочка Владимир Александрович - кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник Института иммунологии и физиологии УрО РАН; адрес: 620049, г. Екатеринбург, ул. Первомайская, 106; тел.: +7(343)374-00-70; E-mail: v_zurochka@mail.ru;
Зурочка Александр Владимирович - доктор медицинских наук, профессор, ведущий научный сотрудник Института иммунологии и физиологии УрО РАН; адрес: 620049, г. Екатеринбург, ул. Первомайская, 106; тел.: +7(343)374-00-70; E-mail: av_zurochka@mail .ru;
Гриценко Виктор Александрович - доктор медицинских наук, профессор, заведующий лабораторией Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, ученый секретарь Президиума Оренбургского научного центра УрО РАН; адрес: 460000, г. Оренбург, ул. Пионерская, 11; тел.: +7(3532)77-05-12; E-mail: vag59@mail.ru)
LITERATURA
1. Gricenko V.A., Ivanov Ju.B. Rol' persistentnyh svojstv v patogeneze jendogennyh infekcij. Zhurnal mikrobiologii, jepidemiologii i immunobiologii. 2009. 4: 66-71.
2. Mavzjutov A.R., Bondarenko V.M., Zherebcova N.Ju., Valishin D.A. Faktory patogennosti opportunisticheskih jenterobakterij i ih rol' v razvitii diarei. Zhurnal mikrobiologii, jepidemiologii i immunobiologii. 2007. 1: 89-96.
3. Gricenko V.A., Aminin D.L., Zurochka A.V. i dr. Nekotorye biologicheskie jeffekty immo-nomoduljatorov estestvennogo i sinteticheskogo proishozhdenija in vitro kak osno-va sozda-nija novyh lekarstvennyh sredstv dlja bor'by s jendogennymi infekcijami. Bjulleten' Oren-burgskogo nauchnogo centra UrO RAN. 2012. 3: 1-17 (URL: http:// elmag.uran.ru/ maga-zine/Numbers/2012-30/o20/Articles/15GricenkoVA-ADL-ZAV.pdf).
4. Immunologija: struktura i funkcii immunnoj sistemy / Pod red. R.M. Haitova. M., 2013. 280 s.
5. Murphy J.M., Young I.G. IL-3, IL-5, and GM-CSF signaling: crystal structure of the human beta-common receptor. Vitam. Horm. 2006. 74: 1-30. DOI:10.1016/S0083-6729(06)74001-8.
6. Zurochka A.V., Zurochka V.A., Suhovej Ju.G. i dr. Immunotropnye i biologicheskie jeffekty sinteticheskih peptidov aktivnogo centra GM-KSF. Vestnik ural'skoj medicinskoj akademi-cheskoj nauki. 2011. 2/2 (35): 23-24.
7. Zurochka A.V., Zurochka V.A., Kostolomova E.G. i dr. Antibakterial'nye, immunotropnye i reparacionnye svojstva peptidov aktivnogo centra GM-KSF, razlichnyh defensinov i vesh-hestv, poluchennyh iz supernatantov CD34+45--kletok - predshestvennikov gemopojeza. Rossijskij immunologicheskij zhurnal. 2012. T. 6 (14). 3 (1): 78-79.
8. Zurochka A.V. Zurochka V.A., Kostolomova E.G. i dr. Sravnitel'naja harakteristika an-tibakterial'nyh svojstv sinteticheskih peptidov aktivnogo centra GM-CSF i veshhestv, poluchennyh iz supernatantov CD34+45dim kletok-predshestvennikov gemopojeza. Citokiny i vospalenie. 2012. 11 (2): 96-99.
9. Zurochka A.V., Zurochka V.A., Dobrynina M.A., Zueva E.B., Gol'cova I.A., Gricenko V.A.
Novye podhody k izucheniju spektra biologicheskoj aktivnosti sinteticheskih peptidov aktiv-nogo centra GM-KSF. Rossijskij immunologicheskij zhurnal 2014. T. 8 (17). 3: 690-693.
10. Buharin O.V., Gricenko V.A. Vlijanie in vitro preparata lejkocitarnogo kationnogo belka "In-tercid" na Escherichia coli. Antibiot. i himioter. 2000. 45 (1): 16-20.
11. Lakin G.F. Biometrija. M.: Vysshaja shkola, 1990. 352 s.
12. Zurochka V.A., Dobrynina M.A., Zurochka A.V., Gricenko V.A. Osobennosti vlijanija sinte-ticheskogo peptida aktivnogo centra GM-KSF na rost grampolozhitel'nyh kokkov in vitro. Bjulleten' Orenburgskogo nauchnogo centra UrO RAN. 2015. 1: 1-10 (URL: http:// el-mag.uran.ru:9673/magazine/Numbers/2015-1/Articles/VAZ-2015-1.pdf).
13. Kisluhina O.V., Kalunjanc K.A., Alenova D.Zh. Fermentativnyj lizis mikroorganizmov. Alma-Ata: Rauan, 1990. 200 s.
14. Derjabin D.G. Funkcional'naja morfologija kletki. M.: KDU, 2005. 320 s.
15. Yeaman M.R., Yount N.Y. Mechanisms of Antimicrobial Peptide Action and Resistence. Pharmacol. Rev. 2003. 55: 27-55.
