CC BY
6
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
СПЕЦИФИЧНОСТЬ РЕАКЦИИ ПРЕЦИПИТАЦИИ С ГАПТЕНОМ ПРИ ИНДИКАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ БРЮШНОГО ТИФА В ВОДЕ*
Н. Н. Ситникова
Из Института эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалеи АМН СССР
Целью нашей работы являлось изучение возможности обнаружения в воде возбудителей брюшного тифа с помощью реакции преципитации с гаптеном и выяснение ее специфичности.
Для установления возможности обнаружения микробов брюшного-тифа с помощью реакции преципитации с гаптеном из суточной культуры музейных штаммов этих микробов (ty-2, 4446, 1203) готовили 2-миллиардную, 500-миллионную и 100-миллионную микробную взвесь в физиологическом растворе. Затем 3 порции водопроводной воды по 500 мл заражали 2 млрд. 500 и 100 млн. микробных тел, фильтровали через мембранный фильтр № 3 в аппарате Зейтца, а по окончании фильтрации с каждого фильтра делали смыв 3 мл 1°/о уксусной кислоты с тем, чтобы в дальнейшем из задержанных микробных тел получить гаптен.
Гаптен получали по общепринятой методике, сначала кипятили смыв в 1%> уксусной кислоте в течение 45—60 минут, затем фильтровали через асбестовую вату и при индикаторе бромтимолблау подщелачивали раствором углекислой соды до нейтральной или слабо щелочной реакции.
Всего было проведено 14 опытов постановки реакции преципитации с полученными гаптенами и преципитирующими сыворотками, выпускаемыми Московским научно-исследовательским институтом вакцин и сывороток. Положительный результат был получен лишь в одном опыте, при содержании в 500 мл воды 2 млрд. микробных тел Bact. typhi abdominalis штамм 1203.
С целью обнаружения меньших количеств микробных тел в пробе воды мы применяли подращивание микробов, задержанных на поверхности фильтров, на среде Левина при температуре 37° в течение 18 часов.
Работа проводилась с 48 штаммами брюшнотифозного микроба (7 музейных штаммов: «О» Essen, ty-2, 4446. 58, 1203, 0-901, Н-901 и 41 штамм, выделенный от больных в 1953 г.). К 250 мл .водопроводной воды прибавляли 1—5—10—100 микробных клеток, для чего из основного разведения 500 млн. микробных клеток суточной культуры бактерий брюшного тифа делались 10-кратные разведения физиологическим раствором. По 1 мл из полученных разведений (1—5—10—100 микробных тел в 1 мл) вносили в колбы с водопроводной водой и по 1 мл на чашки Петри с плотной средой для подсчета количества выросших колоний, т. е. для проверки концентрации микробной взвеси, взятой в опыт.
Зараженную воду фильтровали через мембранные фильтры № 3 в аппарате Зейтца: 250 мл воды фильтровали через 1—2 фильтра. Степень разряжения, создаваемого в аппарате при фильтрации с помощью масляного насоса, на задерживающей способности фильтров для мик-
1 Печатается в порядке обсуждения. — Ред.
2 я
и
•е-о
г; >w
И-
"Р
41
н я
SV 4>
8*1 I и ™ и
1Ш
Результаты
° i 5
8 г- л ее
о 2 £
SS15
о" 5 ч = ю Е >.
sc с ¡6 а
S й с 3
Ё * Я
S t О
аэя
с S я
S "5 < а aJ ff
я Н с
!|з|
«к - 2
-роорганизмов не отражалась, а скорость фильтрации снижалась при уменьшении вакуума. По окончании фильтрации мембранные фильтры переносили на питательную среду. Через 18 часов с фильтров, на которых вырастали колонии, делали смыв 3 мл 1% уксусной кислоты, а затем готовили гаптены по описанной методике. С полученными гаптенами ставили реакцию преципитации. Пробирки для учета реакции просматривали сейчас же, после 15-минутного стояния на столе и после 30-минутного пребывания в термостате.
В реакции преципитации нами были проверены 2 серии преципи-тирующих брюшнотифозных сывороток, выпущенных Московским научно-исследовательским институтом вакцин и сывороток. Кроме того, мы готовили свои преципитирующие сыворотки путем иммунизации кроликов гретой вакциной по схеме с 6-кратными введениями в дозах от 200 млн. до 4 млрд. микробных тел в 1 мл.
В каждом опыте реакцию преципитации ставили как с коммерческой сывороткой, так и с сыворотками, полученными нами, и всегда отмечали аналогичные результаты. В итоге исследований, проведенных
по описанной методике и Таблица представленных в табл. 1,
установлено, что после фильтрования проб водопроводной воды по 100 мл, зараженных 500, 100 и 10 брюшнотифозными микробными клетками, и подращивания микробов, осевших на фильтрах, реакция преципитации с гаптеном была положительна в 100°/о.
При фильтрации проб водопроводной воды по 250 мл, содержащих в этом объеме 100—10 микробных клеток, реакция преципитации с гаптеном была положительной в 98—91%. Таким образом, при увеличении объема исследуемой пробы воды процент положительных находок при заражении тем же количеством микроорганизмов уменьшается. Контролем к опытам служила реакция преципитации с гаптенами, приготовленными из смывов с фильтров, через которые фильтровалась незараженная вода. Все контрольные опыты дали отрицательные результаты.
Далее были поставлены опыты с целью проверки специфичности реакции преципитации с гаптеном. Реакцию ставили с гаптенами, приготовленными из различных представителей кишечно-тифозной группы и брюшнотифозной преципитирующей сывороткой. Прежде всего реакция преципитации была поставлена с гаптенами, полученными из 126 штаммов кишечной палочки, в число которых входили музейные штаммы и штаммы, выделенные от людей, исследуемых на бациллоносительство, от больных острой дизентерией, брюшным тифом и различными кишечными расстройствами. Гаптен готовили из 2-миллиардной микробной взвеси по обычной методике. Из 126 исследованных штаммов кишечной палочки только 2 музейных штамма дали положительную реакцию преципитации, а остальные 124 штамма — отрицательную.
Кроме того, проводили исследование штаммов Bact. coli, выделенных из воды реки Москвы. Пробы брались в районе Центрального стадиона имени В. И. Ленина в Лужниках, в районе пристаней «Киевская» и «Краснопресненская». Всего было взято 50 проб воды, из которых было выделено 200 штаммов кишечной палочки. Реакция преципитации, поставленная с гаптенами, приготовленными из этих штаммов, во всех случаях была отрицательной.
6 12 18
29 88
100 100 100 250 250
500 100 10 100 10
18 18 18 18 18
6 12 18 23 80
100 100 100 98 91
5 1
0,1
0,4 0,04
Из других представителей кишечника тифозной группы для реакции преципитации были использованы Sal. enteritidis (5 штаммов), Sal. typhi murium (4 штамма), Sal. paratyphi С. (5 штаммов), Sal. cholerae suis (3 штамма) (табл. 2).
Таблица 2
Антигенная структура
Количество изученных штаммов Количество положительных реакций Н-антиген
Штамм О-аптиген I 11
фазы
Sal. enteritidis Sal. typhi murium Sal. paratyphi C. 5 4 5 4 4 1 (I) IX XII (I) IV (V) XII VI, VII Д. Т. i С 1,23 1,5
Sal. cholerae suis у 3 0 VI, VII С 1,5
Как показали опыты, положительная реакция преципитации с. брюшнотифозной преципитирующей сывороткой отмечалась с гаптена-ми, полученными из тех штаммов, которые имели общие антигены с возбудителем брюшного тифа, т. е. Sal. enteritidis, Sal. typhi murium, как, по-видимому, и штамм Sal. paratyphi С., взятый нами для исследования. Sal. typhi murium, Sal. cholerae suis, Sal. enteritidis принадлежит главная роль в этиологии пищевых токсикоинфекций. Sal. paratyphi С. может явиться возбудителем паратифа у человека.
Обнаружение этих микробов требует проведения той же системы санитарных мероприятий, что и при обнаружении в воде Bact. typhi abdominalis.
Поэтому наличие положительной реакции преципитации с преципитирующей брюшнотифозной сывороткой и гаптеном, полученными от возбудителей пищевых токсикоинфекций при нахождении их в воде, отнюдь не снижает практической ценности этой реакции как первой ориентировочной пробы. Одновременно ставились опыты для изучения возможности обнаружения Bact. typhi abdominalis в речной воде с помощью реакции преципитации с гаптеном. Было исследовано 53 пробы воды из реки Москвы путем фильтрации 10 мл речной воды через мембранный фильтр, 18-часового подращивания задержанных микробов на среде Левина и получения гаптена обычным способом. Реакция преципитации с гаптеном во всех случаях была отрицательной.
С этих же чашек Петри выделяли колонии, подозрительные по внешним признакам на патогенных представителей кишечной группы. Колонии изучали по морфологическим и биохимическим свойствам и из них готовили гаптен, с которым ставили реакцию преципитации. В процессе исследований штамма Bact. typhi abdominalis из воды реки Москвы выделено не было. Кроме того, этими исследованиями показано, что сапрофитная флора воды не реагирует положительно в реакции преципитации с брюшнотифозной сывороткой, а следовательно, не может мешать обнаружению возбудителей брюшного тифа.
Таким образом, на основании приведенных данных можно считать, что метод обнаружения возбудителей брюшного тифа в воде с помощью реакции преципитации с гептеном является высокочувствительным и специфичным. Этот метод может применяться в практике в качестве первой сигнальной пробы.
5 Гигиена и санитария, ЛГа 4
65
Выводы
1. Применение метода фильтрации воды, подращивания задержанных на фильтре микробов и постановки реакции преципитации с гапте-ном позволяет обнаружить 10 и 100 микробных клеток в 100 мл искусственно зараженной водопроводной воды.
2. Изучение специфичности реакции преципитации с гаптеном показало, что штаммы, близкие в антигенном отношении к возбудителю брюшного тифа, могут давать положительную реакцию преципитации с преципитирующей брюшнотифозной сывороткой, т. е. Sal. enteritidis, Sal. typhi murium.
3. Штаммы других представителей кишечной группы, не имеющих в своем составе антигенов, общих с возбудителем брюшного тифа, неспецифических реакций с преципитирующей брюшнотифозной сывороткой не дают.
4. Сапрофиты, постоянно имеющиеся в воде открытых водоемов, с брюшнотифозной сывороткой не реагируют и не могут мешать обнаружению в воде возбудителей брюшного тифа с помощью реакции преципитации.
5. Реакция преципитации с гаптеном является достаточно специфичной, чтобы служить в качестве сигнальной ориентировочной пробы для обнаружения возбудителей брюшного тифа в воде.
ЛИТЕРАТУРА
Гришина О. С., Капустяк С. М. Журн. микробиол., эпидемиол. и имм>-исбиол., 1955, № 2, стр. 59 — Елшина М. А., Литовченко Е. Т., Дроботь-к о С. В. Тезисы докл. расширенной научной конференции Киевск. ин-та эпидемиологии, микробиологии и гигиены. Киев, 1955, стр. 29. — Казачина К. Н. Тезисы докл. научной сессии санитарно-гигиенических ин-тов и кафедр гигиены ин-тов РСФСР. Л., 1952, стр. 34.—О на же. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол., 1953, № 4, стр. 50.—Кенина А. Е. Тезисы докл. юбилейной объединенной сессии Ин-та эпидемиологии, микробиологии и медицинской паразитологии. Сталинабад, 1954, стр. 21.— Керашева С. И. В кн.: Новые методы лабораторной диагностики важнейших инфекционных болезней. М., 1956, стр. 35. — М о г и л е в с к и й Я- А., Казачина К Н. Гиг. и сан., 1958, № 7, стр 51.—Макарова 3. А. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол., 1953, № 4, стр. 46.—Рутн штейн Н. Д. В кн.: Вопросы санитарной бактериологии. М., 1948, стр. 129.
Поступила 18/IX 1958 г.
■¿Г # -Й-
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЙОДИСТОГО КАЛИЯ В ПОВАРЕННОЙ СОЛИ, ОСНОВАННОЕ НА ВЗАИМОДЕЙСТВИИ КОМПЛЕКСНОГО ИОНА Л2С1- С БРИЛЛИАНТОВЫМ ЗЕЛЕНЫМ
Проф. Л. Н. Лапин, доцент Н. В. Рейс
Из кафедры биологической химии Самаркандского медицинского института имени
акад. И. П. Павлова
Описанные в литературе йодометрические методы, разработанные рядом авторов (И. М. Кольтгоф и Е. Б. Сендэл, А. М. Коган, А. С. Швец и др.), требуют так же, как и стандартный метод1, затраты слишком большого времени сотрудников лабораторий санитарно-эпидемиологических станций, что ограничивает возможность массового применения
1 Санитарные правила по хранению, транспортировке йодированной поваренной соли и -методика определения в ней йода. Сборник важнейших официальных материалов по санитарным и противоэпидемическим вопросам. Т. II, Медгиз, 1953, стр. 596—599.
