CC BY
6
Точность метода мы устанавливали путем внесения 6,6 мкг препарата в пробу с последующей экстракцией ГХБД и спектрофотометрическим определением (табл. 2).
Как видно из табл. 2, процент определения ГХБД различен для отдельных органов.
Таблица
Оптическая плотность экстрактов
Таблица 2 Характеристика точности метода
к
Экстракт 5 л — £ ^ к V м м О к I =
НЕ
О ей
Печень 0,09
Почки 0,12
Легкие 0,16
Головной
мозг. . . 0,10
Желудок 0,11
Жир . . . 0,16
Кровь 0,11
Моча . . . 0,15
Кровь людей 0,12
Моча » 0,15
Экстракт Внесено ГХБД Найдено ГХБД (в мкг) % ошибки
Печень 6,6 0,0
Почки 6,1 —8,0
Легкие 5,5 —17,0
Головной мозг 3,8 —43,0
Желудок 6,6 мкг 6,8 +3,0
Жир" 6,6 0,0
Кровь 7,0 +6,0
Моча 6,1 —8,0
Кровь людей 6,4 -2,0
Моча » 6,2 —6.0
Гексахлоран практически не мешает определению. ДДТ мешает определению ГХБД, так как значительно поглощает свет в области 220—250 нм с максимумом при длине волны 236 нм.
Предложенный метод можно рекомендовать для практического применения.
Поступила 6/1V 1970 г.
УДК 61в-008.849.5:615.285.7-074
СПЕЦИФИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИХЛОРПИНЕНА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ
Канд. хим. наук М. А. Клисенко, Н. И. Верблюдова
Всесоюзный научно-исследовательский институт гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс, Киев
Предложен метод микротонкослойной хроматографии, позволяющий идентифицировать полихлорпинен (ПХП) в присутствии ДДТ, ДДЕ, ДДД, алдрина, гептахлора, гексахлорциклогексана и других хлорорганических пестицидов с достаточной чувствительностью (1—2 мкг в пробе) в таких животных тканях, как сердце, печень, почки, селезенка, жир, мозг, мышца, а также в крови и моче. Метод основан на извлечении пестицида из исследуемой пробы «-гексаном, очистке экстракта концентрированной серной кислотой и хроматографировании в микротонком слое силикагеля (размер зерен 3—10 мк). При этой степени зернения достигается наибольшая компактность пятна ПХП, что способствует разделению такой трудноразделяе-мой пары, как ПХП и ДДТ. При большей или меньшей крупности зерен силикагеля наблюдается размывание пятна ПХП, что затрудняет его идентификацию.
Фракционирование силикагеля производили путем седиментации его в сосудах с водой (Б. Г. Беленький и Э. С. Ганкина). В качестве подвижного растворителя была выбрана смесь н-гексана, метилового спирта и аммиака в соотношении 10 : 4 : 0,3. При этом достигается разделение ПХП
и ДДТ. Значения величин этих препаратов и других хлорорганических пестицидов представлены в табл. 1.
Длина пробега подвижного растворителя составляла 4 см. Препараты обнаруживали путем опрыскивания пластинок раствором азотнокислого серебра и аммиака в ацетоне с последующим облучением УФ светом. Пестициды проявлялись на хроматограмме в виде черных пятен на белом фоне.
Более надежная идентификация исследуемых хлорорганических пестицидов достигнута путем опрыскивания пластинок 5% раствором дифениламина и хлористого цинка в ацетоне с последующим нагреванием в сушиль-
Таблица 1
Значения величин Rt хлорорганических пестицидов
Таблица 2
Чувствительность определения хлорорганических пестицидов
Пестицид *f
Гексахлор-
циклогек-
сан
(у-изомер) 0,30± 0,02
ДДД . . 0,47± 0,04
ПХП . . . 0,55±0,05
Полихлор-
камфен 0,55±0,05
ДДТ . . . 0,65± 0,04
Гептахлор 0,68± 0,03
ДДЕ 0,73±0,02
Алдрин 0,76± 0,02
Проявляющий реактив
Пестицид азотнокислое серебро дифениламин-f-ZnCl,
в мкг
Гексахлорциклогексан (у-изомер)...... ДДД......... Полихлорпинен .... Полихлоркамфен . . 0,3 0,5 0,5 0,5 Не обнаруживается 0,5 1.0 1,0
ДДТ......... Гептахлор ...... ДДЕ......... Алдрин ........ 0,2 0,3 0,5 0,3 0,5 40,0 80,0 Не обнаруживается
ном шкафу при 130—140°. При наличии ПХП появляются голубовато-зеленые пятна, при наличии ДДТ и ДДЕ — красные, при наличии ДДД — голубые; алдрин и гексахлорциклогексан не обнаруживаются. Чувствительность определения этих пестицидов с помощью дифениламина и азотнокислого серебра представлена в табл. 2.
Следовательно, сочетание определенной степени зернения силикагеля, правильного подбора подвижного растворителя и специфического проявителя позволяет обнаружить и количественно определить ПХП в присутствии ДДТ и других хлорорганических пестицидов. Полученные результаты положены в основу разработки методики изучения ПХП в биологическом материале.
Для фракционирования силикагеля 250 г измельченного силикагеля заливают 2,5 л дистиллированной воды в батарейном стакане (А = 20 см, d= 14 см). Высота слоя жидкости в стакане 19 см. Содержимое стакана тщательно перемешивают и отстаивают 1 мин. После этого надосадочную жидкость декантируют во второй стакан такого же размера и доливают воду до уровня 19 см. В этом стакане суспензию отстаивают 2 мин., надосадочную жидкость декантируют в третий стакан и отстаивают 4 мин. и т. д. (16, 30, 60 и 120 мин.). В седьмом стакане осядут частицы с радиусом 3—10 мк. Надосадочную жидкость выливают, а осадок собирают и высушивают при 130—140° в течение суток. Полученная таким образом однородная фракция силикагеля применялась для приготовления пластинок.
Приготовляют пластинки следующим образом. 0,3 г силикагеля (размер частиц 3—10 мк) и 0,015 г гипса (CaS04-2H20), в течение 2 суток прокаленного при 180° и просеянного через сито (размер 100 меш), растирают в фарфоровой ступке с 2,5 мл дистиллированной воды. Полученную массу осторожно выливают на стеклянную пластинку размером 6x6 см и остав-
ляют сохнуть на воздухе в течение 15—18 часов. Перед использованием пластинку сушат в шкафу при 130—140° в течение 20 мин.
При экстрагировании ПХП 1—2 г пробы (сердце, печень, почки, легкие, селезенка, мозг, мышца) у мелких животных (например, крыс) и 25 — 50 г пробы у крупных, (например, мясо крупного рогатого скота) измельчают и растирают в фарфоровой ступке, переносят в химическую колбу и заливают н-гексаном так, чтобы проба была полностью покрыта им, и оставляют на 1 час, периодически встряхивая содержимое. Фильтруют через бумажный фильтр, а пробу снова заливают «-гексаном и оставляют на 1 час, периодически встряхивая содержимое. Фильтруют через бумажный фильтр. Экстракты объединяют и промывают в делительной воронке концентрированной серной кислотой (порциями по 15—20 .ил) до тех пор, пока свежая порция кислоты перестанет окрашиваться и мутнеть. Слой кислоты отбрасывают, а гексан промывают дистиллированной водой 2—3 раза по 50—100 мл. Фильтруют гексан через слой безводного сернокислого натрия в колбу для отгонки растворителя (с оттянутым концом). Выпаривают гексан досуха на водяной бане. К сухому остатку прибавляют 0,1 мл гексана. Отбирают микрошприцем аликвоту (например, 20 мкл) и наносят на пластинку. Производят хроматографирование.
2 г жира измельчают, растирают в фарфоровой ступке и переносят в химическую колбу. Приливают 10—15 мл концентрированной серной кислоты и оставляют на 1 час, периодически встряхивая содержимое. Затем приливают «-гексан и периодически встряхивают в течение часа. Экстракт декантируют (слой «-гексана), после чего экстракцию повторяют. Объединенные экстракты осторожно встряхивают в делительной воронке с концентрированной серной кислотой (порциями по 15 мл) до тех пор, пока свежая порция кислоты перестанет окрашиваться и мутнеть. Слой кислоты отбрасывают, а гексан промывают дистиллированной водой 2—3 раза порциями по 50—100 мл. Дальше делают так, как описано выше.
5 мл крови или 30—50 мл мочи экстрагируют трижды порциями соответственно по 10 и 30—50 мл диэтилового эфира. Эфирные вытяжки соединяют и фильтруют через слой безводного сернокислого натрия в колбу для отгонки растворителя. Выпаривают на водяной бане до нескольких капель и наносят остаток на пластинку. Производят хроматографирование.
При хроматографировании расстояние точки нанесения от нижнего и бокового края пластинки должно составлять 8 мм, расстояние между точками насенения — 10 мм. Пробы и стандартные растворы (концентрация 500 мкг/мл) наносят с помощью микрошприца емкостью 10 мкл или калиброванных капилляров. Диаметр пятен не должен превышать 3 мм. На хроматограмме с 3 сторон снимают слой силикагеля шириной 0,5 см. После насенения проб и стандартных растворов к пластинке прикладывают стеклянную крышку, представляющую собой пластинку (6 х 6 см) с приклеенными с 3 сторон полосками (стеклянными) размером0,5х 5,5см. Скрепляют их резиновым кольцом и опускают в камеру для хроматографирования. Подвижным растворителем служит смесь н-гексана, метилового спирта и аммиака в соотношении 10 : 4 : 0,3. После поднятия растворителя на высоту 4 см пластинку вынимают, крышку снимают, сушат и опрыскивают 0,5% раствором дифениламина и хлористого цинка в ацетоне. Затем пластинку нагревают в сушильном шкафу 10 мин. при 130—140°. При наличии ПХП появляются голубовато-зеленые пятна.
Визуально сравнивают размер и интенсивность пятен стандартного раствора и пробы и определяют содержание пестицида в пробе. Расчет производят по формуле:
у /4 С
л ~ в'
где X — неизвестное содержание (в мг/кг); А — экспериментально найденное количество пестицида (в мкг)\ В — количество пробы (в г); С —
количество растворителя, прибавленного к сухому остатку, полученному после упаривания очищенного экстракта; О — аликвотная часть указанного выше растворителя, нанесенная на пластинку (в мл).
Если ПХП в пробе меньше 10 мкг, то на пластинку наносят весь остаток. Расчет производят по формуле:
обозначения X, А и В см. выше.
Полихлоркамфен (токсафен) можно определять по рассмотренной выше методике, так как ПХП и полихлоркамфен — родственные по химическому строению вещества. Если известно, что ДДТ и другие хлороргани-ческие пестициды отсутствуют в анализируемой пробе, то очищенный по приведенной выше схеме экстракт можно хроматографировать на пластинках размером 6x6 и 9х12сл« (проявляющий реактив — раствор азотнокислого серебра и аммиака в ацетоне).
ЛИТЕРАТУРА
Беленький Б. Г., Г а н к и н а Э.»С. В кн.: Физико-химические методы изучения анализа и фракционирования биополимеров. Под ред. Г. В. Самсонова. М., 1966, с. 287.
Поступила 13/IV 1970 г.
УДК 613.833:678.7]-07:в12.215.014.2 +61в.24-003.6в-02:678.7]-092.9
ОБ ОЦЕНКЕ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ ЛЕГКИХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ ПЫЛИ НЕКОТОРЫХ ПОРОШКОВЫХ ПОЛИМЕРОВ
Т. А. Кочеткова, О. И. Васильева, А. Д. Промыслова, А. Н. Сергеев Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
Литературные данные по изучению патогенных свойств порошковых полимеров (В. А. Урюпин, и др.), 4 полимеров группы полиолефинов (полиэтилена, полипропилена, политетрафторэтилена или фторопласта, полиформальдегида) и 2 смол (ВДУ и ВРС) на основе замещенного фенола, проведенные совместно с А. JI. Дюжевой1, В. С. Шведченко2, М. А. Кропоткиной и соавт. (1969), показывают, что при патоморфологических исследованиях органов дыхания, главным образом легких, и остальных внутренних органов подопытных животных (белых крыс) с применением общепринятых методик (окрашивание гематоксилин-эозином, пикрофуксином, турнбулевым синим и Суданом III, импрегнация серебром срезов легких) изменения имеют однотипный характер. На месте воздействия указанных видов пыли, т. е. в легких, развивается слабо или умеренно выраженный пневмокониоз узелковой или диффузно-склеротической формы (рис. 1) в зависимости от количества пыли, попавшей в легкие. Узелковая форма возникает, как правило, при однократном интратрахеальном введении взвеси 50 мг пыли, а межуточная — при ингаляционном воздействии исследуемых видов пыли в концентрации 300—400 мг/м3 длительностью 3—4 часа в течение 3—9 месяцев (с последующим восстановительным периодом продолжительностью 2—3 месяца). При этом «узелки», вернее клеточно-пылевые очажки, развиваются поздно, к концу наблюдения, т. е. к 9 месяцам, тогда как при массивном интратрахеальном поступлении пыли они хорошо видны через 3 месяца после ее введения (рис. 2).
1 Кандидатская диссертация. М., 1969.
! Там же. М., 1968.
