CC BY
5
УДК 614.31teiS.28S.7.074:543.544
ИЗ ОПЫТА РАБОТЫ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДДТ И ГЕКСАХЛОРАНА В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С ФЛЮОРЕСЦЕИНОМ
Г. И. Упорова, С. Ю. Штылер Областная санэпидстанция, Смоленск
Лаборатория областной санэпидстанции в основном занимается определением гексахлорана и ДДТ. В настоящее время ДДТ в область не завозится но в ряде случаев анализы на ДДТ дают положительные результаты. За 1967—1969 гг. исследовано на ДДТ и гексахлоран методом тонкослойной хроматографии больше 1000 проб различных продуктов.
В редисе, помидорах и крыжовнике ДЦТ и гексахлорана не обнаружено.
До 1967 г. мы пытались определять хлорорганические пестициды методами, описанными М. А. Клисенкс и Т. А. Лебедевой, но эти методы не давали удовлетворительных результатов. Метод тонкослойной хроматографии, разработанный М. А. Клисенко и 3. Ф. Юрковой для определения хлорорганическнх пестицидов, основан на извлечении препарата из исследуемой пробы н-гексаном, очистке экстракта концентрированной серной кислотой и последующем хроматографировании в тонком слое окиси алюминия или силикагеля. Подвижным растворителем служит к-гексан. Пятна определяемых веществ проявляют опрыскиванием пластин раствором аммиаката серебра в ацетоне и облучением УФ светом.
В нашей лаборатории эта методика сразу не приводила к желаемым результатам. Причиной тому было плохое качество используемых реактивов (силикагель, окись алюминия, гнпс, крахмал). Поэтому, не прекращая осваивать метод, мы одновременно применили в качестве хромагенного реактива флюоресцеин. Метод с применением флюоресцеина заключается в экстракции пестицидов органическими растворителями (н-гексаном, ацетоном, бензолом), очистке экстракта концентрированной серной кислотой и отгонке растворителя до объема 0,1—0,3 мл. Последний наносят на тонкий слой сорбента, содержащий флюоресцеин. Разведение пестицидов производят в «-гексане. Затем пластины освещают УФ светом. Количество пестицидов определяют визуально сравнением появившихся темно-фиолетовых пятен на желтовато-зеленом фоне со стандартом.
Для выполнения исследований необходимы стеклянные пластины размером 9X12 см, покрытые слоем сорбционной массы. Последнюю готовят следующим образом. 3 г медицинского гипса тщательно растирают в фарфоровой ступке с 30 г окиси алюминия для хроматографирования, вносят 50 мл 0,02% спиртового раствора флюоресцеина, все перемешивают и доводят спиртом до сметанообразной консистенции. Для ускорения сушки пластин мы пробовали вместо спирта брать хлороформ, при этом получали очень четкие хроматограммы, но сорбционный слой быстро осыпался, так что пластины нельзя было долго хранить. К тому же использование хлороформа нежелательно, так как он относится к профессионально вредным веществам. На пластину наносят около 15 г сорбционной массы (десертная ложка). Сушат при комнатной температуре в течение нескольких часов. Затем нужны: банки с притертой пробкой для экстракции емкостью 200 мл, делительные воронки емкостью 250 мл, мерные колбы на 100 или 50 мл, приборы для отгонки растворителя, камеры для хроматографирования (эксикатор), медицинские шприцы на 1 мл, бани водяные, аппарат для встряхивания, ртутно-кварцевая лампа, холодильник бытовой, терка, мясорубка.
Реактивы: н-гексан, ацетон, окись алюминия для хроматографирования или ч.д.а. безводная, гипс медицинский, спирт этиловый, флюоресцеин-натрий или флюоресцеин, стандартные растворы ДДТ и гексахлорана, содержащие по 10 мкг препарата в 1 мл эфира, диэтиловый эфир, бензол.
Определение ведется следующим образом.
1. Экстракция и очистка
А. .Молоко, сливки, кефир, простокваша, животные жиры. В делительную воронку берут 50 мл молока, кефира, простокваши, 20 г сливок, сметаны или животного жира. Небольшими порциями прн постоянном охлаждении водопроводной водой прибавляют 30—40 мл концентрированной серной кислоты до полного сжигания пробы (почернения). Пробу оставляют на 1—2 часа или до следующего дня. Затем пестициды экстрагируют дважды н-гексаном: 20 мл м-гексана вносят в делительную воронку, плавными движениями, избегая эмульсии, жидкости перемешивают и оставляют на 30 мин. для расслаивания. В случае образования эмульсии прибавляют 1—2 мл этилового спирта. Гексановые экстракты переносят во вторую делительную воронку и чистят концентрированной серной кислотой, для этого прибавляют около 10 мл кислоты и содержимое воронки перемешивают, через 30 мин. добавляют новую порцию кислоты. И так продолжают до тех пор, пока темно-бурый слой кислоты не обесцветится. Очищенный экстракт переносят в колбу прибора для отгонки растворителя. Отгонку производят до объема 0,1—0,3 мл.
Мы пробовали молочные продукты перед анализом сушить, а животные жиры определять как сливочное масло — первоначально экстрагировать ацетоном с водой, но остановились на описанном выше варианте как более быстром.
4 Гигиена и санитария JA 4
97
Б. Творог, сыр, фрукты, овощи, мясо, рыба, зерно. Пробы измельчают. 10 г сыра, 25 г мяса или рыбы, 50 г остальных продуктов заливают гексаном до полного покрытия пробы. 1 час встряхивают на приборе для встряхивания или оставляют анализ до следующего дня. Затем экстракт фильтруют в делительную воронку, чистят серной кислотой до объема 0,1—0,3 мл.
В. Масло сливочное, капуста, трава. 20 г масла или 50—100 г остальных продуктов заливают 50 мл ацетона. Масло предварительно растапливают. После перемешивания добавляют 10 мл ледяной воды и оставляют пробу на 30 мин. в испарителе холодильника или во льду. Полученную ацето-водную смесь фильтруют через небольшой кусочек ваты в колбу прибора для отгонки растворителя. Экстракцию повторяют. Ацетон отгоняют. Оставшийся водный экстракт переносят в делительную воронку, туда же добавляют 30 мл н-гек-сана. Несколько минут плавными движениями жидкости перемешивают и оставляют на 30 мин. для расслаивания. Затем водный слой сливают и повторяют экстракцию к-гексаном. Гексановые экстракты чистят и отгоняют, как описано выше.
Г. Вода, вино. 200 мл исследуемой жидкости помещают в делительную воронку емкостью 500—1000 мл и в течение 15 мин. перемешивают с 30 мл бензола. Экстракцию повторяют. Чистку производят серной кислотой. Затем сливают бензольные экстракты в колбу прибора для отгонки растворителя через воронку, на дно которой положен небольшой кусочек паты, покрытый слоем обезвоженного сернокислого натрия. Экстракт отгоняют до объема 0,1—0,3 мл.
2. Хроматографирование
В хроматографическую камеру не менее как за 30 мин. наливают гексанстакнм расчетом, чтобы помещенные в него пластины погружались не более чем на 0,5 сл.
Оставшийся после отгонки экстракт наносят шприцем на пластину с сорбционным слоем на расстоянии 1,5 см от узкого края ее (в случае, если выпарится весь растворитель, осадок растворяется в 0,1—0,3 мл эфира). Образующееся при этом пятно должно иметь диаметр не более 1 см. Рядом наносят в точку 2 стандартных раствора (ДДТи гексахлорана), содержащих по 1 мкг препарата. Пластины ставят под углом 80° в камеру для хрома-тографнровання. После того, как фронт растворителя поднимается приблизительно на 10 см, пластины вынимают и в течение 1 часа освещают УФ светом. Время освещения зависит от силы источника света. При наличии ДДТ и гексахлорана появляются темно-фиолетовые пятна на желтовато-зеленом фоне на одном уровне со стандартами. Сравнивая величину пятен и интенсивность их окраски со стандартом, определяют количество пестицида в пробе.
Метод позволяет обнаружить до 0,2 мкг ДДТ и 0,5 мкг гексахлорана в пробе.
Мы провели сравнение метода М. Л. Клисенко и 3. Ф. Юрковой с описанным выше. С этой целью различное количество ДДТ и гексахлорана вносили в молоко. Оказалось, что оба метода одинаково чувствительны и специфичны и дают точные результаты, если содержание пестицида в пробе не превышает 10 мкг.
Преимуществом метода с применением азотнокислого серебра является очень четкая хроматограмма — черные пятна на белом фоне; нет необходимости в такой тщательной очистке экстракта, как при работе с флюоресцеином. Но метод с азотнокислым серебром имеет ряд недостатков. Опрыскивание пластин производится ручным пульверизатором, поэтому качество опрыскивания зависит от искусства лаборанта и хорошей конструкции пульверизатора. Практика показала, что приобретение таких пульверизаторов лабораториями, не имеющими стеклодувных мастерских, представляет некоторую трудность. Недостатком опрыскивания являются, кроме того, неизбежные потери дорогостоящего азотнокислого серебра, так как оно расходуется с избытком. Проявляющий реактив должен готовиться в день анализа, потому что точно рассчитать потребность в нем невозможно.
Работа с такими вредными веществами, как ацетон и аммиак, требует дополнительного места в вытяжном шкафу, что вызывает дополнительную трудность. Кроме того, метод сложен тем, что он исключительно требователен к качеству реактивов (силикагеля, окиси алюминия, гипса).
Метод с применением флюоресцеина технически прост, «не капризен» в отношении реактивов, исключает применение ацетона и аммиака, не требует использования пульверизатора и камеры для опрыскивания в вытяжном шкафу. Правда, и этот метод имеет недостатки: необходима исключительно тщательная очистка экстракта; хроматограмма получается не такая четкая, как при использовании азотнокислого серебра.
Учитывая положительные и отрицательные стороны метода с применением азотнокислого серебра и флюоресцеина, мы пришли к выводу, что для определения ДДТ и гексахлорана, помимо метода М. А. Клисенко и 3. Ф. Юрковой, в некоторых случаях может быть успешно использован метод с флюоресцеином.
При работе с азотнокислым серебром рациональнее вносить его в сорбционный слой при приготовлении пластин, исключив пульверизацию. Пластины готовить по следующему рецепту: 50 г окиси алюминия, 5 г медицинского гипса и 75 мл 0,1% водного раствора азотнокислого серебра. На такие пластины нужно наносить стандарты и пробы, затем выдерживать в хроматографической камере и облучать УФ светом. Тем самым отпадает необходимость в опрыскивании.
ЛИТЕРАТУРА
К л и с е н к о М. А., Ю р к о в а 3. Ф. Гиг. и сан., 1967, № 10. с. 59.
Поступила 4/1 1970 г-
