CC BY
63
Для корреспонденции
Ворожко Илья Викторович - кандидат медицинских наук, научный сотрудник лаборатории клинической биохимии, иммунологии и аллергологии ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии»
Адрес: 115446, г. Москва, Каширское шоссе, д. 21 Телефон: (499) 613-16-15 E-mail: bio45@inbox.ru
И.В. Ворожко1, И.Н. Скидан2, О.О. Черняк1, А.Е. Гуляев3
Современные тренды изучения полиморфизма генов, кодирующих белки козьего молока
1 ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии», Москва
2 Компания «Бибиколь РУС», Московская область, Мытищи
3 Центр наук о жизни «Назарбаев Университет», Астана, Казахстан
1 Federal Research Centre of Nutrition, Biotechnology and Food Safety, Moscow
2 Bibicall-RUS Ltd., Moscow Region, Mytishchi
3 Center for Life Sciences «Nazarbayev University», Astana, Republic of Kazakhstan
В обзоре представлены данные о генотипической неоднородности популяции коз, которая на молекулярном уровне проявляется в виде полиморфизма генов белков молока. Полиморфные гены, представленные в популяции гетерогенными аллелями, обусловливают широкое разнообразие химического состава и технологических свойств козьего молока. Обобщены данные литературы об основных особенностях генов, кодирующих белки козьего молока. Подчеркнуто, что козье молоко, особенно определенных пород коз, ввиду ряда присущих этому продукту свойств, приобретенных вследствие генетического полиморфизма, должно иметь особое значение при создании новых функциональных продуктов для питания детей.
Ключевые слова: козье молоко, полиморфизм белков, дети раннего возраста, адаптированные смеси
Использование в детском питании козьего молока и продуктов на его основе предусматривает оценку его безопасности, пищевой и биологической ценности. При этом сведения о переносимости белков козьего молока, выморочность применения научной информации или использование неточных или устаревших данных зачастую приводят к неоднозначным выводам, что в ряде случаев искажает реальную значимость этого пищевого продукта. Особенно актуальна в этом отношении острая дискуссия вокруг возможности использования формул на основе козьего молока в рационе питания детей с отягощенной наследственностью по аллергическим заболеваниям или детей c пищевой аллергией. В настоящем обзоре сделана попытка обобщить имеющиеся данные литературы, касающиеся основных особенностей компонентов козьего молока, способных оказывать лечебно-профилактическое воздействие. Описан феномен генетического полиморфизма коз, который характеризуется существованием в популяции множественных вариантов
Modern trends in study of polymorphism of genes encoding goat's milk proteins
I.V. Vorozhko1, I.N. Skidan2, O.O. Chernyak1, A.E. Gulyaev3
This review emphasises the genotypical heterogeneity of the population of goats, which at the molecular level is manifested in the form of gene polymorphism in the milk proteins. Polymorphic genes, represented in the population of heterogeneous alleles, cause a wide variance in the chemical composition and processing properties of goat milk. We summarized the literature about the main features of genes encoding proteins of goat milk. It is stressed that goat's milk, due to genetic polymorphism has a great value when creating a new functional food product for children. Keywords: goat milk, protein polymorphism, infants, infant formulas
генов (аллелей) белков молока, обусловливающих разнообразие его химического состава и технологических свойств, что важно для создания инновационных функциональных пищевых продуктов.
Белковый состав молока
С физико-химической точки зрения молоко представляет собой сложную полидисперсную систему, состоящую из трех основных частей: органической (в том числе белков, жиров, углеводов, нуклеиновых кислот, жироподобных веществ, группы низкомолекулярных органических соединений разнообразной химической природы - витаминов), минеральной (в том числе ионов металлов, солей неорганических и органических кислот) и водной. Химический состав грудного молока (ГМ) и молока сельскохозяйственных животных непостоянен и зависит от ряда факторов. В частности прослежена взаимосвязь между составом коровьего и козьего молока и породой животных, ареалом обитания, сезонностью, периодом лактации, составом корма, условиями содержания и др. На примере зааненской породы коз (Saanen goats) в табл. 1 представлены основные физико-химические показатели молока.
В молоке млекопитающих насчитывают сотни различных видов белков, причем большинство из них присутствуют в очень низких концентрациях. Белки молока условно делят на 2 группы: основные белки - казеины и сывороточные белки и белки, входящие в состав мембран компонентов молока (в том числе жировых глобул и соматических клеток). Коровье и козье молоко состоит из 4 основных видов казеина: аБ1-, аБ2-, р- и к-казеин, кроме того, может обнаруживаться у-казеин (у1-, у2-, и у3-казеины), который является продуктом деградации р-казеина [2]. Основными казеинами ГМ являются р-казеин и к-казеин. В литературе нет сообщений о присутствии аБ2-казеина в ГМ, а аБ1-казеин обнаруживают в очень низких (следовых) концентрациях [3-4]. Наиболее представленными белками молочной сыворотки у коров и коз являются а-лактальбумин, р-лактоглобу-лин, иммуноглобулины и бычий сывороточный альбумин. Менее представленными - лактопероксидаза, лизоцим, лактоферрин, гликомакропептиды [5]. В составе сывороточных белков ГМ преобладает а-лактальбумин
и отсутствует р-лактоглобулин. Отличительной особенностью молока определенных пород коз, например за-аненской породы коз из Новой Зеландии, от коровьего молока являются более низкое содержание aSI-казеина и р-лактоглобулина и более высокие концентрации р-казеина [6].
Полиморфизм основных белков и других компонентов козьего молока
Известно, что гены, кодирующие основные белки молока, ассоциированы с его коагуляционными свойствами, показателями пищевой ценности и формированием молочной продуктивности у сельскохозяйственных животных [7-10]. Среди молочных животных генам белков козьего молока свойственен один из наиболее высоких уровней изменчивости (полиморфизма), явившейся результатом естественного отбора и/или направленных селекционных процессов в животноводстве. Наиболее важным результатом генетического полиморфизма у коз является изменение продукции некоторых основных белков молока. Наиболее охарактеризован с этой точки зрения aSI-казеин, кодируемый геном CSN1S1 [10-13]. У гена CSN1S1 выявлено по меньшей мере 17 структурных (аллельных) вариантов: A, B1, B2, B3, B4, C, D, E, F, G, H, I, L, M, 01, 02, N. Аллельные изоформы гена CSN1S1, в зависимости от вырабатываемого aS1-казеина, делят на 4 типа: высокие ~3,5 г/л (A, B1, B2, B3, B4, C, H и L), средние ~1,1 г/л (E и I), низкие ~0,45 г/л (D, F и G) или нулевые (01, 02 и N) [11, 14]. При характеристике генотипа коз также часто используется термин «сильные аллели», что соотносится с высокой выработкой aS1-казеина. Сильные аллели чаще всего встречаются у пород коз, обитающих в странах Южной и Западной Европы (Испания, Италия, Франция и др.). Существуют также средние или слабые аллели, которые, например, широко встречаются у коз, содержащихся на фермах в Новой Зеландии и Бразилии [14-16]. Помимо гена CSN1S1 охарактеризовано как минимум 9 аллельных вариантов (A, B, C, D, E, F, 0, sub A и sub E) у гена CSN1S2 (aS2-казеин), 8 аллельных вариантов (A, A1, O', O, B, C, D и E) у гена CSN2 (р-казеин) и 16 аллельных вариантов (A, B, B', B'', C, C', D, E, F, G, H, I, J, K, L и M) у гена CSN3 (к-казеин) [10-11]. Генам, кодирующим белки сыворотки молока, также свойственен полиморфизм, однако этот феномен для данной группы белков недостаточно изучен.
У коз основные типы казеинов кодируются генами, тесно сцепленными в едином кластере, локализованном на шестой хромосоме [17-18]. Кластер казеинов занимает участок 250-350 т.п.н., в котором aS1-казеин, aS2-казеин и р-казеин связаны друг с другом эволюци-онно (рис. 1) [19-20].
Эти казеины характеризуются сходной молекулярной массой (~24-25 кДа), промоторными участками, последовательностями лидерного пептида и участками фосфорилирования. С другой стороны, к-казеин эво-
Таблица 1. Основные физико-химические показатели козьего молока (зааненская порода коз) [1]
Показатель Содержание
Общий белок (г/100 г) 3,15 (±0,01)
Лактоза (г/100 г) 4,85 (±0,01)
Жир (г/100 г) 3,55 (±0,01)
Вода (г/100 г) 88,39 (±0,08)
Минеральные вещества (г/100 г) 0,68 (±0,05)
Плотность при 20 °С (г/см3) 1,03 (±0,08)
Кислотность, °Т (г/100 г) 0,17 (±0,01)
люционно не относится к перечисленным выше белкам и отличается в основном особенностью организации 5'-фланкирующей области [11, 17].
При активации аллельных генов возможен синтез различных концентраций ав1-казеина в козьем молоке. Если аллели с 08Ы181 -генотипом находятся в гомозиготном состоянии, то вырабатывается максимальный уровень ав1-казеина в молоке, т.е. примерно от 5 до 10 г/л [11-12, 17, 21]. Так называемый нулевой генотип, или, другими словами, отсутствие ав1-казеина в молоке, у некоторых пород коз означает, что основными ав-казеинами у данной породы коз являются р-казеин, ав2-казеин и к-казеин. Встречаемость аллель-ных вариантов гена 08Ы181 у коз может быть различной. При этом даже в пределах одной породы коз наблюдается широкое их разнообразие, что свидетельствует о присутствии ав1-казеина в молоке в широком диапазоне концентраций. Известно, что нулевой аллельный вариант по ав1-казеину присутствует в значительном проценте случаев у зааненской породы коз, которая широко представлена в Новой Зеландии [21].
Полиморфизм 08М81 влияет как на количество общего белка в козьем молоке, так и на соотношение его основных белковых фракций. Влияние аллельных вариантов 08Ы181 на белковый компонент козьего молока можно объяснить ключевой ролью этого гена в транспортировке казеинов из эндоплазматического ретикулума в аппарат Гольджи в секреторных клетках молочных желез [22].
Казеины молока представлены в виде коллоидных частиц сферической формы, так называемых казеиновых мицелл [23]. Казеиновые мицеллы молока выступают в качестве основных переносчиков кальция и других макроэлементов в организме млекопитающих. При этом мицеллы как основная форма присутствия казеинов в молоке сельскохозяйственных животных и человека существенно отличаются по своим физико-химическим свойствам друг от друга. Например, казеиновые мицеллы козьего молока отличаются от одноименных мицелл коровьего молока своим размером, скоростью оседания (седиментации), стабильностью по отношению к действию высоких температур, количеством солюби-лизированного в мицеллы р-казеина, а также количеством кальция, фосфора и других минеральных веществ в составе мицелл [24]. Установлено также, что ген 08Ы181 ассоциирован с изменением структуры и функции казеиновых мицелл [24]. В случае аллельных вариантов А, В2 и С, которые ассоциированы с высокой выработкой ав1-казеина, средний диаметр мицелл меньше, чем у коз с так называемым нулевым генотипом - ал-лельным вариантом О. Интересно отметить, что существует прямая корреляция между размером казеиновой мицеллы и содержанием кальция в ее составе [25]. Некоторые авторы отмечают более высокую корреляцию между размером казеиновых мицелл и соотношением ав1-казеина к к-казеину в козьем молоке, чем размером казеиновых мицелл или генетическим полиморфизмом 08Ы181 [24]. В другой работе описано состояние, когда
-<-250 п.н.->-
ЧО^Ш-loS^-l±J-
Экзоны 19 9 18 5
A. A. 199 207 208 171
SER P 7/9 3/6 9/11 2/3
SH - - 2 3
Сахар - - - +
Рис. 1. Кластер казеинов козьего молока (геномная организация) [11]
А.А. - аминокислоты; SER P - фосфосерин; SH-группы - сульф-гидрильные группы (тиоловые группы) аминокислот; п.н. - пары нуклеотидов.
aSI-казеин выступает в качестве своеобразного якоря на поверхности казеиновой мицеллы для других белков молока, таких, например, как ß-лактоглобулин [26]. Поверхностное связывание мицелл с ß-лактоглобули-ном может снижать переваривание последнего ферментами пищеварительного тракта.
Другим наиболее важным аспектом полиморфизма CSN1S1 и, в частности, его «нулевых» аллельных вариантов является переформатирование внутриклеточной секреции и транспорта жировых глобул молока (ЖГМ), а также изменения в их составе [27-29]. Данные свидетельствуют о том, что размер и Z-потенциал ЖГМ может существенно зависеть от aSI-казеинового генотипа. Козы с «сильным» A/A-аллельным вариантом гена CSN1S1 продуцируют более крупные ЖГМ, чем козы с «нулевым» (О/О) вариантом этого гена [30]. Показано, что количество полярных (функциональных) липидов в составе мембраны жировой глобулы молока (МЖГМ) значительно выше у коз с «нулевым» (О/О) генотипом для aSI-казеина (5,97±0,11 мг/г) по сравнению с МЖГМ у коз с А/А-генотипом (3,96±0,12 мг/г). При этом как минимум 2 биологически активных белка в составе МЖГМ: лактадгерин и стоматин, - значительно активированы у коз с О/О-генотипом [28].
Установлено также влияние полиморфизма белков на соотношение жирных кислот в козьем молоке. При сравнении профиля жирных кислот у коз с различными аллельными вариантами CSN1S1 выявлена существенная разница в соотношении 17 жирных кислот, в том числе жирных кислот фракции С8-С12, а также пальмитиновой кислоты, стеариновой кислоты, линолевой кислоты и конъюгированной линолевой кислоты [28]. У коз, продуцирующих молоко с низким содержанием aS1-казеина, отмечено снижение общего жирового контента и среднецепочечных фракций жирных кислот с длиной углеродной цепи в 8-12 углеродных атомов, т.е. каприловой, каприновой, лауриновой [28-29]. По-видимому, полиморфизм aS1-казеина влияет на интенсивность процессов липогенеза в секреторных клетках молочной железы и Д9-десатуразной активности, являющейся важнейшим фактором текучести клеточных мембран. Установлено, что так называемые слабые аллели CSN1S1 негативно влияют на экспрессию генов GPAM
Таблица 2. Соответствие аминокислот в полипептидной цепи у основных белков козьего молока по сравнению с коровьим молоком [36]
Таблица 3. ProtScale-анализ индивидуальных аминокислот, входящих в состав аS1 - и аS2-казеина коровьего и козьего молока [38]
П р и м е ч а н и е. * - общее количество аминокислот в белке принимается за 100%.
и FAS - двух основных генов, участвующих в начальном этапе биосинтеза триглицеридов [31] и эндогенном биосинтезе коротко- и среднецепочечных жирных кислот [32] соответственно. Изучается влияние полиморфизма гена CSN1S1 на биосинтез и секрецию оли-госахаридов козьего молока, которые могут рассматриваться в качестве естественных пребиотиков молока. Однако в настоящее время не удалось установить четкую взаимосвязь между аллельными вариантами гена CSN1S1 (например, генотипом А/А и О/О) и количеством/качеством синтезируемых олигосахаридов козьего молока [33].
Иммунологическая характеристика основных белков козьего молока
Наиболее важными клинически значимыми аллергенами коровьего молока являются а-лактальбумин, ß-лактоглобулин и казеины, в частности aSI-казеин [34-35]. При этом сенсибилизация организма может возникнуть в результате контакта с одним или несколькими белками молока. Частота сенсибилизации к основным фракциям белка коровьего молока (БКМ), по данным различных авторов, варьирует в широком диапазоне, что можно объяснить отсутствием унифицированных клинико-лабораторных методов диагностики аллергии в разных странах [36, 37].
Согласно современным представлениям, пищевая аллергия также может быть результатом перекрестной сенсибилизации белков молока разных видов животных, когда специфическая молекулярная область на поверхностных эпитопах одного белка гомологична другому белку и/или трехмерная структура белков схожа в способности связываться со специфическими антителами. Наиболее близко по антигенному составу молоко молочных животных - крупного (корова) и мелкого (коза) рогатого скота. В целом феномен перекрестной реактивности отражает эволюционную взаимосвязь между этими животными и одновременно консерватизм различных видов белков молока. Выявлена высокая схожесть аминокислотного профиля основных белков молока у различных видов млекопитающих (табл. 2), из данных которой следует, что гомология белков сыворотки коровьего и козьего молока, в частности у a-лактальбумина и ß-лактоглобулина, довольно высока - 95%, а у казеинов - 85-89%. В связи с чем в рекомендациях некоторых экспертов позиционируется принцип необходимости элиминации (исключения) из питания всего класса молочных продуктов у детей с аллергией к БКМ. Однако в настоящее время этот вопрос остается дискутабельным.
Известно, что белки молока характеризуется определенной последовательностью аминокислот в полипептидной цепи с определенными участками связывания (эпитопами) и пространственной структурой для избирательного взаимодействия с лигандами [38]. Взаимодействие лиганда с эпитопом обусловлено комплемен-
Белок молока Соответствие, %*
ß-Лактоглобулин 95
a-Лактальбумин 95
aS1-казеин 88
aS2-казеин 88
ß-Казеин 89
к-Казеин 85
Примечани е. * - последовательность аминокислот в молекуле каждого белка коровьего молока принимается за 100%.
Белок aS1-казеин*
аминокислота коровье молоко козье молоко
Ala (A) 5,6 7,0
Arg (R) 2,8 3,3
Asn (N) 3,7 5,1
Asp (D) 3,3 3,3
Cys (C) 0,5 0,5
Gln (Q) 6,5 6,5
Glu (E) 11,7 9,3
Gly (G) 4,2 4,2
His (H) 2,3 1,9
Ile (I) 5,6 5,6
Leu (L) 10,3 10,3
Lys (K) 7,0 6,5
Met (M) 2,8 2,8
Phe (F) 3,7 3,3
Pro (P) 7,9 8,9
Ser (S) 7,5 8,4
Thr (T) 2,8 2,8
Trp (W) 0,9 0,9
Tyr (Y) 4,7 5,1
Val (V) 6,1 5,1
Белок aS2-казеин*
Ala (A) 5,0 5,4
Arg (R) 2,7 3,6
Asn (N) 6,3 5,8
Asp (D) 1,8 2,2
Cys (C) 1,4 1,3
Gln (Q) 7,2 7,2
Glu (E) 10,8 10,8
Gly (G) 0,9 0,9
His (H) 1,4 2,2
Ile (I) 5,4 6,3
Leu (L) 7,2 5,8
Lys (K) 11,3 11,2
Met (M) 2,3 2,2
Phe (F) 4,1 4,5
Pro (P) 4,5 5,4
Ser (S) 7,7 6,3
Thr (T) 7,2 6,7
Trp (W) 0,9 1,3
Tyr (Y) 5,4 5,4
Val (V) 6,8 5,4
тарностью, т.е. их соответствием. В табл. 3 представлен спектр аминокислот (Рго1вса!е-анализ), входящих в состав ав1-казеина и ав2-казеина коровьего и козьего молока, отличающихся по составу аминокислот и вторичной структуре белков.
На рис. 2 представлен пример конформационных и линейных эпитопов в молекулах основных белков молока. При этом доказано, что изменение структуры молекул антигенов в результате, например, переработки молока-сырья может приводить к разрушению различных центров связывания белков (эпитопов) и, как следствие, утрате и (или) снижению их антигенных свойств [39-41].
Известно, что 1дЕ-опосредованные иммунные реакции рассматриваются как ведущие в патогенезе аллергических заболеваний, а линейные эпитопы в большей степени играют важную роль в патогенезе аллергии к БКМ при 1дЕ-опосредованных иммунных реакциях. Ряд исследований демонстрирует положительную взаимосвязь между линейными эпитопами антигенов молока и высокой вероятностью персистирования аллергии. Различные последовательности аминокислот в эпитопах, способные связываться с 1дЕ-антитела-ми, принято называть 1дЕ-связывающими эпитопами. В основном это короткие фрагменты, которые широко представлены в гидрофобной части молекулы белка. Известно также, что эпитопы белков молока состоят из остатков аминокислот с очень консервативной последовательностью. Консерватизм состава эпито-пов предопределяет высокую 1дЕ-кросс-реактивность с соответствующими антигенами молока [42-44]. Определено большое количество линейных 1дЕ-связыва-ющих эпитопов у ав1-, ав2-, р- и к-казеинов, а также у а-лактальбумина и р-лактоглобулина (табл. 4).
В последние годы активно изучаются как 1дЕ-, так и IgG-связывающие эпитопы. Например, у пациентов с персистирующим течением атопического дерматита 7 1дЕ- и 6 IgG-связывающих эпитопов определены в полипептидной цепи р-лактоглобулина [44]. С появлением методов определения специфических участков связывания на поверхности белковых молекул открылись новые возможности для селективного и структурного изучения их как антигенных детерминантов. В пилотном исследовании ¡п эШео показано, что генетическая вариабельность полиморфных систем белков козьего молока может существенно влиять на структуру 1дЕ-связывающих эпитопов белков [45]. В другой работе протестирована гипотеза о том, что мутация (полиморфизм) генов может приводить к изменению фосфорилирования, которое, в свою очередь, способствует изменению свойств определенных белков молока, что способно влиять на их иммуногенную реактивность [46]. При этом 1дЕ-ответ на казеины был значительно снижен вследствие модификации или удаления основных мест фосфорилирования специфических участков в полипептидной цепи белковых молекул. Отсутствие у пациентов 1дЕ-реактивности к белкам молока одного вида сельскохозяйственных
животных по сравнению с молоком других видов животных может означать, что эпитопы, участвующие в связывании с IgE, отличаются друг от друга степенью фосфорилирования [47]. В недавно опубликованной работе по изучению антигенсвязывающих участков на поверхности различных генетических вариантов казеинов молока различных животных установлена значительная разница в их иммунном ответе [46]. Несмотря на то что эпитопы aS1- и р-казеина козьего молока имели более низкую иммунореактивность по сравнению с коровьим молоком, в некоторых случаях было обнаружено более высокое или эксклюзивное их связывание с молекулой IgE. В качестве примера представлены IgE-связыва-ющие эпитопы aSI-казеина коровьего молока и их сравнение с соответствующим белком козьего молока (представлены полиморфные варианты A, B, C, D, E и F) (табл. 5).
В настоящее время предприняты только первые шаги в рамках исследований по изучению взаимосвязи между полиморфизмом белков козьего молока и их аллергенным потенциалом. В этой связи перспективным является сравнительное in vivo исследование, основанное на изучении влияния диеты, содержащей белки коровьего и козьего молока с высоким или низким уровнем aSI-казеина, на развитие сенсибилизации к белкам молока у морских свинок с моделью аллергии к БКМ [49]. У животных, получавших корм на основе козьего молока с низким содержанием aSI-казеина, определено значительно более низкое количество специфических IgGI-антител к р-лактоглобулину, чем у животных с вариантом диеты, содержащей высокие концентрации aSI-казеина в молоке (среднее значение титра IgGI-антител - 546 против 2046 соответственно). Кроме этого, наблюдалось снижение времени наступления анафилаксии в случае назначения диеты с высоким уровнем aSI-казеина по сравнению с вариантом диеты
Конформационные эпитопы
¡ Линейные Г-эпитопы ';
У Y
Инактивированные Активные линейные эпитопы конформационные эпитопы
Рис. 2. Конформационные и линейные эпитопы основных белков молока
Конформационные эпитопы часто повреждаются в результате переработки молока-сырья (температурное воздействие, низкий уровень рН, ферментная обработка), тогда как линейные эпитопы проявляют большую стабильность [39].
Нагревание Ферменты Низкий pH
Таблица 4. Участки аминокислотных последовательностей у 1дЕ-связывающих эпитопов основных белков молока козы и коровы, определенные при помощи БРОТ-теста (А) или диагностических тест-систем, основанных на технологии микрочипов (В) [43]
Белок ^-связывающие эпитопы (АА позиция) Метод определения
аБ1-казеин 17-36, 39-48, 69-78, 83-102, 109-120, 123-132, 139-154, 159-174, 173-194 28-50 49-62 А, В В В
аБ2-казеин 31-44, 43-56, 83-100, 93-108, 105-114, 117-128, 143-158, 157-172, 165-188, 191-200 1-20, 13-32, 67-86, 181-207 69-77 А, В В В
р-Казеин 1-16, 45-54, 55-70, 83-92, 107-120, 135-144 149-164, 167-184, 185-208 25-50, 52-74, 154-173 16-39 А, В А, В В
к-Казеин 9-26, 21-44, 47-68, 67-78, 95-116, 111-126 137-148, 149-166 А, В В
а-Лактальбумин 34-53 1-16, 13-26, 47-58, 93-102 1-19, 15-34, 105-123, 45-64, 60-79, 90-109 А В А, В
р-Лактоглобулин 1-16, 31-48, 47-60, 67-78, 75-86, 127-144, 141-152 58-77, 106-119 А, В В
Таблица 5. 1дЕ-связывающие эпитопы аБ1-казеина коровьего молока и их сравнение с соответствующим белком козьего молока [48]
Эпитопы aS1-казеина коровьего молока Последовательность и замена аминокислот в эпитопах коровьего и козьего молока
1-й большой МЕ1\11_1_ВРРУАРРРЕУР6КЕК ----V.....^м.......
3-й большой 1.Е 1 УР^АЕЕШ ----К • • 0----
4-й большой МС1Е1_АУРУРЕ1_РРС1Р .....0.........
5-й большой У Р Б в А\/УУ У\/Р1_6ТС1У • • • • 1..........
3-й малый МК Е в 1Н А00 К • • N Р • Н • • • •
П р и м е ч а н и е. ••• - участки без замены на другие аминокислоты.
без данного белка. В другой работе показано, что аллергенный потенциал козьего молока может зависеть от полиморфизма гена 08М82, направленного на контроль синтеза аБ2-казеина. В частности аллельные варианты А, В, С, Е и F этого белка имели более высокий аллергенный потенциал по сравнению с вариантами D и О [50]. Таким образом, в настоящее время появляется все больше информации о том, что генетические варианты основных белков молока имеют разный иммуно-генный потенциал.
Заключение
Клиническая практика применения продуктов на основе козьего молока способствует появлению новых данных о структурных особенностях белков козьего молока, их эпигенетики и аминокислотном составе. Хотя в настоящее время нельзя в полной мере выделить вклад генетического полиморфизма в изменение иммунологических характеристик основных белков молока, изучение этого феномена у коз с выявлением специфических аллельных вариантов, влияющих на количественное и
качественное изменение в составе молока, способствует созданию продуктов, обладающих сниженным аллергенным потенциалом. Примером может служить ряд продуктов на основе молока зааненской породы коз из Новой Зеландии.
Научная информация о влиянии генетического полиморфизма на иммуногенность конкретных белков козьего молока или переносимость продуктов на их основе является далеко не полной, но тем не менее для создания детских молочных смесей со сниженным аллергенным потенциалом показана перспективность использования молока-сырья от коз с определенными генетическими вариантами белков.
Комплексный подход, основанный на учете совокупности данных о возможных причинно-значимых аллергенах, генетической предрасположенности, а также персонализированном подходе к назначению питания детей, с одной стороны, и использовании современных способов переработки молока-сырья, его отбора на основании молекулярно-генетического анализа -с другой, позволяет достичь определенных результатов в создании пищевых продуктов с низким аллергенным потенциалом.
Сведения об авторах
Ворожко Илья Викторович - кандидат медицинских наук, научный сотрудник лаборатории клинической биохимии, иммунологии и аллергологии ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва) E-mail: bio45@inbox.ru
Скидан Игорь Николаевич - кандидат медицинских наук, руководитель научного отдела компании ООО «Бибиколь РУС» (Московская область, Мытищи) E-mail: med_adviser@bibicall.ru
Черняк Ольга Олеговна - кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории клинической биохимии, иммунологии и аллергологии ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва) E-mail: klinikakashir@yandex.ru
Гуляев Александр Евгеньевич - доктор медицинских наук, профессор, ведущий научный сотрудник Центра наук о жизни «Назарбаев Университет» (Астана, Республика Казахстан) E-mail: akin@mail.ru
Литература
1. da Costa W.K.A., de Souza E.L., Beltrao-Filho E.M., Vasconcelos G.K.V. et al. Comparative protein composition analysis of goat milk produced by the Alpine and Saanen Breeds in Northeastern Brazil and related antibacterial activities // PLOS One. 2014. Vol. 9, N 3. Article ID e93361.
2. Miller M.J.S, Witherly S.A, Clark D.A. Casein: a milk protein with diverse biologic consequences // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1990. Vol. 195. P. 143-159.
3. Altendorfer I., Konig S., Braukmann A., Saenger T. et al. Quantification of aS1-casein in breast milk using a targeted mass spectrometry-based approach // J. Pharm. Biomed. Anal. 2014. Vol. 103. P. 52-58.
4. Petermann K., Vordenbaumen S., Maas R., Braukmann A. et al. Autoantibodies to aS1-Casein Are Induced by Breast-Feeding // PLoS One. 2012. Vol. 7, N 4. Article ID e32716.
5. Farrell H.M., Jimenez-Flores R., Bleck G.T., Brown E.M. et al. Nomenclature of the proteins of cows' milk-sixth revision // J. Dairy Sci. 2004. Vol. 87. P. 1641-1674.
6. Проссер К. Состав детских формул на основе козьего молока, результаты клинической эффективности и безопасности их применения у детей // Рос. вестн. перинатол. и педиатр. 2013. № 5. С. 15-22.
7. Strzalkowska N.K., Lech J.Z., Zofia R. Effect of K-casein and B-lactoglobulin loci polymorphism, cows age, stage of lactaition and somatic cell count on daily milk yield and milk composition in Polish Black and White cattle // Anim. Sci. Paper Rep. 2002. Vol. 20, N 1. P. 21-35.
8. Ng-Kwai-Hang K.F. A review of the relationship between milk protein polymorphism and milk composition/milk production // Proceedings of the IDF Seminar «Milk Protein Polymorphism», Palmerston North, New Zealand. International Dairy Federation. Brussels, 1997. P. 22-37.
9. Ng-Kwai-Hang K.F. Genetic polymorphism of milk proteins: relationships with production traits, milk composition and technological properties // Can. J. Anim. Sci. 1998. Vol. 78. P. 131-147.
10. Хаертдинов Р.А. Содержание белков в молоке коров бестужевской породы с различными генотипами по альфа-S 1, бета-, каппа-казеинам и бета-лактоглобулину // Сельскохозяйственная биол. 1988. № 5. C. 71-75.
11. Marletta D., Criscione A., Bordonaro S., Guastella A.M., D'Urso G. Casein polymorphism in goat's milk // Lait. 2007. Vol. 87. P. 491-504.
12. Selvaggi M., Laudadio V., Dario C., Tufarelli V. Major proteins in goat milk: an updated overview on genetic variability // Mol. Biol. Rep. 2014. Vol. 41, N 2. P. 1035-1048.
13. Ollier S., Chauvet S., Martin P., Chilliard Y., Leroux C. Goat's aS1-casein polymorphism affects gene expression profile of lactating mammary gland // Animal. 2008. Vol. 2, N 4. P 566-573.
14. Grosclaude F., Martin P. Casein polymorphism in the goat, IDF seminar «Milk Protein Polymorphism II». Palmerston North, 1997. P. 241-253.
15. Jordana J., Amills M., Diaz E., Angulo C. et al. Gene frequencies of caprine as1-casein polymorphism in Spanish goat breedsn // Small Ruminant Res. 1996. Vol. 20. P. 215-221.
16. Enne G., Feligini M., Greppi G.F., lametti S., Pagani S. Gene frequencies of caprine as1 -casein polymorphism in dairy goats, IDF seminar «Milk Protein Polymorphism II». Palmerston North, 1997. P. 275-279.
17. Rijnkels M. Multispecies comparison of the casein gene loci and evolution of casein gene family // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2002. Vol. 7. P. 327-345.
18. Kupper J., Chessa S., Rignanese D., Caroli A., Erhardt G. Divergence at the casein haplotypes in dairy and meat goat breeds // J. Dairy Res. 2010. Vol. 77. P. 56-62.
19. Ferretti L., Leone P., Sgaramella V. Long range restriction analysis of the bovine casein genes // Nucleic Acids Res. 1990. Vol. 18. P. 6829-6833.
20. Threadgill D.W., Womack J.E. Genomic analysis of the major bovine casein genes // Nucleic Acids Res. 1990. Vol. 18. P. 6935-6942.
21. Greppi G.F., Roncada P., Fortin R. Protein components of goat's milk // Dairy Goats Feeding and Nutrition. 2 ed. ed. / eds G. Pulina, A. Cannas. Bologna : CAB International, 2008. P. 71-94.
22. Chanat E., Martin P., Ollivier-Bousquet M. aS1-casein is required for the efficient transport of ß- and K-casein from the endoplasmic reticulum to the Golgi apparatus of mammary epithelial cells // J. Cell Sci. 1999. Vol. 112, N 19. P. 3399-3412.
23. de Kruif C.G., Huppertz T., Volker S., Urban A., Petukhov V. Casein micelles and their internal structure // Adv. Colloid Interface Sci. 2012. Vol. 171-172. P. 36-52.
24. Pierre A., Francoise M., Le Grant Y., Zahoute L. Casein micelle size in relation with casein composition and as1, as2 and K casein contents in goat milk // Lait. 1998. Vol. 78. P. 591-605.
25. Remeuf F. Influence du polymorphisme gene tique de la case ine alpha-s1 caprine sur les caracte ristiques physico-chimiques et technologiques du lait // Lait. 1993. Vol. 73. P. 549-557.
26. Lara-Villoslada F., Olivares M., Jimenez J., Boza J. et al. Goat milk is less immunogenic than cow milk in a murine model of atopy // J. Pediatr. Gastroenterol. 2004. Vol. 39. P. 354-60.
27. Parc A.L., Leonil J., Eric Chanat E. aS1-casein, which is essential for efficient ER-to-Golgi casein transport, is also present in a tightly membrane-associated form // BMC Cell Biol. 2010. Vol. 11. P. 65.
28. Chilliard Y., Rouel J., Leroux M. Goat's alpha-s1 casein genotype influences its milk fatty acid composition and delta-9 desaturation ratios // Anim. Feed Sci. Technol. 2006. Vol. 131, N 3. P. 474-487.
29. Silanikove N., Leitner G., Merin U., Prosser C. Recent advances in exploiting goat's milk: quality, safety and production aspects // Small Rumin. Res. 2010. Vol. 89. P. 110-124.
30. Cebo С., Caillat Р., Bouvier F., Martin P. Major proteins of the goat milk fat globule membrane // J. Dairy Sci. 2010. Vol. 93. P. 868-876.
31. Coleman R.A., Lewin T.M., Muoio D.M. Physiological and nutritional regulation of enzymes of triacylglycerol synthesis // Annu. Rev. Nutr. 2000. Vol. 20. P. 77-103.
32. Smith S. The animal fatty acid synthase: one gene, one polypeptide, seven enzymes // FASEB J. 1994. Vol. 8, N 15. P. 1248-1259.
33. Meyrand M., Dallas D.C., Caillat H., Bouvier F. et al. Comparison of milk oligosaccharides between goats with and without the genetic ability to synthesize as1-casein // Small Ruminant Res. 2013. Vol. 113, N 2-3. P. 411-420.
34. Wal J.M. Cow's milk allergens // Allergy. 1998. Vol. 53. P. 1013-1022.
35. Fiocchi A., Schunemann H.J., Brozek J. et al. Diagnosis and rationale for action against cow's milk allergy (DRACMA): a summary report // J. Allergy Clin. Immunol. 2010. Vol. 126, N 6. P. 1119-1128.
36. Boyce J.A., Assa'ad A., Burks A.W. et al. Guidelines for the diagnosis and management of food allergy in the United States: report of the NIAID-sponsored expert panel // J. Allergy Clin. Immunol. 2010. Vol. 126, N 6. P. 1-58.
37. Crittenden R.G, Bennett L.E. Cow's milk allergy: A complex disorder // J. Am. Coll. Nutr. 2005. Vol. 24. P. 582-591.
38. Masoodi T.A., Shafi G. Analysis of casein alpha S1 & S2 proteins from different mammalian species // Bioinformation. 2010. Vol. 4, N 9. P. 430-5.
39. Nowak-Wegrzyn A., Fiocchi A. Rare, medium, or well done? The effect of heating and food matrix on food protein allergenicity // Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 2009. Vol. 9. P. 234-237.
40. Головач Т.Н., Курченко В.П. Аллергенность белков молока и пути ее снижения // Труды БГУ. 2010. T. 5, № 1. С. 9-55.
41. Bu G., Luo Y., Chen F., Liu K. et al. Milk processing as a tool to reduce cow's milk allergenicity: a mini-review // Dairy Sci Technol. 2013. Vol. 93, N 3. P. 211-223.
42. Wal J.M. Bovine milk allergenicity // Ann. Allergy Asthma Immunol. 2004. Vol. 93, N 5. P. 2-11.
43. Lisson M.M., Novak N., Erhardt G. Immunoglobulin E epitope mapping by microarray immunoassay reveals differences in immune response to genetic variants of caseins from different ruminant species // J. Dairy Sci. 2014. Vol. 97, N 4. P. 1939-1954.
44. Jarvinen K.M., Chatchatee P., Bardina L., Beyer K. et al. IgE and IgG binding epitopes on alpha-lactalbumin and beta-lactoglobulin in cow's milk allergy // Int. Arch. Allergy Immunol. 2001. Vol. 126, N 2. P. 111-118.
45. Chessa S., Chiatti F., Rignanese D., Ceriotti G. et al. Analisi in silico delle sequenze caseiniche caprine // Sci. Tecn. Latt. Cas. 2008. Vol. 59. P. 71-79.
46. Bernard H., Meisel H., Creminon C., Wal J.M. Post-translational phosphorylation affects the IgE binding capacity of caseins // FEBS Lett. 2000. Vol. 467. P. 239-244.
47. Cases B., Garcia-Ara C., Boyano M.T., Perez-Gordo M. et al. Phosphorylation reduces the allergenicity of cow casein in children with selective allergy to goat and sheep milk // J. Investig. Allergol. Clin. Immunol. 2011. Vol. 21, N 5. P. 398-400.
48. Chessa S., Chiatti F., Rignanese G., Ceriotti G., Caroli A. Nutraceutical properties of goat milk: In silico analysis of the casein sequences // Options Mediterraneennes. 2009. Vol. 91. P. 241-243.
49. Bevilacqua C., Martin P., Candalh C., Fauquant J. et al. Goats' milk of defective as1-casein genotype decreases intestinal and systemic sensitization to ß-lactoglobulin in guinea pigs // J. Dairy Res. 2001. Vol. 68. P. 217-227.
50. Marletta D., Bordonaro S., Guastella A.M., Falagiani P. et al. Goat milk with different as2-casein content: Analysis of allergenic potency by REAST-inhibition assay // Small Ruminant Res. 2004. Vol. 52. P. 19-24.
References
da Costa W.K.A, de Souza E.L, Beltrao-Filho E.M, Vasconcelos G.K.V, 9. et al. Comparative protein composition analysis of goat milk produced by the Alpine and Saanen Breeds in Northeastern Brazil and related antibacterial activities. PLOS One. 2014; Vol. 9 (3). Article ID 10. e93361.
Miller M.J.S., Witherly S.A., Clark D.A. Casein: a milk protein with diverse biologic consequences. Proc Soc Exp Biol Med. 1990; Vol. 195: 143-59. 11.
Altendorfer I., Konig S., Braukmann A., Saenger T., et al. Quantification of aS1-casein in breast milk using a targeted mass spec- 12. trometry-based approach. J Pharm Biomed Anal. 2014; Vol. 103: 52-8.
Petermann K., Vordenbaumen S., Maas R., Braukmann A., et al. 13. Autoantibodies to aS1-casein are induced by breast-feeding. PLoS One. 2012; Vol. 7 (4). Article ID e32716.
Farrell H.M., Jimenez-Flores R., Bleck G.T., Brown E.M., et al. Nomen- 14. clature of the proteins of cows' milk-sixth revision. J Dairy Sci. 2004; Vol. 87. 1641-74.
Prosser C. Composition and clinical evidence of the safety and 15. efficacy of an infant formula based on goat milk. Rossiyskiy vestnik perinatologii i pediatrii [Russian Bulletin of Perinatology and Pediatrics]. 2013; Vol. 58 (5): 15-22. (in Russian) 16. Strzalkowska N.K., Lech J.Z., Zofia R. Effect of K-casein and B-lactoglobulin loci polymorphism, cows age, stage of lactaition and somatic cell count on daily milk yield and milk composition in Pol- 17. ish Black and White cattle. Anim Sci Paper Rep. 2002; Vol. 20 (1): 21-35.
Ng-Kwai-Hang K.F. A review of the relationship between milk protein 18. polymorphism and milk composition/milk production. In: Proceedings of the IDF Seminar «Milk Protein Polymorphism», Palmer-ston North, New Zealand. International Dairy Federation. Brussels, 19. 1997: 22-37.
Ng-Kwai-Hang K.F. Genetic polymorphism of milk proteins: relationships with production traits, milk composition and technological properties. Can J Anim Sci. 1998. 78: 131-47. Chaertdinov R.A. The protein content of milk cows to different breeds bestuzhevskoj genotypes for alpha-S 1, beta-, kappa-casein and beta-lactoglobulin. Selskochozyaistvennaya biologiya [Agricultural Biology]. 1988; 5: 71-5 (in Russian)
Marletta D., Criscione A., Bordonaro S., Guastella A.M., D'Urso G. Casein polymorphism in goat's milk. Lait. 2007; Vol. 87: 491-504. Selvaggi M., Laudadio V., Dario C., Tufarelli V. Major proteins in goat milk: an updated overview on genetic variability. Mol Biol Rep. 2014; Vol. 41 (2): 1035-48.
Ollier S., Chauvet S., Martin P., Chilliard Y., Leroux C. Goat's aS1-
casein polymorphism affects gene expression profile of lactating
mammary gland. Animal. 2008; Vol. 2: 566-73.
Grosclaude F., Martin P. Casein Polymorphism in the Goat, IDF
Seminar «Milk Protein Polymorphism II». Palmerston North, 1997:
241-253.
Jordana J., Amills M., Diaz E., Angulo C., et al. Gene frequencies of caprine as1-casein polymorphism in Spanish goat breeds. Small Ruminant Res. 1996; Vol. 20: 215-21.
Enne G., Feligini M., Greppi G.F., Iametti S., Pagani S. Gene frequencies of caprine as1-casein polymorphism in dairy goats, IDF Seminar «Milk Protein Polymorphism II». Palmerston North, 1997: 275-9. Rijnkels M. Multispecies comparison of the casein gene loci and evolution of casein gene family. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 2002; Vol. 7: 327-45.
Kupper J., Chessa S., Rignanese D., Caroli A., Erhardt G. Divergence at the casein haplotypes in dairy and meat goat breeds. J Dairy Res. 2010; Vol. 77: 56-62.
Ferretti L., Leone P., Sgaramella V. Long range restriction analysis of the bovine casein genes. Nucleic Acids Res. 1990; Vol. 18: 6829-33.
2
3
5
6
7.
8.
M.B. BopoMKO, M.H. ÜKMflaH, O.O. HepHAK u np.
20. Threadgill D.W., Womack J.E. Genomic analysis of the major bovine casein genes. Nucleic Acids Res. 1990; Vol. 18: 6935-42.
21. Greppi G.F., Roncada P., Fortin R. Protein components of goat's milk. In: Pulina G., Cannas A. (eds). Dairy Goats Feeding and Nutrition. 2 ed. ed. Bologna: CAB International. 2008: 71-94.
22. Chanat E., Martin P., Ollivier-Bousquet M. aS1-casein is required for the efficient transport of ß- and K-casein from the endoplasmic reticulum to the Golgi apparatus of mammary epithelial cells. J Cell Sci. 1999; Vol. 112 (19): 3399-412.
23. de Kruif C.G., Huppertz T., Volker S., Urban A., Petukhov V. Casein micelles and their internal structure. Adv Colloid Interface Sci. 2012; Vol. 171-172: 36-52.
24. Pierre A., Francoise M., Le Grant Y., Zahoute L. Casein micelle size in relation with casein composition and as1, as2 and K casein contents in goat milk. Lait. 1998; Vol. 78: 591-605.
25. Remeuf F. Influence du polymorphisme gene tique de la case ine alpha-s1 caprine sur les caracte ristiques physico-chimiques et technologiques du lait. Lait. 1993; Vol. 73: 549-57.
26. Lara-Villoslada F., Olivares M., Jimenez J., Boza J., et al. Goat milk is less immunogenic than cow milk in a murine model of atopy. J Pediatr Gastroenterol. 2004; Vol. 39: 354-60.
27. Parc A.L., Leonil J., Eric Chanat E. aS1-casein, which is essential for efficient ER-to-Golgi casein transport, is also present in a tightly membrane-associated form. BMC Cell Biol. 2010; Vol. 11: 65.
28. Chilliard Y., Rouel J., Leroux M. Goat's alpha-s1 casein genotype influences its milk fatty acid composition and delta-9 desaturation ratios. Anim Feed Sci Technol. 2006; Vol. 131 (3): 474-87.
29. Silanikove N., Leitner G., Merin U., Prosser C. Recent advances in exploiting goat's milk: quality, safety and production aspects. Small Rumin. Res. 2010; Vol. 89: 110-24.
30. Cebo C., Caillat P., Bouvier F., Martin P. Major proteins of the goat milk fat globule membrane. J Dairy Sci. 2010; Vol. 93: 868-76.
31. Coleman R.A., Lewin T.M., Muoio D.M. Physiological and nutritional regulation of enzymes of triacylglycerol synthesis. Annu Rev Nutr. 2000; Vol. 20: 77-103.
32. Smith S. The animal fatty acid synthase: one gene, one polypeptide, seven enzymes. FASEB J. 1994; Vol. 8 (15): 1248-59.
33. Meyrand M., Dallas D.C., Caillat H., Bouvier F., et al. Comparison of milk oligosaccharides between goats with and without the genetic ability to synthesize as1-casein. Small Ruminant Res. 2013; Vol. 113 (2-3): 411-20.
34. Wal J.M. Cow's milk allergens. Allergy. 1998; Vol. 53: 1013-22.
35. Fiocchi A., Schunemann H.J., Brozek J., Restani P., et al. Diagnosis and rationale for action against cow's milk allergy (DRACMA): a summary report. J Allergy Clin Immunol. 2010; 126 (6): 1119-28.
36. Boyce J.A., Assa'ad A., Burks A.W., Jones S.M., et al. Guidelines for the diagnosis and management of food allergy in the United States:
report of the NIAID-sponsored expert panel. J Allergy Clin Immunol. 2010; Vol. 126 (6): 1-58.
37. Crittenden R.G., Bennett L.E. Cow's milk allergy: A complex disorder. J Am Coll Nutr. 2005; Vol. 24: 582-91.
38. Masoodi T.A., Shafi G. Analysis of casein alpha S1 & S2 proteins from different mammalian species. Bioinformation. 2010; Vol. 4 (9): 430-5.
39. Nowak-Wegrzyn A., Fiocchi A. Rare, medium, or well done? The effect of heating and food matrix on food protein allergenicity. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2009; Vol. 9: 234-7.
40. Golovach T.N., Kurchenko V.P. Allergenicity of milk proteins and ways to reduce it. Trudi BGU []. 2010; Vol. 5 (1): 9-55. (in Russian)
41. Bu G., Luo Y., Chen F., Liu K., et al. Milk processing as a tool to reduce cow's milk allergenicity: a mini-review. Dairy Sci Technol. 2013; Vol. 93 (3): 211-23.
42. Wal J.M. Bovine milk allergenicity. Ann Allergy Asthma Immunol. 2004; Vol. 93 (5): 2-11.
43. Lisson M.M., Novak N., Erhardt G. Immunoglobulin E epitope mapping by microarray immunoassay reveals differences in immune response to genetic variants of caseins from different ruminant species. J Dairy Sci. 2014; Vol. 97 (4): 1939-54.
44. Jarvinen K.M., Chatchatee P., Bardina L., Beyer K., et al. IgE and IgG binding epitopes on alpha-lactalbumin and beta-lactoglobulin in cow's milk allergy. Int Arch Allergy Immunol. 2001; Vol. 126 (2): 111-8.
45. Chessa S., Chiatti F., Rignanese D., Ceriotti G., et al. Analisi in silico delle sequenze caseiniche caprine. Sci Tecn Latt Cas. 2008; Vol. 59: 71-79.
46. Bernard H., Meisel H., Creminon C., Wal J.M. Post-translational phosphorylation affects the IgE binding capacity of caseins. FEBS Lett. 2000; Vol. 467: 239-44.
47. Cases B., Garcia-Ara C., Boyano M.T., Perez-Gordo M., et al. Phos-phorylation reduces the allergenicity of cow casein in children with selective allergy to goat and sheep milk. J Investig Allergol Clin Immunol. 2011. 21(5):398-400.
48. Chessa S., Chiatti F., Rignanese G., Ceriotti G., Caroli A. Nutraceuti-cal properties of goat milk: In silico analysis of the casein sequences. Options Mediterraneennes. 2009; Vol. 91: 241-43.
49. Bevilacqua C., Martin P., Candalh C., Fauquant J., et al. Goats' milk of defective as1-casein genotype decreases intestinal and systemic sensitization to ß-lactoglobulin in guinea pigs. J Dairy Res. 2001; Vol. 68: 217-27.
50. Marletta D., Bordonaro S., Guastella A.M., Falagiani P., et al. Goat milk with different as2-casein content: Analysis of allergenic potency by REAST-inhibition assay. Small Ruminant Res. 2004; Vol. 52: 19-24.
