Снижение неспецифического иммунитета и повышение дисбиоза и воспаления в слизистой оболочке полости рта крыс, получавших антихеликобактерную терапию, и их нормализация под влиянием кверцетина Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 616.33+342.092

О. Е. Успенский, К. В. Скидан, к. м. н.

Харьковский национальный медицинский университет

СНИЖЕНИЕ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО ИММУНИТЕТА И ПОВЫШЕНИЕ ДИСБИОЗА И ВОСПАЛЕНИЯ В СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКЕ ПОЛОСТИ РТА КРЫС, ПОЛУЧАВШИХ АНТИХЕЛИКОБАКТЕРНУЮ ТЕРАПИЮ, И ИХ НОРМАЛИЗАЦИЯ ПОД ВЛИЯНИЕМ КВЕРЦЕТИНА

У крыс, получавших антихеликобактерную терапию (АХБТ), снижается в сыворотке крови и в СОПР активность лизоцима, увеличивается активность уреазы, степень дисбиоза и воспаления в СОПР. Оральные аппликации гелей с кверцетином нормализуют все показатели в СОПР крыс, получавших АХБТ.

Ключевые слова: антихеликобактерная терапия, слизистая оболочка полости рта, иммунодефицит, дисбиоз, воспаление, кверцетин.

О. €. Успенський, К. В. Скидан

Харювський нацюнальний медичний утверситет

ЗНИЖЕННЯ НЕСПЕЦИФ1ЧНОГО 1МУН1ТЕТУ ТА ЩДВИЩЕННЯ ДИСБ1ОЗУ I ЗАПАЛЕННЯ В СЛИЗОВ1Й ОБОЛОНЦ1 ПОРОЖНИНИ РОТА ЩУР1В, ЯК1 ОТРИМУВАЛИ АНТИХЕЛ1КОБАКТЕРНУ ТЕРАП1Ю, ТА ][Х НОРМАЛ1ЗАЦ1Я П1Д ВПЛИВОМ КВЕРЦЕТИНА

У щурiв, яю отримували антихелжобактерну тератю (АХБТ), знижуеться в сироватц кровi i в СОПР актив-тсть лiзоцима, збыьшуеться актившсть уреази, ступть дисбюзу та запалення в СОПР. Оральш аплтацп гелiв з кверцетином нормалiзують усг показники в СОПР щурiв, ят отримували АХБТ.

Ключовi слова: антихелжобактерна тератя, слизова обо-лонка порожнини рота, iмунодефiцит, дисбюз, запалення, кверцетин.

O. E. Uspenskiy, K. V. Skidan

State Establishment «Kharkov National Medical University»

THE REDUCTION OF NONSPECIFIC IMMUNITY AND GROWTH OF DYSBIOSIS AND INFLAMMATION IN ORAL MUCOUS MEMBRANE IN RATS, HAVING UNDERWENT ANTI-HELICOBACTER THERAPY, AND THEIR NORMALIZATION UNDER THE INFLUENCE OF QUERCETIN

ABSTRACT

The aim. To determine the state of nonspecific immunity, dysbiosis and inflammation in oral mucosa (OM) at anti-helicobacter therapy (AHBT) and the possibility of their correction with quercetin-containing preparations "Quertulin" and "Quertulidon ".

The materials and the methods. AHBT was carried out daily by introduction of the following preparations: Omeprazole -1.3mg/kg, Amoxil - 50 mg/kg and Clarithromycin - 7.5 mg/kg during 8 days. The oral gels "Quertulin " (quercetin + inulin + calcium citrate) and "Quertulidon" (Quercetin + imudon),

dosed at 0.5ml, were applied on OM during 11 days. After the euthanasia on the 12th day the activity of lysozyme was revealed in blood serum and OM, the activity of urease, elastase and content of MDA - in OM. According to the ratio of the relative activities of urease and lysozyme the degree of dysbiosis in OM was calculated.

The findings. The reduction in the activity of lysozyme in blood serum and OMM, growth in activity of urease, the degree of dysbiosis and level of inflammation markers (MDA and elastase) in OM of rats, having undergone AHBT, was revealed. Quertulin and Quertulidon increase activity of lysozyme, reduce activity of urease, degree of dysbiosis and level of inflammation markers in OM.

The conclusion. AHBT causes the reduction of nonspecific immunity, growth of the degree of dysbiosis and inflammation in OM. Quercetin-containing preparations strengthen immunity and reduce the degree of dysbiosis and inflammation. Key words: anti-helicobacter therapy, oral mucosa, immunodeficiency, dysbiosis, inflammation, quercetin.

Побочные эффекты антихеликобактерной терапии (АХБТ) связаны, прежде всего, с наличием в составе комплекса препаратов АХБТ мощных антибиотиков [1-3]. Последние, как известно, способны вызывать развитие дисбиоза [4], в патогенезе которого решающим фактором является иммунодефицит (ИД)

[5].

Как известно, с одной стороны ИД представлен неспецифическим, врожденным, в котором главенствующую роль занимает антибактериальная функция нейтрофилов [6], а также активность ряда антимикробных ферментов (лизоцима, пероксидаз, лактофер-рина и др.) [7]. С другой стороны, ИД представлен специфическим, приобретенным, основанном на участии лимфоцитов разных классов, ряд из которых способны продуцировать антитела (иммуноглобулины) [8].

Ранее нами было показано, что при АХБТ в крови снижается содержание нейтрофилов и увеличивается содержание лимфоцитов, увеличивая соотношение лимфоциты:нейтрофилы в 3 раза [9]. Это может свидетельствовать об ослаблении неспецифического иммунитета [6] и поэтому может указывать на целесообразность применения при АХБТ стимуляторов неспецифического иммунитета. Наиболее эффективными иммуностимуляторами являются полифеноль-ные вещества, в частности, биофлавоноиды [10].

Поэтому целью данной работы стало определение состояния неспецифического иммунитета, дисбиоза и воспаления в слизистой оболочке полости рта (СОПР) при АХБТ и возможность их коррекции с помощью кверцетинсодержащих препаратов: Квертулин и Квертулидон.

Материалы и методы исследования. В эксперименте было использовано 40 белых крыс линии Вистар (самки, 10 месяцев, средняя живая масса 300 г). Их распределили в 4 равных группы: 1-ая - контрольная (интактные), 2-ая, 3-я и 4-ая - получали АХБТ в течение 8 дней, причем 3-я группа дополнительно получала аппликации на СОПР геля «Квертулин», а 4-ая - геля «Квертулидон» в дозе 0,5 мл ежедневно в течение 11 дней.

© Успенский О. Е., Скидан К. В., 2015.

АХБТ включала в себя: ингибитор протонной помпы омепразол, антибиотики амоксил и кларитро-мицин в суточных дозах 1,3 мг/кг, 50 мг/кг и 7,5 мг/кг соответственно [9].

Гель «Квертулин» (ТУ У 20.4-13903778032:2012) производства ООО «Биохимтех» (Одесса, Украина), содержит в своем составе кверцетин, инулин и цитрат кальция. Гель «Квертулидон» (ТУ У 20.4-13903778-032:2012) производства ООО «Биохимтех» (Одесса, Украина), содержит Квертулин и Имудон.

Эвтаназию крыс осуществляли на 12-й день опыта под тиопенталовым наркозом (20 мг/кг) путем тотального кровопускания из сердца. Собирали сыворотку крови и иссекали слизистую оболочку щеки крыс, в гомогенате которой (20 мг/мл 0,05 М трис-

НС1 буфера, рН 7,5) определяли активность лизоцима (маркер неспецифического иммунитета) бактериоли-тическим методом [11], активность уреазы (показатель микробной обсемененности) [12], уровень биохимических маркеров воспаления [13]: содержание малонового диальдегида (МДА) [14] и активность эластазы [15].

По соотношению относительных активностей уреазы и лизоцима рассчитывали степень дисбиоза по Левицкому [16].

Статистическую обработку результатов исследования осуществляли в соответствии с рекомендациями [17]. Рассчитывали средние величины (М), ошибку средней величины (±т), достоверность различий определяли по ^критерию Стьюдента.

Таблица 1

Активность лизоцима в СОПР и в сыворотке крови крыс, получавших АХБТ и кверцетинсодержащие

препараты (М±т, п=10)

№№ п/п Группы СОПР, ед/кг Сыворотка, ед/л

1 Контроль 300±40 131±8

2 АХБТ 140±40 107±4

р<0,05 р<0,05

260±50 132±5

3 АХБТ + Квертулин р>0,3 р:>0,05 р>0,8 р:<0,05

240±50 126±4

4 АХБТ + Квертулидон р>0,3 р:>0,05 р2>0,5 р>0,3 р:<0,05 р2>0,3

Примечание : р - в сравнении с гр. 1; р! -в сравнении с гр. 2; р3 -в сравнении с гр. 3.

Таблица 2

Активность уреазы и степень дисбиоза в СОПР крыс, получавших АХБТ и кверцетинсодержащие препараты (М±т, п=10)

№№ п/п Группы Уреаза, мк-кат/кг Степень дисбиоза, ед.

1 Контроль 0,41±0,04 1,00±0,15

2 АХБТ 0,65±0,04 3,39±0,22

р<0,01 р<0,01

0,54±0,03 1,52±0,20

3 АХБТ + Квертулин р<0,05 р1<0,05 р<0,05 р1<0,01

0,56±0,03 1,59±0,19

4 АХБТ + Квертулидон р<0,05 р:>0,05 р2>0,5 р<0,05 р1<0,01 р2>0,5

Примечание : см. табл. 1

Результаты и их обсуждение. В таблице 1 представлены результаты определения активности ли-зоцима в СОПР и в сыворотке крови крыс, получавших АХБТ. Из этих данных видно, что АХБТ вызывает снижение активности лизоцима в СОПР на 53,3 %, а в сыворотке крови на 18,3 % (в обоих случаях р<0,05). Кверцетинсодержащие препараты повышают на 85,7 % (Квертулин) и на 71,4 % (Квертулидон) уровень лизоцима в СОПР. В сыворотке крови Квер-тулин повышает активность лизоцима на 23,4 %, а

Квертулидон - на 17,8 %. Эти результаты подтверждают данные об угнетении неспецифического иммунитета под влиянием АХБТ [9].

В таблице 2 показано, что АХБТ достоверно увеличивает в СОПР активность уреазы - показатель микробного обсеменения. Аппликации гелей с квер-цетином на СОПР достоверно снижают уровень уреа-зы.

В этой же таблице представлены результаты определения степени дисбиоза по Левицкому, из кото-

рых видно, что АХБТ увеличивает степень дисбиоза в СОПР в 3,4 раза, а оральные аппликации гелей с кверцетином снижают ее в 2 раза.

В таблице 3 представлены результаты определения уровня в СОПР биохимических маркеров воспа-

ления: МДА и эластазы. Из этих данных видно, что АХБТ увеличивает их уровень на 54,5 % (МДА) и на 40 % (эластаза), что свидетельствует о развитии воспаления в СОПР после курса АХБТ.

Таблица 3

Уровень маркеров воспаления в СОПР крыс, получавших АХБТ и кверцетинсодержащие препараты ^±m, n=10)

№№ п/п Группы МДА, ммоль/кг Эластаза, мк-кат/кг

1 Контроль 15,4±1,5 20±1

2 АХБТ 23,8±2,8 28±3

р<0,05 р<0,05

18,6±2,0 21±2

3 АХБТ + Квертулин р>0,1 р1>0,05 р>0,5 р1<0,05

18,9±2,5 21±1

4 АХБТ + Квертулидон р>0,1 р1>0,05 р2>0,5 р>0,5 р1<0,05 р2=1,0

Примечание : см. табл. 1

Аппликации гелей с кверцетином снижают уровень маркеров воспаления до нормы, что свидетельствует о противовоспалительном действии этих гелей.

Выводы. 1. АХБТ снижает неспецифический иммунитет, способствует развитию дисбиоза и воспаления в СОПР.

2. Оральные аппликации гелей с кверцетином устраняют иммунодефицит, снижают степень дисбио-за и воспаления в СОПР.

Список литературы

1. Циммерман Я. С. Helicobacter pylori-инфекция: внежелу-дочные эффекты и заболевания (критический анализ) / Я. С. Циммерман // Клиническая медицина. - 2006. - № 4. - С. 63-67.

2. Исаева Г. Ш. Возможное участие бактерии рода Helicobacter в патогенезе гепатобилиарных заболеваний / Г. Ш. Исаева // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопрокто-логии. - 2008. - № 4. - С. 14-22.

3. Цодиков Г. В. Достижения и перспективы изучения Helicobacter pylori-инфекции / Г. В. Цодиков, А. М. Зякун, Е. В. Климова // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2011. - № 2. - С. 46-49.

4. Новик Г. И. Продукция гидролаз и антибиотикорезистент-ность молочнокислых и бифидобактерий / Г. И. Новик, Н. И. Аста-пович, Н. Е. Рябая // Прикладная биохимия и микробиология. -2007. - т. 43, № 2. - С. 184-192.

5. Мельников О. Ф. Местный иммунитет и концепция диагностики иммунной недостаточности на основе определения уровня защитных белков в секретах / О. Ф. Мельников, Д. Д. Заболотная // Сучасш медичш технологи. - 2009. - № 2. - С. 37-42.

6. Плехова Н. Г. Бактерицидная активность фагоцитов / Н. Г. Плехова // ЖМЭИ. - 2006. - № 6. - С. 89-96.

7. Проблема неспецифического и специфического в индукции и регуляции иммунологических реакций / А. М. Земсков, В. М. Земсков, М. А. Земсков [и др.] // ЖМЭИ. - 2005. - № 4. - С. 105109.

8. Ивашкин В. Т. Основные понятия и положения фундаментальной иммунологии / В. Т. Ивашкин // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2008. - № 4. - С. 4-13.

9. Шухтина И. Н. Влияние антихеликобактерной терапии на состояние печени у крыс / И. Н. Шухтина, В. Л. Васюк // Актуальные проблемы транспортной медицины. - 2015. - № 1. - С. 25-30.

10. Левицкий А. П. Применение антидисбиотических средств в стоматологии / А. П. Левицкий // Вюник стоматологи. -2014. - № 4. - С. 80-88.

11. Левицкий А. П. Лизоцим вместо антибиотиков / Левицкий А. П. - Одесса: КП ОГТ, 2005. - 74 с.

12. Гаврикова Л. М. Уреазная активность ротовой жидкости у больных с острой и хронической инфекцией челюстно-лицевой области / Л. М. Гаврикова, И. Т. Сегень // Стоматология. - 1996. -Спецвыпуск. - С. 49-50.

13. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости: метод, рекомендации / Левицкий А. П., Деньга О. В., Макаренко О. А. [и др.] - Одесса, 2010. - 16 с.

14. Стальная И. Д. Метод определения малонового диальде-гида с помощью тиобарбитуровой кислоты. В кн.: Современные методы в биохимии / И. Д. Стальная, Т. Г. Гаришвили. - М.: Медицина, 1977. - С. 66-68.

15. Левицкий А. П. Методы определения активности эласта-зы и ее ингибиторов: методические рекомендации / А. П. Левицкий, А. В. Стефанов. - К.: ГФЦ, 2002. - 15 с.

16. Патент на корисну модель, Украша 43140, МПК (2009) G01N 33/48. СпоЫб оцшки ступеня дисбюзу (дисбактерюзу) орга-шв i тканин / Левицький А.П., Деньга О. В., Селiванська 1.О. [та ш.]. - Опубл. 10.08.2009, Бюл. № 15.

17. Лапач О. Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excel / О. Н. Лапач, А. В. Чубенко, П. Н. Бабич. - К.: Морион, 2000. - 320 с.

REFERENCES

1. Tsimmerman Ya. S. Helicobacter pylori-infection: outergastric effects and diseases (the critical analysis). Klinicheskaya meditsina. 2006; 4: 63-67.

2. Isaeva G. Sh. The possible participation of Helicobacter bacteria in pathogenesis of hepatobiliary diseases. Rossiyskiy zhurnal gastroenterologii, gepatologii, koloproktologii. 2008; 4: 14-22.

3. Tsodikov G. V., Zyakun A. M., Klimova E. V. The achievements and projects of study of Helicobacter pylori-infections. Epidemiologiya i infektsionnye bolezni. 2011; 2: 46-49.

4. Novik G. I., Astapovich N. I., Ryabaya N. E. The production of hydrolases and antibiotic resistance of lactobacilli and bifidobacilli. Prikladnaya biokhimiya i mikrobiologiya. 2007; 43 (2): 184-192.

5. Melnikov O. F., Zabolotnaya D. D. Local immune system and diagnostics concept of immune deficiency on the basis of determining the level of protective proteins in the secretions. Suchasni medychni tekhnologii. 2009; 2: 37-42.

6. Plekhova N. G. Bactericidal activity of phagocytes. JMEI. 2006; 6: 89-96.

7. Zemskov A. M., Zemskov V. M., Zemskov M. A. [i dr.]. The

problem of the nonspecific and the specific in induction and regulation of immunologic reactions. JMEI. 2005; 4: 105-109.

8. Ivashkin V. T. The basic notions and the statements of the fundamental immunology. Rossiyskiy zhurnal gastroenterologii, gepatologii, koloproktologii. 2008; 4: 4-13.

9. Shukhtina I. N., Vasyuk V. L. The influence of anti-helicobacter therapy on the state of liver in rats. Aktual'nye problemy transportnoy meditsiny. 2015; 1: 25-30.

10. Levitsky A. P. The use of antidysbiotic preparations in dentistry. Visnyk stomatologii. 2014; 4: 80-88.

11. Levitsky A. P. Lizotsym vmesto antibiotikov [Lysozyme instead of antibiotics]. Odessa, KP OGT, 2005: 74.

12. Gavrikova L. M., Segen I. T. Urease activity of oral liquid in patients with acute odontogenic infection of maxillofacial part. Stomatologiya. 1996; The extra issue :49-50.

13. Levitsky A. P., Denga O. V., Makarenko O. A. [i dr.]. Biokhimicheskie markery vospaleniya tkaney rotovoy polosti: metodicheskie rekomendatsii [Biochemical markers of inflammation of oral cavity tissue: method guidelines]. Odessa, KP OGT, 2010: 16.

14. Stalnaya I. D., Garishvili T. G. Metod opredeleniya malonovogo dialdegida s pomoshchyu tiobarbiturovoy kisloty [The method of revelation of malonic dialdehyde with thiobarbituric acid]. Moskva, Meditsina, 1977: 66-68.

15. Levitsky A. P., Stefanov A. V. Metody opredeleniya aktivnosti elastazy i eye ingibitorov: metodicheskie rekomendatsii [The methods of the determination of the activity of elastase and its inhibitors: method guidelines]. Kiev, GFK, 2002: 15.

16. Levitsky A. P., Denga O. V., Selivanskaya I. A. [ta in.]. The method of estimation of the degree of dysbiosis (dysbacteriosis) of organs and tissues. Patent of Ukraine 43140. IPC (2009) G01N 33/48. Application number u 200815092. Date of filling: 26.12.2008. Publ.: 10.08.2009. Bul. № 15.

17. Lapach S. N., Chubenko A. V., Babich P. N. Statisticheskiye metody v medico-biologicheskikh issledovaniyakh s ispolzovaniem Excel [Statistical methods in medical and biological research by using Excel]. Kiev, Morion, 2000: 320.

Поступила 09.02.15

УДК 616.33+342.092

Т. В. Томилина, к. мед. н.

Харьковский национальный медицинский университет

КВЕРЦЕТИН ПОВЫШАЕТ НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЙ ИММУНИТЕТ И СНИЖАЕТ ДИСБИОЗ И ВОСПАЛЕНИЕ В ПАРОДОНТЕ КРЫС, ПОЛУЧАВШИХ АНТИХЕЛИКОБАКТЕРНУЮ ТЕРАПИЮ

У крыс, которые получали антихеликобактерную терапию (АХБТ), снижается в сыворотке крови и в десне активность лизоцима, повышается степень дисбиоза и воспаления в пародонте. Оральные аппликации гелей кверцетинсо-держащих препаратов (Квертулин или Квертулидон) нормализуют иммунитет, устраняют дисбиоз и воспаление в пародонте после АХБТ.

Ключевые слова: антихеликобактерная терапия, паро-донт, иммунодефицит, дисбиоз, воспаление, кверцетин.

Т. В. Томтта

Харювський нацюнальний медичний ушверситет

КВЕРЦЕТИН ЩДВИЩУе НЕСПЕЦИФ1ЧНИЙ 1МУН1ТЕТ I ЗНИЖУС ДИСБЮЗ I ЗАПАЛЕННЯ В ПАРОДОНТ1 ЩУР1В, ЯК1 ОТРИМУВАЛИ АНТИХЕЛ1КОБАКТЕРНУ ТЕРАП1Ю

У щурiв, ят отримували антихелжобактерну тератю (АХБТ), знижуеться в сироватц mpoei i в яснах актившсть лiзоцима, збыьшуеться ступть дисбюзу та запалення в па-родонтi. Оральш аплтацп гелiв кверцетинвмiсних препа-ратiв (Квертулт або Квертулiдон) нормалiзують iмунi-тет, усувають дисбюз та запалення в пародонтi тсля АХБТ.

Ключовi слова: антихелжобактерна тератя, пародонт, iмунодефiцит, дисбюз, запалення, кверцетин.

T. V. Tomilina

State Establishment «Kharkov National Medical University»

QUERCETHIN INCREASES NONSPECIFIC

IMMUNITY AND REDUCES DYSBIOSIS AND INFLAMMATION IN PERIODONTIUM OF RATS, HAVING UNDERGONE ANTI-HELICOBACTER THERAPY

ABSTRACT

The aim. To estimate the state of nonspecific immunity, dysbiosis and inflammation in periodontium of rats, having undergone anti-helicobacter therapy (AHBT) and to correct them with quercetin.

The materials and the methods. 40 white rats of Vistar line, AHBT included daily taking of the following preparations during 8 days: Omeprazole - 1.3mg/kg, Amoxil - 50 mg/kg and Clarithromycin -7.5 mg/kg. In the capacity of Quercetin the gels "Quertulin" (quercetin + inulin + calcium citrate) and "Quertulidon " (Quercetin + imudon), applied daily with 0.5ml on oral mucous membrane during 11 days. Rats' euthanasia was carried out on the 12th day. The activity of lysozyme, urease, elastase and content of MDA was revealed in serum and ho-mogenate of gum. According to the ratio of the relative activities of urease and lysozyme the degree of dysbiosis in gum was calculated.

The findings. The reduction of the activity of lysozyme (the index of nonspecific immunity) in serum and in rats gum after AHBT, growth of urease activity (marker of microbe insemination) and degree of dysbiosis, as well as the level of markers of inflammation (MDA and elastase) in gum of rats, that underwent AHBT, was determined. The applications of gels Quertulin and Quertulidon increase activity of lysozyme, decrease the degree of dysbiosis and inflammation. The considerable difference between two Quercetin preparations was not observed. The conclusion AHBT causes the development of immunodeficiency, dysbiosis and inflammation in periodontium. These phenomens are depresed with oral applications of gels of quercetin-containing preparations.

Key words: anti-helicobacter therapy, periodontium, immunodeficiency, dysbiosis, inflammation, quercetin.

© Томилина Т. В., 2015.