CC BY
21УДК 619:616.98:578.825.1
СЛУЧАЙ БОЛЕЗНИ МАРЕКА СРЕДИ НЕ ИММУННОГО ПОГОЛОВЬЯ КУР В ЧАСТНОМ ПОДВОРЬЕ РЕСПУБЛИКИ КРЫМ
Воротилова Н. Г., кандидат ветеринарных наук;
Данильченко С. И., кандидат ветеринарных наук;
Ионкина И. Б., научный сотрудник; Филиал Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр охраны здоровья животных» в Республике Крым
В статье приведены данные о случае гибели не иммунных кур. Для установления причины гибели птицы были проведены эпизоотологические, клини-ко-патологоанатомические, бактериологические, гистологические, вирусологические и молекулярно-биологические исследования. При наблюдении за больной и патологоанатомическом вскрытии павшей птицы были установлены признаки заболевания, свойственные болезни Марека. В результате гистологических исследований во внутренних органах (селезёнке, сердце, печени, кишечнике) птицы обнаружены неопластические лимфоидные пролифераты из полиморфных клеток, что характерно для действия вируса болезни Марека. Вирусологическими исследованиями на куриных эмбрионах были установлены не специфические патологоанатоми-ческие изменения. При постановке по-лимеразной цепной реакции выделена ДНК вируса болезни Марека.
CASE MAREK'S DISEASE AMONG THE NON IMMUNE LIVESTOCK IN THE BACKYARD
OF REPUBLIC OF CRIMEA
Vorotilova N. G., candidate of veterinary sciences;
Danilchenko S. I., candidate of veterinary sciences, Deputy Director for Science;
Ionkina I. B., researcher; Branch of the Federal State Organization «Federal Centre for Animal Health» in the Republic of Crimea
The article presents data on the case of death is not immune chickens. To determine the cause of death of the birds were held epizootologic, clinico-pathological, bacteriological, histological, virological and molecular biological studies. When monitoring a patient and autopsy dead birds were established symptoms of the disease peculiar to Marek's disease. As a result of histological examination of internal organs (spleen, heart, liver, intestine) birds found neoplastic lymphoid proliferative cells of the polymorphic, which is characteristic of the virus of Marek's disease. Virological studies in chick embryos were not established specific pathological changes. In setting the polymerase chain reaction DNA isolated Marek's disease virus.
Ключевые слова: болезнь Марека, Key words: Marek's disease, вирусная болезнь, не иммунные куры, virosis, is not immune chickens, Marek's вирус болезни Марека, диагностика disease virus, Marek's disease diagnosis, болезни Марека, полимеразная цепная polymerase chain reaction. реакция.
Введение. Болезнь Марека (БМ) - высококонтагиозная вирусная болезнь птиц (преимущественно кур), проявляющаяся парезами, параличами конечностей, изменением цвета радужной оболочки глаз, деформацией зрачка, а также образованием опухолей во внутренних органах, скелетной мускулатуре и коже [1].
Возбудителем БМ является вирус, принадлежащий к семейству Herpes-viridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, роду Mardivirus [2]. На основании серологических исследований определены три серотипа вируса БМ. Серотип
1 включает все онкогенные вирусы и их атенуированные варианты, серотип
2 - все неонкогенные вирусы, серотип 3 - антигенно-родственные вируса БМ вирусы герпеса индеек. Кроме того, вирусы БМ 1 серотипа по степени вирулентности для птицы подразделяются на высоковирулентные, вирулентные и слобовирулентные штаммы [3, 4].
В естественных условиях к БМ наиболее чувствительны куры. Могут заражаться индейки, фазаны, лебеди, горлицы, которые служат резервуаром вируса и участвуют в распространении болезни. Установлено носительство возбудителя среди ворон, скворцов, ласточек [5].
Характерным для БМ является быстрое распространение среди восприимчивого поголовья. Заболеваемость в невакцинированных стадах составляет 25-30% и может достигать 60% [6]. Кроме того, несмотря на стопроцентную вакцинацию птицы, в птицеводческих хозяйствах отмечаются вспышки болезни [7].
Болезнь Марека может возникать в любое время года и нередко протекает в ассоциации с другими инфекционными и инвазионными болезнями, БМ имеет значительное распространение среди домашней и дикой птицы почти во всех странах мира [8].
В настоящее время диагностика болезни Марека включает: патолого-анатомические и гистологические исследования; обнаружение антигена в эпителии перьевых фолликулов в реакции диффузной преципитации (РДП); выделение вируса на куриных эмбрионах, культурах клеток с последующей идентификацией его в РДП; биопробу на суточных цыплятах с целью определения патогенности выделенного вируса и выявление антител в сыворотке крови в РДП и иммунно-ферментном анализе [9]. Однако, в последнее время для диагностики вирусных заболеваний широко используется полимеразная цепная реакция (ПЦР). Эта реакция превосходит другие методы по скорости, специфичности и чувствительности [10, 11].
Целью наших исследований было установить причину падежа неиммунных кур в одном из частных подворьев Республики Крым.
Материал и методы исследований. Эпизоотологическому обследованию подвергался один из частных секторов Симферопольского района Республики Крым, где в сентябре 2013 года был зафиксирован случай падежа куры 157-суточного возраста. При осмотре данного объекта учитывали способ содержания птицы, проводили клинический осмотр больной птицы, определяли основные показатели интенсивности эпизоотического процесса (заболеваемость, смертность, летальность).
Патологоанатомическое вскрытие павшей птицы и вирусологические исследования проводили в лаборатории изучения болезней птиц Крымской опытной станции Национального научного центра «Институт экспериментальной и клинической ветеринарной медицины» (ННЦ «ИЭКВМ») (г. Симферополь).
Гистологические исследования проводили в лаборатории патоморфологии и иммунологии ННЦ «ИЭКВМ» (г. Харьков). Образцы органов (селезенки, печени, сердца, кишечника) фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина с последующей заливкой парафином. Гистопрепараты готовили по стандартным методикам, принятым в гистологических исследованиях и окрашивали гематоксилин-эозином.
Вирусологические исследования проводили, руководствуясь ГОСТом 25582-83 «Методы лабораторной диагностики инфекционных заболеваний птиц». От павшей птицы отбирали паренхиматозные органы (печень, селезёнка), готовили из них 10% суспензию. Для подавления посторонней микрофлоры подготовленную суспензию обрабатывали в течение 30 минут при комнатной температуре антибиотиками: 2000 ЕД/см3 пенициллина, 1000 ЕД/см3 стрептомицина. Подготовленной суспензией инфицировали 10-суточных СПФ-куриных эмбрионов в аллантоисную полость. Инкубацию эмбрионов осуществляли в термостате при температуре 37,5 0С в течение 7 суток. После установленного срока инкубации эмбрионы охлаждали при 4 0С в течение 8-12 часов. При вскрытии эмбрионов оценивали картину патологоа-натомических изменений.
Молекулярно-биологические исследования проводили методом постановки ПЦР в лаборатории молекулярной эпизоотологии и диагностики ННЦ «ИЭК-ВМ» (г. Харьков) при участии доктора ветеринарных наук Гериловича А.П.
Результаты и обсуждение. При клинико-эпизоотологическом обследовании поголовья птицы частного сектора Симферопольского района Республики Крым было установлено, что общее поголовье кур кросса Шевер 157-суточного возраста составляло 120 голов. Закупка цыплят суточного возраста осуществлялась из Племенного птицеводческого завода им. Фрунзе, которое являлось благополучным по вирусным заболеваниям. Вакцинация птицы в данном хозяйстве против БМ производится в суточном возрасте, однако, по не установ-
ленным причинам вышеупомянутая птица была не привита ни к одному из инфекционных заболеваний.
Содержание птицы - выгульное. Кроме того, был зафиксирован контакт домашних кур с синантропной птицей (горлицы, воробьи, вороны). При осмотре птицы из близлежащих дворов случаев заболевания БМ не было.
Количество павшей птицы на момент обследования составляло 70 голов, количество больных - 10 голов, а падёж составлял 2-3 головы в сутки в течение одного месяца. При этом показатели заболеваемости и смертности составили по 70%, а показатель летальности - 100 %.
При клиническом осмотре птицы были установлены признаки поражения периферической и центральной нервной системы, а именно: хромота, атаксия, парезы, параличи крыльев, шеи и хвоста (рис. 1).
У некоторой птицы отмечали характерную для БМ позу: одна конечность вытянута вперёд, другая - назад (рис. 2).
Кроме того, наблюдались не специфические признаки заболевания: угнетение, анорексия, истощение птицы, а также расстройства желудочно-кишечного тракта. Случаев выздоровления не наблюдали. По эпизоотологическим данным и клиническим признакам была установлена классическая форма БМ. При этом патологоанатомическая картина вскрытия павшей птицы характеризовалась поражением внутренних органов лимфоидными опухолями. Лимфо-матозные поражения находили в сердце, (рис. 3, 4), печени, селезёнке (рис. 5), почках. Слизистая оболочка железистого желудка была утолщена (рис. 6).
В результате гистологических исследований выявлены неопластические лимфоидные пролифераты во внутренних органах павшей птицы. В сердце обнаружена лимфоидная пролиферация (рис. 7) между мышечными волокнами. Клеточный состав пролифератов полиморфный, преобладают малые и средние лимфоциты, плазматические клетки, макрофаги. В участках неоплазии мышечные волокна в состоянии дистрофии и распада. Очаги пролиферации локализованы, главным образом, в миокарде под перикардом. При гистологическом исследовании селезенки (рис. 8) отмечали пролиферацию клеток белой пульпы - лимфоцитов, формирующих очаги небольшого размера и сливающиеся между собой. Их клеточный состав полиморфный. Встречались лимфоциты с увеличенными гиперхромными ядрами.
В печени отмечали лимфоидные пролифераты вокруг кровеносных сосудов. Гепатоциты были с признаками зернистой дистрофии: ядра клеток разного размера, цитоплазма клеток мутная, печеночные балки не выражены, пространства Диссе расширены. Наблюдали изменения в желчных протоках (рис. 9). Также гистоморфологические изменения пролиферативного характера установлены и в кишечнике (рис. 10). Установлено, что агрегаты полиморфных лимфоидных клеток инфильтрировали собственную слизистую оболочку и заполняли участки между кишечными криптами.
Рисунок 1. Петух с поражением Рисунок 2. Петух с поражением пери-
периферической нервной системы: ферической нервной системы:
выкручивание шеи выкручивание конечностей
Рисунок 3. Сердце павшего петуха: Рисунок 4. Сердце павшего петуха:
признаки перикардита 1. Лимфоматозные поражения
Рисунок 5. Селезёнка павшего петуха: Рисунок 6. Железистый желудок:
1. Лимфоидные опухоли утолщение стенки
Рисунок 7. Участок сердца. Неопластический лимфоидный пролиферат между мышечными волокнами. Гематоксилин и эозин, х200.
Рисунок 9. Участок печени. Неопластическая лимфоидная пролиферация вокруг кровеносных сосудов, дистрофия гепатоцитов. Гематоксилин и эозин, х200
Рисунок 8. Участок селезёнки. Неопластический лимфоидный проли-ферат. Гематоксилин и эозин, х200.
Рисунок 10. Участок кишечника: неопластическая лимфоидная пролиферация. Гематоксилин и эозин, х200.
При проведении вирусологических исследований на куриных эмбрионах были установлены не специфические для действия вируса БМ признаки. На вскрытии эмбрионов наблюдали увеличение печени, её глинистую окраску; незначительное увеличение железистого желудка. Кроме того, регистрировали отсутствие гибели эмбрионов в течение 7 суток инкубации.
Методом ПЦР была обнаружена ДНК вируса БМ.
Выводы. 1. В результате клинико-эпизоотологического обследования птицы частного сектора Симферопольского района Республики Крым был зареги-
стрирован массовый падёж не вакцинированной против болезни Марека кур. Определены основные показатели интенсивности эпизоотического процесса: показатели заболеваемости и смертности составили по 70%, показатель летальности - 100 %.
2. При клиническом осмотре больной и патологоанатомическом вскрытии павшей птицы были установлены характерные признаки болезни Марека.
3. По результатам гистологических исследований патологического материала обнаружены неопластические лимфоидные пролифераты из полиморфных клеток, что характерно для опухолевых поражений у птиц.
4. Вирусологическими исследованиями, проведёнными с использованием куриных эмбрионов, были установлены неспецифические для действия вируса БМ признаки. Однако при постановке ПЦР обнаружена ДНК вируса болезни Марека.
Перспективой дальнейших исследований является контроль ситуации относительно болезни Марека в подворье, где регистрировалась вспышка заболевания и прилегающих к этой территории частных дворов, а также донесение до граждан сведений о необходимости специфической профилактики болезни Марека не только среди промышленного поголовья, но и среди домашней птицы.
Список использованных источников:
1. Болезнь Марека / Вирусные болезни животных // Сюрин В. Н., Са-муйленко А. Я., Соловьёв Б. В., Фомина Н. В. — М., 1998. - с. 689-721.
2. Schat K. A. Immune responces against Marek's disease virus // Proc. 19-th World's Poultry Congress. Amsterdam, Netherlands, 20-24 sept. 1992. - p. 233-238.
3. Bulow V., Biggs P. M. Differentiation between strains of MDV and HVT by immunofluorescence assays // Avian Pathol. 1975. - v. 4. - p. 133-146.
4. Bulow V., Biggs P. M. Precipitación antigens associated with MDV and a HVT // Avian Pathol. 1975. -v. 4. - p. 147-162.
5. Witter R. L. Epidemiology of Marek's disease - A review / R. L. Witter // Oncogenesis and Herpesviruses. -Lyon, France, 1972. - p. 111-112.
References:
1. Marek's Disease / Viral diseases of animals // Syurin V. N., Samujlenko A. J., Solovyov B. V., Fomin N. V. - M., 1998. - p. 689-721.
2. Schat K. A. Immune responces against Marek's disease virus // Proc. 19-th World's Poultry Congress. Amsterdam, Netherlands, 20-24 sept. 1992. - p. 233-238.
3. Bulow V., Biggs P. M. Differentiation between strains of MDV and HVT by immunofluorescence assays // Avian Pathol. 1975. - v. 4. - p. 133-146.
4. Bulow V., Biggs P. M. Precipitación antigens associated with MDV and a HVT // Avian Pathol. 1975. -v. 4. - p. 147-162.
5. Witter R. L. Epidemiology of Marek's disease - A review / R. L. Witter // Oncogenesis and Herpesviruses. -Lyon, France, 1972. - p. 111-112.
6. Куляшбекова Ш. К. Болезнь Марека / Ш. К. Куляшбекова, А. В. Борисов, В. В. Дрыгин - Владимир: Транзит-ИКС, 2008. - c.7.
7. Witter R. L. Control strategies for Marek's disease: a perspective for the future // Poult. Sci. - 1998. - v. 77. -p.1197-11203.
8. Соловьёв Б. В., Болезнь Марека: современные проблемы / Б. В. Соловьёв // Ветинформ. - 2004. -№1. - с. 10-11.
9. Болезнь Марека // Микробиологические и вирусологические методы исследований в ветеринарной медицине (справочное пособие) / А. Н. Головко [и др.] - К., 2007. - с. 253-256.
10. Becker Y., Tabor E., Asher Y. e. a. PCR detection of amplified 132 bp repeats in MDV type 1 DNA can serve as an indicate for critical genomic rearrangement leading to the attenuation of virus virulence // Virus Genes. 1993. - v. 7. - p. 277287.
11. Шульпин М. И. Дифференциация вакцинных штамов вируса болезни Марека серотипа 1 от полевых вариантов с помощью полимеразной цепной реакции / Труды Федерального центра охраны здоровья животных // ФГБУ «ВНИИЗЖ». т. 11. - 2013. - c. 71-75.
6. Kulyashbekova Sh. K. Marek's disease / Sh. K. Kulyashbekova, A. V. Borisov, V. V. Drygin - Vladimir: Transit - ICS, 2008. - p.7.
7. Witter R. L. Control strategies for Marek's disease: a perspective for the future // Poult. Sci. - 1998. -v. 77. - p. 1197-11203.
8. Solovyov B. V., Marek's disease: current problems / B. V. Solovyov // Vetinform. - 2004. - №1. - p. 10-11.
9. Marek's disease // Microbiological and virological research methods in veterinary medicine (handbook) / A. N. Golovko [et al.] -K., 2007. - p. 253-256.
10. Becker Y., Tabor E., Asher Y. e. a. PCR detection of amplified 132 bp repeats in MDV type 1 DNA can serve as an indicate for critical genomic rearrangement leading to the attenuation of virus virulence // Virus Genes. 1993. - v. 7. - p. 277287.
11. Shul'pin M. I. Differentiation of vaccine strains of Marek's disease virus serotype 1 from the field of options by polymerase chain reaction / Proceedings of the Federal Centre for Animal Health // FGBI «ARRIAH». t. 11. - 2013. - p. 71-75.
Сведения об авторах:
Воротилова Надежда Григорьевна - кандидат ветеринарных наук, заведующая лаборатории болезней птиц Филиала ФГБУ «ВНИИЗЖ» в Республике Крым, e-mail: n.vorotilova@bk.ru, 295494, Республика Крым, г. Симферополь, ул. Шоссейная, д. 21а, Фили-
Information about the authors:
Vorotilova Nadegda Grigorevna -candidate of veterinary sciences, head of the laboratory of disease in birds Branch of FGBI «ARRIAH» in the Republic of Crimea, e-mail: n.vorotilova@bk.ru, 295494, The Republic of Crimea, Simferopol, Shosseinaya Street, 21a,
ал ФГБУ «ВНИИЗЖ» в Республике Крым.
Данильченко Сергей Иванович - кандидат ветеринарных наук, заместитель директора по науке Филиала ФГБУ «ВНИИЗЖ» в Республике Крым, e-mail: danylchenko@ arriah.ru, 295494, Республика Крым,
г. Симферополь, ул. Шоссейная,
д. 21а, Филиал ФГБУ «ВНИИЗЖ» в Республике Крым.
Ионкина Ирина Борисовна - научный сотрудник лаборатории болезней птиц Филиала ФГБУ «ВНИИЗЖ» в Республике Крым, e-mail: ionkina.60@mail.ru, 295494, Республика Крым, г. Симферополь, ул. Шоссейная, д. 21а, Филиал ФГБУ «ВНИИЗЖ» в Республике Крым.
Branch of FGBI «ARRIAH» in the Republic of Crimea.
Danyl'chenko Sergey Ivanovich - candidate of veterinary sciences, Deputy Director for science Branch of FGBI "ARRIAH" in the Republic of Crimea, e-mail: danylchenko@arriah. ru, 295494, The Republic of Crimea, Simferopol, Shosseinaya Street, 21a, Branch of FGBI «ARRIAH» in the Republic of Crimea.
Ionkina Irina Borisovna -researcher of the laboratory of disease in birds Branch of FGBI «ARRIAH» in the Republic of Crimea, e-mail: ionkina.60@mail.ru, 295494, The Republic of Crimea, Simferopol, Shosseinaya Street, 21a, Branch of FGBI «ARRIAH» in the Republic of Crimea.
