СИСТЕМА ДОСТАВКИ БЕЛКОВ С ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОПУХОЛЕВЫЕ КЛЕТКИ Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ

Для анализа FLT3-TKD флуоресцентно-меченные ампликоны дополнительно гидролизовали рестриктазой EcoRV (СибЭн-зим, Россия). Положительные образцы секвенировали с использованием BigDye™ Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, USA).

Результаты. В результате проведения фрагментного анализа, исследуемые мутации были выявлены у троих из шести пациентов с ОМЛ. Наличие мутаций у этих пациентов было подтверждено секвенированием по Сенгеру. У пациента №1 с ранним рецидивом обнаружена FLT3-ITD мутация c.1774_1838-1dup, не представленная в COSMIC. Длина тан-демного повтора (ITD) составила 153 bp и по данным секве-нирования включает часть 14 экзона и весь 14 интрон. Уровень аллельной нагрузки мутации составил 18%. До нашего исследования образец костного мозга пациента был направлен в The Laboratory for Personalized Molecular Medicine (Germany). Диагностический тест методом ПЦР подтвердил наличие FLT3-ITD мутации. Также у этого пациента была обнаружена самая распространенная NPM1 мутация типа А c.860-863dup с аллельной нагрузкой 34%. Данные об анализе исследуемых мутаций у пациента в дебюте заболевания отсутствуют, однако хромосомных аномалии у него нет. У

пациента №2 с поздним рецидивом обнаружена наиболее распространенная FLT3-TKD c.2503G>T с уровнем аллельной нагрузки более 50%. Полученные данные были подтверждены методом аллель-специфичной ПЦР Лабораторией молекулярной гематологии НМИЦ Гематологии (Москва). Также есть данные, что у этого пациента выявлен PML-RARA.

У пациента №6 с ранним рецидивом обнаружена FLT3-ITD мутация с ITD длиной 99 bp и аллельной нагрузкой 5%. Сек-венирование подтвердило наличие мутации, т.к. на секвено-грамме видно окончание фрагмента дикого типа и продолжение мутантного фрагмента. Но из-за аллельной нагрузки, ниже порога обнаружения метода, достоверно определить вариант мутации не представляется возможным. Также есть данные, что в дебюте у этого пациента выявлен RPN1-EVI1.

Выводы. Впервые в Красноярском крае был использован метод фрагментного анализа для обнаружения и количественной оценки FLT3 и NPM1 мутаций у пациентов с ОМЛ. Использованный метод позволил выявить мутации у троих из шести пациентов с ОМЛ и провести количественную оценку уровня аллельной нагрузки. Кроме того, была выявлена новая FLT3-ITD мутация, не представленная в COSMIC и затрагивающая интронную область.

В.А. Мисюрин1, И.В. Ярош 2'3, М.В. Дмитриева1, А.А. Рудакова1, И.И. Краснюк3, М.А. Барышникова1

СИСТЕМА ДОСТАВКИ БЕЛКОВ С ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

В ОПУХОЛЕВЫЕ КЛЕТКИ

1Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина» Министерства здравоохранения России, г. Москва

2Акционерное общество «Р-Фарм», г. Москва

3Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), Москва

Введение. Гранзим B (Гр B) является мощнейшим инициатором каспазного каскада и запуска апоптоза в клетке. Благодаря этому Гр B может использоваться как противоопухолевое средство. В настоящее время для доставки Гр B в опухолевую клетку используются CAR-T-лимфоциты. Подобные вакцины эффективны, но их производство сложно и требует больших затрат.

Цель. Разработать контейнеры для доставки Гр B и других протеолитических белков в опухолевую клетку.

Материалы и методы. В нашем исследовании использовались мышиный Гр B и трипсин. Эти белки были упакованы в липосомы по протоколу, предложенному Бенгхемом. Липо-сомы, содержащие трипсин, были добавлены в культураль-ную среду с клетками меланомы mel Kor и клеткам рака молочной железы SK-BR-3. Цитотоксический тест проводился методом МТТ. Для статистического анализа использовался критерий Уилкоксона.

М.А. Михалева1, И.С. Мартынкевич1, Е.В. Мотыко1, С.В. Петров1, И.А. Булдаков1, А.Ю. Кувшинов1, С.В. Волошин1,23

МУТАЦИОННЫЙ СТАТУС ХРОНИЧЕСКОГО ЛИМФОЛЕЙКОЗА: АПРОБАЦИЯ

ТАРГЕТНОЙ NGS-ПАНЕЛИ

Результаты. Эффективность включения Гр B и трипсина в липосомы составляла более 90%. Размер полученных липо-сом составлял около 320 нм. Клетки линий mel Kor и SK-BR-3 погибали в присутствие липосом с трипсином (p <0,01 для обеих линий). Цитотоксичность 0,5 мг/мл липосом на линии mel Kor составила 22%. IC50 определить не удалось, так как не наблюдалось гибели 50% клеток.

Выводы. Как Гр B, так и трипсин могут быть помещены в липосомы, причём липосомы с трипсином обладали цито-токсической активность. В дальнейших экспериментах мы планируем создать липосомы с рекомбинантным гранзимом B человека, и добавить к поверхности липосом антитела к антигену CD22. Планируется определить цитотоксическую активность полученной лекарственной формы на клетках CD22-экспрессирующих лимфом и B-клеточных лимфоид-ных лейкозов.

1Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии

и трансфузиологии федерального медико-биологического агентства», г. Санкт-Петербург 2Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова Министерства Обороны Российской Федерации», г.Санкт-Петербург 3Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова министерства здравоохранения Российской Федерации», г. Санкт-Петербург

Введение. Технологии секвенирования нового поколения (Next-generation sequencing, NGS) произвели революцию в подходах к молекулярно-генетическим исследованиям, сделав возможным определение мутационного статуса, генетической и

эпигенетической изменчивости хронического лимфолейкоза (ХЛЛ). Идентификация драйверных мутаций позволяет глубже понять патогенез ХЛЛ, стратифицировать пациентов на прогностические группы и выбирать терапию в соответствии