СИНТЕЗ ПРОТИВОГРИБКОВЫХ И ПРОТИВОВИРУСНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В РЯДУ ПРОИЗВОДНЫХ АНТИПИРИНА Текст научной статьи по специальности «Химические науки»

УДК 547.795 :

V.I. Krutikov, A.V. Erkin, V.V. Krutikova, E.S. Zakharova

SYNTHESIS

OF 4-AMINOANTIPYRINE DERIVATIVES WITH ANTIFUNGAL AND ANTIVIRAL ACTIVITY

St. Petersburg State Institute of Technology (Technical University) Moskovskii pr. 26, St Petersburg, 190013, Russia e-mail: kruerk@yandex.ru

As the development of the search for effective antiviral and antimicrobial drugs a number of derivatives of 4-aminoanti-pyrine were synthesized. Synthesis based on reaction of 4-aminoantipyrine with aromatic aldehydes. The results of experimental testing of target products coincided with biological effects predicted with the help of PASS computer program. It was shown that products' solubility in lipids greatly influenced their antiviral activity. Optimization of the structures of derivatives of 4-aminoantipyrine based on Hansch method using the software package HyperChem™ Release 8.08 for Windows Molecular Modeling System. Also several compounds showed pronounced activity against yeast-like fungi and pathogenic mycobacteria in vitro.

Keywords: 4-aminoantipyrine, thin layer chromatography, antimicrobial and antiviral activity, lipophilicity, Hansch method.

DOI: 10.15217Zissn1998984-9.2014.26.53

Одну из наиболее серьезных проблем современной медицины представляют грибковые и вирусные заболевания, многие из которых крайне плохо поддаются лечению, что связано как с недостаточной эффективностью существующих препаратов, так и появлением устойчивых форм вирусов и грибов [1, 2].

Изучение соединений, полученных на основе 4-аминоантипирина, выявило у них наличие различных видов биологической активности. Препараты этой группы оказывают характерное для них болеутоляющее, жаропонижающее и противовоспалительное действие.

В последние годы началось активное исследование производных 4- аминоантипирина, а также полу-

547-304.4

В.И. Крутиков1, А.В. Еркин2, В.В. Крутикова3, Захарова Е.С.4

СИНТЕЗ

ПРОТИВОГРИБКОВЫХ И ПРОТИВОВИРУСНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В РЯДУ ПРОИЗВОДНЫХ АНТИПИРИНА

Санкт-Петербургский государственный технологический институт (технический университет), Московский пр., 26, 190013, Санкт-Петербург, Россия e-mail: kruerk@yandex.ru

В продолжение работ по поиску эффективных противовирусных и противомикробных препаратов синтезирован ряд соединений - производных 4-аминоантипирина. В основу синтеза положено взаимодействие 4-амино-антипирина с ароматическими альдегидами. Результаты тестирования целевых продуктов совпали с предсказанием их биологической активности с использованием компьютерной программы PASS. Показано, что уровень противовирусной активности полученных веществ значительно зависит от растворимости их в липидах. Оптимизацию структур производных 4-ами-ноантипирина осуществляли по методу Ганча с использованием пакета программ HyperChem™ Release 8.08 for Windows Molecular Modeling System. Кроме того, оказалось, что некоторые соединения активны in vitro по отношению к дрожжеподобным грибам и патогенным микобактериям.

Ключевые слова: 4-аминоантипирин, тонкослойная хроматография, противомикробная и противовирусная активность, липофильность, метод Ганча.

ченных на их основе комплексов с металлами. При этом полученные соединения показали выраженную противо-микробную активность. Так, были исследованы комплексы Fe (3+), Co(2+), Ni(2+) и Cu(2+) с 4-дициклогексилами-нометилантипирином. Структура комплексов отвечала формулам MLX2, MLX3 или MLX2(H2O)2, где X = Cl, NO3; M = Fe(3+), Co(2+), Ni(2+), Cu(2+). Исследование биологической активности показало, что четырехкоординирован-ные комплексы проявляют б0льшую противомикробную активность, чем пяти- и шестикоординированные [3].

Методом тонкослойной хроматографии с обращенной фазой изучена липофильность соединений формул (1), где R = H, NH2, 2,4(O2N)2C6H3NH, 2,4,6-(O2N)3C6H2NH и (2), а также их взаимодействие с аминокислотами (Gly, His, Asp, Fen, Met, Ser, Leu) [4].

1 Крутиков Виктор Иосифович, д-р. хим. наук, зав. кафедрой химии и технологии синтетических биологически активных веществ, e-mail: kruerk@ yandex.ru

Krutikov Viktor.I., Dr. Sci. (Chem.), Professor, head of Department of Chemistry and Technology of Synthetic Biologically Active Substances , e-mail: kruerk@yandex.ru

2 Еркин Андрей Викторович, канд. хим. наук, доцент кафедры химии и технологии синтетических биологически активных веществ, e-mail: kruerk@ yandex.ru

Erkin Andrey.V., Ph.D. (Chem.), associate Professor, Department of Chemistry and Technology of Synthetic Biologically Active Substances, e-mail: kruerk@yandex.ru

3 Крутикова Вера Валентиновна, мл. научн. сотр. кафедры химии и технологии синтетических биологически активных веществ, e-mail: kruerk@ yandex.ru

Krutikova Vera V., Junior researcher, Department of Chemistry and Technology of Synthetic Biologically Active Substances, e-mail: kruerk@yandex.ru

4 Захарова Екатерина Сергеевна, студентка кафедры химии и технологии синтетических биологически активных веществ, e-mail: kruerk@yandex.ru Zakharova Ekaterina S., student, Department of Chemistry and Technology of Synthetic Biologically Active Substances, e-mail: kruerk@yandex.ru

Дата поступления - 22 октября 2014 года Received October, 22 2014

O^ CH

O N CH

N-N

R1

AnV

S I I \ //

R4 R3

2-гидроксифенил, стирил) и результаты их тестирования против 5 штаммов бактерий: E. coli, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae и Staphylococcus aureus. При этом лучшую активность проявило соединение с R = PhCH=CH2.

CH3

Реакцией 4-аминоантипирина с С1СОСН2С1 получают 4-хлорацетамидо-антипирин (3). Конденсацией 2-R1-4-R2C6HзOCHR3CONHNH2 с R2CNS синтезировали соединения структуры 2-R1-4-R2C6HзOCHR3CONHNHC-SNHR4, щелочной гидролиз которых приводит в результате циклизации к 3-[(2-РМ-Р2-фенилокси)- Р3-метил]-1,2,4-триазол-5-тиолам (4). Взаимодействием 3 с 4 в присутствии К2СО3 синтезировали 5 (Р1 = С1, Ме, Н, ОМе; Я2 = Н, Ме; R3 = Н, Ме; R4 = Et, Ph) с выходами 70-92 % [5].

К сожалению, авторы публикации ограничились лишь расплывчатой констатацией факта исследования анальгетической активности некоторых соединений из полученного ряда.

В публикации [6] было отмечено тестирование вещества формулы 6 против Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Staphylococcus paratyphy A., однако заметной активности оно не проявило.

4-(2-Гидроксибензилиден)аминоантипирин (7) был синтезирован реакцией 4-аминоантипирина с салициловым альдегидом [7].

H3C N O ho

Цель такого синтеза вполне очевидна: авторы стремились соединить в одной молекуле хорошо известные терапевтические свойства производных пиразоло-на и салициловой кислоты. Следует особо подчеркнуть, что соединение (7) было получено при взаимодействии исходных реагентов в твердой фазе.

Авторами работы [8] был описан синтез и свойства азометинов общей формулы (8) (1Р = 2-хлорофенил,

В работе [9] показано, что комплексы Cu", CuCl (L) соединений общей формулой 9, где Х = H, Cl, Me, NO2, проявляют более высокую биологическую активность, чем соответствующие основания Шиффа. Выявлено, что указанные соединения действуют против таких бактерий, как Staphylcoccus aureus, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhi, Pseudomonas aerugeno-sa, Bacillus subtilis.

В настоящем исследовании мы не ставили перед собой цель полного освещения результатов синтеза и оценки биологической активности производных пира-золона. Мы считаем, что особенности структуры подобных соединений обусловливают вероятность проявления ими, помимо «традиционных», и других видов физиологической активности.

Применение в данной работе программы предсказания спектра биологической активности органических соединений PASS (http://www.pharmaexpert.ru/ PASSOnline/ ) показало значительную вероятность проявления производными 4-аминоантипирина антивирусного (Pa 0.781) и антимикобактериального (Pa 0.343) действия. Учитывая определенную условность оценки биологической активности органических веществ современными компьютерными программами, тем не менее, следует отметить актуальность поиска антивирусных и антимикобактериальных препаратов в рассматриваемом ряду. Тем более что подобное предположение получило экспериментальное подтверждение. Так, ранее было запатентовано применение 1-фенил-2,3-диметил-4-йод-пиразол-5-она в качестве средства при профилактике гриппа и других острых респираторных вирусных заболеваний [10].

Результаты и обсуждение

Взаимодействием замещенных бензальдегидов с 4-амино-1,5-диметил-2-фенил-1,2дигидропиразол-3-оном (4-аминоантипирином) осуществлен синтез целевых продуктов:

O CH

O CH

CH3 + H2O

10 а-ж

Значения R указаны в таблице 1.

R

R

X

1

2

S

9

R2

5

N

N

H3C N O

6

R

HN

N

HC

+

+

R

H O

7

4-ариЛидеНаМиНо-1Т5абЛиГт1лФ2ифеК0иХТиирЧе!СоКизеоПнаоРва(1еаГПРЫ) мало отличаются от свойств азометинов на основе 4-ами-

ноантипирина. В самом деле, геометрия соединений 10 и 12 и распределение электронной плотности в них очень схожи (рисунок 1).

№ R Т. пл., Выход, % r;> ПМР 8, м. д.

соед. °С N=CH Ar OH CH3

10а 2,4-Cb 208 83 0.75 9.7 7.5 - 2.4с, 3.4с

10б 2-OH-3,5-Cb 229 83 0.4 9.6 7.6 14.7 2.4с, 3.4с

10в 4-Cl 260 83 0.5 9.55 7.7 - 2.5с, 3.3с

10г 2-OH 210 82 0.6 9.4 7.8 - 2.5с, 3.3с

10Д 3-NO2 228 82 0.7 9.65 8.0 - 2.5с, 3.3с

10е 2-OH-3,5-l2 221222 разл. 84 0.85 9.5 7.6 14.5 2.5с, 3.3с

10ж 2-OH-3,5-Br2 227 83 0.65 9.6 7.9 14.6 2.3с, 3.4с

11 а R'CHs, R" 4-Cl 238 разл. 23 0.57 - 8.0 - 2.3с

11 б R'CHs, R" 2,4-(OH)2 242 разл. 24 0.50 - 8.0 - 2.3с

Примечание *) R,: X а, XI а, б хлороформ - метанол = 9:1 X б-ж хлороформ - метанол = 20:1

Структура целевых соединений подтверждена спектром протонного магнитного резонанса. Для спектров ПМР полученных соединений характерными являются сигналы протона азометиновой группы в области 9.4^9.7 м.д., сигналы протона гидроксильной группы в области 14.5^14.7 м.д., ароматических протонов в диапазоне 7.0^8.0 м.д. Значения химических сдвигов основных групп полученных соединений приведены в таблице 1.

С целью модификации азометинового фрагмента и оценки его влияния на биологическую активность были синтезированы соединения общей формулы 11. Взаимодействие 4-аминоантипирина с ароматическими кетона-ми проводили по методике, аналогичной предыдущей. Однако из-за более низкой реакционной способности ароматических кетонов по сравнению с альдегидами требовалось применение минеральной кислоты в качестве катализатора.

С CH,

11a: R = CH3, R' = 4-Cl, кат. HCl; 11б: R = CH2CI; R' = 3,5-(OH)2, Kam.H2SO4

Процесс проводили при постоянном перемешивании и температуре кипящей водяной бани. В качестве катализатора использовали серную и соляную кислоты.

Тот факт, что комплексные соли азометинов проявили большую активность, чем сами основания Шиффа [9], свидетельствует о важности распределения электронной плотности в молекуле замещенного пиразолона при проявлении ими биологической активности, а также о необходимости учета соотношения растворимости соединений в воде и липидах.

С целью выяснения роли азометинового фрагмента в молекуле производных 4-аминоантипирина мы осуществили синтез ряда 4-ариламинометил-2,4-дигид-ро-2-фенил-5-метилпиразол-3-онов (12). Молекулы этих соединений по своим физико-химическим параметрам

Рисунок 1. Оптимизация молекул соединений (А) и (Б) по методу Флетчера-Ривса

Б

Рисунок 2. Распределение электронной плотности соединений (А) и (Б), рассчитанное по программе Hyper MM+ QSAR Properties

Б

+

АН

R

+ HO

+

R

На рисунке 1 представлены молекулы 4-арилиде-намино-1,5-диметил-2-фенил-1,2-дигидропиразол-3-она (А) и 5-метил-2-фенил-4-ариламинометилен-2,4-дигид-ропиразол-3-она (Б), структура которых оптимизирована нами по программе Hyper MM+ Molecular Mechanics. Молекулярная динамика указанных молекул рассчитана при температуре 300 К в вакууме. На рисунке 2 показано распределение электронной плотности в молекулах соединений (А) и (Б).

(C2H5O)3CH +

12

Синтез проводили при постоянном перемешивании и температуре 80-90 °С. Полученные продукты пере-кристаллизовывали из изопропанола. Значения 1Р и физико-химические параметры полученных по аналогичной схеме соединений приведены в таблице 2.

Таблица 2. Физико-химические параметры

С пллтил О г^лпип А -1 т I п -1 п м I л п л л.-и I I п л > |ш |п -1п г* > I О ттп /111

№ R Выход, Т. пл., Спектр ПМР 8, м.д.

соед % °С СН NH СН3

12а Ph 88 157 8.56c 11.39c 2.29с

12б 2-ClC6H4 80 175 8.72c 11.82д 2.31с

12в 4-CH3C6H4 75 167 8.66c 11.56c 2.30с

12г 2-IC6H4 71 182 8.59c 11.70c 2.28с

12д 2,6-Cl2C6H4 45 184 8.70c 11.64c 2.29с

12е 4-BrC6H4 74 164 8.72c 11.55c 2.31с

12ж 1-Napht 79 150 8.55c 11.72c 2.29с

12з 2,3-Cl2C6H3 71 180 8.67c 11.79c 2.27с

Оценка биологической активности целевых соединений

Синтезированные соединения в ряду производных аминоантипирина были протестированы на различные виды противогрибковой и противовирусной активности. Оценку противовирусной, противогрибковой и антимикобактериальной активности синтезированных веществ осуществляли по известным методикам [11]. Результаты испытаний представлены в таблице 3.

Таблица 3. Результаты биологических испытаний 4-арилиденамино-1,5-диметил-2-фенилпиразол-3-онов (10,11)*

R lg 1/C50 Параметр липофильности lg P

HSV-1 Candida albicans Mycobacterium smegmatis

2,4-Cl2 3.16 - - 1.26

2-OH-3,5-Cl2 3.18 - - 2.59

4-Cl 2.98 - - 0.55

2-OH 2.96 - - 1.17

3-NO2 3.10 4.1 4.06 -1.95

2-OH-3,5-l2 3.85 - 4.3 4.06

2-OH-3,5-Br2 3.26 - - 3.13

XI a - - - 2.10

XI б - - - 4.45

Примечание *) Прочерки в таблице означают, что изученные соединения не активны в отношении использованных тест-культур патогенных микроорганизмов

Обращает на себя внимание тот факт, что все синтезированные нами 4-арилиденаминопиразолоны проявили противовирусную активность. Кроме того, препараты (10д) и (10е) in vitro активны на достаточно высоком уровне по отношению к дрожжеподобным грибам и патогенным микобактериям. Это подтверждает наши предположения о перспективности поиска новых эффективных противовирусных препаратов в ряду замещенных пиразолонов. В то же время этилиденаминопи-разолоны (11а, б) были неэффективны по отношению к выбранным в настоящей работе штаммам, хотя параметр липофильности подобных соединений достаточно высок. Пока этот факт не получил аргументированного объяснения. В любом случае необходим дополнительный статистический анализ биоактивности этилидена-минопиразолонов.

Результаты, полученные в ходе наших исследований, подтверждают предположение о том, что для проявления заметной противогрибковой и противогерпесной активности в ряду замещенных пиразолонов необходимо синтезировать вещества с достаточно высокой растворимостью в липидах. На рисунке 3 представлена зависимость уровня противогерпесной активности соединений (10) от их липофильности. Величина lg P рассчитана по программе Hyper MM+ QSAR Properties.

Параболический характер кривой lg 1/C50 - lg P подтверждает классическую зависимость Ганча (C50 - концентрация вещества, вызывающая 50 %-ное угнетение роста микроорганизмов) . При этом минимум активности проявляют соединения (10) с практически одинаковой растворимостью веществ в воде и липидах. Ниже представлены расчеты, подтверждающие этот вывод.

lg I/C50 = 2.94 - 0.0016 lg P + 0.0488 (lg P)2 d(lg I/C50) / d(lg P) = - 0.0016 + 2 • 0.0488 lg P = 0 lg Pmin = 0.016

4-Ариламинометилен-5-метил-2-фенил-2,4-ди-гидропиразол-3-оны (12) были также протестированы на биологическую активность. При этом оказалось, что эти соединения не оказывают in vitro никакого воздействия на штаммы микобактерий и вирусов. Таким образом, изменение положения атомов углерода и азота в молекулах пиразолонов приводит к потере биологической активности. Видимо реакционная способность этилиденаминопи-разолонов в биологических средах отличается от таковой для азометинов (10). Известно [12], что производные антипирина в основном выделяются из организма в неизмененном виде. Азометины на основе антипирина в биологических средах протонируются с сохранением пи-разолонового кольца, протонирование же ариламиноме-тиленпиразолонов (12), скорее всего, должно привести к разрушению этого фрагмента, что и ведет к исчезновению противовирусного действия.

Экспериментальная часть

Спектры ПМР записаны в растворе ДМСО-de на спектрометре Bruker (рабочая частота 200 МГц, внутренний стандарт - сигналы остаточных протонов ДМСО, программное обеспечение Bruker-Franzen Analytik GmbH Version: 950801.1).

Индивидуальность веществ доказана методом тонкослойной хроматографии на пластинах Silufol UV-254. Оценку эффективности различных систем элюен-тов осуществляли по величине дискриминирующей силы (ДС):

ДС = 1 -2M/N(N-1)

где N-число веществ, подвергаемых разделению на пластинке, М-число пар, образованных веществами, между пятнами которых ARf < 0,05.

В качестве подвижных фаз были использованы следующие системы растворителей: хлороформ : метанол (5.5 : 1, А); хлороформ : метанол (9 : 1, В); хлороформ

O

+

R

: метанол (10 : 1, С); хлороформ : метанол (15 : 1, D); хлороформ (E); ацетон : гексан (4 : 1, F); ацетон : гексан (1 : 1, G); хлороформ-метанол (20 : 1, H), кислота уксусная-бу-танол-вода (1 : 1 : 1, I). Нами установлено, что оптимальными являются двухкомпонентные подвижные фазы, состоящие из хлороформа и метанола (20^1, Н) а также из уксусной кислоты, бутанола и воды (1 : 1 : 1).

Температуры плавления определены на приборе для измерения температуры плавления ПТП.

Расчет конфигурации, распределения электронной плотности, параметра липофильности молекул и их молекулярная динамика проводились на персональном компьютере с использованием пакета программ Hy-perChem™ Release 8.08 for Windows Molecular Modeling System.

Антимикобактериальная и антивирусная активность 4-арилиденаминопиразолонов изучены по отношению к стандартным штаммам из коллекции кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии С.-Петербургского Государственного университета им. академика И.П. Павлова, за что авторы выражают глубокую благодарность профессору В.В. Тецу и его сотрудникам.

4-(2,4-дихлорбензилиден)амино-1,5-диме-тил-2-фенилпиразол-3-он (10а). К 0.56 г 4-аминоанти-пирина (0.0028 моль), растворенного в 15 мл этанола, при температуре кипящей водяной бани порциями при перемешивании прибавляют 0.48 г 2,4-дихлорбензаль-дегида (0.0028 моль), растворенного в 25 мл этанола. При этом в колбе выпадает осадок желтого цвета. Реакционную массу перемешивают в течение 30 минут на кипящей водяной бане, затем постепенно охлаждают до комнатной температуры. Полученный осадок отфильтровывают, промывают 15 мл этанола и высушивают. Выход целевого продукта 0.82 г (82 % от теоретического). Остальные 4-арилиденамино-1,5-диметил-2-фенилпира-зол-3-оны синтезируют аналогичным способом. Индивидуальность полученных соединений доказана методом ТСХ: дополнительной очистки продуктов реакции не требовалось. Параметры полученных соединений представлены в таблице 1.

1-(4-хлорфенил)этилиденамино-1,5-диметил-2-фенилпиразол-3-он (11а). К 0.6 г 4-аминоантипирина (0.0029 моль), растворенного 15 мл этанола, на кипящей водяной бане порциями при перемешивании добавляют 0.46 г 4-хлорацетофенона (0.0029 моль), растворенного в 30 мл этанола. Окончание реакции определяют по результатам тонкослойной хроматографии. Затем постепенно охлаждают реакционную массу до комнатной температуры, отфильтровывают выпавший светло-желтый осадок, промывают 15 мл этанола и высушивают. Выход 0.27 г (23 % от теоретического).

5-метил-2-фенил-4-фениламинометилен-2,4-дигидропиразолон-3-он (12а). Смешивают 0.465 г (0.005 моль) анилина, 0.87 г (0.005 моль) 5-метил-2-фенил-2,4-дигидролпиразол-3-она и 0.74 г (0.005 моль) триэтилор-тоформиата. Реакционную массу перемешивают при 8090 °С в течение 1 ч, затем охлаждают, при температуре 70 °С масса затвердела. По данным тонкослойной хроматографии в реакционной массе, помимо целевого продукта, присутствовали в небольшом количестве анилин, а также неидентифицированные примеси. Целевое соединение перекристаллизовывали из изопропанола. Выход 1.22 г (88 % от теоретического). Физико-химические параметры остальных арилиденпиразолонов представлены в таблице 2.

Заключение

Анализ уровня антивирусной активности азометинов на основе 4-аминоантипирина однозначно показал существенное влияние параметра липофильности на величину биологического отклика этих соединений. Кроме того, оказалось необходимым сохранение в молекуле связи CH=N, так как ее модификация приводит к потере биологической активности. Результаты проведенных исследований показали, что среди 4-арилиденамино-1,5-диметил-2-фенилпиразол-3-онов возможен поиск соединения-лидера противовирусного действия.

Литература

1. Fidel P.L. Jr., Vazquez J.A., Sobel J.D. Candida glabrata: review of epidemiology, pathogenesis and disease with comparison to C. albicans: ASM News, 1999, 1, p. 80-96.

2. White T. Antifungal drug resistance in Candida albicans: Ibidem, 8, pp. 427-433.

3. Kalarani N., Sangeetha S., Kamalakannan P., Venkappayya D. Synthesis of 4-dicyclohexylaminomethyl an-tipyrine and its metal complexes. Spectral characterization fnd avaluation of thermodynamic parameters // Координационная химия. 2003. Т. 29. № 12. С. 909-915.

4. Sahinivi Victor E., Caproiu Miron T., lonita Gabritl-la Lipophilicity study of some antipyrine derivatives and their interaction with aminoacids // Rev. Roum. Chem. 1999. V.44. № 9. P. 817-822.

5. Turan-Zitouni GQlhan, Sivaci Meltem, Kilic Fatma S., Erol Kevser Synthesis of some triazolyl- antipyrine derivatives and investigation of analgesic activity // Eur. J. Med. Chem. 2001. V.36. № 7-8. P. 685-689.

6. Agrawal R.K., Chakraborti I. Synthesis, spectral and biological studies of some bioactive metal coordination compounds of thiosemicarbazones derived from 4-aminoantipyrine // Oriental Journal of Chemistry. 2002. V. 18. N 2. P. 343-346.

7. Li. Ren-Yu, Bei. Feng-Li, Ma. Wei-Xing,Yang. Xu-Jie, Xu. Xing-You, Lu. Lu-De, Wang. Xin. One step synthesis of sacilydene-4-aminoantipyrine by solid phase reaction at room temprature // Youji Huaxue. 2003. V. 23. N 8. P. 846-849 / C.A. 2004. V. 140. 27779g.

8. Nair R., Shah A., Baluja S., Chanda S.V. Synthesis and antibacterial activity some Schiff bases derived from sulphonamide, 4-aminoantipyrine and acetophenone // Med. Chem. Res. 2002. V.11. № 8. P. 463-479.

9. Roman N., Kulandaisamy A., Thangarajan Ch., Manisankur P., Viswanathan S., Vedhi Ch. Synthesis, strurtural characterisation and eleсtrochemical and antibacterial studies of Schiff base copper complexes // Transition Metal Chem. 2004. V. 29. № 2. P. 129-135.

10. Саратиков А.С., Яворовская В.Е., Лепехин А.В., Помогаева А.П., Пучкова Н.Н. Средство для профилактики гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций: пат. 2175548 Рос. Федерация. № 98107411/14; заявл. 20.04.1998; опубл. 10.11.2001 // http://ru-patent. info/21/75-79/2175548.html

11. Gentry G.A, Lawrensy N., Lushbaugh N. Isolation and Differentiation of Herpes Simplex Virus and Trichomonas vaginalis in Cell Culture // J. of Clinical Microbiology. 1985. V. 22. N 2. Р. 199-204; Wang S-P., Grayston J.T. Serotyping of Chlamydia trachomatis by inderect fluorescent-antibody staining of inclusions in cell culture with monoclonal antibodies //Ibidem, 1991. V. 29. N 7. Р. 1295-1298; Judson B.A. Lambert P.P. Improved Syva MicroTrac Clamydia trachomatis direct test method // Ibidem, 1988. V. 26. N 12. Р. 2657-2658;

12. Машковский М.Д. Лекарственные средства: пособие для врачей. В 2-х т. Т. 1. М: Медицина, 2003. 540 с.