Синтез новых борсодержащих производных (s) - глутамина и (s) -аспарагина как основа для создания новых агентов для БНЗТ опухолей Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»



26 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

человека), А-172 (глиобластома человека), РАЫС-1 (аде- конденсация протекает при использовании метода смешан-нокарцинома протоков поджелудочной железы человека), ных ангидридов. Поскольку исходные ^ациламинокислоты HeLa (аденокарцинома шейки матки человека). Цитоток- на основе карборана имеют в своей структуре хиральную сичность соединения определяли после 24 и 72 ч действия плоскость, дипептиды на их основе представляют собой по методу МТТ-теста. Профиль клеточного цикла изучали смеси диастереомеров. Нами разработаны методы анализа методом проточной цитофлуориметрии. Уровень экспрес- и разделения диастереомерных борсодержащих пептидов, сии генов р21, 14-3-3, репа, поха и sod2 определяли методом в каждом случае получены индивидуальные стереоизомеры ПЦР в режиме реального времени с использованием реак- ^е > 95 % по данным ВЭЖХ и спектроскопии ЯМР). ционной смеси qPCRmix-HS SYBR (Евроген, Россия) по- Расщепление трет-бутиловых эфиров под действием сле 12 ч действия комплекса в дозе 1С50. трифторуксусной кислоты позволило получить карбора-Результаты. Показано, что комплекс ИНК-2 обладает нил-дипептиды со свободной карбоксильной группой. токсичностью для опухолевых клеток всех изученных ли- Карборансодержащие #-ациламинокислоты получены ний. Наибольшую цитотоксичность исследуемый ком- в диастереомерно чистом виде ^е > 95 %). Абсолютная плекс проявил на линии А-172 (87 мкМ), а наименьшую — конфигурация всех полученных соединений определена на клетках линии РАЫС-1 (189 мкМ). Анализ клеточного методом рентгеноструктурного анализа. цикла при действии комплекса ИНК-2 выявил существен- Результаты. Синтезирован ряд новых С- и ^защищенных ное снижение количества клеток в фазах G1 и G2/М, а так- псевдо-дипептидов на основе планарно-хиральной борсодер-же накопление клеток в области subG1, что говорит об ин- жащей аминокислоты. Проведен кислотный гидролиз трет-дукции клеточной гибели. В клетках А-172 комплекс бутиловых эфиров карборанил-дипептидов. Исследованы ИНК-2 вызывает значительную активацию экспрессии возможности получения индивидуальных стереоизомеров гена остановки клеточного цикла р21 и проапоптотическо- пептидов, имеющих в структуре остаток карборана. го гена поха. Заключение. Полученные соединения представляют Заключение. Показано, что комплекс платины (IV) интерес в качестве потенциальных агентов для БНЗТ, а такс лигандами — производными ИНК-2 — оказывает цито- же полупродуктов в синтезе опухолетропных карборансо-токсическое действие на опухолевые клетки разных типов; держащих олигопептидов. самая высокая токсичность показана для клеток глиобла- Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ стомы А-172. Цитотоксическое действие комплекса ИНК- (грант 16-33-60122). 2 на клетки А-172 сопровождается выраженным изменением клеточного цикла и экспрессии генов, участвующих Д.А. Груздев1, Г.Л. Левит1, В.А. Ольшевская2, В.П. Краснов1 в регуляции пролиферации и клеточной гибели. СИНТЕЗ НОВЫХ БОРСОДЕРЖАЩИХ ПРОИЗВОДНЫХ (Л) - ГЛУТАМИНА И (Л) -Д.А. Груздев1. В.О. Устинова1. А.Ю. Вигоров1, Г.Л. Левит1, АСПАРАГИНА КАК ОСНОВА ДЛЯ СОЗДАНИЯ НОВЫХ В.А. Ольшевская2, В. П. Краснов1 АГЕНТОВ ДЛЯ БНЗТ ОПУХОЛЕЙ ПОЛУЧЕНИЕ КАРБОРАНСОДЕРЖАЩИХ ПСЕВДО- Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского ДИПЕПТИДОВ НА ОСНОВЕ ПРИРОДНЫХ УрО РАН, Екатеринбург, Россия; АМИНОКИСЛОТ, НОВЫХ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ 2Институт элементоорганических соединений им. А.Н. НеАГЕНТОВ ДЛЯ БОР-НЕЙТОРОНОЗАХВАТНОЙ смеянова РАН, Москва, Россия ТЕРАПИИ ОПУХОЛЕЙ Введение. Бор-нейтронозахватная терапия (БНЗТ) — 1Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского важный современный подход к лечению онкологических УрО РАН, Екатеринбург, Россия; заболеваний. Метод предусматривает комбинированное 2Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Не- использование борсодержащих химических агентов и об-смеянова РАН, Москва, Россия лучение тепловыми нейтронами. Производные биомоле-Введение. Производные 1,2-дикарба-клозо-додекабора- кул, содержащие фрагменты 1,2-дикарба-клозо-додекабо-нов (карборанов) представляют интерес в качестве агентов ранов (карборанов), привлекают к себе пристальное для бор-нейторонозахватной терапии (БНЗТ) опухолей. внимание в связи с поиском эффективных агентов для БН-Важным путем оптимизации агентов для БНЗТ является ЗТ. Известно, что клетки злокачественных новообразова-введение в их структуру фрагментов природных аминокис- ний активно утилизируют аминокислоты и соединения лот. Известно, что транспорт и биологическая активность на их основе. Производные полифункциональных амино-хиральных соединений существенно зависят от их про- кислот, содержащие фрагмент карборана в боковой цепи странственной конфигурации и оптической чистоты. и имеющие свободные карбоксильную и аминогруппы Цель исследования — разработать методы получения в альфа-положении, являются привлекательными соеди-дипептидов на основе природных (5) — аминокислот и пла- нениями с точки зрения доставки бора внутрь опухолевых нарно-хиральных (3-ациламино-1,2-дикарба-клозо-до- клеток. декаборан-1-ил) уксусных кислот. Цель исследования — получить производные (5) — глу-Материалы и методы. Защищенные псевдо-дипептиды таминовой и (5) — аспарагиновой кислот со свободными получены исходя из трет-бутиловых, метиловых и 1-ада- функциональными группами в альфа-положении, содер-мантиловых эфиров (5) — аминокислот (валина, фенилала- жащих остаток карборана в боковой цепи. нина и др.) и рацемических карборансодержащих #-ацил- Материалы и методы. Трет-бутиловые эфиры N-трет-аминокислот. Показано, что с наибольшим выходом бутоксикарбонил (Вое) — (5) — глутамина и Вое- (5) —

Спецвыпуск / том 16 / 2017 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

27

аспарагина, содержащие фрагменты карборана в боковой цепи, получены ацилированием 3-аминокарборана альфа-трет-бутиловыми эфирами Boc- (S) — глутаминовой и Boc- (S) — аспарагиновой кислот. Удаление защитных групп в одну стадию позволило получить карборанил-(S) — глутамин и карборанил- (S) — аспарагин в оптически чистом виде, что подтверждено результатами ВЭЖХ анализа на хиральной неподвижной фазе.

Результаты и заключение. Синтезированы производные (S) — глутамина и (S) — аспарагина, содержащие фрагменты карборана в боковой цепи и имеющие свободные ами-но- и карбоксильную группы в альфа-положении. Новые соединения отличаются высоким содержанием бора (37,5— 39,4 % по массе), хорошей растворимостью в водных средах и представляют значительный интерес с точки зрения поиска избирательных агентов для БНЗТ

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (грант 16-33-60122).

И.Д. Гулякин1, Али Хашем2, М.В. Дмитриева1,

Л.Л. Николаева12, Е.В. Игнатьева1, Н.А. Дмитричева1,

И.В. Ярцева1, Л.А. Король2

ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ПРОИЗВОДНОГО ИНДОЛОКАРБАЗОЛА - ЛХС-1208

1ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия;

2ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, Москва, Россия

Введение. В лаборатории разработки лекарственных форм ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России выбран состав и предложена технология получения лио-филизированной липосомальной лекарственной формы (ЛЛЛФ) ЛХС-1208. Для проведения комплекса доклинических исследований наработаны экспериментальные серии ЛЛЛФ ЛХС-1208.

Цель исследования — определить показатели качества для стандартизации ЛЛЛФ ЛХС-1208.

Материалы и методы. Образцы экспериментальных серий ЛЛФ-лио ЛХС-1208. Оборудование: спектрофотометр Cary 100 (Agilent Technologies, Австралия), наносайзер Submicron Particle Sizer Nicomp-380 (Particle Sizing Systems, США), рН-метр HANNA HI 2211 (Hanna Instruments, Румыния), весы аналитические Sartorius 2405 (Sartorius AG, Германия), весы лабораторные AND DL-120 (A&D Company Limited, Япония). Методы: УФ-спектроскопия, тонкослойная хроматография (ТСХ), лазерная спектрометрия, потенциометрия.

Результаты. Для стандартизации ЛЛЛФ ЛХС-1208 выбраны следующие показатели, по которым необходимо контролировать качество препарата после получения и в процессе хранения: описание, регидратируемость, подлинность, размер везикул, pH, количественное определение и однородность дозирования, средняя масса содержимого флакона, потеря в массе при высушивании. ЛЛФ-лио представляет собой сухую пористую массу светло-желтого цвета, при регидратации которой образуется светло-желтая дисперсия. Подлинность препарата подтверждали электронным спектром поглощения, характерным для ЛХС-

1208, и проведением ТСХ-анализа. Размер липосом составил 175—190 нм; рН лиофилизата после регидратации в воде — 6,1—7,1. Содержание ЛХС-1208 во флаконе — 1,8 ± 0,3 мг — определяли методом прямой спектрофотоме-трии в максимуме поглощения при длине волны 320 ± 2 нм. Установлено, что вспомогательные вещества, входящие в состав ЛЛЛФ, не имеют в этой области собственного поглощения и не влияют на положение аналитического максимума в спектре основного вещества. Относительная ошибка определения не превышает 2,0 %. Средняя масса содержимого флакона находилась в пределах от 1,064 до 1,113 г. Потери в массе при высушивании не превышали 3 %.

Заключение. На основании проведенных исследований выбраны показатели качества для стандартизации ЛЛЛФ ЛХС-1208 и последующей разработки проекта НД.

Н.Н. Турина1. Т.С. Егорова1, С.Г. Фомина1, Д.В. Новиков1, Р.Г. Пегов2, М.А. Магомедов2, В.В. Новиков1 СВЯЗЬ ЧАСТОТЫ ОБНАРУЖЕНИЯ ИЗОФОРМ МРНК МиС1/Х^ С УРОВНЕМ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА 1САМ1 В КАРЦИНОМАХ ТОЛСТОЙ КИШКИ Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород, Россия;

Нижегородская государственная медицинская академия, Нижний Новгород, Россия

Введение. Исследования модельных линий раковых клеток показали, что гипогликозилирование МиС1 способствует связыванию белка с молекулой клеточной адгезии 1САМ1. Взаимодействие МиС1 и 1САМ1 опосредует миграцию опухолевых клеток в близлежащие ткани и кровоток с использованием механизмов, сходных с подвижностью клеток иммунной системы.

Цель исследования — сопоставить характер экспрессии изоформ мРНК МиС1 и уровень экспрессии молекулы клеточной адгезии 1САМ1 в образцах опухолевых очагов пациентов с раком толстой кишки (РТК).

Материалы и методы. Исследовали 58 образцов опухолевых очагов, полученных после резекции опухоли от пациентов с колоректальным раком, проходивших лечение в ГБУЗ НО «Нижегородский областной клинический онкологический диспансер». Частоту обнаружения альтернативных форм мРНК в опухолевых очагах пациентов с РТК исследовали методом ОТ-ПЦР. Уровень экспрессии генов МиС1 и 1САМ1 определяли методом ОТ-ПЦР в реальном времени. Нормирование уровней экспрессии проводили относительно мРНК 4 генов домашнего хозяйства: бета-2-микроглобулина, тирозин-3-монооксигеназы, убикви-тина С, гипоксантин-гуанин фосфорибозилтрансферазы.

Результаты. Матричная РНК МиС1 обнаружена в 76 % (44 из 58) образцов опухолевых очагов пациентов с РТК, мРНК 1САМ1 в 80 % (50 из 58). Корреляционных связей между уровнями экспрессии генов МиС1 и 1САМ1 не обнаружено. В опухолевых очагах, позитивных на мРНК МиС1, исследовали частоты обнаружения 9 вариантов сплайсинга мРНК МиС1. мРНК изоформ, относящихся к группе МиС1/А^, детектировалась в 34 % (15 из 44) опухолевых очагов; мРНК группы МиС1/Х^ выявлены

Спецвыпуск/ том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ