Экспериментальная онкология Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ

Н.В. Андронова1, Д.В.Филоненко1, А.Л. Николаев1,

А.В. Гопин2, Е.М. Трещалина1, Б.Я. Коган3,

Г.Н.Ворожцов3

ЭФФЕКТИВНОСТЬ МОДИФИКАЦИИ ЛОКАЛЬНОЙ

УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ГИПЕРТЕРМИИ С ПОМОЩЬЮ НАНОЧАСТИЦ СЕРЕБРА

‘ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА 2МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва 3ФГУП ГНЦ НИОПИК, Москва

Введение. Эффективность ультразвуковой гипертермии (УЗ-ГТ) в онкологии широко известна. Нами совместно с ООО «Альбедо» разработана установка для локальной УЗ-ГТ, генерирующая гипертермию в ранге температур от 39 до 50 С. С помощью этой установки выполнен цикл работ по изучению различных термомодификаторов УЗ-ГТ, направленных на повышение избирательности повреждающего действия. Наиболее перспективные результаты получены с наночастицами серебра (HЧ-Ag). Результаты исследования представлены ниже.

Цель исследования. В эксперименте оценить эффективность модификации противоопухолевого действия УЗ-ГТ с помощью наночастиц серебра под контролем переносимости.

Материалы и методы. Использованы мыши-самцы ББП 19-22 г с в/м перевитой эпидермоидной карциномой легкого Льюис Уо=0,7-1,0 см . В опыте 10 групп мышей (п=5-8). Основные группы получали HЧ-Ag за 115 мин - 1 ч до УЗ-ГТ 43 С 10 мин. Группы сравнения получали УЗ-ГТ 43 С 10 мин. Группа контроля получала инъекции физиологического раствора. В качестве модификаторы использованы HЧ-Ag, покрытые ПЭГ или ПВТ: HЧ-Ag-ПЭГ 1,5 мг/кг или HЧ-Ag-ППB 20 мг/кг. Характеристики УЗ-ГТ 43 С: 1 поле - 1 Вт/см2; 0,88 МГц; 2 поле - 2 Вт/см2; 2,64 МГц; контактная среда - вода

39 С. Температура в опухоли 43 С (контролировали с помощью термопары). Оценка эффективности: по времени удвоения опухоли «т» и коэффициенту усиления эффекта как соотношение ТопьшДкотрспя К—.

Результаты. В группе УЗ-ГТ 43 С получен К=2,0. В группах с НЧ^-ПВП+УЗ-ГТ получен К=2,5-3,5 при интервалах 1 мин-1 ч соответственно. В основных группах HЧ-Ag-ПЭГ+УЗ-ГT получен К=4,0-4,7 при тех же интервалах. Терапевтический выигрыш в случае применения HЧ-Ag-ПЭГ в дозе 1,5 мг/кг, введенного за 15 мин до УЗ-ГТ составил 1,8 раз (р<0,05). Переносимость всех видов воздействия удовлетворительная, видимых повреждений нормальных тканей в месте УЗ-ГТ не наблюдали.

Заключение. Использование HЧ-Ag-ПЭГ 1,5 мг/кг в качестве модификатора с УЗ-ГТ 43 С в схеме ЦП+Доксо приводит к достоверной задержке роста в/м трансплантированного ЬЬС в сравнении с УЗ-ГТ.

Исследования выполнены при финансовой поддержке Правительства Москвы.

Н.В. Андронова1, Д.В. Филоненко1, А.Л. Николаев1,

А.В. Гопин2, Е.М. Трещалина1, О.Л. Калия3,

Г.Н. Ворожцов3

ЭФФЕКТИВНОСТЬ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ СОНОДИНАМПЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ПО СХЕМЕ ЦИСПЛАТИН+ДОКСОРУЬИЦИН С ТЕРАФТАЛОМ НА МЫШАХ С ПЕРЕВИВАЕМОЙ КАРЦИНОМОЙ ЛЕГКОГО

1 ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

2 МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва 3ФГУП ГНЦ НИОПИК, Москва

Введение. Ранее нами была продемонстрирована эффективность сонодинамической терапии опухолей , включающей локальное ультразвуковое воздействие (УЗ) с предварительным применением соносенсибилизатора в виде терафтала в сочетании с монохимиотерапией. В содружестве с ООО «Альбедо» разработана установка УСДТ, которая предназначена для клинического изучения метода СДГ у больных саркомами мягких тканей, получающих комбинированную химиотерапию по схеме цисплатин + доксорубицин. Для обоснования клинического изучения СДТ с ТФ в сочетании с ЦП+Доксо проведено экспериментальное изучение эффективности этой схемы.

Цель исследования. Оценить эффективность и переносимость СДТ с ТФ на мышах с карциномой Льюис.

Материалы и методы. Использованы мыши-самцы ББИ 19 - 22 г с в/м перевитой эпидермоидной карциномой легкого Льюис Уо=1,7 см3. В опыте 5 групп мышей (п=5-8). Основная группа УЗ с ТФ и ЦП+Доксо. Группы сравнения получали УЗ; УЗ с ТФ; УЗ с ЦП+Доксо. Группа контроля не получала лечения. Характеристики УЗ: 1 поле - 1 Вт/см ; 0,88 МГц;

2 поле - 2 Вт/см2; 2,64 МГц; контактная среда - вода. ТФ 25 мг/кг вводили в/в за 1 ч до УЗ, цитостатики вводили одновременно последовательно за 2 ч до УЗ ЦП 4 - 5 мг/кг в/б, Доксо 5-7 мг/кг в/в. Оценка эффективности: по времени удвоения опухоли «т» и коэффициенту усиления эффекта как соотношение

^опыта^контроля^ .

Результаты. В группе УЗ+ТФ+ЦП+Доксо получен К=6,0. В группах УЗ, УЗ+ТФ, УЗ+ЦП+Доксо получен К=2,0 - 3,3-4,0 соответственно. В основной группе СДТ с ТФ в сравнении с СТД без ТФ терапевтический выигрыш составил 1,5 раза. Переносимость всех видов воздействия удовлетворительная, видимых повреждений нормальных тканей в месте УЗ не наблюдали.

Заключение. Использование ТФ в качестве соносенсибилизатора с УЗ в сочетании с комбинированной химиотерапией по схеме ЦП+Доксо приводит к задержке роста в/м трансплантированного ЬЬС в 1,5 раза в сравнении с использованием СДТ без терафтала.

Исследования выполнены при финансовой поддержке Правительства Москвы.

Группа, доза Т2 К

Контроль (физ. р-р), 2 опыта 1,5-2,0 -

УЗ-ГТ 43°С 4,0 2,0

HЧ-Ag-ПBП 20 мг/кг+1 мин+УЗ-ГТ 5,0 2,5

НЧ^-ПВП 20 мг/кг+15 мин+УЗ-ГТ 7,0 3,5

HЧ-Ag-ПBП 20 мг/кг+1 час+УЗ-ГТ 7,0 3,5

НЧ^-ПЭГ 1,5 мг/кг+1 мин+УЗ-ГТ 6,0 4,0

НЧ^-ПЭГ 1,5 мг/кг+15 мин+УЗ-ГТ 7,0 4,7

НЧ^-ПЭГ 1,5 мг/кг+1 ч+УЗ-ГТ 6,0 4,0

Г.Н. Апрышко, Л.В. Гончаренко, Р.Б. Пугачева СИСТЕМА ПРЕДСТАВЛЕНИЯ СТРУКТУРНО-ХИМИЧЕСКОЙ ИНФОРМАЦИИ В БАЗЕ ДАННЫХ

ПО ПРОТИВООПУХОЛЕВЫМ ВЕЩЕСТВАМ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН

ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Задачи исследования. Разработать единые правила представления структурных формул химических соединений в Базе данных по противоопухолевым веществам (БДПОВ) РОНЦ с целью обеспечения максимальной полноты информационного поиска и эффективного использования структурно-химических данных при виртуальном скрининге биологически активных веществ.

Материалы и методы. Использованы информационные ресурсы Банка данных по противоопухолевым веществам РОНЦ РАМН - массив паспортов на вещества, передаваемые для биологического изучения, и компьютерная база данных, Интернет-доступные базы данных химического профиля, СУБД ISISBASE, программа ISISDRAW.

Результаты. При эксплуатации БДПОВ РОНЦ выявлены различные подходы химиков к графическому представлению - как в традиционном бумажном варианте, так и в электронном виде - структурных формул таких веществ, как структурные изомеры, координационные соединения, полимеры, многокомпонентные системы, сольваты. При разработке правил стандартного представления структурно-химической информации в БДПОВ РОНЦ использованы результаты анализа соответствующих данных в базах данных по химии систем STN International, CAS, ChemWeb, по биологически активным веществам и лекарствам PUBCHEM, Prous Science Integrity, DrugBank, KEGG LIGAND, информационной системы Development Therapeutic Program NCI.

Разработанные правила основаны на принципах исключения из поля структурных данных текстовой информации и сокращенных названий функциональных групп и радикалов типа Me, Ет и т.п., обязательного указания стереохимии оптических центров стереоизомеров, размещения сольватных компонентов в специализированном поле базы данных. Для представления структуры координационных соединений выбран принцип искусственного расположения отрицательного заряда на атоме металла-комплексообразо-вателя и положительного заряда на лиганде. Этот несколько искусственный подход связан с ограничениями, обусловленными особенностями химического редактора ISISDRAW.

Заключение. Разработанные правила представления структурных формул включены в используемую при эксплуатации БДПОВ РОНЦ инструкцию по вводу данных и составлению запросов по химической структуре веществ.

Д.Ю. Блохин

К ВОПРОСУ О МЕХАНИЗМАХ ВОЗНИКНОВЕНИЯ И ПРОГРЕССИИ ОПУХОЛЕЙ

ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Причиной опухолевой трансформации является накопление в одной клетке критического количества соматических мутаций. Важно, что речь идет не о каком-то определенном наборе мутаций, а о комбинации нескольких наиболее вероятных, в результате которых возникает совокупность фенотипических признаков, характерных для клеток злокачественной опухоли: самообеспечение митогенными стимулами, нечувствительность к антимитогенным сигналам, неограниченный репликативный потенциал, способ-

ность к тканевой инвазии и метастазированию. Предсуществование герминальных мутаций, затрагивающих протоонкогены, повышает вероятность и увеличивает скорость накопления этого критического количества, в связи с чем возрастает риск развития злокачественной опухоли в раннем возрасте.

Мутагенез носит случайный характер и связан как с внешними повреждающими факторами (ионизирующее облучение, химическая модификация оснований, вирус-опосредованная трансформация генома), так и с неабсолютной точностью копирования ДНК в процессе репликации. Функционирующий в клетках аппарат генетического самоконтроля, сопряженный с системами репарации ДНК и программой клеточной гибели, обеспечивает генетический гомеостаз организма, устраняет возникающие мутации или полностью удаляет мутантные клетки при невозможности репарации генетических повреждений. Таким образом последовательное накопление в одной клетке нескольких мутаций возможно только при возникновении предшествующей им мутации, угнетающей аппарат генетического самоконтроля (систем распознавания повреждений, их репарации, активации и исполнения ПКГ). Возникший в результате такого события «мутаторный фенотип» характеризуется толерантностью к новым генетическим повреждениям и является основой для формирования опухолевого трансформанта: по мере накопления мутаций потомки такой клетки могут приобретать фенотипические признаки опухолевых клеток вплоть до их окончательной злокачественной трансформации.

По мере прогрессии исходно моноклональной опухоли происходит дальнейшее накопление мутаций, что ведет к клональному полиморфизму и усилению злокачественности. Последовательная репрессия ПКГ вызывает становление фенотипа множественной лекарственной устойчивости к химиотерапевтическим препаратам, механизм действия которых связан с активацией апоптоза. В таких условиях остановка деления и гибель опухолевых клеток возможна при индукции их «митотической катастрофы».

Т.А. Богуш, Е.А. Дудко, Е.А. Богуш, В.Ю. Кирсанов,

О. В. Ковалева, М. И. Давыдов

ТАМОКСИФЕН

КАК ПОЛИВАЛЕНТНЫЙ ИНГИБИТОР МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ,

ОПОСРЕДОВАННОЙ

ТРАНСПОРТНЫМИ БЕЛКАМИ PGP, MRP1 И LRP

ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Задачи исследования. Тамоксифен (ТАМ) является эффективным препаратом в стандартном режиме терапии рака молочной железы в качестве антиэстрогена. В то же время он обладает многими другими важными свойствами, одно из которых - «восстановление» эффективности химиотерапии при назначении ТАМ с противоопухолевыми препаратами, резистентность к которым обусловлена механизмом множественной лекарственной резистентности (MDR) - активацией транспортных белков (MDR-транспортеров: Pgp, MRPs и LRP), выбрасывающих цитостатики из клеток. Известно также, что ТАМ увеличивает цитотоксичность MDR-препаратов в культурах клеток с экспрессией Pgp. Поэтому, размышляя над причинами увеличения эффективности химиотерапии при применении ТАМ, мы предположили, что одной из них может быть ингибирование ТАМ активности MDR-транспортеров. Для проверки этого предположения изучено влияние ТАМ на взаимодействие моноклональных антител c Pgp, MRP1 и LRP.

Материалы и методы. Исследованы линии клеток человека Jurkat, HeLa и A549, экспрессирующие Pgp, MRP1 и LRP соответственно, а также клетки, полученные из образцов рака молочной железы, с установленной экспрессией MDR-транспортеров. Связывание с Pgp, MRP1 и LRP специфических антител оценивали методом проточной цитофлуориметрии с применением программы WinMDI и теста Колмогорова-Смирнова.

Результаты. ТАМ нарушает взаимодействие моноклональных антител с исследованными MDR-транспортерами in vitro u ex vivo: параметры связывания антител с Pgp, MRP1 и LRP (средняя флюоресценция и количество специфически окрашенных клеток) уменьшались до 2 и более раз. Эффект зависел от концентрации специфических антител и был наиболее выражен в области пропорциональной зависимости клеточной флюоресценцией от концентрации антител. Эта область была различной в разных культурах, но действие ТАМ выявлено во всех типах клеток с фенотипом множественной лекарственной резистентности. На взаимодействие с опухолевыми клетками изотипических антител ТАМ не влиял.

Выводы. Уменьшение взаимодействия моноклональных антител c Pgp, MRP1 и LRP указывает на конкуренцию между ТАМ и MDR-препаратами за связывание с исследованными MDR-транспортерами.

Это означает, что ТАМ является поливалентным ингибитором различных транспортных белков, выбрасывающих противоопухолевые препараты из клеток, и может рассматриваться как эффективный модификатор фенотипа MDR, опосредованной экспрессией и коэкс-прессией разных MDR-транспортеров, у онкологических больных.

Исследование поддержано Грантами РФФИ (№> 07-04-00082 и №08-04-13647).

Ю.Н. Бордюшков, Л.Ю. Владимирова, И.Л. Попова ПРИМЕНЕНИЕ ТРЕНТАЛА В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ОНКОЛОГИИ

ФГУ Ростовский НИОИ Росмедтехнологий, Ростов-на-Дону

Задача исследования. Определить влияние трен-тала на особенности роста опухоли и показатели крови в эксперименте.

Материалы и методы. Опыт проводился на кры-сах-самцах массой 200-220 г с опухолью С-45. Животные были распределены на 2 группы: I группа - основная (18 животных) - всем животным ввели внутривенно по 2 мг трентала, а через 2 ч внутрибрюшинно ввели по 10 мг циклофосфана, всего 4 введения с интервалами введения 3 дня (суммарно - 8 мг трентала и 40 мг циклофосфана); II группа - контрольная (5 животных), в которой планировали ввести внутрибрюшинно 4 раза по 10 мг циклофосфана.

Через 3 дня после последнего введения животных основной группы забили. Кровь исследовали по формуле крови, числу лейкоцитов; лимфоциты - на их синтетическую активность (коэффициент а), костный мозг -на синтетическую активность и синюю флюоресценцию (уровень HAD-H).

Результаты. Размер опухоли в основной группе до лечения составлял М=2,87 0,51 и после всех введений составил 0,94 0,5; t=2,7; р<0,05; в контрольной группе -до лечения М=1,41 0,08; после 2 введения М=0,6б 2,7; после 3 введения у оставшейся одной крысы 0,3. Следует отметить, что объем опухоли у животных основной группы был больше, чем в контрольной. Таким образом, опухоль в основой группе уменьшилась в 3 раза, а в контрольной - в 2 раза, в контрольной группе также отмечалось резкое снижение продолжительности жизни. В контрольной группе после второго введения циклофосфана на фоне регрессии опухоли у крыс стали резко снижаться лейкоциты и после 3 введения из 5 животных

пало 4. Следовательно последнего введения не было. При исследовании синтетической активности лимфоцитов в основной группе было выявлено, что до введений она составляла 0,32S 0,015; после - 0,52S 0,041. При определении синтетической активности костного мозга в основной группе, было выявлено, что до введения она составляла 0,227 0,06; после - 0,551 0,0S. Синяя флюоресценция костного мозга имела следующие показатели: до введения - 5,33 0,47; после 22,252 3,52.

Выводы. Возможно предположить, что используемый нами трентал не только потенцирует противоопухолевое действие цитостатиков, но оказывает и защитное действие на клетки крови и костного мозга за счет увеличения оксигенации крови, в том числе опухоли, и изменения реологических свойств крови.

Н.А. Брусенцов1, Б.И. Никитин2, Ю.А. Бирогов3, В.А. Белянский4, Т.Н. Брусенцова1,2, И.С. Болубева1, Т.Н. Ксеневич2, М.Б. Никитин2, М.В. Юрьев2, А.А. Учеваткин3, ДА. Куприянов3, А.И. Дубина3, ДА. Тищенко3, Е.Р. Вольтер5, А.В. Иванов 1 ТЕРМОХИМИОТЕРАПИЯ ОПУХОЛЕЙ НАНОПРЕПАРАТАМИ

1 ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2ИОФ им. А.М. Прохорова РАН

3 ЦМТС МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва 4НИИМ МГУ, Москва 5НИИЭПиТ АН Абхазии, Сухум

Задачи исследования. Разработать магнитоуправляемые противоопухолевые нанопрепараты и регионарную термохимиотерапии опухолей с контролем содержания МПН в опухоли и в органах РЭС.

Материалы и методы. МПН синтезированы методами, описанными T.N. Brusentsova et al., 2005; T.N. Brusentsova et al., 2007. Мышам BDF1 весом 1S-21 г, разводки вивария РОНЦ, имплантируют клетки лимфоцитарной лейкемии P3SS. Когда объем опухолей достигает 17-33 мм3 их пальпируют и вводят в опухоли и окружающие ткани 100-300 мкл золя декстранферрита с сар-колизином или с алкераном. Соотношения вводимых компонентов: декстранферрит (ДФ) 50-120 мг, сарколи-зин 2-4 мкг/алкеран 2-4 мкг. У каждой мыши определяют содержания МПН в опухоли и в органах РЭС и размещают в устройстве индукционного нагрева опухолей. Опухоль ориентируют в переменном магнитном поле (частота SS0 кГц, индукция 7 кА/м, мощность 0,15 кВт). При индукционном нагреве феррита за 12-15 мин температуру опухоли повышают до +42-46 С, активируется алкилирующее средство, мембраны опухолевых клеток плавятся, содержимое клеток смешивается с МПН. Через 30 мин суспензию клеточных элементов и остатков МПН отсасывают. Процедуру TXT повторяют до 4 раз. Контроль содержания МПН в опухоли и в органах РЭС проводят магнитным сенсором.

Результаты. Непосредственно гипертермия индуцирует первичные, обратимые эффекты в клетках и тканях. Чтобы помочь организму справиться со злокачественными опухолями, применяют МПН и регионарную гипертермию опухолей. В качестве МПН применяют декстранферрит и суспензии ДФ, содержащие противоопухолевые антибиотики и алкилирующие агенты. Основные усилия при разработке TXT направлены на оптимизацию контроля содержания МПН в объеме опухоли и органов РЭС, поскольку МПН, попавшие в печень и селезёнку, уменьшают терапевтический эффект TXT. Разработанные МПН позволяют проводить таргетинг и

контроль их содержания и распределения в организме животных. При TXT с контролем содержания МПН в опухоли и в органах РЭС полная регрессия опухолей Р388 наблюдается у 30 % самок мышей BDFb увеличение средней продолжительности жизни - на 180%.

Выводы. Разработаны магнитоуправляемые противоопухолевые нанопрепараты и технология термохимиотерапии опухолей с контролем содержания магнитоуправляемых противоопухолевых нанопрепаратов в опухоли и в органах РЭС.

Н.А. Брусенцов1, Т.Н. Брусенцова2', Ю.А. Пирогов3 П.П. Никитин , В.А. Полянский , А.А. Учеваткин ,

ДА. Куприянов3, А.И. Дубина3, ДА. Тищенко3,

Т.П. Ксеневич2, М.П. Никитин , М.В. Юрьев2,

Е.Р. Вольтер5, А.В. Иванов1.

МАГНИТОУПРАВЛЯЕМЫЙ НАНОПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ АСКОРБИНАТА МАГНЕТИТА ДЛЯМРТ

ТУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2ИОФ им. А.М. Прохорова РАН

3 ЦМТС МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва 4НИИМ МГУ, Москва 5НИИЭПиТ АН Абхазии, Сухум

Задача исследования. Разработка МРТ-негатив-ных контрастных нанопрепаратов на основе синтеза наночастиц аскорбината магнетита (AM) для повышения качества визуализации первичных опухолей и метастазов на ранних стадиях опухолевого процесса.

Материалы и методы. Нами испытаны 3 водных золя, полученных на основе покрытых аскорбинат-ионами наночастиц магнетита Fe3O4, которые были синтезированы по модифицированному методу (T.N. Brusentsova et al., 2007) соосаждением гидроксидов железа в атмосфере азота. К сырому осадку прибавили 30% вес. количество аскорбиновой кислоты и нагревали 20-30 мин при 80-90 С и перемешивании в атмосфере N2, до образования исходного золя, который концентрировали и суспендировали в 10%-ном растворе глюкозы.

Температурные и полевые зависимости намагниченности образцов AM определили на экспресс- и SQUID магнитометрах, намагниченность насыщения (Ms) 5, 10 и 40% золей определили методами, описанными T.N. Brusentsova et al., 2007. MPT мышей провели в ЦМТС МГУ им. М.В. Ломоносова на биоспек-тротомографе BIOSPEC BC 70/30 USR (Bruker).

В опытах использовали мышей BDF1 и C57Bl/6j. Провели визуальный анализ структуры опухоли и внутренних органов (лимфатические узлы, молочные железы, мышцы, кости, легкие, почки, мочевой пузырь и печень), которые поражаются метастазами карциномы Эрлиха, лимфоцитарного лейкоза Р388; карциномы легких Льюис и аденокарциномы молочной железы Са 755.

Результаты. Испытаны 3 водных золя на основе наночастиц AM. ЛД^ разработанного AM 0,5 г/кг при медленном введении 10%-ного золя AM в хвостовую вену крыс, диагностическая доза 0,1 мг/кг. AM проявляет все свойства, характерные для МРТ-негативных контрастных нано препаратов: при Т2 взвешенном сканировании повышает контраст первичных опухолей, границ инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани, и метастазов.

Выводы. Разработан MPT-негативный контрастный нанопрепарат, усиливающий изображения опухоли, внутренних органов и тканей, при Т2 взвешенном MPT-сканировании тела животного и способствующий обнаружению метастазов и границ инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани.

И.Н. Воронцов1, Н.В. Келдыш1, М.С. Базлее1,

И. С. Михаееич2, Т.И. Солнцева2, Т.И. Сухова2,

Б.К. Берасимова2

РАЗРАБОТКА МАТЕМАТИЧЕСКИХ КОМПЬЮТЕРНЫХ МОДЕЛЕЙ МЕТАБОЛИЗМА ГЛЮКОЗЫ ЖИВОЙ КЛЕТКИ

1ИПУ им. В.А. Трапезникова РАН, Москва,

2ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН

Новые данные о различиях в транспорте и путях утилизации глюкозы в опухолевых клетках, чувствительных или устойчивых к индуцирующим апоптоз факторам, дают основание для предположения о том, что биоэнергетические пути опухолевых клеток могут рассматриваться как возможная мишень для таргетной терапии. Используя наш опыт в создании математической модели цикла фолиевой кислоты и сопряженных с ним реакций биосинтеза тимидилата, пуринов, метионина, мы поставили задачу разработать математическую модель метаболизма глюкозы в нормальных и опухолевых клетках. Работа выполняется с помощью созданной в ИПУ РАН Системы математических методов машинного моделирования «Взаимодействия», предназначенной для математического описания и анализа систем высокой сложности. Определен комплекс ферментативных реакций, подлежащих моделированию: гликолиз, окислительная и неокислительная ветви пентозофосфатного пути, цикл трикарбоновых кислот, биосинтез фосфатидилхолина, метаболизм циклических нуклеотидов. Составлена компьютерная база данных по кинетическим характеристикам ферментов этих путей, концентрациям субстратов, характеристикам известных ингибиторов. Построены математические описания этих реакций. Основные трудности в построении моделей связаны со сложностью описания и анализа происходящих в клетке отдельных звеньев биохимических процессов и их взаимодействия. Методы синтеза и исследования математических компьютерных моделей должны быть совмещены с мониторингом наблюдаемых изменений в клетках, достаточно точными методами их измерений. Такие возможности открывает использование в биохимических исследованиях глюкозы, меченой стабильным изотопом углерода, и контроль за изменениями в ее утилизации с помощью 13С-ЯМР спектроскопии. Анализ изменений в биоэнергетических системах клетки с помощью математической модели может дать дополнительную информацию для выявления молекулярных мишеней для химиотерапии опухолей.

Работа выполняется в рамках НТП «Разработка и практическое освоение в здравоохранении новых методов и средств диагностики и лечения онкологических, инфекционных и других опасных заболевании».

Л.Е. Болубовская1, Т.А. Титова2, В.Н. Толкачев2, ;

З.С. Смирнова , М.А. Красильников , В.М. Ржезникое ВЛИЯНИЕ НОВЫХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ СТЕРОИДОВ ЦИТЭСТРОЛ-АЦЕТАТА И ЕГО НИТРОКСИ-СОДЕРЖАЩЕГО АНАЛОГА НА КУЛЬТИВИРУЕМЫЕ IN VITRO КЛЕТКИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ЧЕЛОВЕКА MCF-7 ‘ГУ ЭНЦР, Москва

2ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Рак молочной железы относится к числу самых распространенных онкологических заболеваний, при этом высокий удельный вес в структуре болезни занимают гормоночувствительные опухоли. Для лечения этих опухолей широко применяют нестероидные антиэстрогены - производные трифенилэти-лена тамоксифен и его аналоги. Однако длительная терапия тамоксифеном приводит к развитию резистентности к нему опухолей. Нами на основе направленно трансформированных эстрогенов синтезирован

новый класс противоопухолевых стероидов, обладающих неизвестным ранее сочетанием антиэстрогенных и цитотоксических свойств (Пат. № 2139292). Наибольшую активность показал препарат цитэстрол-ацетат, превосходящий по силе и продолжительности действия тамоксифен. В развитие этих работ синтезированы новые аналоги с нитроксильным заместителем как потенциальные доноры оксида азота, способного инициировать апоптоз опухолевых клеток, включая клетки резистентных опухолей.

Цель исследования. Изучение влияния цитэстрол-ацетата и его аналога РО-737 с нитроксильным заместителем в структуре на чувствительную (MCF-7) и резистентную к тамоксифену (MCF-7/T2) линии клеток рака молочной железы человека.

Материалы и методы. Синтез препарата РО-737 осуществлен методом, описанным (Ржезников и др., Изв. РАН, 2001) для синтеза нитроксистероидов. Клетки рака молочной железы человека MCF-7 культивировали в среде DMEM при 37 C и 5%-ном С02.

Сублиния MCF-7/T2 была получена в результате длительного (60 суток) культивирования родительской линии MCF-7 в среде DMEM в присутствии тамоксифе-на. При оценке выживаемости опухолевых клеток при добавлении синтезированных соединений использован МТТ-тест.

Результаты. В эксперименте обнаружено, что изученные препараты обладают выраженным цито-статическим действием на обе линии клеток. Культивирование клеток как MCF-7, так и MCF-7/T2 в присутствии 10-6 М любого из препаратов (цитэстрол-ацетат или РО-737) в течение 7 суток приводит к

50 %-ному подавлению клеточного роста.

Выводы. Активность приоритетных антиэстрогено-цитостатиков на резистентной к антиэстрогенам культуре клеток рака молочной железы человека демонстрирует их высокий потенциал в качестве противоопухолевых препаратов для лечения рака молочной железы.

И.Н. Григорьева, Е.В. Степанова, O.C. Бурова,

Т.К. Харатишвили, Е.Ш. Соломко, А.Ю. Барышников КЛЕТОЧНАЯ ЛИНИЯ МЕЛАНОМЫ КОЖИ MEL CHER КАК ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ МОДЕЛЬ ВАСКУЛОГЕННОЙ МИМИКРИИ ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Цель. Васкулогенная мимикрия - это уникальный процесс, который представляет собой образование новых кровеносных сосудов, выстланных базальной мембраной, не из эндотелиоцитов, а из клеток высокоагрессивных опухолей.

Целью настоящего исследования является отбор подходящей клеточной линии меланомы кожи как наиболее подходящей в качестве положительной модели этого феномена.

Материалы и методы. Мы протестировали 15 клеточных линий меланомы кожи, полученных от больных, проходивших лечение в РОНЦ. Были проведены эксперименты in vitro для определения способности клеточных линий формировать сосудистоподобные структуры и тубулярные структуры на 2- и 3-слойном матриксе. В качестве внеклеточного матрикса были использованы матригель, коллаген I и фибронектин.

Экспрессия молекулярно-биологических маркеров была определена иммуноцитохимическим методом. Клеточная линия mel Cher была перевита иммуноде-фицитным мышам (количество клеток - 1; 3 и 5 млн на мышь в 3 разных группах), и полученные опухолевые образцы были протестированы на наличие ВМ-структур in vivo. Для этого была проведено комбинированное окрашивание CD34+ и PAS-реакция.

Результаты. Клеточная линия mel Cher — наиболее оптимальная положительная модель васкулогенной мимикрии среди протестированных 15 клеточных линий меланомы кожи человека. Способность mel Cher к васкулогенной мимикрии была определена во всех экспериментах, проведенных in vitro. Данная клеточная линия обладает способностью формировать СПС и тубулярные структуры в экспериментах на двух- и трехслойном матриксе. Иммуноцитохимическом методом было определено, что mel Cher экспрессирует такие молекулярнобиологические маркеры как vEgF, VEGFR1, VEGFR2, ламинин 5gamma2, ephA2, Notch3 и c-met. Способность формировать структуры васкулогенной мимикрии была подтверждена in vivo. Образцы опухолей, полученные в результате двух экспериментов на иммунодефицитных мышах, были протестированы путем проведения комбинированного иммуногистохимического окрашивания на CD34+ и PAS-реакции, и были выявлены CD347PAS+ положительные структуры.

В соответствии с полученными результатами клеточная линия меланомы кожи человека mel Cher может быть использована в качестве положительной модели васкулогенной мимикрии.

Работа поддержана государственным контрактом Федерального агентства по науке и инновациям № 02.512.11.2195.

Д.В. Демидов, Т.А. Маньчева, Н.А. Плотникова,

Т.В. Харитонова, С.В. Харитонов, С.П. Кемайкин,

О.Н. Куликова

ВЛИЯНИЕ ЭНДОГЕННОГО ГОРМОНА МЕЛАТОНИНА НА МОДЕЛИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО КАНЦЕРОГЕНЕЗА, ИНДУЦИРУЕМОГО УРЕТАНОМ И ЬЕНЗ(А)ПИРЕНОМ У МЫШЕЙ ГОУВПО «МГУ ИМ. Н.П. ОГАРЕВА», САРАНСК

Цель исследования. Изучить динамику морфологических изменений на экспериментальных моделях бенз(а)пиренового эпидермального опухолевого роста и уретанового легочного канцерогенеза у мышей под влиянием эндогенного гормона мелатонина.

Материалы и методы. Эксперименты проводились на самках нелинейных аутбредных SHR/u белых мышей массой 20-22 г. В возрасте 3 месяца 220 мышей были рандомизированно поделены на 4 группы по 50 особей. Оставшиеся 20 мышей служили интакт-ным контролем и не подвергались каким-либо воздействиям. Животным 1-й и 2-й групп канцероген бенз(а)пирен (Fluka, Busch, Швейцария) вводился 2 раза в неделю накожно в дозе 0,2 мл на мышь в концентрации 0,05 % в растворе ацетона. Животным 3-й и 4-й групп канцероген уретан (НИИ онкологии Н.Н. Петрова М3 и СР РФ) был введен однократно интра-перитонеально в дозе 1 г/кг, растворенный в физиологическом растворе хлористого натрия. После введения канцерогена животные 1-й и 3-й групп получали питьевую воду без добавления мелатонина и составили контрольную группу по канцерогену. Животные 2-й и 4-й групп получали с питьевой водой в ночные часы (с 19.00 ч до 07.00 ч) мелатонин (Sigma, St.Louis; MS, США) в дозе 2 мг/л. Продолжительность эксперимента составила 24 нед, по окончании эксперимента все мыши декапитированы, у них взята ткань кожи для гистологических исследований.

Результаты. При введении мелатонина частота и множественность развития опухолевых узлов на коже уменьшились на 19 % (р<0,05). Наблюдалось уменьшение среднего и максимального размеров опухолей кожи, а также выраженность вторичных изменений в опухолевых узлах. Использование же мелатонина в условиях уретанового легочного канцерогенеза весьма

существенно снижает множественность развития индуцированных аденом легких у мышей - в 2,1 раза (р<0,05). Анализ размеров опухолевых узлов легких показал, что под влиянием мелатонина уменьшалось, прежде всего, число крупных опухолей и аденом средних размеров, тогда как множественность мелких новообразований не изменялась.

При коррекции мелатонином индуцированного эпидермального и уретанового канцерогенеза наблюдается снижение пролиферативной активности в тканях изучаемых опухолей.

Выводы. Индольный гормон эпифиза мелатонин тормозит процессы индуцируемого уретанового канцерогенеза легких и бенз(а)пиренового канцерогенеза кожи в эксперименте.

В.П. Дерягина, Н.И. Рыжова, В.А. Юрченко ЭНДОГЕННОЕ ОБРАЗОВАНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ N0 У МЫШЕЙ С ХИМИЧЕСКИ ИНДУЦИРОВАННЫМИ И ПЕРЕВИВАЕМЫМИ ОПУХОЛЯМИ И ВЛИЯНИЕ МОДУЛЯТОРОВ N0-CИHTAЗ И ПРИРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ НА РОСТ КАРЦИНОМЫ ЭРЛИХА ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Введение. Экспериментальные и клинические данные показывают, что опухолевый рост часто сопровождается усилением эндогенного образования оксида азота (N0) и его производных вследствие активации индуци-бельной ЬО-синтазы (iNOS). Избыточная продукция N0 нарушает структуру ДНК, вызывая мутации, полиморфизм опухолей и др.

Имеются данные о положительной зависимости между стадией опухоли и активностью iN0S. Обнаружено, что ингибиторы iN0S могут тормозить рост опухолей на фоне снижения продукции N0.

Природные вещества с антиоксидантными свойствами также могут инактивировать образующийся N0.

Цель исследования. Изучить эндогенное образование нитросоединений в процессе индуцированного бенз(а)пиреном канцерогенеза и на модели перевивной карциномы Эрлиха, а также влияние потенциальных ингибиторов iN0S и природных веществ на рост КЭ.

Материалы и методы. Исследования проведены на двух моделях опухолевого роста: модели БП канцерогенеза у мышей Fl (п=150) и модели перевиваемой КЭ у мышей F1 или Ва1Ь/с (п=170).

БП предварительно растворяли в ацетоне, после чего делали еженедельные накожные аппликации в дозах 6 мкг (группа 1, п=50) или 9 мкг (группа 2, п=50) на мышь в течение 24 нед.

Мыши контрольной группы (п=50) получали аппликации с ацетоном.

Наблюдение за мышами составило 1080 дней. Верификацию опухолевого роста при индукции БП проводили по стандартной гистологической методике.

КЭ имплантировали по 106 клеток на мышь. Мышей разделили на 13 групп (п=10-30).

Мыши подопытных групп (№№ 1-4) в лечебном режиме (от 8 по 25-32 дни после перевивки) получали в/б аминогуанидин, N-нитpo-L-apгинин (НАрг) и №-метил-L-apгинин (МАрг) и п/к нитропруссид натрия в разовых дозах 140; 100; 50 мг/кг и 80 мкг/кг соответственно.

Мыши подопытных групп (№№ 5-11) в лечебнопрофилактическом режиме (в течение 14 дней до перевивки и до конца опыта) получали постоянно с питьевой водой:

L-кapнoзин (Кр) по 2,4 мг на мышь, в/б 5 раз в нед.; гистохром (ГХ) по 0,02-0,16 мг/кг и рег о&' 5 раз

в нед.; водную суспензию измельченных грибов Lentinus edodes (ВСГ) по 188-376 мг/кг.

Мыши контрольных групп (№№12, 13) получали физраствор в течение всего опыта. Анализ окисленных продуктов N0^0: нитритов и нитратов в биологических жидкостях и тканях осуществляли методом Грисса.

Торможение роста опухоли рассчитывали по средним объемам или по массе опухоли. Статистическую обработку результатов проводили с использованием критериев Вилкоксона - Манна - Уитни, ^ , Стьюдента, регрессионного анализа.

Результаты. Показано, что у мышей с опухолями кожи, индуцированными БП, выделение с мочой НИ и НА увеличено в 7-82 раза в сравнении с контролем. В моче мышей с опухолями, получивших 216 мкг/м БП, содержание НС достигало 565 мкг/кг и положительно коррелировало с частотой опухолей в группе.

У мышей с КЭ в течение 32 дней роста опухоли экскреция НС с мочой увеличена в 10-70 раз. Определена положительная линейная зависимость между размером КЭ и количеством выделившихся НС.

У животных с КЭ содержание НИ в перитонеальной жидкости снижено на 65 %, что косвенно указывает на подавление секреции N0 нейтрофилами и макрофагами. Опухолевая ткань КЭ содержала существенные количества (до 5,3 10-4М) НИ и НА.

Обнаружено, что НАрг и АГ снижают эндогенное образование НС соответственно на 26 и 53 % и умеренно тормозят рост КЭ до 40 % (р<0,01-0,05). Лечебно-профилактическое введение ГХ и ВСГ приводило к замедлению на раннем этапе роста КЭ на 52 - 60 % (р<0,01) и в случае ГХ - снижению до 35 % образование НС. Хотя Кр при введении рег os ингибировал на 37 % образование НА и НИ, это не влияло на скорость роста КЭ у мышей и их выживаемость.

Заключение. Получены данные о многократном повышении эндогенного образования производных N0 у мышей с индуцированными БП и перевитыми опухолями. Опухолевая ткань, по-видимому, является основным источником образования N0.

Ингибиторы активности iN0S имеют определенный противоопухолевый потенциал, в связи с чем поиск более избирательных ингибиторов перспективен. ГХ и ВСГ замедляют развитие КЭ, но разнонаправлено действуют на образование НС, что может быть связано с особенностью опухолевого роста в период оценки НС.

В. В. Жданов1, Н.Н. Ермакова1, Е.В. Симанина1,

Л.А. Стаероеа1, Т.В. Фирсоеа1, Е.С. Хмелевская1, Е.И. Верещагин2, П.Г. Мадонов2, Д.Н. Киншт2 ВЛИЯНИЕ ИММОБИЛИЗИРОВАННОГО ГРАНУЛОЦИТАРНОГО КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕГО ФАКТОРА НА ГРАНУЛОМОНОЦИТОПОЭЗ В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МИЕЛОСУПРЕССИИ

‘ГУ НИИ ФАРМАКОЛОГИИ ТНЦ СО РАМН, ТОМСК 2000 «СФМ», Новосибирск

Препараты Г-КСФ широко используют для профилактики и лечения различных видов нейтро-пений, в том числе восстановления гемопоэза у онкологических боль-ных, получивших цитостати-ческую ХТ.

Между тем применение Г-КСФ во многом ограничено наличием у него достаточно большого спектра побочных эффектов и отсутствием возможности приема внутрь.

С помощью нанотехнологии радиационного синтеза был получен иммобилизированный Г-КСФ на по-лиэтиленгликоле низкой молекулярной массы, благодаря изменению фармакокинетических и фармакоди-намических параметров, конъюгат обладает низкой иммуногенностью и достаточной биодоступностью при пероральном введении.

Целью настоящего исследования явилось сравнительное изучение гранулоцитопоэзстимулирующей активности иммГ-КСФ и стандартного препарата рекомбинантного человеческого Г-КСФ в условиях миелосу-прессии, вызванной введением ЦФ.

В эксперименте использовали стандартные гематологические и культуральные методы. Препарат модифицированного Г-КСФ вводили подкожно и перорально по 100 мкг/кг/сутки мышам линии CBA/CaLac в течение 5 и 10 дней соответственно, препарат стГ-КСФ вводили подкожно 5 дней по 100 мкг/кг/сутки.

В ходе проведенных экспериментов было установлено, что иммГ-КСФ способствовал накоплению нейтро-фильных гранулоцитов в системе крови в условиях введения циклофосфана. При подкожном введении действие препарата проявляется в период миелосупрессии и регенерации гранулоцитарного ростка (сопоставимо с эффектом стандартного препарата Г-КСФ), при пероральном введении проявление специфической активности задерживается на сутки. В основе стимуляции гра-нулоцитопоэза пегилированным Г -КСФ лежат повышение темпов деления и созревания грануломоноцитарных клеток-предшественников и восстановление активности прилипающих клеточных элементов гемопоэзиндуци-рующего микроокружения (формирование гранулоци-тарных гемопоэтических островков и продукция колониестимулирующей активности). Таким образом, иммГ -КСФ обладает гранулоцитопоэзстимулирующим действием при энтеральном и парентеральном приеме, что указывает на большие перспективы использования препарата в клинической практике.

Ю.П. Истомин, Э.А. Жаврид, С.В. Петрович,

О.П. Сергеева, Е.Н. Александрова, Г.И. Коробцова ТЕРМОХИМИОТЕРАПИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ ГУ РНПЦ ОМР им. Н.Н. Александрова, Минск

Цель исследования. Разработать метод лечения злокачественных опухолей яичников с использованием общей гипертермии, гипергликемии и химиотерапии; провести его доклинические исследования.

Материалы и методы. В эксперименте in vitro на культуре опухолевых клеток HeLa и in vivo на белых беспородных крысах с асцитной опухолью яичника исследовали эффективность термохимиотерапии. Общую гипертермию (42 C, 30 мин) животным проводили в состоянии наркоза, в водяной бане ультратермостата, сразу после введения XT, на фоне индуцированной гипергликемии (10 г/кг глюкозы в/в в течение 3 ч).

Результаты. Гипертермия незначительно угнетала рост культуры опухолевых клеток и асцитной опухоли яичника у крыс. При термохимиотерапии наблюдалось усиление цитостатического эффекта винорель-бина, карбоплатина, ифосфамида, оксалиплатина - в >4 раза; доксорубицина, гемцитабина - в >2 раза. Ци-тотоксическое действие возрастало только при сочетании с гипертермией винорельбина, карбоплатина, оксалиплатина или доцетаксела, при этом коэффициент усиления не превышал 1,4. В условиях общей гипертермии и гипергликемии in vivo выявлены высокоэффективные химиотерапевтические препараты: цик-лофосфамид, ифосфамид, карбоплатин, доксоруби-цин, винорельбин, гемцитабин, оксалиплатин, этопо-

зид, противоопухолевая активность которых возрастала, по показателям торможения роста опухоли и/или продолжительности жизни крыс с асцитной опухолью яичника. Эффективность комбинированного применения цитостатиков в условиях гипертермии также значительно увеличивалась.

Т.А. Кармакова, Р.И. Якубовская ОПУХОЛЕАССОЦИИРОВАННЫЙ МУЦИН МиС1: НОВЫЙ ВЗГЛЯД НА РОЛЬ В ПАТОГЕНЕЗЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ ЭПИТЕЛИЯ

ФГУ МНИОИ ИМ. П. А. ГЕРЦЕНА, МОСКВА

МиС1 — мембранный высокомолекулярный гликопротеид, продуцируемый клетками однослойного эпителия и опухолями эпителиального происхождения. Высокая экспрессия МиС1 и деполяризованная внутриклеточная локализация МиС1 ассоциированы с агрессивным биологическим поведением злокачественной опухоли и неблагоприятным прогнозом у онкологических больных. Результаты исследований, проведенных нами с использованием моноклональных антител к МиС1 у больных с заболеваниями молочной железы, легкого и шейки матки, показали, что аномальная экспрессия МиС1 в эпителии ассоциирована с ранними этапами развития неоплазии; неполя-ризованная экспрессия МиС1 в сочетании с дисплазией и/или метаплазией указывает на высокий риск прогрессии внутриэпителиальных нарушений; аномальное внутриклеточное распределение МиС1 косвенно свидетельствует о внутриклеточной инфекции.

Обобщение полученных данных и известных сведений в отношении функциональной активности внеклеточного и цитоплазматического (ЦД) доменов молекулы МиС1, а также анализ научных публикаций о значении МиС1 в защите эпителия от патогенов, позволили сформировать принципиально новый взгляд на роль МиС1 в патогенезе злокачественных новообразований эпителия.

Так, мы предполагаем, что в клетке, инфицированной онкогенным вирусом, в результате нарушении ее полярности реализуется взаимодействие ЦД МиС1 с белками базо-латеральной мембраны.

Это приводит, в частности, к искажению работы связанных с бета-катенином всех сигнальных систем и нарушению дифференцировки.

Устойчивая высокая экспрессия МиС1 в поверхностной мембране, которую может обеспечивать встраивание ДНК вируса в МиС1-кодирующий участок генома клетки-хозяина, создает условия для дальнейшего успешного формирования злокачественного фенотипа.

Таким образом, деполяризованная экспрессия МиС1 в клетках опухоли и аномальная экспрессия МиС1 в прилежащем эпителии, могут косвенно указывать на вирус-опосредованный этиопатогенез новообразования.

Выделение в группу риска пациентов с аномальным характером экспрессии МиС1 в макроскопически неизмененном эпителии может повысить эффективность диагностики предопухолевых изменений и начальных форм рака.

В этих же случаях может стать целесообразным применение средств и воздействий, направленных на элиминацию вируса и активацию иммунных противовирусных реакций в целях снижения риска рецидивов и метахронных опухолей.

Работа выполнена при финансовой поддержке Правительства Москвы.

Е.С. Клинцова, Т.Г. Щербатюк ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ХИМИОТЕРАПИИ С ПОМОЩЬЮ ОЗОННЫХ ТЕХНОЛОГИЙ (экспериментальное исследование)

ГОУ ВПО НИЖГМА РОСЗДРАВА, НИЖНИЙ НОВГОРОД

Цель исследования. Разработка методов и способов озонных технологий, повышающих эффективность действия 5-фторурацила и доксорубицина.

Материалы и методы. Животным с гепатомой 27 и гепатомой Зайделя вводили 5-ФУ в дозе 500 мг/м2 в/м и озонированного физиологического раствора с концентрацией озона в озоно-кислородной смеси 0,2 мг/л в/б общим курсом 10 дней (введение озона чередовалось с введением химиопрепарата). ДР в дозе 60 мг/м2 и 30 мг/м2 вводили в/в крысам с ГЗ на 12-е сутки роста опухоли. Предварительно с 7-х суток ежедневно вводили ОФР в/б (0,2 мг/л). Оценку противоопухолевого эффекта проводили по массе опухоли после эвтаназии животных под эфирным наркозом. Были проведены биохимические и морфологические исследования.

Результаты. Показано, что совместное введение ОФР (0,2 мг/л в/б) и 5-ФУ (500 мг/ м2 в/м) крысам с перевитой Г-27 и ГЗ общим курсом 10 дней тормозит рост опухоли на 54 и 66 %; увеличивает продолжительность жизни на 62 и 86 % соответственно. Комбинированное введение ОФР и ДР в дозе 1,2 мг/кг и уменьшенной дозе (0,6 мг/кг веса) в/в крысам с ГЗ общим курсом 7 дней тормозит рост опухоли на 56 и 54 % соответственно.

Совместное применение ОФР и 5-ФУ приводит к большей коррекции проантиоксидантного баланса организма: интенсивности хемилюминесцентного свечения, уровня окислительной модификации белков, общей антиоксидантной активности, и активности су-пероксиддисмутазы и каталазы плазмы крови животных в условиях роста Г-27 и ГЗ. Совместное использование озонированного ОФР и ДР снижает интенсивность хемилюминесцентного свечения, продуктов перекисного окисления липидов, активность СОД и каталазы.

Эффективность комбинированного введения озо-но- и химиотерапии крысам с Г-27 и ГЗ отражается в морфологической структуре фации плазмы крови. Выявлена высокая корреляционная взаимосвязь между показателями свободнорадикальной активности и кристаллооптическими характеристиками плазмы крови. Эти показатели: максимальная интенсивность хемилюми-несценции/количество и ширина трещин; общая антиоксидантная активность/количество и ширина трещин; ширина периферической зоны/содержание альдегид- и ке-тондинитрофенилгидразонов; n морщин/уровень оАОА.

В.П. Красное1, Г.Л. Левит1, ДА. Груздев1, А.М. Дёмин1, И.В. Бажов1, В.А. Ольшевская2, В.Н. Калинин2 СИНТЕЗ ПСЕВДО-ДИПЕПТИДОВ (3-АМИНО-

1,2-ДПКАРБА-КЛОЗО-ДОДЕКАБОРАН-1-ИЛ)УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ, ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ АГЕНТОВ ДЛЯ БОР-НЕЙТРОНОЗАХВАТНОЙ ТЕРАПИИ ОПУХОЛЕЙ

*ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН, Екатеринбург 2ИЭС им. А.Н. Несмеянова РАН, Москва

Бор-нейтронозахватная терапия - современный эффективный подход в лечении опухолевых заболеваний. Селективная доставка бора в опухоль, необходимая для успешного проведения БНЗТ, возможна с использованием клозо-карборансодержащих аналогов биомолекул (нуклеозидов, порфиринов, аминокислот и др.). Известно, что важными субстратами клеток новообразований являются аминокислоты и пептиды.

Задача исследования - синтез производных (3-ами-но-1,2-дикарба-клозо-додекаборан-1 -ил)уксусной кислоты - борсодержащего структурного аналога ГАМК

Карбодиимидный метод: получены псевдодипептиды (3-ациламино-1,2-дикарба-клозододека-боран-1 -ил)уксусных кислот и природных аминокислот. Исследован диастереомерный состав полученных амидов, в ряде случаев диастереомеры выделены в оптически чистом виде. Проведено избирательное удаление С- и N защитных групп полученных производных с сохранением клозо-карборанового фрагмента. Синтезированы три-пептиды, включающие остаток орто-карборана. Разработаны методики направленного синтеза производных L-аминокислот, несущих остаток клозо-карборана в составе боковой цепи. Получены продукты присоединения L-лизинa к (3-амино-1,2-дикарба-клозо-додекаборан-

1-ил)уксусной кислоте, а также -амид L-глyтaминo-вой кислоты с 3-амино-орто-карбораном, которые имеют свободные -амино- и карбоксильную группы.

Строение всех производных подтверждено набором физико-химических методов. Полученные соединения являются потенциальными агентами для БНЗТ. Планируется исследование их биологических свойств.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (проект № 07-03-00684), а также в рамках Босударственной программы поддержки ведущих научных школ (грант НШ 3758.2008.3).

Н.Ю. Кулъбачевская, О.И. Коняева, Н.П. Ермакова,

В.М. Бухман

СДТ С ТЕРАФТАЛОМ В СОЧЕТАНИИ С КОМБИНАЦИЕЙ Докс+ЦП НА СОБАКАХ

ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Целесообразность сочетания сонодинамической терапии с химиотерапией основана на усилении цитоток-сических эффектов различных химических соединений при локальном ультразвуковом воздействии на опухоль. В эксперименте установлено: терафтал, использованный в качестве соносенсибилизатора, повышает избирательность повреждающего действия УЗ на опухоль.

Цель исследования. Доклиническое токсикологическое изучение сочетания комбинации Докс+ЦП с СДТ - сенсибилизация ТФ с последующим УЗ-воздействием на собаках.

Материалы и методы. Рабата проведена на 14 собаках породы «английский бигл». Для работы была модифицирована установка «УСДТ» (адаптированая к изучению СДТ на крупных животных). Использовали фиксированный режим УЗ: озвучивание с 2 полей. Поле 1: V - 2,64 Мгц, интенсивность - 2 Вт/см2. Поле 2: V -

0,88 Мгц, интенсивность - 1 Вт/см2 (суммарная интенсивность 3 Вт/см2). Время воздействия во всех исследованиях - 10 мин на наружную поверхность бедра. Функциональную и гистологическую оценку влияния УЗ и Докс+ЦП+ТФ+УЗ на органы и ткани проводили после однократного воздействия. Оценивали системное и локальное воздействие УЗ.

Результаты. УЗ не вызывает местно-раздражающего действия (локальной токсичности) у животных, не оказывает влияния на поведенческие реакции, функциональное состояние органов и систем организма собак и не вызывает в них морфологических изменений. УЗ и ТФ не изменяют клиническую картину интоксикации, вызванную применением комбинации ДОКС+ЦП.

УЗ и ТФ не увеличивают токсического действия Докс+ЦП на периферическую кровь, печень, поджелудочную железу, сердечно-сосудистую систему животных, не усугубляют морфологические изменения, характерные для действия этой комбинации, и не влияют на обратимость изменений во внутренних органах животных. Но УЗ и ТФ незначительно увеличивают токсическое действие Докс+ЦП на функциональное состояние почек, вызывая на 7-14-е сутки, помимо обратимого роста уровня мочевины, обратимый рост уровня кретинина в 1,5 раза.

Заключение. Сочетание СДТ, сенсибилизированной ТФ, с химиотерапевтической комбинацией ДОКС+ЦП может быть рекомендовано для клинических испытаний.

A.В. Куролес1, Д.В. Новиков1, Е.Ю. Конторщиков^,

КА. Коровушкина2, П. А. Будай2, О.В. Уткин1,

НА. Сахарное1, А.В. Алясова, В.В. Новиков1 ИССЛЕДОВАНИЕ МАТРИЧНОЙ РНК, КОДИРУЮЩЕЙ ВНУТРИКЛЕТОЧНУЮ ЧАСТЬ FAS-АНТИГЕНА в опухолевых клетках

'НИИ Молекулярной биологии и региональной экологии ННГУ имени Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород 2ГОУ ВПО НИЖГМА РОСЗДРАВА, НИЖНИЙ НОВГОРОД

Задачи исследования. Нарушения экспрессии Fas-антигена часто обнаруживаются при злокачественных опухолях. Задачей работы явилось исследование участка мРНК, кодирующего домен смерти Fas-антигена в клетках опухолевого очага больных раком толстой кишки, аденокарциномы и миомы тела матки.

Материалы и методы. Участок мРНК Fas-антигена, кодирующий цитоплазматический регион, ам-плифицировали методом ОТ-ПЦР с использованием оригинальных праймеров. Полученную кДНК анализировали с помощью электрофореза в агарозном геле и использовали для секвенирования нуклеотидной последовательности.

Результаты. Для решения поставленной задачи был подобран оригинальный праймер, комплементарный месту соединения 5 и 6 экзонов, который позволял амплифицировать матричные РНК, кодирующие полноразмерную и альтернативную формы мембранного Fas-антигена. У 18 тестированных больных с аденокарциномой и миомой тела матки обнаруживалась только мРНК полноразмерной мембранной формы Fas. В клетках опухолевого очага больных раком толстой кишки в одном из двух образцов в дополнение к полноразмерной детектировалась альтернативная мембранная форма мРНК Fas-антигена с делецией 8 экзона (FasExo8Del). Альтернативная форма мРНК FasExo8Del кодирует последовательность, соответствующую белку, у которого отсутствует домен смерти. Он может препятствовать проведению сигнала апоптоза внутрь клетки.

Анализ первичной структуры мРНК полноразмерной мембранной формы Fas-антигена, выявленной в другом образце опухолевых клеток рака толстого кишечника, показал наличие значимой мутации, приводящей к замене аспарагиновой кислоты на глицин в области, кодирующей домен смерти. Предположительно, данная замена влияет на конформацию белка и нарушает передачу цитотоксического сигнала внутрь клетки.

Выводы. Полученные данные свидетельствуют о том, что при раке толстого кишечника опухолевые клетки могут уходить от Fas-зависимого апоптоза путем альтернативного сплайсинга и мутагенеза участка мРНК Fas, кодирующего домен смерти. В клетках аденокарциномы и миомы тела матки альтернативных форм мРНК Fas с делецией 8 экзона обнаружено не было.

B.П. Лебедев

О ВОЗМОЖНОСТЯХ ПРИМЕНЕНИЯ НЕИНВАЗИВНОЙ ТРАНСКРАНИАЛЬНОЙ ЭЛЕКТРОСТИМУЛЯЦИИ ЭНДОРФИННЫХ СТРУКТУР МОЗГА (ТЭС-ТЕРАПИИ)

В ОНКОЛОГИИ

ИНСТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ ИМ. И.П. ПАВЛОВА РАН, САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

Задачи исследования. Принято считать, что онкологическим больным физиотерапевтические воздействия не рекомендуются. Задача настоящей работы состояла в доказательстве того, что ТЭС-терапия с ее анальгетической активностью и многосторонним го-меостастатическим эндорфинергическим влиянием может быть с успехом использована у онкологических больных. По литературным данным известно, что опиоидные пептиды в определенных концентрациях

могут оказывать тормозящее влияние на рост опухолевых клеток разного типа in vitro.

Материалы и методы. В экспериментах определяли влияние 2-3 ежедневных сеансов ТЭС роста следующих перевивных опухолей у крыс и мышей: саркома-45, карциносаркома Уокера 256, лимфосаркома Плиса, гепатома-27, асцитная опухоль яичников, гепа-тома-22, меланома В-16, асцитная опухоль Эрлиха. На опухолях крыс - карциносаркоме Уокера 256 и лимфо-саркоме Плиса - изучали влияние ТЭС на эффективность противоопухолевого действия препаратов платины, винбластина, метотрексата, циклофосфана, 5-ФУ. Противоболевой эффект ТЭС-терапии (10 ежедневных сеансов) оценивали у 1080 онкологических больных с болевыми синдромами разной выраженности с опухолями молочных желез, матки и ее придатков, толстой и прямой кишки, легких и средостения, желудка и пищевода, челюстно-лицевой области, почек, мочевого пузыря, простаты и др. (стадии III-IV, часть больных после операций и XT).

Результаты. ТЭС в анальгетическом режиме вызывала интенсивное торможение роста всех видов изученных перевивных опухолей у крыс и мышей, даже такой медленно растущей опухоли как саркома-45. ТЭС усиливала противоопухолевые эффекты винбластина, циклофосфана и 5-фторурацила и на влияла на эффекты платамина и метотрексана. Наличие противоопухолевого эффекта ТЭС в эксперименте позволило применить метод ТЭС-терапии у онкологических больных. Устойчивое устранение болей после курса ТЭС-терапии (до 2 и более мес.) наблюдали у 743 (68,8%) больных, умеренное (от 1 до 3 нед) - у 212 (19,6 %), отрицательный результат отмечен у 125 (11,6%). У большинства пациентов после курса ТЭС-терапии отмечено улучшение сна, работы желудочнокишечного тракта, купирование депрессии, повышение настроения и показателей качества жизни. ТЭС-терапию также проводили родственникам для купирования «синдрома утраты».

Выводы. ТЭС-терапия может быть обоснованно и с успехом использована для купирования болевых синдромов у онкологических больных. Разработанные нами с использованием принципов доказательной медицины аппараты для ТЭС-терапии производятся серийно и более 25 лет используются в лечебной практике.

К.А. Лопатина, О.А. Румпель ВЛИЯНИЕ ТИОФАНА НА ПРОТИВООПУХОЛЕВУЮ АКТИВНОСТЬ ПАКЛИТАКСЕЛА

ГУ НИИ ФАРМАКОЛОГИИ ТНЦ СО РАМН, ТОМСК

Задача исследования. Оценить влияние антиоксиданта тиофана, снижающего гемо- и гепатотоксичность паклитаксела, на его противоопухолевую активность на модели карциномы легких Льюис у мышей.

Материалы и методы. Эксперимент проводили на 36 мышах линии C57B1/6 с карциномой легких Льюис, перевитой внутримышечно по 4-6*106 опухолевых клеток в 0,1 мл физиологического раствора. Тиофан вводили внутрижелудочно в дозе 200 мг/кг, начиная с 3 суток после перевивки опухоли в течение 14 дней. Противоопухолевый препарат паклитаксел (Митотакс, Dr.Reddy’s, Индия) вводили однократно внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг на 8-е сутки роста опухоли. Животные с опухолями были разделены на 3 группы по 12 особей в каждой:

1. контрольная, получающие соответствующие растворители;

2. получающие паклитаксел;

3. получающие паклитаксел в сочетании с тио-фаном.

В конце эксперимента (18-й день после перевивки) определяли массу первичной опухоли, подсчитывали количество и площадь метастазов в легких, вычисляли процент торможения роста опухоли, частоту и торможение метастазирования. Результаты обрабатывали, используя непараметрические критерии статистики.

Результаты. Введение тиофана не влияло на противоопухолевую активность паклитаксела в отношении первичного опухолевого узла. Масса метастазов при введении цитостатика составляла 114,17 16,30 мг (в контроле - 130,36 22,09 мг), при добавлении в схему лечения тиофана - 91,08 18,86 мг. Торможение метастазирования на фоне введения одного цитостатика составляло 12,42 %, цитостатика в комбинации с антиоксидантом - 30,13 %.

Выводы. Таким образом, многократное введение антиоксиданта тиофана мышам с карциномой легких Льюис, леченных паклитакселом, не изменяет противоопухолевый эффект цитостатика, что свидетельствует о целесообразности применения тиофана в химиотерапии опухолей в качестве модификатора его биологических реакций.

ЕЯ. Маръяновская, Л.П. Барсукова, ЕА. Шейко,

Д.В. Леонтьева, ТА. Куркина, АИШихлярова ВОЗМОЖНОСТИ

НИЗКОДОЗНОЙ ХИМИОТЕРАПИИ ОПУХОЛЕЙ ПОЗДНИХ СРОКОВ РАЗВИТИЯ

ФГУ РОСТОВСКИЙ НИОИ, РОСТОВ-НА-ДОНУ

В развитии подхода к лечению далеко зашедших нерезектабельных форм рака мы учитывали, прежде всего, нелинейные эффекты чувствительности опухоли к дозам химиопрепаратов, значительно меньших, чем терапевтические. Кроме того, использовалась возможность повышения эффективности лечения в условиях сочетания полимодальных факторов, имеющих различную (химическую, физическую) природу воздействия. С целью проведения экспертной оценки противоопухолевого эффекта и коррекции состояния защитных систем организма при аутогемохимиотерапии (АГХТ) прогрессирующих опухолей на модели саркомы-45 поздних сроков развития (начальный объем опухоли до 12 см3) было изучено влияние сочетания воздействий циклофосфана (ЦФ) в дозах в 2 и 5 раз меньших, чем терапевтические, а также низкоинтенсивного лазерного излучения с X 670 нм. В результате сопоставления совокупности критериев противоопухолевого эффекта (Т% - процент торможения роста опухоли, ИЭ - индекс эффективности, К - коэффициент активности, ИР - индекс роста опухоли) между группами с введением ЦФ в дозах 10; 5 и 2 мг на 100 г веса крысы в сочетании с лазерным облучением чрес-кожно бедренной вены и контролем выяснилось следующее. В идентичных условиях лазерного облучения (^=0,12 Дж/см2) при вариации дозы ЦФ было выявлено, что наибольшие значения Т%, ИЭ и К отмечались в группах с терапевтической (I группа) и минимальной дозой химиопрепарата (III группа).

Через неделю после начала воздействий Т% в I группе превышал значения в III группе на 24 %, и эта динамика сохранялась до конца эксперимента. В тот же период степень регрессии опухоли в III группе опережала показатели I группы в 1,5 раза. Позитивную динамику стабилизации и регрессии С-45 поздних сроков развития демонстрировали показатели ИЭ и К, которые достоверно отличались от контроля.

В группах с применением малых доз ЦФ показатели продолжительности жизни превышали таковые в

1,2 раза у крыс-опухоленосителей, получавших терапевтическую дозу ЦФ и в 1,6 раз - контрольных крыс. Модулирующее влияние лазерного облучения про-

явилось в активизации неспецифических гуморальных факторов защиты.

Судя по показателям лизосомально-катионного теста нейтрофильных гранулоцитов, уровень цитохимического коэффициента в группах с применением ЦФ в терапевтической, а также в 2 и в 5 раз меньших дозах возрос относительно контроля в 1,3; 2,3 и 2,8 раз соответственно.

Учитывая сдерживающее рост опухолей поздних сроков развития влияние малых доз цитостатика и активизирующее неспецифическую резистентность действие фототерапии можно рассчитывать на возможность использования данной тактики лечения нерезектабельных форм рака для продления и улучшения качества жизни.

И.Б. Меркулова, Т.В. Абрамова, О.И. Коняева,

Н.Ю. Кульбачевская, Н.П. Ермакова, В.М. Бухман ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ СОБАК ПОСЛЕ ОДНОКРАТНОГО ПРИМЕНЕНИЯ СДТ С ТЕРАФТАЛОМ-ЛИО ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ КОМБИНАЦИИ

ДОКСОРУБИЦИНА И ЦИСПЛАТИНА

ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Цель исследования. Патоморфологическое исследование внутренних органов собак после однократного применения сонодинамической терапии с терафталом-лио при использовании комбинации доксорубицина и циспла-тина - Докс+Цп+ТФ+СДГ - в сравнении с применением СДТ, Докс+Цп, Докс+Цп+ТФ и Докс+Цп+СДТ.

Материалы и методы. Использовано 14 собак породы «английский бигл» обоего пола, получавших Докс+Цп+ТФ+СДГ, СДТ, Докс+Цп, Докс+Цп+ТФ, Докс+Цп+СДТ. Препараты вводили однократно внутривенно в дозах, соответствующих ВНТД. СДТ применяли локально однократно на область бедра задней лапы в течение 10 минут.

Эвтаназию проводили на сутки 7 и 60 опыта. На аутопсии были взяты участки головного мозга, сердца, легких, печени, почек, желудка, тонкого и толстого кишечника, лимфатических узлов, селезенки, поджелудочной железы, надпочечников, половых желез, мочевого пузыря, щитовидной железы, головного мозга. Материал подвергали общепринятой гистологической обработке.

Результаты. Через 7 суток после однократного применения Докс+Цп+ТФ +СДГ у собак в легких, сердце, печени, семенниках, почках, селезенке, лимфатических узлах обнаружены умеренные деструктивнодистрофические, воспалительные или атрофические изменения различной степени; в желудке, поджелудочной железе, тонкой и толстой кишке, мочевом пузыре десквамативные и воспалительные изменения соответствовали фоновым (СДТ).

К 60 суткам практически полная обратимость изменений отмечена в легких, печени, лимфатических узлах и селезенке, а в остальных органах была неполной -остаточные признаки повреждений сохранялись у 1 или 2 собак в почках, в сердце, а также фоновые изменения сохранялись в желудке, поджелудочной железе, а также в тонкой и толстой кишке.

Морфологическая картина внутренних органов собак этой группы не отличалась от морфологической картины внутренних органов собак после применения Докс+Цп, Докс+Цп+ТФ и Докс+Цп+СДТ.

Выводы. Однократное применение сонодинамической терапии с терафталом-лио при использовании комбинации доксорубцина и цисплатина не усиливает повреждающего действия комбинации доксорубицина и цисплатина на внутренние органы собак.

П.И. Никитин1, НА. Брусенцов2, Ю.А. Пирогов3,

В.А. Полянский4, М.П. Никитин , Е.Р. Вольтер6,

Т.Н. Брусенцова1, Т.И. Ксеневич1,, М.В. Юрьев5,

А.А. Учеваткин3, ДА. Куприянов ,А.Н. Дубина3,

ДА. Тищенко3, , А.В. Иванов2

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ТАРГЕТИНГА

МАГНИТОУПРАВЛЯЕМЫХ

НАНОПРЕПАРАТОВ В ОРГАНИЗМЕ

ЖИВОТНЫХ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ

*ИОФ ИМ. А.М. ПРОХОРОВА РАН, МОСКВА

2 ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

3ЦМТС МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва

4НИИМ МГУ, Москва

5МФТИГУ, Москва

6НИИЭПиТ АН Абхазии, Сухум

Задача исследования. Разработка неинвазивного магнито-сенсорного определения магнитоуправляемых нанопрепаратов в организме животных, распределения МН в опухоли и в здоровых тканях для повышения качества магнитогидродинамической термохимиотерапии первичных опухолей на ранних стадиях опухолевого процесса.

Материалы и методы. Нами испытаны по 2 водных золя МН, полученных на основе покрытых декст-раном наночастиц магнетита Fe2O4 и замещенных ферритов. При внутриартериальном регионарном введении МН в сильном неоднородном постоянном магнитном поле проведена направленная доставка (таргетинг) в требуемые участки живого организма. Существующие методы определения нанопрепаратов в организме животных не позволяют количественно оценить их содержание в опухоли, печени и других органах в реальном времени. В ИОФ РАН разработан прибор «БиоМаг» для неинвазивного исследования распределения МН в тканях живых организмов на глубине до 20 мм при помощи индукционной системы, находящейся вне организма. Глубина детекции МН в живом организме может быть существенно увеличена. Прибор также использовался для количественных исследований МН в тканях ex vivo.

Результаты. Метод основан на детекции МН по их нелинейному отклику при воздействии магнитным полем на двух частотах и регистрации отклика на комбинаторных частотах. Порог чувствительности составляет 2 нг МН, что совпадает с уровнем чувствительности MH на основе изотопов 59Fe по -излучению. Мышей или крыс с опухолями размещали в неоднородном постоянном магнитном поле с индукцией 0,2-

7,0 Тл и градиентом 0,01-0,25 Тл/см. Вводимый золь МН включал декстранферрит и наночастицы диаметром 10-900 нм общей формулы

Zn2+x Mn2+y Fei-x,y[Gd3+z Fe3+2-z]O4, где 0<y<1, 0<x<1, 0<z<1.

Выводы. Сканирование тел экспериментальных животных магнитным сенсором «БиоМаг» позволило количественно оценить распределение МН в опухоли, органах и тканях не только в нормальных условиях, но и при магнитоуправляемом таргетинге противоопухолевых лекарственных препаратов в НПМП.

Д.В. Новиков1. Т.В. Белова1, Е.Ю. Конторщикова2,

А. В. Калугин , КА. Коровушкина2,В.В. Новиков1 ОПРЕДЕЛЕНИЕ MPHK MAGE-A(1-6) , NY-ESO-I И GAGE 1-8 АНТИГЕНОВ В КЛЕТКАХ ОПУХОЛЕВОГО ОЧАГА МИОМЫ И РАКА ТЕЛА МАТКИ

1НИИ Молекулярной биологии и региональной экологии ННГУ имени Н. И. Лобачевского, Нижний Новгород 2ГОУ ВПО НИЖГМА РОСЗДРАВА, НИЖНИЙ НОВГОРОД

Введение. Среди маркеров, используемых для выявления и прогнозирования течения неопластического

процесса, выделяют группу белков, экспрессируемых опухолевыми клетками и названных раково-тестикулярными (cancer/testis) антигенами.

Задачи исследования. Оценить частоту обнаружения мРНК раково-тестикулярных антигенов MAGE-A(1-6), NY-ESO-I и GAGE 1-8 в клетках опухолевых очагов при злокачественных и доброкачественных новообразованиях тела матки.

Материалы и методы. В работе исследовали 11 образцов опухолевого очага миомы тела матки и 8 образцов опухолевого очага больных раком тела матки. мРНК раково-тестикулярных антигенов выявляли методом ОТ-ПЦР с использованием специфических праймеров.

Результаты. В образцах клеток опухолевого очага миомы тела матки мРНК MAGE-A(1-6) выявлена в 45,5 % случаев (5 из 11), мРНК NY-ESO-I - в 81,8 % случаев (9 из 11). Суммарная частота обнаружения мРНК раковотестикулярных антигенов составила 90,9 % (10 из 11). В опухолевых очагах больных раком тела матки мРНК mAgE-A(1-6) и NY-ESO-I выявлена в 62,5 % (5 из 8) и 87,5 % (7 из 8) случаях соответственно. Общая частота обнаружения мРНК равнялась 100 %. Ни в одной из исследуемых проб мРНК GAGE 1-8 обнаружена не была.

Выводы. Матричная РНК раково-тестикулярных антигенов MAGE-A(1-6) и NY-ESO-I с высокой частотой встречается в клетках опухолевых очагов как при доброкачественных новообразования тела матки, так и при злокачественной трансформации. Одновременное обнаружение спектра мРНК раково-тестикулярных антигенов с помощью биочипа может иметь мониторинговое значение.

ПА. Плотникова, С.П. Кемайкин, С.В. Харитонов,

О.Н.Куликова, Т.В. Харитонова, Я. С. Лукьянова,

Б.М. Веснушкин

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ

МЕКСИДОЛА И МЕЛАТОНИНА НА МОДЕЛИ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО УРЕТАНОВОГО

КАНЦЕРОГЕНЕЗА

ГОУ ВПО «МГУ им. Н.П. Огарева», Саранск

Цель исследования. Изучить антиоксидантное действие синтетического производного 3-оксипири-дина -мексидола - и эндогенного гормона мелатонина в условиях экспериментального уретанового канцерогенеза.

Материалы и методы. Эксперименты проводились на белых мышах (200 мышей). Материалом исследования являлась кровь экспериментальных животных. Оценку активности ПОЛ проводили по содержанию одного из конечных продуктов свободнорадикальной реакции липопереокисления - малонового диальдегида, Fe-МДА и активности каталазы, как показателя протекторных свойств клетки. В экспериментальных исследованиях для коррекции канцерогенного эффекта использовали естественный антиоксидант мелатонин и синтетическое производное 3-оксипиридина - мексидол.

Результаты. На фоне введенного уретана у 100 % мышей контрольной группы возникали множественные мультицентричные аденомы. Среднее количество аденом у одного животного составило 22,0 2,2.

Изучение динамики изменений биохимических данных показало, что по сравнению с интактными в группе контрольных животных отмечается достоверное увеличение содержания МДА с 1,44 0,02 мкмоль/л до 4,7 0,02 мкмоль/л (р<0,05) в плазме крови и с 12,82 0,17 мкмоль/л до 18,2 0,12 мкмоль/л (р<0,05) в эритроцитах.

При коррекции канцерогенного эффекта уретана мексидолом наблюдалось достоверная зависимость снижения уровня МДА в плазме в зависимости от величины дозы применяемого антиоксиданта.

Так, при использовании мсксидола и дозе Ш,0 мг/кт отмечено уменьшение показателей МДД до 2,95 0,02 мкмоль/л (р<0,05); в дозе 1,0 мг/кг - до 2,1 0,01 м кмоль/л (р<0,05); наиболее знач и мое снижение МЛ А выявлено при в веденії н данного препарата в дозе0,1 мг/кг-1,32 0.04 м км ол ь/л (р<0.05).

I применение мелатонина способствовало положительной динамике показателен МДД в плазме крови. При использовании доз 20 мг/л и 2 мг/л происходило снижение уровня МДА до 2^ 0,02 мкнош/л и 1,46 0,14 мкмель/л соответственно (р<з0»05>.

Выводы. Полученные данные сицдетепьствукгт о достоверной ангноксидангной активности иенендолв и матэтгшмИ- Вышеуказанные свойства синтетических антиокеидантов и мелатонина далее достоверно проявляются при использовании меньигнх доз препаратоп,

В. С. Покровский, П. А. Лесная.

В, И. РаманенкО) Е.М. Трещйяиий ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ результапл ДОКЛИНИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИИ ЭФФЕКТИВНОСТИ И ПЕРЕНОСИМОСТИ КОМБИНАЦИЙ ЭТОПОЗИД + ЦИСПЛАТИН И ЗТОПОЗИД + ЦИСПЛАТИН + АРАНОЗА НА МОДЕЛИ КАРЦИНОМЫ ЛЕГКОГО Л ЬКИК I у 14)1 III, ИМ. 11.11. КЛОХИІІЛ РЛМІI, ШК’КНЛ

Введение. Комбинация этопозщ + цисшатии И Р» является традиционным стандартом лечения мелюокле-точного рака легкого. Ранее было показано, что араноза (Аг) может существенно повышать эффективность многих шітостатнков. в том числе ішеплатина. В данной работе изучена возможность включения Ат в схему ВР, Цель исследовании. ('равинті. )і|)і])скі ипшцть и переНОСИМОСТЬ комбинации ЕР и ЕРАГ.

Материалы и методы. Использованы мыши-самим IIIЖ і с подкожно іранснланированноЙ эпндермоццвой карннномоіі легкого Льюис. Г) опытные н коїгтрольную (без лечения) группы включали по 10—33 мышей.

Препараты вводили ннутрнбрЕошшню одновременно последовательно (интервал 10-15 мин) 1 раз в сутки в течение 3 дней, лечение начинали через 48 ч после трансплантации опухоли. Оптимальные разовые лозы: Г - 5 мг/кг, Р - 2,5 мг/кг. А г - 100 мг/кг. Эффективность оценивали но увеличению продолжительности жизни (УПЖ%, минимальный критерий >25 %] в сравнении с контролем и излечению ......ей {отсутст-

вие опухоли її течение 90 дней), О переносимости лечения судили по изменению массы селезенки и возможной шбелн мышей от токсичности. Оппвстичесжую обработку данных проводили по мсіщу Фнигера-Сгъюденга в модо фнкаплн ?,Ь, Стрелкова, рассчитывая .юверілсльньїй ні пер-вал средней сравниваемой величины.

Результаты Комбинация ЕР в указанных дозах малоэффективна: УПЖ 2 %, излечения не наблюдали. ЕРАг приводила к излечению 85 % мышей и к достоверному УІІЖ оставшихся животных на Ы %. І Іере-ИОСИМОСТЬ сравниваемых комбинации была удовлетворительной, гибели от зокенчноезн не отмечали.

Однако в группе мышеи, получивших ЕРАг, масса селезенки была достоверно меньше без ухудшения качества жизни.

] Указатели лечения 1 -.ЕЧп-к» {■;РАт (п '131

УИЖ 2% 67 % (р ^1,0^)

Излечен не 0% «5%

Средняя масса селезенки, мг 301 [234+368] 156[9в-1741

Заключение. Ка модели рака легкого ЕЬС включение нрапози и ехему іюлихимнотерапии КР ирііноді і і к достоверному улучшению тлалепных результатов ЛЄЧЄНИЯ. Целесообразно изучение ГСМаТОЛОГИЧС-

ской токсичности комбинации ЕРАг.

НС. Покровский. И.А. Лесная. В. И. Романенко,

Е.М. Трещапина

ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ДОКЛИНИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ И ПЕРЕНОСИМОСТИ КОМБИНАЦИЙ И РИ НОТЕ КА И + ЦИСПЛАТИН Н ИРИНОТЕКАН + ЦИСПЛАТИН + АРАНОЗА НА МОДЕЛИ КАРЦИНОМЫ ЛЕГКОЮ ЛЬЮИС ГУ РОНЦИМ. НН. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

введение. Комбинация ирнкотекан + цисплатин (1Р> является одной из современных схем нолнм1мно1срапнн мел ко клеточного рака легкого. Араноза является перспективным ПОМбиНВНТОМ ДЛЯ включения В схемы 1ЮЛН-хнмнечераннн МРЛ. тик как сушей венно повышает эффективность штснлатина (экспериментальные н клинические ланпые) и комбинатщ гтолозид + цисплатин (экспериментальные данные}. В данной работе изучена 1Н}:шожносг1. включения Аг в СКСМу II’ Для повышения

эффективности лечения.

Цель исследования. Сравнить эффективность и переносимость комби наций 1Р и 1РАг.

Материалы и методы. Использованы мыши-самцы СО!7! с подкожно транспланнрованнон эпидермоид-ной карциномой легкого Лыоис, ГС опытные н контрольную (без лечения) грунты вкяочали по 10-12 мышей. 1ке препараты шмдиан внугрибрютинно. I - (гиюкрапю через 4» Ч после трансплантации ОЛуКОЛИ (день I), Р и Дг —

I раз всугкн В ДНИ 1—3, в указанной последовапл'нлкн.'тп е интервалом 10-15 мин, и оптимальных розовых дозах; I -40 мг/кг (в 1РАг 20 мг/кг), Р - 2,5 мг/кг, Аг - 100 мг/кг. Эффекшвносгъ оценивай! по увеличению продолжительности жизни (УГГЖ%) в сравнении с контролем и излечению мышей (отсутствие опухоли в течение 90 дней),

О переносимости лечения судили по изменению массы селезенки и возможной гибели мы шеи от токсичности Статистическую обработку данных проводили но метопу Фишера-Сгькдента а модификации Р.Е. Стрелкова, рае-ечнзывая ДИ средней сравниваемой велнчи...

Результаты. 1Р.Чг была значительно более эффективной на ЕЬС, чем 1Р: излечение мышей - 100 % против 10 %. Переносимость сравниваемых комбинаций была удовлетворительной, гибели от токсичности не отмечали. Средняя масса селезенки в группе мышеи, подучивших !Р или !РАг, составляла !21 н 103 мгсоответственно, различия статистически недостоверны,

Показатели лечения 1Р<п=К1> 1РДг(п=12)

У11Ж.% 4» -

Излечение. % 10 100

Средняя маееа селезенки, мг 121 [87-155] 103 [83-Н 17|

Заключение. На модели рака легкого 1ЕС включение ара козы в схему ноли химиотерапии ІР при водит к достоверному улучшению отдаленных результатов лечения. Комбинация ІРАг, возможно, является более эффекпшным, чем этопозцд і цисплатин ■ араноза. Целесообразно детальное изучение гематологической токсичности комбинации ГРДг,

П. С. Руки!, А.Ю. Скрябина ГЛ. А прытки'

ПОИСК ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ

противїюпухолевьіх КОМ ПЛ ЕКСНЫХ СОК л п НЕНИЙ РЕД КОЗЕМ Е Л Ь И ЫХ М ЕТА Л Л О В

МИТХТ нм. М.Н. Ломопоспвд, Москва

51 У РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Задачи исследовании. 1’азрабоіап. іюдчодьі кшлучошю вькозл)эффекп1вных 1фотпво(М1>,хатевых вечікстр из класса ктпиіексіпчх сослиікнин редкоземельных металлов.

Материалы и методы. Испольасвав метод компьютерного нропюзіфоііаііня спскіра Гніолошчсскпй

активности химических веществ по их структуре с помощью системы PASS с целью применения веществ с наибольшей прогнозируемой противоопухолевой активностью в качестве лигандов для синтеза комплексных производных соединений лантаноидов.

Результаты. Литературные сведения о повышении биологической активности органических веществ при их включении в качестве лигандов в комплексные соединения, а также полученные ранее предварительные данные о наличии противоопухолевой активности при испытании на животных с экспериментальными опухолями синтезированных нами антипириновых производных иодидов лантаноидов послужили основанием для исследований по получению высокоэффективных противоопухолевых веществ из класса комплексных соединений редкоземельных металлов с органическими лигандами. Для выбора оптимальных лигандов проведено компьютерное прогнозирование спектра биологической активности 47 низкомолекулярных веществ (включая применяемый как лекарство антипирин). Для ряда веществ получен значимый прогноз антинеопла-стической активности с цитотоксическим или иммуномодулирующим механизмами действия. Для некоторых производных пиразолона предсказана достаточно высокая вероятность (Ра) проявления антиметастатиче-ской активности (например, соответствующие Pa для 1-(4-хлорфенил)-3-метил-2-пиразолин-5-она и 3-метил-1-фенил-2-пиразолин-5-она равны 0,554 и 0,594) и наличия ряда биохимических механизмов этой активности. В настоящее время проводится отработка методов синтеза комплексных производных иодидов лантаноидов с лигандами, отобранными по результатам компьютерного прогнозирования. Некоторые комплексные соединения иодидов лантаноидов с антипирином переданы на изучение цитотоксической активности в Национальный институт рака США. Синтезированные вещества предлагаются для изучения противоопухолевой и ан-тиметастатической активности на животных.

Выводы. Предложена методика оптимизации поиска активных противоопухолевых комплексных соединений лантаноидов с органическими лигандами на основе компьютерного прогнозирования биологической активности предполагаемых лигандов.

Н.А. Сахарно в1, Д.В. Новиков1, О.В. Уткин1,

А.В. Куролес1, Е.Ю. Конторщиков^,

КА. Коровушкина2, В.В. Новиков1

ЧАСТОТА ВСТРЕЧАЕМОСТИ

МРНК FAS-АНТИГЕНА

В КЛЕТКАХ ОПУХОЛЕВЫХ ОЧАГОВ

МИОМЫ И РАКА ТЕЛА МАТКИ

'НИИ МБРЭ ИНГУ имени Н.И. Лобачевского, Н. Новгород

2ГОУ ВПО НИЖТМА РОСЗДРАВА, НИЖНИЙ НОВГОРОД

Введение. Опосредующий апоптоз Fas-антиген участвует в передаче апоптотического сигнала в клетку-мишень при связывании со специфическим лигандом. Помимо мембранной описаны растворимые формы мРНК Fas-антигена, образующиеся в результате альтер-нативного сплайсинга.

Цели и задачи. Характеристика спектра форм мРНК Fas-антигена, кодирующих растворимые белки, в опухолевых клетках миомы и рака тела матки.

Материалы и методы. Материалом исследования служили образцы клеток 14 больных миомой тела матки и 7 больных раком тела матки. Сравнительный анализ спектра форм мРНК Fas-антигена в клетках опухолей проводили с помощью метода ОТ-ПЦР.

Результаты. Установлено, что в клетках опухолевых очагов мРНК мембранной формы Fas-антигена детектировалась в 5 случаях из 14 (35 %) при миоме и в 4 случаях из 7 (57 %) при раке тела матки. Матрич-

ная РНК доминирующей растворимой формы выявлялась в 2 случаях из 14 (14 %) при миоме и в 1 из 7 (14 %) при раке тела матки. При этом альтернативная форма мРНК РаБ-антигена с делециями 3 и 4 экзонов обнаруживалась в 5 из 14 (35 %) случаев при миоме и в 4 из 7 (57 %) при раке тела матки. Альтернативная форма мРНК РаБ-антигена с делециями 4 экзона детектировалась в 2 случаях из 14 (14 %) при миоме и в 2 из 7 (28 %) при раке тела матки. Минорная форма мРНК РаБ-антигена с делециями 4 и 6 экзонов была выявлена в 1 случае из 14 (7 %) при миоме и в 2 из 7 (28 %) при раке тела матки.

Выводы. Отсутствие экспрессии мРНК мембранной формы РаБ-антигена в ряде образцов, вероятно, является защитным механизмом, позволяющим опухолевым клонам уходить от РаБ-зависимого апоптоза. Дополнительным механизмом снижения чувствительности опухолевых клеток к апоптотическим сигналам может служить увеличение частоты образования альтернативных форм мРНК РаБ-антигена, кодирующих растворимые белковые продукты.

Ю. С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е. Ф. Комарова,

Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова,

Е.З. Сергостъянц

ГИДРОЛИТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ САРКОМЫ С-45,

РАСТУЩЕЙ В ТКАНИ ЛЕГКОГО.,

ПОСЛЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ХИМИОТЕРАПИИ

ФГУ РОСТОВСКИЙ НИОИ, РОСТОВ-НА-ДОНУ

Изучена активность катепсина Д, антитриптическая, кислото-стабильных ингибиторов, щелочной и кислой фосфатаз, коэффициентов соотношения КФ/ЩФ, кат. Д/АТА, кат. Д/КСИ в образцах тканей С-45, растущей в ткани легкого крыс без химиотерапевтического воздействия и после проведения различных видов химиотерапии. В исследовании было использовано 56 животных с саркомой С-45, перевитой в ткань легкого. Все крысы были разделены на 3 группы: 1 - рост опухоли без каких-либо воздействий (контрольная); 2 - через 25 дней от момента перевивки С-45 в ткань легкого животным внутривенно вводили циклофосфан, разведенный физиологическим раствором, в дозе 40 мг; 3 - через 25 дней от момента перевивки С-45 в ткань легкого животным внутривенно вводили циклофосфан, преинкубирован-ный 30 мин при 37 С с кровью из пораженного опухолью легкого, в дозе 40 мг.

Установлено, что активность кат. Д снижалась по сравнению с показателями контрольной группы: во 2 группе крыс на 24,1 %, в 3 - на 56 %. При этом активность КСИ после в/в введения химиопрепарата на физиологическом растворе достоверно не изменялась, а после химиотерапии на крови из органа, пораженного опухолью, достоверно увеличивалась на 46,1 %. Коэффициенты соотношения кат. Д/КСИ снижались на 33,3 % в образцах опухоли 2-й группы животных и в 2,3 раза - в образцах ткани опухоли 3-й группы крыс. Активность КФ и ЩФ в образцах ткани опухоли после традиционной экспериментальной химиотерапии не имела достоверного изменения по сравнению с показателями у крыс без химиотерапии. После АГХТ на органоспецифической крови активность фосфатаз имела разнонаправленный характер: КФ - снижалась на 77,4 %, а ЩФ, напротив, повышалась на 29,7 %.

При этом коэффициенты соотношения КФ/ЩФ, характеризующие взаимоотношения цитозольного и мембранного компонентов системы фосфорилирования, после проведения АГХТ снизились по сравнению с традиционными показателями без имиотерапевтического воздействия в 1,7 раза.

Выводы. Обнаруженное нами изменение активности системы протеиназа-ингибитор в ткани С-45 после введения химиопрепарата на крови из пораженного опухолью легкого может указывать на качественные перестройки обмена, лежащие в основе трансформации и дифференцировки клеток опухоли, процессов морфогенеза, координации межклеточных взаимодействий, присущих опухолевой ткани.

Ю. С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е. Ф. Комарова,

Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова,

Е.З. Сергостъянц

ГИДРОЛИТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ПЕРИФОКАЛЬНОЙ ЗОНЫ САРКОМЫ С-45, РАСТУЩЕЙ В ТКАНИ ЛЕГКОГО,

ПОСЛЕ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ химиотерапии. ФГУ РОСТОВСКИЙ НИОИ, РОСТОВ-НА-ДОНУ

Изучена активность гидролитических процессов в перифокальной зоне опухоли без химиотерапевтического воздействия и после проведения экспериментальной химиотерапии.

В исследовании было использовано 56 белых беспородных самцов крыс с саркомой С-45, перевитой в ин-тактные ткани легкого.

Все крысы были разделены на 3 группы:

1 - рост опухоли без химиотерапевтического воздействия (контрольная);

2 - через 25 дней от момента перевивки С-45 в ткань легкого животным внутривенно вводили циклофосфан, разведенный физиологическим раствором, в дозе 40 мг;

3 - через 25 дней от момента перевивки С-45 в ткань легкого внутривенно вводили циклофосфан, преинкуби-рованный 30 мин при 37 С с кровью из пораженного опухолью легкого, в дозе 40 мг.

Установлено, что без терапии активность протео-лиза в ткани перифокальной зоны опухоли была повышена, о чем свидетельствовало увеличение показателя соотношения в системе протеаза-ингибитор.

Это сопровождалось и значительным усилением энергетических процессов, причем, преобладал ги-поксический тип фосфорилирования.

После стандартной внутривенной экспериментальной химиотерапии в активности гидролитических процессов перифокальной зоны опухоли не отмечено сколько-нибудь значимых изменений, кроме снижения на 25 % показателя коэффициента соотношения катепсинД/КСИ (кислото-стабильные ингибиторы), произошедшего за счет увеличения на 53,8 % уровня активности КСИ.

После проведения экспериментальной химиотерапии препаратом, преинкубированным с кровью из легкого, пораженного злокачественной опухолью, активность кат. Д в перифокальной зоне опухоли достоверно не отличалась от аналогичного показателя в интактной ткани легкого. Активность КСИ возросла в 2,4 раза по отношению к показателю до противоопухолевого воздействия и стала лишь на 23,1 % меньше, чем в интактной ткани легкого.

Активность обеих фосфатаз перераспределилась по сравнению с показателями без воздействия в сторону активации щелочной фосфатазы, активность которой возросла в 2,1 раза.

Коэффициент соотношения КФ/ЩФ снизился по сравнению с аналогичным показателем в контрольной группе в 2,7 раза и стал лишь в 2 раза выше, чем в интактной ткани легкого.

Разработанная нами аутогемохимиотерапия с использованием крови из пораженного опухолью органа снижает инвазивный, пролиферативный потенциал ткани злокачественной опухоли, регулируя гидролитические процессы не только в самой опухоли, но и в окружающей ее ткани.

Ю. С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е. Ф. Комарова,

Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова,

Е.З. Сергостъянц

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ХИМИОТЕРАПИЯ ЛИМФОСАРКОМЫ ПЛИССА ЛЕГКОГО

ФГУ РОСТОВСКИЙ НИОИ, РОСТОВ-НА-ДОНУ

Для изучения эффективности различных способов введения циклофосфана мы провели экспериментальную химиотерапию лимфосаркомы Плисса в легком, представляющую собой опухоль железистого строения практически не чувствительную к химиотерапии.

Было использовано 45 крыс массой 160-180 г, у которых лимфосаркому Плисса получали в ткани легкого путем введения в стерильных условиях взвеси опухолевых клеток в подключичную вену.

Все животные были разделены на 3 группы. В контрольной группе рост опухоли был без каких-либо воздействий. Двум группам животных через 1 ч от момента перевивки лимфосаркомы Плисса внутривенно вводили циклофосфан в дозе 120 мг, причем в одном случае циклофосфан традиционно разводили физиологическим раствором, а в другом — преинку-бировали 30 мин при 37 С с аутокровью, взятой из подключичной вены.

Показано, что экспериментальная химиотерапия циклофосфаном, введенном внутривенно на физиологическом растворе, не оказывала влияния на лимфосаркому Плисса, растущую в легком. При внутривенном введении циклофосфана, преинкубированного с аутокровью животного продолжительность жизни увеличивалась практически в 2, 5 раза по сравнению с группой контрольных крыс и после введения циклофосфана в традиционном варианте.

Это свидетельствует о том, что инкубация химиопрепарата с аутокровью приводит, по-видимому, к появлению новых активных метаболитов с другой фармакодинамикой и, следовательно, к модификации его действия и частичному преодолению резистентности опухоли к циклофосфану.

Поскольку побочным токсическим действием химиопрепаратов является повреждение внутренних органов, мы изучили морфологические изменения, возникающих в тимусе, селезенке, печени.

В результате гистологического исследования показано, что введение циклофосфана, преинкубированного с аутокровью, не вызывает таких серьезных токсических повреждений тимуса и селезенки (органов иммунитета) и печени (основного органа, осуществляющего регуляцию гомеостаза организма и его дезинтоксикацию) как в группе с другим способом введения химиопрепарата.

Ю. С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е. Ф. Комарова,

Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова,

Е.З. Сергостъянц ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ХИМИОТЕРАПИЯ САРКОМЫ С-45,

РАСТУЩЕЙ В ТКАНИ ЛЕГКОГО ФГУ РОСТОВСКИЙ НИОИ, РОСТОВ-НА-ДОНУ

Целью исследования явилась разработка экспериментальной хирургической химиотерапии, основанной на инкубации цитостатиков с кровью из зоны злокачественного роста. В настоящей серии исследования было использовано 60 белых беспородных самцов крыс с саркомой С-45, перевитой в ткань легкого. Все животные были разделены на 3 группы: 1 - рост опухоли без каких-либо воздействий (контрольная); 2 - через 25 дней от момента перевивки С-45 в ткань легкого животным внутривенно вводили циклофосфан, разведенный физиологическим раствором, в дозе 40 мг; 3 - через 25 дней от момента перевивки С-45 в ткань легкого животным внутривенно

вводили циклофосфан, преинкубированный 30 мин при 37 С с кровью из пораженного опухолью легкого, в дозе

40 мг. Кровь для экспериментальной химиотерапии получали от 15 крыс с С-45, перевитой в ткань легкого в те же сроки, что и в исследованных группах.

Традиционная химиотерапия приводила к достоверному увеличению продолжительности жизни животных

2-й группы на 26,4 % по сравнению с 1-й. Проведение химиотерапии на крови, полученной из органа (легкого), пораженного С-45, увеличивало продолжительность жизни 70 % животных 3-й группы в 2,2 раза по сравнению с показателем в контрольной группе и в 1,4 раза по сравнению с показателем во 2-й группе животных. Необходимо отметить, что 30 % крыс этой группы пережили указанный срок и были забиты по истечению 150 суток от момента перевивки опухоли в ткань легкого. При морфологическом исследовании опухоли в 3-й группе отмечено выраженное очаговое фиброзирование в центре и по периферии опухоли, отсутствие патологических митозов и очагов некрозов. В перифокальной зоне опухоли не обнаружено очагов некроза и инфильтрации сегментоядерными лейкоцитами, кровоизлияний. Ткань мало отличалась от нормальной легочной ткани. Не найдено метастатических отсевов. В дальнейшие сроки исследования, вплоть до гибели, в ткани опухоли животных 3-й группы увеличивался очаговый фиброз. Опухоль крыс 2-й группы состояла из веретенообразных клеток с мелкими участками некрозов, незначительным полиморфизмом с небольшим количеством сегментоядерных лейкоцитов. В перифокальной зоне опухоли была отечная жидкость в просвете альвеол, мелкие кровоизлияния, однако, в отличие от аналогичной ткани в контрольной группе, почти отсутствовали сегментоядерные лейкоциты. Изредка встречались одиночные мелкой величины метастатические отсевы без лимфо-плазмоцитарной инфильтрации вокруг.

Ю. С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е. Ф. Комарова,

Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова,

Е.З. Сергостъянц

СОСТОЯНИЕ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ САРКОМЫ С-45,

РАСТУЩЕЙ В ТКАНИ ЛЕГКОГО,

ПОСЛЕ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ химиотерапии ФГУ РОСТОВСКИЙ НИОИ, РОСТОВ-НА-ДОНУ

Была изучена активность супероксиддисмутазы, каталазы, суммарной пероксидазной активности, уровень содержания диеновых конъюгатов, малонового диальдегида, витаминов Е и А саркомы С-45, перевитой в ткань легкого самцов белых беспородных крыс массой 200-220 г без химиотерапевтического воздействия и после проведения различных видов химиотерапии.

После внутривенного введения циклофосфана, растворенного в физиологическом растворе, активность СОД возросла по сравнению с показателем в группе крыс без экспериментальной терапии на 44,1 % за счет активности Мп-СОД, которая увеличилась на 57,2 % без достоверного изменения активности Си-2п - СОД. Активность каталазы при этом увеличилась в 1,7 раза, СПА - в 4 раза. Содержание витамина Е снизилось в 2 раза, а витамина А осталось без изменений. Не обнаружено достоверных различий в содержании первичных и конечных продуктов ПОЛ - ДК и МДА.

После экспериментальной химиотерапии, проведенной циклофосфаном, преинкубированным с кровью из пораженного опухолью легкого, общая активность СОД возрастала по сравнению с фоновыми величинами на 92,5 %. При этом в 3,1 раза возрастала активность Си-2п-зависимого изофермента, а активность Мп-СОД

увеличилась в 1,6 раза. Активность каталазы в ткани опухоли возросла по сравнению с фоновыми показателями в 2,1 раза, СПА - в 1,5 раза. Изменения уровня витаминов А и Е было таким же, как и в предыдущей группе. Значительные изменения отмечены в содержании продуктов ПОЛ в этой группе: уровень ДК возрос по сравнению с показателями без химиотерапевтического воздействия в 1,5 раза, МДА - в 2 раза.

В целом можно говорить, что предложенная нами экспериментальная химиотерапия вызвала в злокачественных опухолях, растущих в ткани легкого, универсальную реакцию активации свободнорадикального окисления, способную нарушить целостность перокси-сом. Поскольку основные антиоксиданты наружной клеточной мембраны - жирорастворимые витамины А и Е также претерпевали изменения, можно думать, что активация ПОЛ в исследуемых опухолях происходила и внутри клеток и способствовала разборке цитоплазматических и митохондриальных мембран, что, в свою очередь, является адекватным показателем повреждающего действия химиопрепаратов, модифицированных органоспецифической кровью.

Ю. С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е. Ф. Комарова,

Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова,

Е.З. Сергостъянц СОСТОЯНИЕ

СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ ПЕРИФОКАЛЬНОЙ ЗОНЫ САРКОМЫ С-45, РАСТУЩЕЙ В ТКАНИ ЛЕГКОГО,

ПОСЛЕ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ химиотерапии ФГУ РОСТОВСКИЙ НИОИ, РОСТОВ-НА-ДОНУ

Основываясь на принципе тканевой теории злокачественного роста, согласно которой рак есть результат нарушения механизма тканевого контроля пролиферации как надклеточной системы, мы сочли целесообразным изучить состояние свободнорадикальных процессов в перифокальной зоне саркомы С-45, растущей эктопически в ткани легкого белых беспородных самцов крыс, в процессе традиционного и предлагаемого нами способа экспериментальной химиотерапии, а также без воздействия химиопрепаратами.

В целом в группе без экспериментальной терапии в перифокальной зоне саркомы С-45 отмечено нарушение соотношения в системе ПОЛ-антиоксиданты практически такое же, как и в ткани самой злокачественной опухоли. Это, вероятно, и создавало условия для роста и развития опухолевых метастатических отсевов, найденных при морфологическом исследовании ткани перифокальной зоны.

После стандартной внутривенной экспериментальной химиотерапии в перифокальной зоне опухоли изменения коснулись лишь активности СОД. Найдено падение в 4,4 раза общей активности фермента относительно группы крыс без терапии. Причем эта активность была полностью представлена Си-2п-зависимой изоформой, тогда как активность Мп-зависимого изофермента СОД не определялась.

Все остальные исследуемые показатели достоверно не отличались от значений у животных без экспериментальной терапии.

После проведения внутривенной экспериментальной химиотерапии циклофосфаном, преинкубированным с кровью из пораженного опухолью легкого, произошли серьезные перестройки в свободнорадикальных процессах перифокальной зоны опухоли. Так, уровень содержания продуктов ПОЛ - ДК и МДА - возрос по сравнению с показателями у крыс без терапии в 2 и 3,3 раза соответственно, и показатели достоверно не отличались от таковых в интактной ткани легкого.

Возросла и достоверно не отличалась от показателей в интактной ткани легкого активность Си-2п-зависимого и Мп-зависимого изоферментов СОД. СПА в перифокальной зоне опухоли снизилась в 2,1 раза и стала превосходить показатель в интактной ткани легкого лишь на 22 %. Не обнаружено по сравнению с показателями в группе без терапии изменения уровня содержания витаминов Е, а также активности каталазы. Вместе с тем отмечено возрастание в 3 раза содержания витамина А.

Т.А. Сидорова, Г.К. Герасимова

СИСТЕМА ГЕМ-ГЕМОКСИГЕНАЗА I ТИПА /

ФЕРРИТИН (ГО-1/Ф)

В ЗАЩИТЕ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ОТ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА, ИНДУЦИРОВАННОГО ХИМИОПРЕПАРАТАМИ ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Введение. Система ГО-1/ Ф является ключевой в физиологическом катаболизме гема и поддержании гомеостаза железа в клетке. При действии ряда факторов (радио-, химио- и фотодинамической терапии) в опухолевой клетке образуются свободные радикалы кислорода (ROS), которые вызывают повреждение гемопротеинов и появление свободного гема.

Для защиты от избытка «гемового» железа в клетке индуцируется система ГО-1/Ф. Остается не ясным вопрос, влияет ли уровень базальной и индуцированной активности этой системы на эффективность противоопухолевых препаратов, механизм действия связан с генерацией в клетке ROS.

К таким препаратам относятся антрациклиновые антибиотики, митоксантрон и каталитическая система терафтал + аскорбиновая кислота (ТФ+АК).

Задачи исследования. Найти линию опухолевых клеток человека с базальной активностью ГО-1/Ф, исследовать влияние препаратов на ГО-1/Ф и выяснить ее роль в механизме защиты клеток от цитотоксичности химиопрепаратов.

Материалы и методы. В работе использовались культуры опухолевых клеток линий К562, и937 и KG1. Базальный и препарат-индуцированный уровень мРНК ГО-1 и Ф изучали методом ПЦР с обратной транскрипцией, экспрессию белков оценивали методом Вестерн-блотта. Цитотоксичность препаратов оценивали МТТ-методом.

Результаты. Исследования базального и индуцированного гемином уровней экспрессии ГО-1 и Ф (мРНК и белка) показали, что в клетках линий и937 и KG-1 ГО-1/Ф система является базально активной, а в клетках линии К562 она ингибирована на уровне транскрипции.

В клетках и937 базальный уровень экспрессии ГО-1 увеличивается в присутствии ТФ+АК и Н202 и не меняется в присутствии антрациклинов и митоксантрона. Выживаемость клеток и937 после индукции ГО-1/ Ф гемином увеличивалась в присутствии ТФ+АКи Н202, не изменялась в присутствии антрациклинов и митоксантрона. Угнетение цинк-прото-порфирином базальной и индуцированной гемином активности ГО-1 -фермента в клетках и937 не повлияло на цитотоксичность ТФ+АКи Н202.

Выводы

1) В клетках и937 с базально активной ГО-1/Ф системой ТФ+АК и Н202 оказались индукторами экспрессии мРНК ГО-1 и ГО-1-белка и не влияли на базальный уровень экспрессии мРНК Ф и Ф-белка.

2)Уровни экспрессии мРНК ГО-1 и ГО-1-белка в клетках и937 не изменяются в присутствии доксору-бицина, акларубицина, митоксантрона.

3) Индукция ГО-1/Ф в клетках и937 гемином за-

щищает их от токсичности ТФ+АК и Н202 и не влияет на цитотоксичность доксорубицина и митоксантрона.

4) Ингибирование активности ГО-1-фермента в клетках и-937 не повышает их чувствительности к ТФ+АК и Н202.

Работа выполнена в рамках НТП «Разработка и внедрение в медицинскую практику новых методов и средств диагностики и лечения злокачественных опухолей и других заболеваний».

А.П. Смирнова, Л.П. Сушинина, С.В. Устинкина,

З.С. Шпрах, А.П. Будько, Л.И. Смирнова,

Н.П. Яворская, И.С. Болубева, Е.И. Михаевич,

З.С. Смирнова СИНТЕЗ

И ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ ЦИФЕТРЕЛИНА

ПРИ ПЕРОРАЛЬНОМ ВВЕДЕНИИ

ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Введение. Современные представления о значении гормонов гипоталамуса в развитии гормонозависимых опухолей послужили основанием для поиска принципиально новых противоопухолевых веществ среди аналогов соматостатина. Механизм их противоопухолевого действия основан на ингибировании секреции ряда белковых и стероидных гормонов, участвующих в пролиферации опухолевых клеток. Этот механизм реализуется через специфические рецепторы, высокая экспрессия которых широко представлена на клетках ряда злокачественных опухолей. Цифетрелин — один из синтезированных аналогов соматостатина, отобран в эксперименте для продвижения на клинические испытания и находится в настоящее время на стадии разработки лекформы.

Цель исследования. Синтез и изучение противоопухолевой активности цифетрелина на перевиваемых опухолях мышей с целью создания лекарственной формы для перорального введения в виде таблеток.

Материалы и методы. Синтез проводили классическими методами пептидной химии. Хроматографическую очистку субстанции проводили на колонках с силикагелем. ВЭЖХ выполняли на жидкостном хроматографе НР 1050 фирмы «Хьюлетт-Паккард» США. Противоопухолевую активность оценивали на перевиваемых моделях опухолей мышей: аденокарциноме молочной железы Са-755, раке шейки матки, РШМ-5 и эпидермоидной карциноме легкого Льюис LLC по стандартной методике. Лечение начинали через 48 часов после перевивки опухоли. Критериями эффективности служили торможение роста опухоли (ТРО, %) и увеличение продолжительности жизни (УПЖ, %)

Результаты. Оптимизирован метод синтеза цифетрелина, с помощью которого наработано несколько серий субстанции. Разработаны методики определения качества субстанции с целью дальнейшего создания проекта ФСП. Прототип лекарственной формы изучен на перевиваемых опухолях мышей при пероральном введении в широком диапазоне доз от 50 до 140 мг/кг. Установлена терапевтическая доза 120 мг/кг. На трех перевиваемых опухолях LLC, РШМ-5 и Са-755 показан противоопухолевый эффект равный 65-86 % ТРО после ежедневного введения терапевтической дозы цифетрелина в течение 5 дней. На LLC и РШМ-5 терапевтический эффект сохраняется в течение 30 дней. На Са-755, кроме высокого противоопухолевого эффекта непосредственно после лечения 86 % ТРО и на 9 день 76 % ТРО, выявлено УПЖ, равное 53 %.

Выводы. Полученные результаты позволяют сделать заключение о возможности создания лекарственной формы цифетрелина в виде таблеток для перорального применения.

3. С. Смирнова, Л.М. Борисова, М.П. Киселева,

Т.Д. Миникер, ИЛ. Плихтяк, Л.В. Эктоеа, С.Я. Мельник ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ СОЕДИНЕНИЙ В РЯДУ

]Ч-ГЛПКОЗИЛИРОВАННЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ИНД0Л0[2,3-А]КАРБА30ЛА

ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Введение. В настоящее время одно из направлений повышения эффективности химиотерапии идет по пути включения в схему лечения мишень-направлен-ных противоопухолевых препаратов. Мишенями для индолокарбазолов являются топоизомеразы, ДНК и киназы. Особенностью механизма действия отдельных соединений является их способность взаимодействовать с несколькими мишенями и, следовательно, индуцировать разные пути клеточной гибели. Выявленная ранее высокая противоопухолевая активность у двух производных индоло[2,3-а]карбазолов послужила основанием для продолжения исследований в этом ряду соединений как для проведения структурно-функционального анализа, так и с целью отбора наиболее активного из них для передачи на клинические испытания.

Материалы и методы. Противоопухолевую активность трех соединений изучали на перевиваемых опухолях мышей: лимфолейкозе Р-388 и эпидермоид-ной карциноме легкого Льюис ЬЬС. В опытах использовали мышей-гибридов ВДр!. Критериями эффективности служили: торможение роста опухоли (ТРО, %) и увеличение продолжительности жизни опытных животных по сравнению с контрольными (УПЖ, %). Соединение растворяли в 10% растворе ДМСО и вводили внутрибрюшинно, в течение 5 дней в широком диапазоне доз от 10 мг/кг до 100 мг/кг.

Результаты. Соединения ЛХС-1098 и ЛХС-1040 имеют одинаковую гетероциклическую часть, но различаются углеводными остатками. Изменение структуры углеводного остатка привело к тому, что практически равный терапевтический эффект достигается при применении этих соединений в разных терапевтических дозах. Так, на Р-388 УПЖ=39 % достигается при введении этих соединений в дозах 10 мг/кг и 25 мг/кг соответственно, а на ЬЬС ТРО=67 % наблюдается при введении ЛХС-1098 в дозе 25 мг/кг и ТРО=59 % при введении ЛХС-1040 в дозе 50 мг/кг. Соединение ЛХС-976 оказывает терапевтический эффект на Р-388 равный 47 % УПЖ в дозе 50 мг/кг, а на ЬЬС - 68 % ТРО в дозе 10 мг/кг.

Заключение. Три вновь изученных соединения обладают меньшей терапевтической эффективностью на Р-388 и ЬЬС по сравнению с изученными ранее ЛХС-999 и ЛХС-1006 на этих же моделях опухолей. В то же время подтверждены полученные данные, что изменение структуры углеводного фрагмента у производных индоло[2,3-а]карбазолов приводит к равному противоопухолевому эффекту соединений, но в разных терапевтических дозах.

З.С. Смирнова1, Л.М. Борисова1, М.П. Киселева1,

И.Ю. Кубасова1, Б.К .Берасимова1, Н.А. Санина ,

С.М. Алдошин2

ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ НАТРИЕВОЙ СОЛИ ТЕТРАНИТРОЗИЛЬНОГО СУЛЬФИДНОГО КОМПЛЕКСА ЖЕЛЕЗА

‘ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА 2ИПХФ РАН, Черноголовка

Введение. В отличие от известных органических МО-доноров (органических нитратов, диазониумдио-латов, нитрозотиолов и др.), которые применяются только для повышения эффективности известных химиотерапевтических средств, нитрозильные [2Бе-28]

комплексы железа проявляют противоопухолевую активность при монотерапии. Однако применение нитрозильных [2Бе-28] комплексов железа в клинике ограничено их низкой растворимостью. Таким образом, создание растворимых и биодоступных лекарственных средств этого класса, обладающих высокой противоопухолевой активностью и низкой токсичностью, остается актуальной задачей.

Цель работы. Оценить противоопухолевую активность натриевой соли водорастворимого тетранит-розильного сульфидного комплекса железа (РЖ-Ш).

Материалы и методы. В опытах использовали мышей гибридов ВБр1, массой 18-20 г. Противоопухолевую активность соединения изучали на перевиваемых опухолях мышей: эпидермоидной карциноме легкого Льюис и меланоме В-16, аденокарциноме молочной железы Са-755, лимфолейкозе Р-388. Критериями эффективности служили: торможение роста опухоли (ТРО, %) и увеличение продолжительности жизни опытных животных по сравнению с контрольными (УПЖ, %). Соединение растворяли в воде и вводили внутрибрюшинно, в течение 5 дней в широком диапазоне доз — от 10 мг/кг до 100 мг/кг.

Результаты. Показано, что соединение ЯБЯ-Ма на Са-755 проявляет статистически значимый, но кратковременный противоопухолевый эффект в дозах 10 и 50 мг/кг (ТР0=70 % и 60 % соответственно). На меланоме В-16 выявлено длительное противоопухолевое действие в дозах 10; 25; 50 и 75 мг/кг (ТРО=62-74 % ТРО), а также УПЖ = 50; 42; 26 и 28 % соответственно. Длительный (в течение 20 дней) терапевтический эффект соединение оказывает и в отношении ЬЬС в дозе 25 мг/кг 83 - 60% ТРО и УПЖ = 27 %. В то же время выявлен слабый противоопухолевый эффект на Р-388 - максимальное УПЖ=17 %.

Заключение. Полученные экспериментальные данные по противоопухолевой активности натриевой соли тетранитрозильного сульфидного комплекса железа -К8К-№ дают основание продолжить изучение терапевтической эффективности в ряду нового поколения доноров N0 с целью создания нового высокоэффективного противоопухолевого препарата.

З.А. Соколова1, Т.П. Рябых1, Т.В. Осипова1,

В.И. Карасева1, В.Б. Матвеев1, М.И. Модорский2,

А.Ю. Барышников1

РАЗРАБОТКА ДИАГНОСТИЧЕСКИХ СИСТЕМ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ НА ОСНОВЕ ТЕХНОЛОГИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ МИКРОЧИПОВ

‘ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА 2ГКБ №60, Москва

Задачи исследования. Технология биочипов как одна из нанотехнологий открывает новые возможности в области диагностики опухолевых заболеваний. Биологические микрочипы являются экономичной, эффективной альтернативой традиционным диагностическим системам на опухолевые маркеры, позволяющие проводить одновременное количественное определение в одном образце нескольких опухолевых маркеров. Про-стат-специфический антиген является наиболее эффективным и часто используемым маркером в ранней диагностике РПЖ. Одновременное определение двух форм ПСА-общей и свободной (ПСАобщ и ПСАсв) в сыворотке крови значительно повышает специфичность ПСА-теста. Целью исследования была оценка диагностической эффективности тест-системы в формате микрочипа для одновременного количественного определения двух форм ПСА (общей и свободной) с помощью КОС-анализа и сравнение с эффективностью традиционной иммуноферментной системы (CanAg).

Материалы и методы. Микрочипы на основе гидрогелей с иммобилизованными моноклональными антителами к двум формам ПСА были предоставлены ИМБ им. В.А Энгельгардга РАН. Уровень ПСАобщ и ПСАсв определяли в сэндвич иммуноанализе. Общее число образцов сыворотки крови мужчин, включенных в исследование, составило 223, из них было 28 здоровых донора, 54 больных с разными формами урогенитального рака, 54 - с доброкачественной гиперплазией предстательной железы и 87 - с подгвервденным диагнозом РПЖ. Были сформированы три группы сравнения: РПЖ и здоровые доноры, РПЖ и разные формы урогенитального рака, РПЖ и ДГПЖ. ROC - анализ в группах сравнения проводили с помощью компьютерной программы MedCalc.

Результаты. Регрессионный анализ показал высокую степень корреляции (i=0,96; p<0,0001) данных определения двух форм ПСА (общего и свободного) в тест-системе в формате микрочипа и иммунофермент-ной системе (CanAg). Результаты измерений ПСА были проанализированы с помощью ROC-кривых и показателя площади под ROC-кривой. Показано что, площади под ROC-кривыми для двух тест-систем в группах сравнения достоверно не различаются (p>0.05) и диагностическая эффективность новой системы сопоставима с эффективностью традиционной и хорошо зарекомендовавшей себя иммуно ферментной тест-системы (CanAg).

Выводы. Новая тест-система в формате микрочипа, позволяющая проводить одновременное количественное определение двух форм ПСА, не уступает по диагностической эффективности иммуноферментной системе (CanAg) и может быть использована для своевременной диагностики РПЖ в группах высокого риска (мужчины старше 50 лет).

КВ. Смирнова, С.В. Дидук, В.Э. Гурцевич

ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

ВАРИАНТОВ ГЕНА LMP1

ВИРУСА ЭПШТЕЙНА-БАРР У БОЛЬНЫХ

ЛИМФОПРОЛИФЕРАТИВНЫМИ

ЗАБОЛЕВАНИЯМИ В РОССИИ

ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Введение. Особый интерес среди современных исследований различных онкогенных вирусов представляет вирус Эпштейна-Барр, который является убикви-тарным герпесвирусом. С этим вирусом ассоциирован широкий спектр доброкачественных (инфекционный мононуклеоз, ИМ, и волосатоклеточная лейкоплакия полости рта) и злокачественных заболеваний (лимфо-ма Беркитта, рак носоглотки, лимфома Ходжкина, не-ходжкинские лимфомы). Исследования последних лет свидетельствуют о том, что один из белков латентной инфекции ВЭБ, онкобелок LMP1 (латентный мембранный белок 1), кодируемый одноименным геном (LMP1), играет чрезвычайно важную роль в патогенезе ряда ВЭБ-ассоциированных заболеваний.

Учитывая полное отсутствие информации о штам-мовых различиях вариантов LMP1 ВЭБ, персистирую-щих в России, цель исследования заключалась в филогенетическом анализе его вариантов, амплифицирован-ных от российских больных ВЭБ-ассоциированными злокачественными и доброкачественными (ИМ) заболеваниями, а также здоровых лиц.

Материалы и методы. Опухолевый биопсийный материал, а также образцы крови и слюны (частично) от одних и тех же больных ЛХ и НХЛ; а также образцы крови от больных ИМ и доноров крови. Из собранного клинического материала выделяли ДНК, проводили амплификацию и секвенирование фрагментов гена LMP1 ВЭБ. Для определения филогенетического родства вариантов LMP1 использовался пакет программ CLUSTAL W, Vector NTI, TreeView.

Результаты. Среди изученных нами образцов мы выявили представителей таких охарактеризованных Edwards и др. штаммов ВЭБ (Edwards et al, 1999, 2004) как China 1 (Ch1), Mediterranean плюс (Med+), Mediterranean минус (Med-), North Carolina (NC), а также представителей группы B95-8b/A - штамм, предложенный группой Sandvej (Sandvej et al., 1997). Наибольшее же число проанализированных из этой группы образцов LMP1 было охарактеризовано как генотип B95-8b/A, для которого характерен низкий уровень дивергенции (3-4 критические замены ак.), отсутствие Сао-подобной делеции 30 п.н., а также наличие «молчащей» замены Т на С в 356 кодоне, что соответствует 168253 положению генома ВЭБ.

Выводы. Проведенные исследования показали, что российские образцы LMP1 по уровню дивергент-ности относятся к различным вариантам LMP1 зарубежного происхождения, но обладают рядом уникальных мутационных особенностей. Полученные данные открывают широкую перспективу для сравнительного изучения биологических свойств LMP1 российского происхождения, что может способствовать пониманию особенностей механизмов ВЭБ-ассоциированно-го канцерогенеза в стране.

Работа поддержана грантом РФФИ № 07-04-00604.

А.В. Соснов1, М.Ю. Красавин1, Р.Н. Карапетян1,

Е.В. Годовых1, О.И. Солдаткина1, И.Н. Станъков1,

С.В. Садовников1, М.В. Киселевский2,

Н.Ю. Анисимова , А.А. Gakh3 РАЗРАБОТКА НОВЫХ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ДЛЯ ТЕРАПИИ

РАКА ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

‘ЗАО «ИИХР», Химки, МО

2ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

3Oak Ridge National Laboratory, Oak Ridge, TN, USA

Эффективность химиотерапевтических препаратов, применяемых в 1990-х гг. для лечения гормонорезистентного рака предстательной железы (ГР РПЖ), была весьма незначительна (менее 10 %). Введение в клиническую практику в 2004 г. природного препарата группы таксанов доцетаксела, особенно при использовании его в комбинации с другими препаратами, позволило улучшить продолжительность жизни приблизительно в 1,5 раза, снизить уровень болевого синдрома, улучшить показатель ПСА и улучшить качество жизни пациентов в целом. Дальнейший прогресс в химиотерапии ГР РПЖ невозможен без появления новых более эффективных и доступных синтетических препаратов.

В рамках данного проекта по созданию новых средств терапии ГР РПЖ проведены:

Синтез и первичный роботизированный скрининг in vitro около 5 тысяч оригинальных низкомолекулярных гетероциклических соединений.

Более детальное исследование in vitro около 300 веществ, относящихся к более чем 10 хемотипам. Синтез, биологические и химикоаналитические исследования перспективных природных полифенолов и их аналогов, относящихся к классам стильбенов и куркуминоидов.

Синтез и исследование ковалентных конъюгатов и нековалентных клатратов на основе наномолекул, специфичных к раковым клеткам.

В результате работы найдено около 100 новых высокоактивных ингибиторов пролиферации клеточных линий (DU-145 и PC-3) ГР РПЖ.

Значение IC(50) для наиболее активных веществ близко к уровню активности паклитаксела, используемого в качестве вещества сравнения.

На примере клеток гепатобластомы человека HepG2 показано, что неспецифическая цитотоксичность большинства перспективных веществ в области эффективных концентраций незначительна.

Показано, что некоторые наномолекулы обладают повышенной способностью ингибировать пролиферацию клеток ГР РПЖ относительно входящих в их состав низкомолекулярных веществ.

Показано, что клатраты активных веществ с циклодекстринами в ряде случаев показывают значительное усиление антипролиферативной активности in vitro (на порядок и более) по сравнению с действием индивидуальных веществ.

Эффект проявляется в отношении различных линий опухолевых клеток. Разработаны методы количественной оценки коммерчески востребованных активных полифенолов в природных материалах и пищевых продуктах.

Предварительная оценка механизмов действия исследованных веществ позволяет предположить, что среди наиболее активных веществ имеются ингибиторы полимеризации тубулина, ингибиторы некоторых киназ, ингибиторы топоизомераз и ингибиторы NF-kB.

По результатам работ подано две PCT заявки.

Исследование выполнено в рамках международной программы Discovery Chemistry Project/Prostate Cancer Chemotherapy (проект МНТЦ 3548p).

H.M. Сураева1, Е.А. Воротеляк2, А.В. Самойлов3,

А.В. Васильев2, А.Ю. Барышников1 ПОЛУЧЕНИЕ, ХАРАКТЕРИСТИКА И ДОЛГОСРОЧНОЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК КУР ‘ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА 2ИБР РАН, Москва 3НИИПЗК, Московская область

Задачи. Разработка технологии культивирования и трансплантации генетически модифицированных эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) может открыть широкие возможности по использованию яйца кур для продукции фармацевтических белков. С этой целью были получены ЭСК из бластодисков индивидуальных эмбрионов птицы.

Материалы и методы. Клетки культивировали в среде Knockout DMEM (Gibco), содержащей 10% эмбриональной телячей сыворотки (Gibco), 6 нг/мл LIF (Sigma), 0,1 мМ -меркаптоэтанола, раствора незаменимых аминокислот (NEAA, Gibco), 1 мМ пирувата натрия (Gibco) и 2 мМ глутамина (Gibco).

Результаты. Были обнаружены значительные индивидуальные различия в ростовых характеристиках бластодермальных клеток из разных бластодисков. Обычно из 7-ми эмбрионов 1-2 давали рост стволовым клеткам. Характер роста ЭСК не зависел от наличия в среде куриной сыворотки. ЭСК представляли собой маленькие клетки с большим ядром и хорошо различимыми ядрышками, росли колониям в виде монослоя с четко различимыми границами между клетками. ЭСК экспрессировали маркеры плюрипо-тентности - положительная окраска на щелочную фосфатазу и SSEA-1.

После двух пассажей клетки начинали дифференцироваться и приобретать вид фибробластов с очень активным ростом или погибали. Было показано, что покрытие дна лунок желатином, наличие STO фидера и добавление или продуцирование самими стволовыми клетками определенных факторов роста являлись практически бесспорными необходимыми компонентами культивирования ЭСК.

В качестве фактора роста чаще использовался LIF, который добавляли как коммерческий препарат или в

составе кондиционированной среды, полученной после культивирования клеток линии ВКЬ. Однако в наших экспериментах коммерческий ЫБ поддерживал культуру не более 2 пассажей, а добавление таких факторов, как ЬБвР и 8СБ, используемых при культивировании ППК, приводило к остановке трансформации бластодермальных клеток в ЭСК, несмотря на присутствие ЫБ.

Выводы. Получены культуры ЭСК, охарактеризованы некоторые морфологические и гистохимические особенности этих клеток и выявлены лимитирующие факторы, влияющие на процесс пролиферации.

И.Д. Трещалин, Э.Р. Переверзева, ДА. Бодягин ТОКСИКОМОДИФИЦИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА ДИКАРБАМИНА В ОТНОШЕНИИ ПРЕПАРАТОВ ПЛАТИНОВОЙ ГРУППЫ В КОМБИНАЦИИ С ЦИКЛОФОСФАМИДОМ ГУ НИИНА им. Г.Ф. Гаузе РАМН, Москва

Введение. Ранее было показано, что дикарбамин ослабляет гематотоксическое действие циклофосфа-мида и ускоряет процесс восстановления кроветворения. В клинике ЦФ часто применяется в комбинации с препаратами платиновой группы, что делает актуальной попытку снижения токсичности комбинаций ЦФ с цисплатином, карбоплатином или циклоплатамом.

Материалы и методы. Исследование проведено на мышах-гибридах Б^СВА С57В1) самцах массой 20-24 г. Д вводили в желудок в дозе 0,5 мг/кг за 5 дней до и 5 дней после цитостатиков, которые применяли внутрибрюшинно однократно в дозах, эквивалентных МПД.

Было изучено влияние Д на гемато-, нефро- и гастроинтестинальную токсичность комбинаций. Гематотоксичность оценивали по количеству лейкоцитов в периферической крови, клеточности костного мозга и массе селезенки.

Нефротоксичность регистрировали по массе почки. Почку, селезенку и участки тонкой кишки подвергали патоморфологическому исследованию.

Результаты. Показано, что при включении Д в комбинации с ЦФ+ЦПТ; ЦФ+КАРБ; ЦФ+ЦП количество лейкоцитов в периферической крови на 3 сутки было в 2-3 выше, чем при применении цитостатиков; к 5 суткам число лейкоцитов достигало нижнего предела физиологической нормы, а к 7 суткам достигало исходного уровня.

В группах положительного контроля восстановление количества лейкоцитов происходило лишь к 15-21 суткам. Изученные комбинации цитостатиков вызывали снижение количества кариоцитов костного мозга в 4 раза по сравнению с интактным контролем, восстановление клеточности костного мозга наступало к 10 суткам.

Применение Д в этих комбинациях вдвое ослабляло степень кариоцитопении и ускоряло восстановление. МК селезенки на фоне Д на протяжении всего опыта были достоверно выше, а МК почек - ниже, чем в группах положительного контроля.

Патоморфологические исследования показали, что включение Д в комбинации практически не ослабляло повреждающего действия цитостатиков на ткани почки и тонкой кишки. Отмечено лишь ослабление отёка. Исследование структуры селезенки подтвердило выраженное гематостимулирующее действие Д и способность препарата ускорять восстановление структуры кроветворных органов.

Заключение. Гематостмулирующие свойства Д по-видимому, являются универсальными в отношении цитостатиков, что подтвердилось в экспериментах с препаратами платиновой группы и их комбинаций с ЦФ.

Е.М. Трещалина

ДИЗАЙН ДОКЛИНИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ АГЕНТОВ

ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Введение. Программа доклинического изучения противоопухолевой активности различных агентов стартует после принятия решения о перспективности клинических испытаний. Особенности современной химиотерапии заключаются в сокращении кандидатов для ДИ из известных классов противоопухолевых цитостатиков и в появлении новых препаратов, направленных на другие мишени. Таким образом, специфика современных лекарств направлена на уничтожение опухолевых клеток, снижение прогрессии, сохранение или коррекцию качества жизни пациентов. Среди фармакологически значимых мишеней клиническую роль играют различные маркеры опухолевого роста и иммунного ответа организма, а также биосистемы, участвующие в метаболизме противоопухолевых лекарств. Эффективность монотерапии и, особенно, комбинаций с использованием классических и новых препаратов, например, «таргетных» (направленных на конкретные молекулярные мишени) или модификаторов биологических реакций находит все больше подтверждений в разных клинических ситуациях. Соответственно, изменилась структура современного дизайна ДИ.

Структура ДЙ. Цель ДИ - получение in vivo доказательной информации о противоопухолевой активности стандартизованной субстанции (С) и лекарственной формы (ЛФ) препарата при оптимальном пути введения в организм.

Этапы ДИ для С:

изучение основных характеристик противоопухолевого действия (диапазон эффективных доз, путь введения, спектр активности (в т.ч. на опухолях с гиперэкспрессией мишени);

эффективность в адъювантном (послеоперационном) режиме и при проведении стандартных схем химиотерапии;

изучение антиметастатического и противореци-

дивного эффектов;

особенности механизма действия.

Этапы ДИ для ЛФ:

биологическая стандартизация на этапе разработки оптимальной ЛФ;

подтверждение основных характеристик противоопухолевого действия;

параллельное (проспективное) или историческое (ретроспективное) сравнение с возможным или обязательным прототипом; особенности фармакокинетики; определение показаний для клинического изучения нового препарата у онкологических пациентов (лечебный или адъювантный режим применения, модификатор эффективности).

Материал и методы ДИ. Объект: противоопухолевые цитостатики, «таргетные» агенты, в т.ч. вакцины, МБР (цитокины и т.п.), препараты сопровождения, обеспечивающие качество жизни пациента.

Методы исследования ориентированы на объект и его назначение:

прогностически значимые модели опухолевого роста in vivo, в т.ч. с гиперэкспрессией маркера; инбредные лабораторные животные (мыши); методы современной экспериментальной химиотерапии, молекулярной биологии, иммунологии, биохимии, цитологии и патоморфологии. Формализация результатов ДИ. Результаты ДИ являются основанием для ДИ безвредности. Завершающим документом является Отчет в МЗиСР, который составляется по ГОСТ 7.32 2001.

Е.М. Трещалина, Л.А. Седакова, О.В. Параскееоеа,

А.Ю. Барышников, С.Л. Киселев ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМБИНИРОВАННОЙ ХИМИОТЕРАПИИ С БИВАЛАСПОМ ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Введение. В лаборатории комбинированной терапии опухолей НИИ ЭДиТО завершено доклиническое изучение нового синтетического гексапептида бива-ласпа, представляющего собой иммуномодификатор с противоопухолевым действием, направленный на коррекцию иммуносупрессии, вызванной запущенным опухолевым процессом или агрессивным противоопухолевым лечением. Результатом коррекции является улучшение непосредственных и отдаленных результатов лечения. В работе представлены данные по оптимизации схемы применения биваласпа при проведении иммуносупрессивной химиотерапии (XT).

Материалы и методы. Для экспериментов выбраны схемы XT, рекомендованные для лечения рака шейки матки (цисплатин + топотекан или циспла-тин + иринотекан), а также схемы VAD и CHOP, отличающиеся выраженной иммуносупрессией. Бива-ласп применяли одним или двумя 5-дневными курсами в разовой дозе 100 мкг/кг с началом лечения через 4-5 дней после проведения цикла XT (сроки проявления цитотоксической иммуносупрессии). Опыты проведены на мышах с различными перевиваемыми опухолями, чувствительными к XT и/или к биваласпу. Использованы лимфолейкоз Р388 при п/к и в/б трансплантации, п/к плазмацитома М0ПС-406 и рак шейки матки РШМ-5. Критерии оценки эффективности лечения стандартные.

Результаты. Показано, что комбинированная мо-но- и двойная XT с биваласпом, примененным после или между циклами химиотерапии по указанной выше схеме, дает возможность достоверно повысить эффективность лечения. Терапевтический выигрыш при применении биваласпа заключается в замедлении скорости роста опухоли на 50-90 % (p<0,05), продлении продолжительности жизни в 1,3—1,5 раза (p<0,05) и блокировании лимфогенного метастазирования (РШМ-5). Ингибирующий эффект биваласпа при проведении химиотерапии не сопровождается ухудшением переносимости лечения.

Заключение. Препарат биваласп перспективен для клинического изучения в качестве иммуномодификатора, способного улучшить результаты лечения онкологических пациентов при многокурсовой химиотерапии (2-3 линии лечения). Оптимальным для проявления противоопухолевого эффекта биваласпа является проведение одного или нескольких 5-дневных курсов подкожных инъекций в сроки развития иммуносупрессии, вызванной агрессивной химиотерапией.

Исследования выполнены при финансовой поддержке Правительства Москвы.

Е.М. Трещалина, Н.В. Андронова, Н.Т. Райхлин ИЗУЧЕНИЕ ОНКОГЕННЫХ ПОТЕНЦИЙ РАЗЛИЧНЫХ

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА ИММУНОДЕФИЦИТНЫХ МЫШАХ

ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Введение. Применение новых медицинских иммунобиологических препаратов невозможно без исключения их туморогенности (онкогенные потенции). Для изучения этого эффекта используются различные методики; наиболее достоверной является подкожная имплантация препарата иммунодефицитным мышам.

Цель исследования. Оценить возможность изучения онкогенных потенций различных иммунобиологических препаратов на мышах Balb/c nude разведения

ГУ РОНЦ (лаборатория комбинированной терапии опухолей НИИ ЭДИТО).

Материалы и методы. Исследования проведены в рамках требований методических указаний «Аттестация перевиваемых клеточных линий - субстратов производства и контроля медицинских и иммунобиологических препаратов № РД-42-28-10-89» (М., 1989 г.) Для экспериментов использованы конвенциональные 6-8 недельные мыши-самки Balb/c nude 19-21 г, содержание - спец. отсек, 2 зоны, стерильные корм (МЭСТ, РФ), стерильная вода и бум. подстилка.

Изучены клеточные препараты: ККДЧ штамм ЛЭЧ 4/81 (ООО Компании «Медицина и биотехнологии», г. Екатеринбург), культура диплоидных клеток человека MRC-5 (ФГУП НПО «МИКРОГЕН» М3 РФ), субстанция клеточной культуры фибробластов диплоидных человека штамм cmbt-F (ООО «ЦМБТ Лабораторис», г. Москва). Структура опыта: мыши группы 1 (n=35) получали исследуемый препарат; мыши группы 2 (n=35) получали стандартную линию опухолевых клеток человека (эпителиоподобный рак легкого А-549 или рак кожи А-431). Прививочная доза при п/к имплантации

1,0 млн клеток, наблюдение 21 день. Выявление опухолевого роста: пальпация места имплантации, гистологическое исследование опухоли, регионарных и отдаленных лимфоузлов на 21 сут.

Результаты. В группах с А-549 получены гистологически верифицированные опухоли у 13 % мышей, в случае А-431 - у 57 % мышей, в лимфоузлах опухолевые клетки не выявлены. Полученные характеристики соответствуют использованным стандартным линиям клеток. Ни один из 3 тестированных препаратов не дал верифицированного опухолевого роста под кожей или в лимфоузлах иммунодефицитных мышей. Результаты исследований рецензированы в Фирме Стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича (Национальном органе контроля, НИИ ГИСК).

Заключение. Конвенциональные половозрелые мыши-самки Balb/c nude разведения ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН могут быть использованы для изучения онкогенных потенций у медицинских иммунобиологических препаратов.

В.А. Тронов1, Д.Н. Артамонов2, Л.Ю. Дедерер2,

М.Е. Абрамов3, P.M. Личиницер3, Л.Б. Горбачева2

ОТВЕТЫ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ БОЛЬНЫХ

МЕЛАНОМОЙ НА ХИМИОТЕРАПИЮ

И ТЕСТ-ВОЗДЕЙСТВИЕ

МЕТИЛНИТРОЗОМОЧЕВИНОЙ

*ИХФ им. Н.Н Семёнова РАН, Москва

2ИБХФ им. Н.М. Эмануэля РАН, Москва

3ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Цель исследования. Химиотерапия меланомы на поздних стадиях базируется на использовании алкили-рующих агентов. Эффективность химиотерапии не превышает 20 %. Это связано как с устойчивостью клеток меланомы к генотоксическим воздействиям, так и высокой токсичностью алкилирующих агентов на стволовых кроветворных клетках CD34+, на Т-хелперах CD4+ и связанную с этим вероятность развития вторичных опухолей. В связи с этим актуальна задача прогноза ответа больных на химиотерапию с использованием неинвазивных молекулярных биомаркеров. В данной работе проводили сравнительное исследование ответов лимфоцитов крови больных меланомой на химиотерапию и на тест-воздействие метилнитрозомочевиной in vitro.

Материалы и методы. Химиотерапию больным с диагнозом меланома 3-4 стадии проводили согласно протоколу: дакарбазин 250 мг/м2 в день, в/в струйно в течение 3 дней, ломустин 80 мг/м2 внутрь (3 ч после

дакарбазина), цисплатин 80 мг/м2 на 3-й день. В течение 5 дней до химиотерапии п/к вводили интерферон. До терапии и сразу после завершения курса у больных брали кровь из вены, выделяли лимфоциты, стимулировали добавлением ФГА и исследовали ответ лимфоцитов на химиотерапию, который сравнивали с ответом лимфоцитов тех же больных на тест-воздействие in vitro. Для воздействия в питательную среду с интактными клетками вводили O6BzG (120 мкМ) и/или МНМ (250 мкМ). Параметрами ответа были доля лимфоцитов с пермеабилизованной мембраной (цитотоксичность); пролиферативный индекс лимфоцитов, определяемый по включению BrUdR, который детектировали с помощью анти-BrUdR FITC-антител; степень повреждения ДНК в лимфоцитах, оцениваемая с помощью двух вариантов метода ДНК-комет; внутриклеточное содержание белков MMR и экспрессия рецептора Fas, оцениваемые микроскопически по связыванию со специфичными к ним FITC-антителами; функциональная активность MMR определяемая по количеству ДР в ДНК стимулированных лимфоцитов в ответ на тест-воздействие.

Результаты. Показано, что параметры ответа лимфоцитов на тест-воздействие in vitro хорошо коррелируют с ответом лимфоцитов на химиотерапию. Отмечается относительно высокий уровень корреляции эффективности MMR (R=0,85, P=0,03) и в меньшей степени эксцизионной репарации оснований (BER) с тотальной поврежденностью ДНК в лимфоцитах после XT.

Заключение. Изученный набор параметров может быть информативен для прогноза ответа лимфоцитов на химиотерапию с вероятностью не менее 0,5.

О.В. Уткин, Д.В. Новиков, А.В. Алясова, В.В. Новиков АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА БЕЛКА FAS В МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТКАХ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

НИИМБиРЭ ННГУ им. Н.И. Лобачевского, Н. Новгород НижГМА, И. Новгород

Введение. Мононуклеарные клетки крови экспрессируют мембранную и несколько растворимых изоформ Fas-белка. Механизмы действия растворимых изоформ Fas-белка (sFas) варьируют в зависимости от структуры молекулы. Мономерная форма sFas-белка ингибирует апоптоз, а ее олигомерный вариант участвует в передаче сигнала смерти в клетку.

Задачи исследования. Основной задачей работы явилась характеристика спектра форм мРНК Fas-белка во взаимосвязи с сывороточным содержанием его суммарной и олигомерной фракций при РМЖ.

Материалы и методы. Материалом исследования служили мононуклеарные клетки крови и сыворотка крови 74 здоровых доноров, 86 образцов мононукле-арных клеток крови и сыворотки крови больных РМЖ. Сравнительный анализ спектра форм мРНК Fas-белка проводили с помощью метода ОТ-ПЦР. Суммарную фракцию растворимого Fas-протеина определяли с использованием моноклональных антител ИК0-160 и поликлональных антител против антигенов мононукле-арных клеток. Олигомерную фракцию растворимого Fas-белка определяли с использованием в качестве первых и вторых антител МКА ИК0-160.

Результаты. Мононуклеарные клетки крови доноров синтезируют альтернативные варианты мРНК, соответствующие мембранной и пяти растворимым формам Fas-белка. Во всех образцах мононуклеарных клеток первичных больных были обнаружены мРНК, соответствующие мембранной (mFas) и доминирующей растворимой форме (FasExoTMDel). В 64 % случаев обнаруживались две дополнительные минорные формы мРНК Fas-белка (FasExo4,6Del и FasExo4Del),

а в 36 % случаев - одна дополнительная минорная форма мРНК (FasExo4,6Del). У пациентов, мононукле-арные клетки крови которых экспрессировали две минорные формы мРНК Fas белка, наблюдалось статистически значимое снижение сывороточного содержания олигомерного sFas на третьей и четвертой стадиях заболевания как по сравнению с больными, мононукле-арные клетки которых экспрессировали одну минорную форму, так и по сравнению с донорами.

Выводы. Выявленные спектры альтернативных форм мРНК Fas белка отражают особенности транс-криптома мононуклеарных клеток крови больных раком молочной железы и потенциально могут иметь мониторинговое значение.

A.А. Филъченкое1, М.П. Завелевич1,

B.А. Надгорная1, Д.Ю. Блохин2 ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КЛОНАЛЬНОЙ Т-ЛИМФОБЛАСТНОЙ КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ JURKAT/A4, ОБЛАДАЮЩЕЙ МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ 'ИЭПОР им. Р. Е. Кавецкого НАН Украины, Киев 2ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Введение. Одним из лимитирующих факторов при химиотерапевтическом лечении онкологических больных является развитие в процессе лечения или независимо от него лекарственной устойчивости опухолей, особенно того ее варианта, при котором появляется устойчивость сразу ко многим препаратам с различными механизмами действия - множественной лекарственной устойчивости. Данное исследование продолжает цикл работ, посвященных характеристике клеточной линии Jurkat/A4, полученной в результате селективного культивирования Т-лимфобластных клеток Jurkat в присутствии эффекторных моноклональных антител IPO4 к рецептору смерти CD95/Fas/APO-l (Патент РФ № 2267532).

Цель исследования. Сравнительный анализ экспрессии поверхностных антигенов на клетках родительской линии Jurkat и клональной линии Jurkat/А4.

Материалы и методы. Иммунофенотипирование цитопрепаратов клеток Jurkat и Jurkat/А4 проводили по стандартной методике EnVision (Dako, Дания). Для определения экспрессии отдельных антигенов (CD3, CD4, CD8, CD45R0, CD50, CD54, CD56, CD71, CD95) клетки исследовали методом проточной цитометрии на цитофлюориметре FACScan (Becton Dickinson, США).

Результаты. Фенотип родительской линии Jurkat и линии Jurkat/A4 по основным линейно-специфичным и дифференцировочным антигенам соответствует таковому Т-клеточной лимфобластной лимфомы1. Клетки обеих линий экспрессируют рецептор трансферрина CD71, «рецепторы смерти» DR4 (TRAILR1) и TNFR1, но не экспрессируют рецептор lL-2 CD25. При сравнении двух линий обнаружены отличия в экспрессии поверхностных антигенов:

1 (CD 1a-CD2+CD3+CD4+CD5+CD7+CD8CD19CD34-).

Подавление экспрессии CD50 (ICAM-3) в клетках Jurkat/A4 не отражается на экспрессии его лиганда CD54 (ICAM-1). Возможно, с повышенной экспрессией антигена NCAM (CD56) связано наблюдающееся в условиях суспензионной культуры Jurkat/A4 повышение межклеточной адгезии - клетки легко собираются в гигантские конгломераты.

А.А. Филъченкое1, М.П. Завелевич1,

Н.Н. Храновская , Д.Ю. Блохин3 АКТИВАЦИЯ ВЕПЕЗИДОМ СИСТЕМЫ КАСПАЗ В КЛЕТКАХ ЛИНИИ JURKAT,

НО НЕ В МУЛЬТИРЕЗИСТЕНТНОЙ СУБЛИНИИ JA4

1ИЭПОР им. Р. Е. Кавецкого НАН Украины, Киев 2ГУ НИР, Киев

3ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА

Введение. Активация системы каспаз во время индукции апоптоза играет важную роль в реализации цитотоксического действия большинства известных противоопухолевых препаратов.

Снижение активности каспаз или их блокирование в опухолевых клетках может быть одним из факторов, способствующих утрате чувствительности к индуцированному апоптозу. Ранее в результате селекции Т-лимфобластных клеток линии Jurkat человека под действием моноклональных антител против рецептора Fas была получена мультирезистентная линия JA4 (Патент РФ № 2267532). Молекулярные механизмы ингибирования цитотоксических эффектов различных противоопухолевых препаратов в резистентных клетках JA4 нуждаются в детальном изучении.

Цель исследования. Сравнительный анализ активации двух инициаторных (-8; -9) и одной эффектор-ной (-3) каспаз в клетках мультирезистентной линии JA4 и родительской линии Jurkat в ответ на действие ингибитора ДНК-топоизомеразы II вепезида.

Материалы и методы. Уровень индукции апоптоза оценивали с помощью проточной цитометрии окрашенных пропидия йодидом клеток. Для выявления прокаспазы-3, -8 и -9, а также их зрелых форм использовали иммуноблот-анализ с применением моноклональных антител против указанных белков («Sigma», «BD Pharmingen» и «Beckman Coulter»). Количественную оценку содержания в клетках активной каспазы-3 проводили методом проточной цитометрии, используя набор «mAb Apoptosis Kit FITC» («BD Pharmingen»).

Результаты. Содержание гиподиплоидных (апоп-тотических) клеток после культивирования в присутствии вепезида (10 мкг/мл) на протяжении 18 ч составляло 36,3 и 8,9 % в культурах Jurkat и JA4, соответственно (см. табл.).

При этом задержка в прохождении митотического цикла клетками JA4 была значительно менее выраженной по сравнению с клетками Jurkat.

Линия CD3 CD7 СЭ45дЯ0 CD50 CD56 CD95*

Jurkat 94-98% 97-99% 8-12% 95-99% 10-12% 60-80%

Jurkat/A4 30-33% 40-43% 0 0 50-54% 1-6%

*При длительном культивировании .Тшка/А4 в отсутствие aнти-Fas-aнтитeл экспрессия СБ95 частично восстанавливается, остальные фенотипические признаки остаются без изменений.

После культивирования клеток линии Jurkat в указанных условиях с вепезидом в них активируется кас-паза-3 (20,1 % в сравнении с 3,0 % в контроле). В то же время активация каспазы-3 в резистентных клетках JA4 выражена очень слабо. Аналогичные результаты активации каспазы-3 получены ранее при использовании в качестве индуктора апоптоза блеомицина. Образования зрелых форм инициаторных каспаз-8 и -9 в клетках JA4 не наблюдается, в отличие от клеток исходной линии, в которых наряду с каспазой-9 активируется и каспаза-8, по-видимому, независимо от традиционного пути рецепторной активации (Fas, APO-2, TNFR1 и др.). Такая возможность рецептор независимой активации каспа-зы-8 в условиях индуцированного этопозидом апоптоза продемонстрирована недавно L. Padron-Barthe и соавт. (2008) в других клеточных системах. Различия в активации компонентов каспазной системы могут быть одним из факторов мультирезистентности линии JA4.

В.М. Шерстнев1, Н.М.Перетолчина2,

Н.С. Сапрыкина2, И.В. Манина2, М.П Шерстневе,

В.А. Хайленко3, А.М. Козлов1

ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ

АКТИВНОСТЬ ЦИКЛОФОСФАМИДА,

ИММОБИЛИЗОВАННОГО

НА НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНОЙ ФРАКЦИИ

ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА.

*МЦ «ИТЭРА», Москва

2ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА 3Кафедра онкологии ФУВ РГМУ, Москва

Введение. Церулоплазмин - гликопротеид 2-глобулиновой фракции сыворотки крови, обладающий широким спектром биологических эффектов: он является эндогенным антиоксидантом и иммуномодулятором, стабилизатором клеточных мембран, транспортным белком, ингибитором перекисного окисления липидов, стимулятором гемопоэза и т.д.

Цель исследования. Изучение возможности повышения противоопухолевого действия циклофосфа-мида путем иммобилизации его на низкомолекулярной фракции церулоплазмина.

Результаты. Изучено действие циклофосфамида, иммобилизованного на низкомолекулярной фракции церулоплазмина на рост и метастазирование карциномы легкого Льюис.

Препарат растворяли в физрастворе и вводили животным пятикратно внутрибрюшинно или подкожно в дозе 25 мг/кг в пересчете на циклофосфамид. При внут-рибрюшинном способе введения на фоне проведенного лечения наблюдали торможение роста первичной опухоли Льюис на 7-е; 9-е; 14-е; 19-е; 24-е сутки опыта соответственно на 82; 55; 54; 51 и 48 %. Аналогичные показатели интактного циклофосфамида в эти же сроки равны 89; 79; 59; 58 и 45 %. При подкожном введении конъюгата отмечены выраженные местные побочные эффекты в виде изъязвления кожного покрова и отека подкожной клетчатки, исключающие данный способ введения препарата. При изучении антиметастатическо-го действия циклофосфамида и конъюгата в аналогичных дозах и режиме применения (внутрибрюшинно в течение пяти последующих дней) выявлено торможение метастазирования опухоли Льюис после применения интактного циклофосфамида на 58 % и отсутствие ан-тиметастатического эффекта после применения циклофосфамида, иммобилизованного на носителе.

Выводы. Конъюгат циклофосфамида, иммоблизо-ванный на низкомолекулярной фракции церулоплазмина при внутрибрюшинном пятикратном применении обладает противоопухолевой активностью, соизмеримой с таковой интактного циклофосфамида, использованного в той же дозе и режиме применения. Продол-

жаются экспериментальные исследования конъюгата с целью выявления возможных преимуществ по сравнению с интактным цитостатиком.

Т.Г. Щербатюк, КВ. Кулакова, М.Р. Гайнуллин УБИКВИТИЛИРОВАННЫЕ БЕЛКИ В ПЛАЗМЕ КРОВИ У ЖИВОТНЫХ С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ОПУХОЛЬЮ

ННГУ им. Н.И. Лобачевского, Н. Новгород

Цель исследования. Изучить изменение содержания убиквитилированных белков в плазме крови у животных с лимфосаркомой Плисса в процессе роста опухоли.

Материалы и методы. Эксперименты были выполнены на 100 белых нелинейных крысах, самцах. Модель неоплазии создавали путем перевивки опухолевого штамма Лимфосаркома Плисса, приобретенного в НИИ ЭДиТО ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. Животные были распределены в 10 групп: контрольную, которую составляли интактные животные и 9 опытных, в которых вошли крысы с опухолью, срок роста которой составил 3; 6; 9; 12; 15; 18; 21; 24 и 27 суток.

Наличие убиквитилированных белков определяли методом дотблоттинга, для характеристики убиквитин-белковых конъюгатов (УБК) применяли вестерн-блот-тинг. При этом проводили электрофоретическое разделение белков с последующим электроблоттингом белковых зон на PVDF-мембрану.

Результаты. По данным дот-блоттинга, включающим (1) иммобилизацию смеси белков на PVDF-мембране (Millipore); (2) инкубацию с антиубиквитиновыми антителами (DAKO); (3) визуализацию иммунореактивности при помощи вторичных антител, конъюгированных с пероксидазой (Sigma), и хемилюминисцентного реактива ECL (Amersham), интенсивность и распределение антиубиквитиновой иммунореактивности в цельной плазме крови и во фракциях, полученных после воздействия сульфатом аммония, у интактных животных сходны с показателями животных-опухоленосителей с лимфосаркомой Плисса, срок роста которой составил 3 и 6 дней с момента перевивки.

Вестрен-блоттинг выявил набор мажорных форм УБК в тех же фракциях. В плазме крови крыс с лимфосаркомой, срок роста которой составил 12 и 21 день уби-квитилированные белки регистрируются во всех исследованных фракциях, достигая максимальной интенсивности на поздних стадиях роста опухоли. Анализ спектра УБК в этих же пробах указывает на появление новых белковых зон с увеличенной антиубиквитиновой иммунореактивностью.

Выводы. Полученные результаты свидетельствуют о качественном и количественном изменении содержания убиквитилированных белков в плазме крови живот-ных-опухоленосителей в процессе опухолевого роста.

Р.И. Якубовская1, А.А. Панкратов1, О А. Безбородова1, Е.Р. Немцова1, Т.Н. Андреева1, Ю.Б. Венедиктова1,

О. Л. Калия2, Е.А. Лукьянец2

БИНАРНЫЕ КАТАЛИТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ КАК ХИМИО- И РАДИОМОДИФИКАТОРЫ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ)

*ФГУ «МНИОИ им. П.А.Герцена», Москва 2ФГУП «ГНЦ «НИОПИК», Москва

Цель исследования. Изучение химио- и радиомодифицирующего действия бинарных каталитических систем (ЁКС) на основе препаратов «Оксикобаламин-лио» (Ок), «Терафтал-лио» (Тф) и «Эфитер».

Материалы и методы. Исследования проводили на мышах с перевиваемыми опухолями различного гистогенеза (лимфолейкоз Р-388 (Р-388), АМЖ Са-755 (Са-755), АКЭ, КЛЛ), варьируя дозы препаратов, режимы их применения и облучения (источник - кобальт-60).

Результаты. Модифицирующие свойства БКС «Ок+Ак», «Тф+Ак» и «ЭТФ+Аж» изучены в отношении эффективности цисплатина, циклофосфана, доксоруби-цина (Др), 5-фторурацила (5-Фу) и интаксела (Инг). Установлено, что эти БКС повышают эффективность монотерапии ДЦП, Инт, 5-Фу в среднем на 60 %.

Максимальный терапевтический эффект у мышей с Р-388, Са-755 и АКЭ был отмечен при комбинированном применении исследуемых БКС и препарата циспла-тин. У животных наблюдали повышение эффективности лечения по сравнению с монотерапией цисплатином на 40-110 %. В этих экспериментах удалось снизить дозу высокотоксичного цитостатика в 2-4 раза без снижения лечебного эффекта.

При изучении противоопухолевой эффективности комбинированного применения БКС на основе Ок, Тф и ЭТФ и лучевой терапии было установлено, что эти БКС являются эффективными радиомодификаторами. Так, у мышей с АКЭ при тотальном облучении животных и при использовании в качестве радиомодификатора БКС «Ок+Ак» и «Тф+Ак» в 100 и 70 % случаев соответственно наблюдали полное излечение животных от опухоли. На другой опухолевой модели - КЬС, которая является более резистентной к терапии БКС и лучевой терапии, исследуемые БКС приводили к повышению эффективности лечения на 25 %.

Комбинированное применение 3 методов лечения -бинарной каталитической терапии (БКС на основе Ок и ЭТФ), химиотерапии (препарат цисплатин) и лучевой терапии приводило к повышению эффективности лечения (по ингибированию роста опухоли) на 45-50 % по сравнению с эффективностью лечения только цисплатином или лучевой терапии.

Заключение. Таким образом, проведенные исследования показали, что БКС на основе Ок, Тф и ЭТФ являются эффективными химио- и радиомодификаторами.

Работа выполнена при финаносовой поддержке Правительства г. Москвы.

М.Н. Якунина1, С.В. Зонтов1, ГА. Меерович2,

ЕМ. Трещалина1, Б.Я. Коган3, О.Л. Калия3,

О.Н. Ворожцов3

ПЕРВЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛАЗЕРНОЙ ТЕРМОХИМИОТЕРАПИИ ПОВЕРХНОСТНЫХ ОПУХОЛЕЙ КОЖИ У ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КАТАЛИТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ ТЕРАФТАЛ + АСКОРБИНОВАЯ КИСЛОТА ‘ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА 2ИОФ ИМ. А.М. ПРОХОРОВА РАН, МОСКВА 3ФГУП ГНЦ НИОПИК, Москва

Введение. Локальная гипертермия, в том числе лазерная (Л-ГТ), используется в качестве одного из консервативных методов лечения поверхностных опухолей у собак различного генеза.

Однако по эффективности этот метод уступает хирургическому лечению. Для изучения возможности повышения эффективности Л-ГТ в настоящей работе апробирована новая бинарная каталитическая система терафтал + аскорби-новая кислота (ТФ+АК), которая находится на 2 фазе клинического изучения в гуманитарной клинике.

Материалы и методы. В исследование включены 12 собак и 1 кот с диагнозами: карцинома слизистой правого носового хода, плоскоклеточный неорогове-вающий рак дисневого края верхней челюсти, гистиоци-тарная саркома, злокачественная фиброзная гистио-цитома кожи, фибросаркома, лимфома, меланома, нео-роговевающий плоскоклеточный рак кожи и мастоци-тома кожи.

Животным вводили ТФ+АК (90+168 мг/м2) капелью в/в последовательно и через 1 ч 45 мин проводили Л-ГТ~45°С 15 - 30 мин. Термометрию выполняли с помощью термопары, фиксированной под ложе и на поверхности опухоли. Оценка эффективности лечения стандартная: объективный эффект (ОЭ=ПР+ЧР) и суммарный эффект (СЭ=ПР+ЧР+СТ). Для выявления метаста-зирования и возможных побочных эффектов выполнено полное клиническое обследование. После 1-2 измерений опухоли определяли показания для оперативного удаления узла. Наблюдение за животными проводили в течение 2 мес после лечения.

Результаты. Комбинированная термотерапия Л-ГТ+ТФ+АК была высокоэффективна в 4 из 5 случаев гистиоцитомы или гистиосаркомы кожи: ПР=3/5, СТ=1/5, а также при 2 случаях плоскоклеточного рака края верхней челюсти и карциномы слизистой носа: ПР=2/2. В группе из 7 животных с гистиоцитарными и плоскоклеточными опухолями головы объективный эффект составил 71 %, общий эффект - 86 %. В 3 случаях лимфомы, меланомы и фибросаркомы эффективность низкая: ЧР=1/3, СТ=2/3. Мастоцитома кожи не ответила на лечение: ПГ=3/3. Стимуляции метастази-рования не зарегистрировано. В группе из 13 животных с различной локализацией поверхностных опухолей ОЭ=38 %, СЭ=62 %. Переносимость воздействия оценена как удовлетворительная, лимитирующих побочных эффектов нет.

Заключение. Указанный уровень эффективности метода Л-ГТ+ТФ+АК достаточен для положительной оценки и превышает крайне малочисленные сведения в литературе об эффективности не-абластивной лазерной гипертермии (45 С) при лечении животных с указанными опухолями. При гистиоцитарных опухолях и плоскоклеточных опухолях головы следует продолжить изучение для определения терапевтического вклада ТФ+АК и получения статистически значимых результатов комбинированного лечения.

Исследования выполнены при финансовой поддержке Правительства Москвы.

ФОТОДИНАМИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ

Ю.В. Алексеев1, Е.В. Лихачева1, Е.М. Борисова1,

Д.В. Терешкин , Е.В. Пономарев2 ИЗУЧЕНИЕ НАКОПЛЕНИЯ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОВ ХЛОРИНОВОГО РЯДА ПРИ ПАТОЛОГИИ ЛОР-ОРГАНОВ 'ФГУ ГНЦ ЛМ Росздрава, Москва 2ГУ НИИ БМХ РАМН, Москва

Данное исследование проведено с целью изучения физических параметров и оценки терапевтической

эффективности применения ФДТ с фотосенсибилизаторами - циклическими тетрапирролами хлоринового ряда в комплексном лечении больных оториноларин-гологическими заболеваниями.

В исследовании принимали участие 39 больных, распределенные на 2 нозологические группы: 9 пациентов с хроническими тонзиллитами и 30 с риносину-ситами. В качестве фотосенсибилизаторов были применены следующие соединения хлоринового ряда: