CC BY
12Journal of Siberian Federal University. Biology 2 (2016 9) 136-144
УДК 579.6
Synthesis and Intracellular Degradation of P(3HB/DEG) Copolymers by Cupriavidus eutrophus B-10646
Natalia O. Zhila*
Institute of Biophysics SB RAS 50/50 Akademgorodok, Krasnoyarsk, 660036, Russia
Siberian Federal University 79 Svobodny, Krasnoyarsk, 660041, Russia
Received 00.12.2015, received in revised form 00.02.2016, accepted 00.06.2016 The study addresses synthesis and intracellular degradation of copolymers consisting of 3-hydroxybutyrate and diethylene glycol (P(3HB)/DEG) by Cupriavidus eutrophus В-10646. DEG addition to the medium at concentrations of 10-30 g/L did not influence the yields of biomass and polymer. During intracellular degradation, content of P(3HB)/DEG copolymers and homopolymer P(3HB) decreased at 1.1-1.2 and 1.8 times respectively. Bacterial cells grown in the medium with DEG synthesized copolymer consisting of polymer fractions with low molecular weight (62-217 kDa) and high molecular weight (2810-4860 kDa), whose contents were 78.1-96.4 % and 3.6-21.9 %, respectively, depending on the culture growth phase. DEG addition to the medium
Keywords: P(3HB)/DEG copolymers, molecular weight, intracellular degradation, fatty acids. DOI:
© Siberian Federal University. All rights reserved
* Corresponding author E-mail address: lhab@ibp.ru
Синтез и внутриклеточная деградация
сополимеров П(3ГБ)/ДЭГ в культуре природного штамма
Снрг1аг1йт вШгоркт В-10646
Н.О. Жила
Институт биофизики СО РАН Россия, 660036, Красноярск, Академгородок, 50/50 Сибирский федеральный университет Россия, 660041, Красноярск, пр. Свободный, 79
Исследован синтез и внутриклеточная деградация диблок сополимеров 3-гидроксибутирата и диэтиленгликоля (П(3ГБ)/ДЭГ) культурой Cupriavidus eutrophus В-10646. Показано, что добавление ДЭГ в среду в концентрации 10-30 г/л не влияло на общий выход биомассы клеток и полимера. Установлено, что сополимеры с ДЭГ в меньшей степени, чем гомополимер П(3ГБ), подвергаются внутриклеточной деградации (их содержание снижалось соответственно в 1.1-1.2 и 1.8 раза). Синтезируемые бактериями сополимеры П(3ГБ)/ДЭГ состояли из низкомолекулярной (62-217 кДа) и высокомолекулярной (2810-4860 кДа) фракций, содержание которых равнялось соответственно 78.1-96.4 и 3.6-21.9 % в зависимости от фазы роста культуры. Показано увеличение насыщенности внутриклеточных липидов Cupriavidus eutrophus В-10646, растущих в присутствии ДЭГ.
Ключевые слова: сополимеры П(3ГБ)/ДЭГ, молекулярная масса, внутриклеточная деградация, жирные кислоты.
Введение
Перечень известных природных полимеров гидроксипроизводных алкановых кислот (полигидроксиалканоатов, ПГА) постоянно пополняется. В зависимости от набора и соотношения мономеров, образующих ПГА, их базовые свойства значительно изменяются (Sudesh et al., 2000; Chanprateep, 2010; Chen, 2010; Volova et al., 2013). Это делает актуальным поиск штаммов и условий для синтеза новых типов полимеров этого класса.
Полиэтиленгликоли (ПЭГ), включая диэ-тиленгликоль (ДЭГ), являются нейтральные водорастворимые относительно нетоксичные полиэфиры, могут агрегироваться с фосфоли-пидами и белками. С 1996 г. стали появляться
работы, посвященные изучению микробиологического синтеза сополимеров ПГА/ПЭГ. Установлено, что при добавлении в среду ПЭГ возможен микробиологический синтез ПГА нового типа с образованием диблока ПГА/ПЭГ, где карбоксильный конец (-COOH) цепей ПГА ковалентно связан эфирной связью с цепью ПЭГ. Это явление было названо «PEGylation» (Foster, 2007).
У большинства бактерий биосинтез и эндогенная деградация ПГА представляют собой циклический метаболический процесс. В условиях дефицита по углероду и избытка азота, необходимого для синтеза основных клеточных макромолекул (белков, нуклеиновых кислот), клеточный пул ПГА вовлекает-
ся в метаболизм, в ходе которого полимеры разрушаются под действием внутриклеточных деполимераз и используются клетками в качестве источника энергии и углерода. Эндогенный метаболизм ПГА затрудняет получение общих высоких выходов полимеров и влияет на содержание в них отдельных мономеров. Известно, что ПГА-деполимеразы характеризуются относительной субстратной специфичностью. Так, например, ПГА-деполимеразы Hydrogenophaga pseudoflava обладают специфичностью к следующим мономерам, снижающейся в ряду 3ГБ>3ГВ>4ГБ (Yoon and Choi, 1999). ПГА-деполимеразы Pseudomonas oleovorans характеризуются различной специфичностью по отношению к короткоцепочечным и среднецепочечным ПГА, а также обладают несходной структурой (Stuart et al., 1996; Foster et al., 1996). В литературе есть только одна публикация, в которой исследована внутриклеточная деградация сополимеров, содержащих ПЭГ, а именно П(3ГБ/3ГВ)/ПЭГ200, в которой показано, что деградация П(3ГБ/3ГВ)/ПЭГ200 происходила в меньшей степени, чем П(3ГБ) и сополимера П(3ГБ/3ГВ) (Saha et al., 2007).
Цель данной работы - исследование биосинтеза и эндогенной деградации диблок сополимеров П(3ГБ/ДЭГ) в культуре Cupriavidus eutrophus B-10646 и анализ влияния ДЭГ на молекулярную массу сополимера и состав жирных кислот внутриклеточных липидов.
Материалы и методы
В работе использовали штамм водородо-кисляющих бактерий Cupriavidus eutrophus В-10646, депонированный в ВКПМ, которые выращивали в разработанных режимах синтеза и деградации полимера, определяемых вносимыми в культуру потоками углеродного субстрата и азота (Волова и др., 1992; Volova et al., 2013, 2014). На первом этапе бактерии
культивировали с лимитированным содержанием азота в среде (50 % от потребностей культуры в элементе) в режиме максимальной аккумуляции полимера. На 72-й ч культивирования в среду добавляли хлорид аммония (1 г/л)) для инициирования процесса деградации полимера. В качестве углеродного субстрата использовали фруктозу, поддерживая ее концентрацию в среде на уровне 10-13 г/л и снижая до 1-2 г/л в фазу деградации полимера. Для получения сополимеров П(3ГБ)/ДЭГ в культуру на 24-й ч культивирования добавляли диэтиленгликоль (ДЭГ) (ОАО «Нижне-камскнефтехим», Россия) в концентрации 10, 20 или 30 г/л. Все эксперименты проведены в трех повторностях.
Урожай биомассы клеток в ходе развития культуры бактерий регистрировали по весу сухого вещества и оптическим показателям культуры. Концентрацию фруктозы в среде вычисляли резорциновым методом. Содержание и состав полимера определяли хроматографией метиловых эфиров жирных кислот с применением хромато-масс-спектрометра Agilent Technologies 7890A (США). Молекулярную массу и молекулярно-массовое распределение полимера исследовали с использованием хроматографа для гельпрони-кающей хроматографии Agilent Technologies 1260 Infinity (США) относительно полистироловых стандартов (Fluka, Швейцария, Германия). Находили средневесовую (Мв) и среднечисловую (М„) молекулярную массу, а также полидисперсность (ПД = Мв/Мн). Содержание ДЭГ в сополимере определяли 'И ЯМР спектроскопией растворов ПГА на ЯМР-спектрометре Bruker AVANCE III 600 (Германия) в Красноярском региональном центре коллективного пользования СО РАН.
Липиды экстрагировали из биомассы смесью хлороформ-метанол (2:1) по методу Фолча. В конечном экстракте полимер от-138 -
деляли от липидов осаждением при добавлении двойного объема гексана. Метанолиз жирных кислот проводили в смеси метанола и серной кислоты (50:1 по объему) в течение 2 ч при 90 °С. Анализ МЭЖК осуществляли на хромато-масс-спектрометре GC-MS 7890/5975C (Agilent Technologies, США). Идентификацию ЖК проводили по масс-спектрам и сравнением их времен удерживания с таковыми имеющихся стандартов (Serva, Германия и Sigma, США). Основные методы анализа липидов и жирных кислот подробно описаны в наших работах (Kalacheva and Volova, 2007; Kalacheva et al., 2002).
Результаты и обсуждение
Исследовано влияние различных концентраций ДЭГ (10-30 г/л) на урожай биомассы, общий выход сополимера, молекулярный вес и включение мономеров ДЭГ в полимер. Добавление ДЭГ в среду не влияло на рост бактерий и синтез полимера на первом этапе, когда в культуру подавали полную питательную среду и лимитированную концентрацию азота (50 % от физиологической потребно -сти). К концу первой фазы культивирования (фаза синтеза полимера) урожай биомассы и содержание полимера составляли соответственно 7.0-7.2 г/л и 79-86 % от веса сухой биомассы (рисунок). Однако к концу второй фазы культивирования, когда в клетках неизбежно проявляются процессы внутриклеточной деградации полимера, отмечены существенные различия показателей культур, растущих в присутствии в среде ДЭГ или без него (контрольная культура). В контрольной культуре к концу второй фазы концентрация клеток снизилась на 20 % до 5.88 г/л, а содержание сополимера упало в 1.8 раз, до 49 % от веса сухой биомассы. В отличие от контрольной культуры в культуре бактерий, растущих в присутствии ДЭГ, отмечено снижение пула
полимера до 69-70 % (от веса сухой биомассы). Урожай биомассы клеток при этом практически не изменялся, составляя 6.8-6.9 г/л.
Показано, что с увеличением концентрации ДЭГ в среде росло и содержание ДЭГ в сополимере П(3ГБ)/ДЭГ (рисунок). Так, на 72-м ч культивирования содержание ДЭГ в полимере составляло 0.17, 0.23 и 0.85 мол. % при концентрации ДЭГ в среде 10, 20 и 30 г/л соответственно. К концу фазы внутриклеточной деградации содержание ДЭГ практически не изменилось при концентрации ДЭГ в среде 10 и 20 г/л, однако при увеличении концентрации ДЭГ до 30 г/л содержание ДЭГ в полимере снизилось до 0.35 мол. %.
Добавление ДЭГ в культуру привело к синтезу полимера, представленного двумя фракциями (низкомолекулярной (НМ), 62217 кДа и высокомолекулярной (ВМ), 28104860 кДа) (табл. 1). Распределение фракций полимера НМ и ВМ было неодинаковым в течение культивирования: на 48-й ч культивирования доля ВМ и НМ фракций составляла, соответственно около 20 и 80 %. К концу первой фазы культивирования бактерий (72 ч) доля ВМ-фракции снизилась до 4.2-5.4 %. Ге -терогенность полимера по величине молекулярной массы описана и другими авторами для бактерий Alcaligenes latus DSM 1122 и Alcaligenes eutrophus ATCC 17699 при росте на среде, содержащей ПЭГ-200 (Ashby et al., 1999). Кроме того, известнол что с увеличением концентрации ДЭГ в среде происходит снижение молекулярной массы низкомолекулярной фракции полимера, что согласуется с данными других авторов, показавших снижение Мв полимера при добавлении ДЭГ в среду (Shi et al., 1996; Ashby et al., 1997; Zanzig et al., 2003; Sanguanchaipaiwong et al., 2004). В фазе внутриклеточной деградации полимера произошло снижение доли высокомолекулярной фракции, что, возможно, связано как с
+ NHjCI
контроль Юг/л ДЭГ 20 г/л ДЭГ 30 г/л ДЭГ
24 48 72 96 120 Время культивирования, ч
144
Динамика биомассы (а) бактерий Cupriavidus еШгоркт B-10646, содержания полимера (б) и диэтиленгликоля (ДЭГ) в сополимере П(3ГБ)/ДЭГ (в) в ходе накопления (до 72-го ч) и внутриклеточной деградации (после 72-го ч) полимеров при культивировании с различными концентрациями ДЭГ в среде
распадом полимера с высокой молекулярной массой, так и с синтезом низкомолекулярного полимера. Ресинтез полимера во время внутриклеточной деградации полимера был показан нами ранее (Жила и др., 2015). В кон-
трольной культуре зарегистрированное снижение Мв полимера практически в два раза (от 1506 до 804 кДа) к концу 1-го этапа культивирования согласуется с ранее полученными данными других авторов для бактерий
Таблица 1. Показатели молекулярной массы (Мв, кДа) и полидисперсности (ПД) П(3ГБ) и сополимеров П(3ГБ)/ДЭГ во время синтеза (до 72-го ч) и внутриклеточной деградации (144-й ч) полимера у бактерии Cupriavidus eutrophus В-10646, культивируемой при различных концентрациях диэтиленгликоля (ДЭГ) в среде
Время, ч 10 г/л ДЭГ 20 г/л ДЭГ 30 г/л ДЭГ контроль
Мв ПД Фракция, % Мв ПД Фракция, % Мв ПД Фракция, % Мв ПД
24-й ч 1500 2.58 100 1660 2.52 100 1630 2.55 100 1560 2.54
48-й ч 3160 217 1.30 2.92 19.5 80.5 2900 138 1.39 3.33 21.9 78.1 2810 113 1.43 3.54 21.9 78.1 1200 3.55
72-й ч 4300 138 1.14 2.33 4.4 95.6 4110 89 1.18 2.18 5.4 94.6 4860 67 1.16 2.17 4.2 95.8 804 3.95
144-й ч 4080 134 1.18 2.23 3.9 96.1 4240 89 1.15 2.24 3.6 96.4 4250 62 1.17 2.15 3.8 96.2 936 3.32
Alcaligenes eutrophus и Pseudomonas putida (Shimizu et al., 1993; Hori et al., 1994; Taidi et al., 1995; Tanadchangsaeng and Yu, 2012). Уве -личение Мв полимера до 936 кДа на 2-м этапе, по всей видимости, связано с распадом фрагментов цепей П(3ГБ) с низкой молекулярной массой.
В ходе исследования физиологического состояния культуры С. eutrophus B-10646, находящейся в режиме синтеза и внутриклеточной деградации П3ГБ/ДЭГ, изучено влияние ДЭГ на состав жирных кислот липидов (ЖК), которые во многом определяют состояние и проницаемость цитоплазматической мембраны прокариот. Следует отметить, что данных о влиянии ПЭГ в процессе PEGylation и синтеза ПГА/ПЭГ на состояние клеточных мембран и на величину включения ПЭГ в ПГА/ ПЭГ в литературе не представлено. Вместе с тем, в 80-90-х гг. прошлого столетия при изучении физиологической роли ПЭГ было показано, что он влияет на проницаемость мембран в результате адсорбции клеточными мембранами, связываясь с головными группами фосфолипидов, которые поддерживают текучесть мембраны (Yamazaki and Ito, 1990).
Установлено, что к концу первого этапа культивирования бактерий в среде с ДЭГ
сумма циклопропановых и насыщенных ЖК (за счет 14:0, 16:0) увеличивается на фоне снижения ненасыщенных кислот (16:1ю7, 18:1ю7) (табл. 2). В результате этого насыщенность липидов в целом возрастала от 2.65 до 3.233.28. Этот эффект зарегистрирован нами ранее в культурах R. eutropha B5786, C. eutrophus B-10646 в режиме аккумуляции ПГА по мере старения и возрастания внутриклеточного пула полимера (Kalacheva and Volova, 2007; Zhila et al., 2015). При сочетанном воздействии на культуру, синтезирующую ПГА, постороннего ингибитора (монооксида углерода как компонента синтез-газа) и лимитирования по азоту насыщенность липидов возрастала в 2.0-2.7 раза за счет снижения содержания ненасыщенных жирных кислот (в основном пальмитолеиновой, С16:1) и повышения насыщенных (пальмитиновой С16:0) и С17- и С19-циклопропановых кислот (Volova et al., 2015). Известно, что такое перераспределение в составе ЖК микроорганизмов влияет на текучесть и проницаемость мембраны, обеспечивая повышение ее «жесткости» и устойчивости к воздействию неблагоприятных факторов и снижению проницаемости для ингибирующих субстратов. В данной работе установлено, что в период внутрикле-
Таблица 2. Состав жирных кислот внутриклеточных липидов бактерии Cupriavidus еШгоркт В-10646, культивируемой при различных концентрациях диэтиленгликоля (ДЭГ) в среде ( % от суммы жирных кислот)
Жирная кислота Стадия синтеза полимера (72 час) Стадия деградации полимера (144 час)
10 г/л ДЭГ 20 г/л ДЭГ 30 г/л ДЭГ контроль 10 г/л ДЭГ 20 г/л ДЭГ 30 г/л ДЭГ контроль
14:0 1.08 0.94 0.85 0.63 0.67 0.77 0.62 1.29
16:1ю7 5.93 6.28 5.62 5.42 5.59 4.67 3.30 6.29
16:0 64.99 66.62 60.99 59.11 49.62 52.38 57.35 57.39
с-17:0* 8.40 7.10 12.49 9.69 16.51 18.56 13.59 11.14
18:1ю9 0.10 0.18 0.15 0.08 0.15 0.18 0.23 0.13
18:1ю7 13.86 13.65 14.55 18.37 19.27 16.28 16.60 16.10
18:0 1.24 1.25 1.07 2.22 2.29 1.56 1.74 1.74
с-19:0* 0.30 0.54 1.04 0.68 3.11 2.29 2.90 1.17
Другие** 4.10 3.44 3.24 3.80 2.79 3.31 3.67 4.75
Е циклопропановые 8.70 7.64 13.53 10.37 19.62 20.85 16.49 12.31
Енасыщ./ Ененасыщ. 3.23 3.19 3.28 2.65 2.60 3.11 3.20 2.68
* - циклопропановая жирная кислота. ** - 14:1ш5, 15:0, 15:1ш6, 16:1ш5, 17:0, 17:1ш9
насыщ. - насыщенные жирные кислоты, включая циклопропановые жирные кислоты, ненасыщ. - ненасыщенные жирные кислоты.
точной деградации блок-сополимера П(3ГБ/ ДЭГ) произошли изменения в составе ЖК внутриклеточных липидов бактерий главным образом за счет снижения кислот С16 ряда и увеличения ЖК С18 ряда и циклопропано-вых кислот, что привело к незначительному снижению насыщенности внутриклеточных липидов. Увеличение циклопропановых ЖК также отмечено и в контрольной культуре.
Заключение
Показано, что бактерии Cupriavidus eutrophus В-10646 при росте в присутствии ДЭГ синтезируют сополимеры П(3ГБ)/ДЭГ с содержанием ДЭГ 0.1-0.85 мол. %. В период внутриклеточной деградации наибольшие
изменения, заключающиеся в снижении биомассы и, в большей степени, содержания полимера, отмечены в контрольной культуре. Синтезированы образцы сополимера П(3ГБ)/ ДЭГ и установлено, что он гетерогенен по молекулярно-массовым характеристикам и представлен двумя фракциями: низкомолекулярной (62-217 кДа) и высокомолекулярной (2810-4860 кДа), доля которых менялась в зависимости от фазы роста культуры. Добавление ДЭГ в среду привело к увеличению насыщенности внутриклеточных ли-пидов Cupriavidus eutrophus В-10646 за счет жирных кислот 14:0, 16:0 на фоне снижения содержания моноеновых кислот (16:1ю7. 18:1ю7).
Работа выполнена за счет средств государственного задания на проведение фундаментальных исследований РАН (проект № гос. регистрации 01201351505).
Список литературы
Волова Т.Г., Калачева Г.С., Константинова В.М., Пузырь А.П. (1992) Влияние условий роста на накопление полиоксибутирата водородными бактериями. Прикладная биохимия и микробиология, 28: 221-232 [Volova T.G., Kalacheva G.S., Konstantinova V.M., Puzyr A.P. (1992) Effect of growth conditions on olyhydroxybutyrate accumulation by hydrogen bacteria. Applied Biochemistry and Microbiology [Prikladnaya biohimiya i mikrobiologiya], 28: 221-232 (in Russian)].
Жила Н.О., Калачева Г. С., Волова Т.Г. (2015) К вопросу о внутриклеточной деградации по-лигидроксибутирата. Журнал Сибирского федерального университета. Биология, 8: 220-235 [Zhila N.O., Kalacheva G.S., Volova T.G. (2015) To the question about intracellular polyhydroxybutyrate degradation. Journal of Siberian Federal University. Biology [Zhurnal Sibirskogo federalnogo universiteta. Biologiya], 8: 220-235 (in Russian)].
Ashby R.D., Shi F., Gross R.A. (1997) Use of poly(ethylene glycol) to control the end group structure and molecular weight of poly(3-hydroxybutyrate) formed by Alcaligenes latus DSM 1122. Tetrahedron, 53: 15209-15223.
Ashby R.D., Shi F., Gross R.A. (1999) A tunable switch to regulate the synthesis of low and high molecular weight microbial polyesters. Biotechnol. Bioeng., 62: 106-113.
Chanprateep S. (2010) Current trends in biodegradable polyhydroxyalkanoates. J. Biosci. Bioeng., 110: 621-632.
Chen G.-Q. (2010) Industrial production of PHA. Plastics from bacteria. Natural functions and applications. Chen G.-Q., Steinbüchel A. (eds.) Berlin, Heidelberg, Springer-Verlag, p. 121-132.
Foster L.J.R., Stuart E.S., Tehrani A., Lenz R.W., Fuller R.C. (1996) Intracellular depolymerase and polyhydroxyalkanoate granule integrity in Pseudomonas oleovorans. Int. J. Biol. Macromol., 19: 177-183.
Foster L.J.R. (2007) Biosynthesis, properties and potential of natural-synthetic hybrids of polyhydroxyalkanoates and polyethylene glycols. Appl. Microbiol. Biotechnol., 75: 1241-1247.
Hori K., Soga K., Doi Y. (1994) Effects of culture conditions on molecular weights of poly(3-hydroxyalkanoates) produced by Pseudomonas putida from octanoate. Biotechnol. Lett, 16: 709714.
Kalacheva G.S., Volova T.G. (2007) Fatty acid composition of Wautersia eutropha lipids under conditions of active polyhydroxyalkanoates synthesis. Microbiology, 76: 535-540.
Kalacheva G.S., Zhila N.O., Volova T.G. (2002) Lipid and hydrocarbon compositions of collection and wild sample of the green microalga Botryococcus. Aquat. Ecol., 36: 317-330.
Saha S.P., Patra A., Paul A.K. (2007) Studies on intracellular degradation of polyhydroxyalkanoic acid-polyethylene glycol copolymer accumulated by Azotobacter chroococcum MAL-201. J. Biotechnol., 132: 325-330.
Sanguanchaipaiwong V., Gabelish C.L., Hook J., Scholz C., Foster L.J.R. (2004) Biosynthesis of natural-synthetic hybrid copolymers: polyhydroxyoctanoate-diethylene glycol. Biomacromolecules, 5: 643-649.
Shi F., Ashby R., Gross R.A. (1996) Use of poly(ethylene glycol)s to regulate poly(3-hydroxybutyrate) molecular weight during Alcaligenes eutrophus cultivations. Macromolecules, 29: 7753-7758.
Shimizu H., Tamura S., Shioya S., Suga K.-I. (1993) Kinetic study of poly-D(-)-3-hydroxxybutyric acid (PHB) production and its molecular weight distribution control in a fed-batch culture ofAlcaligenes eutrophus. J. Ferment. Bioeng., 76: 465-469.
Stuart E.S., Foster L.J.R., Lenz R.W., Füller R.C. (1996) Intracellular depolymerase functionality and location in Pseudomonas oleovorans inclusions containing polyhydroxyalkanoate. Int. J. Biol. Macromol, 19: 171-176.
Sudesh K., Abe H., Doi Y. (2000) Synthesis, structure and properties of polyhydroxyalkanoates: biological polyesters. Prog. Polym. Sci., 25: 1503-1555.
Taidi B., Mansfield D.A., Anderson A.J. (1995) Turnover of poly(3-hydroxybutyrate) (PHB) and its influence on the molecular mass of the polymer accumulated by Alcaligenes eutrophus during batch culture. FEMSMicrobiol. Lett, 129: 201-206.
Tanadchangsaeng N., Yu J. (2012) Microbial synthesis of poly hydroxybuty rate from glycerol: gluconeogenesis, molecular weight and material properties of biopolyester. Biotechnol. Bioeng., 109: 2808-2818.
Volova T.G., Kiselev E.G., Shishatskaya E.I., Zhila N.O., Boyandin A.N., Syrvacheva D.A., Vinogradova O.N., Kalacheva G.S., Vasiliev A.D., Peterson I.V. (2013) Cell growth and accumulation of polyhydroxyalkanoates from CO2 and H2 of a hydrogen-oxidizing bacterium, Cupriavidus eutrophus B-10646. Bioresour. Technol, 146: 215-222.
Volova T., Kiselev E., Vinogradova O., Nikolaeva E., Chistyakov A., Sukovatiy A., Shishatskaya E. (2014) A glucose-utilizing strain, Cupriavidus eutrophus B-10646: growth kinetics, characterization and synthesis of multicomponent PHAs. PLoS One, 9: 1-15.
Volova T.G., Zhila N.O., Shishatskaya E.I. (2015) Synthesis of poly (3-hydroxybuty rate) by the autotrophic CO-oxidizing bacterium Seliberia carboxydohydrogena Z-1062. J. Ind. Microbiol. Boitechnol, 42: 1377-1387.
Yamazaki M., Ito T. (1990) Deformation and instability in membrane structure of phospholipid vesicles caused by osmophobic association: mechanical stress model for the mechanism of poly(ethylene glycol) induced membrane fusion. Biochemistry, 29: 1309-1314.
Yoon S.C., Choi M.H. (1999) Localsequence dependence of polyhydroxyalkanoic acid degradation in Hydrogenophagapseudoflava. J. Biol. Chem., 274: 37800-37808.
Zanzig J., Marimuthu B., Werka J., Scholz C. (2003) Investigation of the impact of poly(ethylene glycol)-modulation of poly(b-hydroxybutyrate) synthesis on cell interactions of the resulting polymers. J. Bioact. Compat. Polym., 18: 339-354.
Zhila N., Kalacheva G., Volova T. (2015) Fatty acid composition and polyhydroxyalkanoates production by Cupriavidus eutrophus B-10646 cells grown on different carbon sources. Process Biochem., 50: 69-78.
